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Background Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) affects more than 18 million individuals in Germany. Real-world data help to better characterize the natural history of disease and standard of care. Methods The German NAFLD-Registry is a prospective non-interventional study initiated by the German Liver Foundation and aims to describe clinical characteristics and observe outcomes in patients with NAFLD recruited in secondary and tertiary care. Results From this ongoing study, baseline data of the first 501 patients (mean age 54 years, 48% women) were analysed. 13 % of the study population had a high risk for advanced fibrosis (FIB-4 ≥2.67), approximately one-third had a liver stiffness value ≥9.6kPa measured by transient elastography, and the clinical diagnosis of liver cirrhosis was present in 10%. Typical comorbidities were more prevalent in high risk as compared to low risk patients (FIB-4 Conclusion First data of the German NAFLD registry show that approximately every 10th patient has advanced NAFLD, highlights T2DM patients as a high-risk group and gives insights in the use of comedication and life-style interventions in secondary and tertiary care.

The urgent need in HCV-infected patients with liver disease mandated the rapid implementation of IFN-free DAA combination therapies following their regulatory approval in 2014 and 2015 without full knowledge of the optimal combinations and regimens. Investigating the evolution of the DAA utilization patterns and treatment outcomes could provide learnings for future situations. This was an analysis of a prospective observational database from the German Hepatitis C Registry (DHC-R) covering a period from May 2014 to September 2015. Adult patients had evidence of chronic HCV GT1 or GT4 infection and were treated with an IFN-free combination regimen of simeprevir (SMV) + sofosbuvir (SOF) or other IFN-free regimens: daclatasvir + sofosbuvir (DCV + SOF), ledipasvir/sofosbuvir (SOF/LDV), paritaprevir/r + ombitasvir ± dasabuvir (PrOD), with or without ribavirine (R). A total of 5496 subjects were followed during the period. During this period, clinical recommendations and treatment patterns evolved rapidly in response to new evidence from clinical trials and clinical routine and regulatory approval of additional regimens. High SVR12 rates were seen in this cohort, even in hard-to-treat patient subgroups. In the multivariate analysis, gender, age, advanced cirrhosis, and intensified treatment for cirrhotics were associated with treatment outcome. Despite limited knowledge of the optimal utilization of the newly approved DAA combinations and treatment durations as well as their comparative efficacy and safety profiles, high SVR rates were achieved regardless of the DAA combination. These outcomes were facilitated by the rapid adaptation of clinical recommendations. Future situations with high unmet medical need may follow a similar approach. Die dringende Behandlungsbedürftigkeit HCV-infizierter Patienten mit Lebererkrankung verlangte die rasche Einführung IFN-freier DAA-Kombinationstherapien nach ihrer Zulassung in 2014 und 2015 trotz unvollständigem Wissen über deren optimalen Einsatz. Die Untersuchung der Evolution des Einsatzes und der Ergebnisse könnte wichtige Erkenntnisse für zukünftige Situationen bergen. Diese Analyse einer prospektiven Kohorte des Deutschen Hepatitis C-Registers (DHC-R) deckt den Zeitraum von Mai 2014 bis September 2015 ab. Erwachsene Patienten mit chronischer HCV-GT1 oder GT4-Infektion wurden mit einer IFN-freien Therapie aus Simeprevir (SMV) + Sofosbuvir (SOF), oder anderen IFN-freien Regimen: Daclatasvir + Sofosbuvir (DCV + SOF), Ledipasvir/Sofosbuvir (SOF/LDV), Paritaprevir/r + Ombitasvir ± Dasabuvir (PrOD), mit oder ohne Ribavirin (R) behandelt. 5496 Patienten wurden während des Zeitraums beobachtet. In dieser Periode wandelten sich die klinischen Leitlinien und Behandlungsmuster rasch in Folge neuer Evidenz aus klinischen Studien und klinischer Erfahrung und der Zulassung von neuen Regimen. Hohe SVR12-Raten wurden in dieser Kohorte, selbst in schwierig zu behandelnden Patienten-Subgruppen, beobachtet. Die multivariate Analyse zeigte, dass Geschlecht, Alter, fortgeschrittene Zirrhose und die intensivierte Therapie bei Patienten mit Zirrhose mit dem Behandlungserfolg assoziiert waren. Trotz begrenzten Wissens um den optimalen Einsatz von neu zugelassenen DAA-Kombinationen und deren Behandlungsdauer sowie dem Vergleich ihrer Wirksamkeits- und Sicherheits-Profile wurden hohe SVR12-Raten mit verschiedenen DAA-Kombinationen erzielt. Diese Ergebnisse wurden unterstützt von einer raschen Adaption klinischer Therapie-Empfehlungen. Zukünftige Szenarien mit einem erheblichen ungedeckten medizinischen Bedarf könnten einem ähnlichen Ansatz folgen.

