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Introduction: The increasing number of cases of isolation of Corynebacterium diphtheriae in New Caledonia, the potential severity of this infection and the consequences in terms of public health actions have prompted us to focus on this bacterial species and its local epidemiology. Material and method: A retrospective clinical study was conducted by consulting patient records for each of the 84 cases included. Among these cases, 58 were retained, for which the antibiograms were retested, the tox gene sought, the biovar determined, the strains sequenced and a phylogenetic tree carried out based on the core genome of our cohort. Results: We note a concentration of cases particularly around Nouméa and Lifou. 84% of samples were taken at skin level. Overall the strains present in the territory are sensitive to the majority of commonly used antibiotics. However, 27.9% of tetracycline-resistant strains were found. 63.7% of our strains belong to only two sublineages, few found elsewhere in the world. The vast majority of strains do not express diphtheria toxin, except for two episodes, one case and five cases, all imported from Vanuatu. Discussion: The evolution of the repositories used for the realization of antibiograms tends to make strains more often resistant without biological reality when the same technique is applied to all strains. Asymptomatic portages and incidental discoveries suggest that there is a significant number of tox - strains in New Caledonia, a potential reservoir in case of introduction of tox+ strains via Vanuatu for example. This should motivate particular attention to population immunization coverage.; Introduction : Le nombre croissant d’isolement de Corynebacterium diphtheriae relevé en Nouvelle-Calédonie, la potentielle gravité de cette infection et la répercussion en termes d’actions de santé publique à mettre en place nous ont incités à nous intéresser plus particulièrement à cette espèce bactérienne et à son épidémiologie locale. Matériel et méthode : Une étude clinique rétrospective a été réalisée par consultation des dossiers patients pour chacun des 84 épisodes inclus. Parmi ces cas, 58 ont été conservés, pour lesquelles les antibiogrammes ont été retestés, le gène tox recherché, le biovar déterminé, les souches séquencées et un arbre phylogénétique a été réalisé en se basant sur le core génome de notre cohorte. Résultats : Nous notons une concentration des cas en particulier autour de Nouméa et Lifou. 84 % des prélèvements ont été réalisés au niveau cutané. Les souches présentes sur le territoire sont globalement sensibles à la majorité des antibiotiques couramment utilisés. On note cependant 27,9 % de souches résistantes à la tétracycline. 63,7 % de nos souches appartiennent à seulement deux sublineages, peu retrouvés ailleurs dans le monde. Les souches dans leur grande majorité n’expriment pas la toxine diphtérique, excepté deux épisodes, de 1 cas et 5 cas, tous importés du Vanuatu. Discussion : L’évolution des référentiels utilisés pour la réalisation des antibiogrammes tend à rendre les souches plus souvent résistantes sans réalité biologique lorsque l’on applique la même technique à toutes les souches. Des portages asymptomatiques et découvertes fortuites font penser qu’il y a un nombre important de souches tox- en Nouvelle-Calédonie, réservoir potentiel en cas d’introduction de souches tox+ via le Vanuatu par exemple. Cela doit susciter une attention particulière en ce qui concerne la couverture vaccinale de la population.

