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The pathogenic interactions between tomato roots and Pseudomonas solanacearum were examined microscopically following inoculation with either a pathogenic strain or a nonpathogenic mutant, both harboring a transposon containing a promoterless Escherichia coli lacZ gene, which is highly expressed. Several stages were distinguished during tomato root infection by the pathogenic strain. After colonization of exudation sites such as root extremities and axils of secondary roots the bacteria intercellularly infect the inner cortex and the vascular parenchyma. These latter tissues are separated by the endodermis which is not yet fully differentiated at root extremities and is reoriented by the development of lateral roots. Following infection, the pathogenic strain invades protoxylem vessels degrading cell walls. The colonization of approximately 25% of xylem vessels in each vascular bundle of the hypocotyl just above the collar zone is sufficient to induce partial wilting of a tomato plant. In contrast, the nonpathogenic strain was able to infect intercellular spaces of the inner cortex of some secondary roots, but was never observed in the vascular cylinder. The application of this approach should enable the characterization of the process of tomato root infection by genetically defined mutant strains of Pseudomonas solanacearum.

La technique ELISA a été appliquée à la détection de Pseudomonas phaseolicola dans des graines et des feuilles contaminées de haricot. Le test ELISA a été réalisé selon la méthode sandwich d’après CLARK & ADAMS (1977), modifiée par l’emploi de tampon substrat : Tris-HCI, NaCI avec la phosphatase alcaline d’Escherichia coli. Les immunoglobulines ont été purifiées par chromatographie d’affinité avec soit la protéine A, soit la bactérie entière Ps. phaseolicola comme ligand (fig. 1). Des études préalables ont montré que la technique ELISA donnait des résultats positifs avec les suspensions bactériennes et les filtrats correspondants après passage sur membrane de 0,22 μm. Dans nos conditions expérimentales, il ressort que : - la limite de sensibilité de cette technique correspond à une suspension bactérienne de 104 bactéries/ml en 4 h de réaction (tabl. 1). - Les métabolites bactériens contenus dans les filtrats donnent des réactions parallèles à celles obtenues avec les suspensions (tabl. 2 et 3). - La concentration de métabolites solubles détectés est d’environ 10 ng par ml par référence à la sérum albumine. - La sensibilité de la technique ELISA ne peut être exprimée en terme de concentration bactérienne mais plutôt en terme de concentration d’antigènes bactériens, solubles ou non. Il serait d’un grand intérêt de tenter d’établir une corrélation entre une concentration bactérienne et la production de métabolites correspondant dans des conditions naturelles d’environnement. Les résultats obtenus pour la détection de Ps. phaseolicola dans les graines et les feuilles de haricot contaminées par les techniques d’immunofluorescence ou ELISA sont identiques (tabl. 4 et 5). L’extraction et la purification de quelques métabolites bactériens liés au pouvoir pathogène doivent conduire à l’obtention d’antisérums spécifiques qui permettront des études qualitatives et quantitatives, par la technique ELISA de la production et de la distribution de ces métabolites pathogènes in vivo. La standardisation dans la purification des immunoglobulines et dans leur couplage avec une enzyme plus active est nécessaire pour permettre des comparaisons et pour améliorer la sensibilité de la technique ELISA., The ELISA technique has been applied to the detection of Pseudomonas phaseolicola in contaminated seed and leaves of bean. ELISA tests were performed according to the sandwich method as described by CLARK & ADAMS (1977) and slightly modified by using Tris-HCl saline buffer for the enzymatic phase with alkaline phosphatase from Escherichia coli. Purified immunoglobulins were obtained by affinity chromatography using either protein A, or whole bacterial Ps. phaseolicola as ligands (fig. 1). Preliminary studies revealed that the ELISA technique was effective when applied to bacterial suspensions or to corresponding filtrates through 0.22 μm membranes as well. Under our experimental conditions we found : i) that the lower limit of detection of the EusA sandwich method was about 104 bacteria per ml within four hours (table 1) ; ii) that the bacterial metabolites in the filtrates led to heavy, rapid positive responses (tables 2 and 3) ; iii) that the detectable amount of soluble protein is about 10 ng per ml by reference to serum albumin ; iv) that ELISA ensitivity could not be expressed in terms of bacterial concentration, but rather in terms of the concentration of bacterial antigens soluble or not. A question of major interest is to establish the possible correlation between a bacterial concentration and its related metabolite production under natural environmental conditions. A good correlation was demonstrated between the immunofluorescence indirect method and ELISA in detecting Ps. phaseolicola in contaminated seeds and leaves of bean (tables 4 and 5). The extraction and purification of some bacterial metabolites involved in pathogenicity, should lead to the production of specific antisera. These should be of great help in qualitative and quantitative studies by ELISA on the production and distribution of these pathogenic metabolites in vivo. Standardization in purifying immunoglobulins and in conjugating them with more active enzymes is needed to allow valid comparisons and improve the sensitivity of ELISA.