Einleitung: Die nicht alkoholische Fettlebererkrankung (non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD) stellt heutzutage in der westlichen Welt die haufigste Ursache einer chronischen Lebererkrankung dar. In der europaischen und US-amerikanischen Bevolkerung liegt die Pravalenz bei bis zu 30 %. Unklar ist die Versorgungssituation deutscher Fettleberpatienten. Methoden: An samtliche universitaren Leberzentren in Deutschland (n = 34) wurden Fragebogen (11 Fragen) zur Versorgungssituation der NAFLD-Patienten verschickt. Gefragt wurde u. a. nach dem Anteil von Fettleberpatienten in den Hochschulambulanzen, metabolischen Begleiterkrankungen und der Art der Zuweisung. Auch wurden die klinikinternen Standards erfasst. Hierbei wurden die Situationen von 2008 und 2013 miteinander verglichen. Ergebnisse: Die Rucklaufquote betrug 65 % (n = 22). Es zeigte sich, dass der Anteil von Fettleberpatienten in den Leberambulanzen zwischen 2008 und 2013 gestiegen war, wobei der uberwiegende Anteil von Patienten in den meisten Zentren von extern und nicht aus der eigenen Klinik uberwiesen worden war. Nur wenige Patienten wurden einem Diabetologen oder Endokrinologen vorgestellt, andererseits wurden aber durch die meisten Leberambulanzen Stoffwechselstorungen abgeklart. Nur gering ausgepragt war die Zusammenarbeit zwischen den Leberambulanzen und anderen Fachdisziplinen, diese wurde nur als mittelmasig bewertet, gemeinsame Besprechungen wurden nur selten abgehalten. Verlaufskontrollen der Patienten finden in allen Zentren regelmasig statt, allerdings nach unterschiedlichen Kriterien. Ein einheitlicher Algorithmus zur Risikobeurteilung und invasiven Diagnostik existiert nicht. Schlussfolgerung: Das Problembewusstsein um NAFLD-Patienten scheint in den letzten Jahren gestiegen zu sein. Dennoch ist die Betreuung dieser Patienten heterogen, einheitliche Standards existieren nicht. Eine gemeinsame Leitlinie ist daher dringend erforderlich.

