Search

Yüksek Lisans Tezi Luteinleştirici hormon (LH) ön-hipofiz bezinden salgılanır ve üreme sisteminin gelişimi ve fonksiyonunda önemli rol oynar. LH cinsiyet bezlerinin normal fonksiyonu ve üreme için gereklidir. Erkeklerde testosteron üretimini uyarırken, kadınlarda östrojen ve progesteron üretimini uyarır ve yumurtlamayı başlatır. Kadınlarda artan LH seviyeleri primer gonadol bozukluk, polikistik over sendromu, post-menapoz ve hipofiz adenomları ile ilişkilendirilmektedir. Erkeklerde ise hipogonadizm ve primer testis bozukluğunda yüksek LH konsantrasyonu görülür. Bu tezde; elektrokimyasal impedans spektroskopisi (EIS) ile LH'ın kantitatif tayini için spesifik ve duyarlı immünolojik bir biyosensör geliştirildi. 12-merkaptododekanoik asit, EDC/NHS çifti, PAMAM ve glutaraldehit kullanılarak kovalent immobilizasyon yöntemi ile anti-LH antikoru altın elektrot yüzeyine immobilize edildi. İmmobilizasyon adımları siklik voltammetri ve elektrokimyasal impedans spektroskopisi ile karakterize edildi. Bu biyosensörün tayin süresi 1 saat olup, biyosensörün tayin aralığı 1-60 mIU/mL LH konsantrasyonu aralığı olarak belirlendi. Ayrıca geliştirilen biyosensör, LH eklenmiş yapay serum örneklerinin analizinde de başarıyla kullanıldı. abstract Luteinizing hormone (LH) is secreted by the anterior pituitary gland, and plays a key role in the development and function of the reproductive system. LH is essential for normal gonadal function and fertility, stimulating testosterone production in men while it stimulates estrogen and progesterone production and triggers ovulation in females. Increased LH levels are related with primary gonadal dysfunction, polycystic ovary syndrome, post-menopause and pituitary adenoma in females. High LH concentration has been found in men with hypogonadism, and primary testicular failure. In this thesis, a specific and sensitive immunological biosensor was developed for quantitative detection of LH by electrochemical impedance spectroscopy. Anti-LH antibody was immobilized onto gold electrode surface via covalent immobilization techniques by using mercaptododecanoic acid, EDC/NHS couple, PAMAM and glutaraldehyde. Immobilization steps were characterized by cyclic voltammetry and electrochemical impedance spectroscopy. The detection time of this developed biosensor system was one hour. Its detection range was determined as 1-60 mIU/mL LH concentration during this period. This constructed biosensor was successfully used to artificial serum samples spiked with LH.

Yüksek Lisans Tezi Luteinleştirici hormon (LH) ön-hipofiz bezinden salgılanır ve üreme sisteminin gelişimi ve fonksiyonunda önemli rol oynar. LH cinsiyet bezlerinin normal fonksiyonu ve üreme için gereklidir. Erkeklerde testosteron üretimini uyarırken, kadınlarda östrojen ve progesteron üretimini uyarır ve yumurtlamayı başlatır. Kadınlarda artan LH seviyeleri primer gonadol bozukluk, polikistik over sendromu, post-menapoz ve hipofiz adenomları ile ilişkilendirilmektedir. Erkeklerde ise hipogonadizm ve primer testis bozukluğunda yüksek LH konsantrasyonu görülür. Bu tezde; elektrokimyasal impedans spektroskopisi (EIS) ile LH'ın kantitatif tayini için spesifik ve duyarlı immünolojik bir biyosensör geliştirildi. 12-merkaptododekanoik asit, EDC/NHS çifti, PAMAM ve glutaraldehit kullanılarak kovalent immobilizasyon yöntemi ile anti-LH antikoru altın elektrot yüzeyine immobilize edildi. İmmobilizasyon adımları siklik voltammetri ve elektrokimyasal impedans spektroskopisi ile karakterize edildi. Bu biyosensörün tayin süresi 1 saat olup, biyosensörün tayin aralığı 1-60 mIU/mL LH konsantrasyonu aralığı olarak belirlendi. Ayrıca geliştirilen biyosensör, LH eklenmiş yapay serum örneklerinin analizinde de başarıyla kullanıldı. abstract Luteinizing hormone (LH) is secreted by the anterior pituitary gland, and plays a key role in the development and function of the reproductive system. LH is essential for normal gonadal function and fertility, stimulating testosterone production in men while it stimulates estrogen and progesterone production and triggers ovulation in females. Increased LH levels are related with primary gonadal dysfunction, polycystic ovary syndrome, post-menopause and pituitary adenoma in females. High LH concentration has been found in men with hypogonadism, and primary testicular failure. In this thesis, a specific and sensitive immunological biosensor was developed for quantitative detection of LH by electrochemical impedance spectroscopy. Anti-LH antibody was immobilized onto gold electrode surface via covalent immobilization techniques by using mercaptododecanoic acid, EDC/NHS couple, PAMAM and glutaraldehyde. Immobilization steps were characterized by cyclic voltammetry and electrochemical impedance spectroscopy. The detection time of this developed biosensor system was one hour. Its detection range was determined as 1-60 mIU/mL LH concentration during this period. This constructed biosensor was successfully used to artificial serum samples spiked with LH.