Diphtheria toxin (DT) is a bacterial toxin with intracellular target, secreted by Corynebacterium diphtheriae. During cell intoxication, the translocation domain of DT (T) inserts into the endosomal membrane under acidic conditions and assists the translocation of the catalytic (C) domain in the cytosol. T undergoes conformational changes and adopts a molten globule (MG) state, competent for the interaction with the membrane.We first identified by mutagenesis the residues in the T domain whose protonation triggers the formation of the MG state in solution and the interaction with the membrane. The results showed that the concerted protonation of the six histidines in the T domain is implicated. We found that the pair His223-257 et His251 are more implicated in the formation of the MG state in solution and that the pair His322-323 (and His251) is more implicated in the interaction with the membrane.We then studied the conformational changes of both C and T domains within a CT protein corresponding to the whole toxin truncated at the R domain to understand the effects of the covalent link between the two domains on the conformations of C and T as a function of pH. We produced two Trp mutants, CTW50/153F and CTW206/281F, that allow to follow up the Trp fluorescence of each domain in the CT protein. The results showed that the T domain leads the way in the first steps of translocation (MG formation, binding and membrane insertion), and that it may play the role of a membrane chaperone by stabilizing the MG state of C.; La toxine diphtérique (DT) une toxine bactérienne sécrétée par Corynebacterium diphtheriae. Lors de l'intoxication d'une cellule, le domaine de translocation (T) de la DT s'insère dans la membrane à pH acide et assiste la translocation du domaine catalytique (C) dans le cytosol. Le domaine T adopte une conformation en molten globule (MG) et devient compétent pour l'interaction membranaire. Nous avons identifié par mutagenèse les résidus du domaine T dont la protonation favorise la formation de l'état MG en solution et l'interaction membranaire. Les résultats montrent que la protonation concertée des six histidines du domaine T est impliquée dans la formation de l'état MG en solution. La paire His223-257 et l'His251 ont un effet prépondérant dans la formation de l'état molten globule en solution, alors que la paire His322-323 (mais également His251) est davantage impliquée dans l'interaction avec la membrane, et en particulier la liaison à la membrane.Nous avons étudié les changements de conformation des deux domaines C et T dans une protéine CT correspondant à la DT tronquée de son domaine R, afin de comprendre les effets du lien covalent sur les conformations respectives de C et T en fonction du pH. Les mutants CTW50/153F et CTW206/281F ont permis de suivre la fluorescence des Trp de chaque domaine dans la protéine CT. Lesrésultats montrent que le domaine T dirige la translocation de C dans les premières étapes de la translocation (formation de l'état MG, liaison et insertion membranaire), et qu'il pourrait jouer un rôle de chaperon en stabilisant l'état MG du domaine C.

Diphtheria toxin (DT) is a bacterial toxin with intracellular target, secreted by Corynebacterium diphtheriae. During cell intoxication, the translocation domain of DT (T) inserts into the endosomal membrane under acidic conditions and assists the translocation of the catalytic (C) domain in the cytosol. T undergoes conformational changes and adopts a molten globule (MG) state, competent for the interaction with the membrane.We first identified by mutagenesis the residues in the T domain whose protonation triggers the formation of the MG state in solution and the interaction with the membrane. The results showed that the concerted protonation of the six histidines in the T domain is implicated. We found that the pair His223-257 et His251 are more implicated in the formation of the MG state in solution and that the pair His322-323 (and His251) is more implicated in the interaction with the membrane.We then studied the conformational changes of both C and T domains within a CT protein corresponding to the whole toxin truncated at the R domain to understand the effects of the covalent link between the two domains on the conformations of C and T as a function of pH. We produced two Trp mutants, CTW50/153F and CTW206/281F, that allow to follow up the Trp fluorescence of each domain in the CT protein. The results showed that the T domain leads the way in the first steps of translocation (MG formation, binding and membrane insertion), and that it may play the role of a membrane chaperone by stabilizing the MG state of C., La toxine diphtérique (DT) une toxine bactérienne sécrétée par Corynebacterium diphtheriae. Lors de l'intoxication d'une cellule, le domaine de translocation (T) de la DT s'insère dans la membrane à pH acide et assiste la translocation du domaine catalytique (C) dans le cytosol. Le domaine T adopte une conformation en molten globule (MG) et devient compétent pour l'interaction membranaire. Nous avons identifié par mutagenèse les résidus du domaine T dont la protonation favorise la formation de l'état MG en solution et l'interaction membranaire. Les résultats montrent que la protonation concertée des six histidines du domaine T est impliquée dans la formation de l'état MG en solution. La paire His223-257 et l'His251 ont un effet prépondérant dans la formation de l'état molten globule en solution, alors que la paire His322-323 (mais également His251) est davantage impliquée dans l'interaction avec la membrane, et en particulier la liaison à la membrane.Nous avons étudié les changements de conformation des deux domaines C et T dans une protéine CT correspondant à la DT tronquée de son domaine R, afin de comprendre les effets du lien covalent sur les conformations respectives de C et T en fonction du pH. Les mutants CTW50/153F et CTW206/281F ont permis de suivre la fluorescence des Trp de chaque domaine dans la protéine CT. Lesrésultats montrent que le domaine T dirige la translocation de C dans les premières étapes de la translocation (formation de l'état MG, liaison et insertion membranaire), et qu'il pourrait jouer un rôle de chaperon en stabilisant l'état MG du domaine C.