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Objetivo. El objetivo de este estudio fue evaluar la formación de biopelículas por micoplasmas de interés médico. Métodos. La formación de las biopelículas se realizó en microplacas, fueron enjuagadas con solución PBS para remover las células que no se adhirieron y se tiñeron con solución de cristal violeta al 0,5% durante 30 minutos. La formación de biopelículas por parte de Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma fermentans y Mycoplasma penetrans se analizó por medio de microscopía óptica y microscopía electrónica de barrido. Resultados. Los micoplasmas evaluados mostraron la capacidad para formar biopelículas, lo cual se evidenció por medio de la tinción de cristal violeta. Las biopelículas formadas en las microplacas y analizadas por microscopía mostraron agregados de microcolonias. La formación de biopelículas por parte de M. fermentans, M. pneumoniae y M. penetrans se presentó a las 72 horas de incubación. Se comparó la formación de biopelícula y la cuantificación de plancton, y se encontró correlación. Conclusión. Se debe considerar que este estudio se hizo bajo condiciones de laboratorio y que, para trabajos futuros, se recomienda utilizar modelos animales para definir cómo contribuyen estos agregados en la persistencia en los huéspedes. Estos resultados sugieren que la capacidad de M. fermentans, M. pneumoniae y M. penetrans para formar biopelículas puede considerarse un factor de virulencia, y un evento importante en la patogénesis y evolución en infecciones asociadas con el uso de dispositivos médicos.