Doktora Tezi Kanser biyomarkerları, kanser hücrelerinde yüksek miktarlarda sentezlenip kana karıştığından kanserin erken teşhisinde görüntüleme ve patolojik yöntemlere yardımcı olur. Siklooksigenaz-II (COX-II), pankreas, kolon, özafagus ve meme gibi pek çok dokudaki katı tümör oluşumunda hücre içi ekspresyonu artan bir enzimdir. Siklooksigenaz-II?ye spesifik antikor, 12-merkaptododekanoik asit, PAMAM, EDC/NHS çifti gibi kimyasallar kullanılarak kovalent immobilizasyon yöntemi ile elektrot yüzeyine immobilize edildi. Geliştirilen biyosensör ile siklooksigenaz-II, 1 saat gibi bir tayin süresinde 50-250 pg/mL konsantrasyonu aralığında tayin edilebilmiştir. Kalretinin ise özellikle kötü huylu mezotelyoma gibi akciğer tümörlerinde, ameloblastoma gibi neoplazma tümörlerinde ve nöroblastoma gibi beyin tümörlerinde sentezinin fazlalaşmasından dolayı serum ve beyin-omurilik sıvısında seviyeleri artan kalsiyum bağlayıcı bir proteindir. Kalretinine spesifik antikor; 6-merkaptohekzanol, epiklorohidrin, etanolamin gibi kimyasallar kullanılarak kovalent immobilizasyon yöntemi ile elektrot yüzeyine immobilize edildi. Gelişitirilen biyosensör ile kalretinin, 1 saat gibi bir tayin süresinde 1-5 ng/mL konsantrasyonu aralığında tayin edilebilmiştir. Abstract Cancer biomarkers help radiological and patological monitoring in early diagnosis of cancer, which are highly expressed in cancer cells and leak to blood stream. Cyclooxygenase-II is an enzyme those expression is increased in the cell at the formation of solid tumors in many tissues such as pancreas, colon, eusophagus and breast. A novel biosensor system was developed for detection of Cyclooxygenase-II by immobilisation of antibody spesific to Cyclooxygenase-II onto electrode surface via covalent immobilisation techniques by using mercaptododecanoic acid, PAMAM, and EDC/NHS couple. This biosensor system had detection time “one hour” and detection range “50-250 pg/mL” cyclooxygenase concentration. Calretinin is a calcium binding protein, whose levels in blood and cerebrospinal fluid are increased, since its expression is increased lung tumors such as Malignant mesothelioma, neoplasmic tumors such as ameloblastoma, brain tumors such as nouroblastoma. A novel biosensor system was developed for detection of Calretinin by immobilisation of antibody spesific to Calretinin onto electrode surface via covalent immobilisation techniques by using mercaptohexanol, epichlorohydrin, and ethanolamin. This biosensor system had detection time “one hour” and detection range “1-5 ng/mL” calretinin concentration.

Yüksek Lisans Tezi Günümüzde ürik asit tayininde çeşitli kolorimetrik, polarografik, kromatografik, spektrofotometrik yöntemler kullanılmaktadır. Ancak bunlar genel olarak özel ekipman ve uzman gerektiren zaman alıcı ve pahalı sistemlerdir. Biyosensörler; enzim, hücre ve doku gibi biyolojik unsurların uygun bir iletim sistemiyle birleştirilmesi ile oluşan biyoanalitik cihazlardır. Biyosensörlerin diğer yöntemlere karşı en önemli avantajı, tayin edilecek maddeler için ekonomik, pratik ve spesifik ölçümlere imkan vermesidir. Saf enzimleri içeren dokuların kullanılmasıyla hazırlanan doku temelli biyosensörler, saf enzimlerin immobilize edilmesiyle hazırlanan biyosensörlerle kıyasladıklarında oldukça ucuz, yüksek kararlılıklı ve yüksek aktiviteli tayin sistemlerini oluşturmaktadır. Bu çalışmada, Lactobacillus casei probiyotik bakterisi doğal enzim kaynağı olarak kullanılarak ürik asit tayini için bakteriyal temelli bir biyosensör hazırlandı. L. casei bakterisinin liyofilize formu ile hazırlanan biyosensörün optimizasyon ve karakterizasyon çalışmaları gerçekleştirildi. Çalışmalarda ana substrat olarak ürik asit kullanıldı. İlk önce biyosensörün biyoaktif tabaka bileşenlerini oluşturan bakteri miktarı, jelatin ve glutaraldehid miktarlarının biyosensör cevapları üzerine etkisi incelendi. Sırasıyla bakteri, 10 mg, jelatin ve glutaraldehid miktarları 10 mg ve % 0,5 olarak tayin edildi. Biyosensörün karakterizasyon çalışmalarında, belirlenen optimum biyoaktif tabaka bileşen miktarları kullanılarak hazırlanan biyosensör ile ürik asit tayini için lineer konsantrasyon aralık sınırları 10 ? 40 mM olarak belirlendi. Deney koşullarının optimizasyonu için; hazırlanan biyosensörün, lineer cevapları üzerine tampon pH'ı, tampon konsantrasyonu ve sıcaklık değişimlerinin etkileri incelendi. Kullanılan fosfat tamponu için biyosensörün optimum pH 8.0, tampon konsantrasyonu 150 mM ve optimum sıcaklığı 40 º C olarak belirlendi. Biyosensörün karakterizasyon testlerine geçildiğinde; ölçümlerin tekrarlanabilirliğinin belirlenmesinde; her defasında 10 mM ürik asit kullanılarak hazırlanan biyosensör ile optimum koşullarda arka arkaya 7 ölçüm alındı. Ölçümlerde Xort = 10,022 mM karşılık, standart sapma (S.D.) ± 0,045, varyasyon katsayısı (C.V.) % 4,39 olarak belirlendi. Bu değerler hazırlanan biyosensörün, ürik asit tayini için kararlı ve uygun bir sistem olduğunu gösterdi. Geliştirilen biyosensörün depo kararlılığı optimum koşullarda; 22 gün boyunca belirli aralıklarla alınan ölçümlerde ilk 10 gün, aktivite % 100 korundu. 18. günde biyosensörün başlangıç aktivitesinin % 80'sini koruduğu gözlendi. 19 günden sonra, biyosensör hızlı bir şekilde aktivitesini kaybettiği gözlendi. Optimum koşulları belirlenen, karakterizasyon testleri yapılan bakteri esaslı ürik asit biyosensörü kullanılarak; hasta ve sağlıklı kişilerin kan ve idrar örneklerindeki ürik asit tayininde uygulanabilirliği incelendi. Yapılan ölçümlere ait standart sapma ve varyasyon katsayıları dikkate alındığında; analizi yapılan bütün örneklerde ürik asit tayini için uygulanabileceği görüldü. Anahtar kelimeler: Biyosensör, ürik asit, Lactobacillus casei, probiyotik bakteri, ürikaz . Abstract Nowadays, various colorimetric, polarographic, chromatographic, spectrophotometric methods are used for uric acid determination. However these are in general time consuming and expensive systems which require special equipment and expertise. Biosensors are bio-analytical devices which combine such biological components as enzymes, cells and tissues in an appropriate transmission system. The most important advantage of biosensors against other methods is that it enables economic, practical and specific measurements for substances to be determined. Being prepared by using tissues containing pure enzymes, the tissue based biosensors create considerably cheap determination systems with high stability and high activity compared to the biosensors prepared by immobilizing pure enzymes. In this study, a bacteria-based biosensor has been used as the source of natural enzyme for uric acid determination using L.casei probiotic bacterium. Optimization and characterization studies of bacteria-based biosensor prepared with lyophilized form of L.casei bacterium have been performed. In the studies, uric acid was used as main substrate. Firstly the effect of quantities of bacteria, gelatin and glutaraldehyde which are the components of bioactive layer of the biosensor, on the biosensor responses has been investigated. The quantities have been determined as 10mg, 10mg and 0,5% respectively for bacteria, gelatin and glutaraldehyde. In the characterization studies of the biosensor, the linear concentration range was established 10 ? 40 mM for uric acid determination by the biosensor prepared using the determined bioactive layer component quantities. For the optimization of test conditions, the effects of buffer pH, buffer concentration and temperature changes on the linear responses of the biosensor prepared have been studied and pH has been determined as 8.0, phosphate buffer concentration as 150mM and optimum temperature as 40°C as the optimum values. In the durability tests of biosensor, seven consecutive measurements were taken in determining the repeatability of measurements by using proposed biosensor and each time using 10 mM uric acid. Upon measurements, the followings have been determined; Xort=10,022 mM, standard deviation (S.D.) ± 0,045, coefficient of variation (C.V.) 4,39%. This result demonstrated that the biosensor prepared is a suitable and stable system for uric acid determination. For determination of storage stability of the biosensor developed, measurements were taken at certain intervals during 22 days under optimum conditions. During the first 10 days, activity was maintained at 100%. Then it was observed that biosensor maintained 80% of its initial activity at the 18th day. After the 19th day, biosensor started to lose its activity quickly. Using the bacteria biosensor whose optimum conditions were determined and durability tests were performed, its practicability in determining uric acid in the blood and urine specimens of sick and healthy persons has been studied. In consideration of the standard deviations and coefficients of variation pertaining to the measurements made using the biosensor developed; it has been observed that it could be applied in all specimens subject to uric acid analysis. Key words: Biosensor, uric acid, Lactobacillus casei, probiotic bacteria, uricase.