Poster-Abstract

We had synthesized the bile acid-phospholipid conjugate UDCA-LPE which was demonstrated to be cytoprotective against TNF-α-induced apoptosis with a mechanism involving cFLIP/caspase 8 signalling. We found that UDCA-LPE activated ERK1/2 phosphorylation. It is known that ERK1/2/MAPK pathway regulates cellular survival and apoptosis, we now ask a question whether ERK1/2 could regulate cFLIP during intrinsic apoptosis. HepG2 cells were subjected to knockdown experiments using cFLIP, ERK1/2 or control siRNAs, and subsequently treated with UDCA-LPE or vehicle. cFLIP mRNA and protein was analyzed by RT-PCR and Western Blot. Caspase 3 and 8 activities were measured by luminescence. By using cFLIP- or ERK1/2-knockdown, we now showed that UDCA-LPE was protective against TNF-α-induced apoptosis in HepG2 cells via cFLIP/caspase 8 but not ERK1/2 pathway. UDCA-LPE also strongly rescued the expression of cFLIP proteins (55 and 43 KDa) and mRNA when their expression levels were decreased upon cFLIP knockdown. cFLIP knockdown did not inhibit ERK1/2 protein expression. On the contrary, ERK1/2 knockdown inhibited cFLIP protein expression and suppressed the ability of UDCA-LPE to upregulate cFLIP. ERK1/2 knockdown induced intrinsic mitochondrial cell death by markedly increasing caspase 3 and, to a lesser extent, caspase 8 activities, both of which were inhibitable by UDCA-LPE. The ability of UDCA-LPE to inhibit caspase 8 activity despite of no increase in cFLIP indicated the lack of role of cFLIP in UDCA-LPE protection during intrinsic apoptosis. Thus, UDCA-LPE inhibited extrinsic TNF-α-induced apoptosis by interfering with cFLIP/caspase 8, but not by ERK1/2/MAPK pathway. UDCA-LPE suppressed intrinsic apoptosis by activating ERK1/2 and inhibiting caspase 3 activation, which was likely as a result of UDCA-LPE’s ability to stabilize mitochondrial membrane. Anti-apoptotic effects of UDCA-LPE in both forms of cell death render it as a therapeutic agent to treat liver disease.

We had synthesized the bile acid-phospholipid conjugate ursodeoxycholyl lysophosphatidylethanolamide (UDCA-LPE) which was designed to target hepatocytes via bile-acid transport systems. By using a fluorescent labelled analog UDCA-NBDPE, we showed that the conjugate was taken up by HepG2 cells and also targeted the liver in vivo. We also showed that UDCA-LPE was cytoprotective in HepG2 cells during starvation and TNF-α-induced apoptosis. Here we demonstrated that PI3K inhibitor LY294002 reversed cytoprotective effects of UDCA-LPE in both experimental models indicating that PI3K/Akt pathway may be involved in cytoprotection. Western analyses revealed that UDCA-LPE activated phosphorylation of ERK1/2(Thr202/Tyr204) as well as Akt(Ser473). The activation of both pathways was inhibited by an inhibitor of EGFR activation PD168383; thus, UDCA-LPE may interact with and activated EGFR kinase in plasma membrane to trigger survival signals. Downstream of ERK1/2 activation, we found that UDCA-LPE consistently induced phosphorylation of p90RSK, and pBad(Ser112) in a dose- and time-dependent manner. Downstream of PI3K/Akt activation, UDCA-LPE (but not its metabolite LPE or UDCA) evoked phosphorylation of GSK-3α/β. UDCA-LPE also upregulated cFLIP expression and this was concomitant with an inhibition of cleaved caspase 8 during TNF-α-induced apoptosis. Collectively, UDCA-LPE is a potent hepatoprotectant by activating the two major survival ERK1/2 MAP kinase and PI3K/Akt pathways. UDCA-LPE may be of potential therapeutic importance for treatment of liver diseases.

Einleitung: D-Galaktosamin/Lipopolysaccharid (Gal/LPS) verursacht in der Maus eine akute, Endotoxin-vermittelte Hepatitis; einer der zentralen Mediatoren dieser inflammatorischen Leberschadigung ist TNFα. In Vorarbeiten wurde gezeigt, dass das Gallensaure-Phospholipid-Konjugat UDCA-LPE Leberzellen vor TNFα-induzierter Apoptose und Inflammation schutzen kann und in vivo selektiv in die Leber aufgenommen wird. Die Wirkung des Konjugats wurde in dieser Studie im Maumodell fur einen Gal/LPS-induzierten Leberschaden untersucht. Ergebnisse: In C57BL/6 Mausen wurde durch i.p. Injektion von Gal/LPS eine akute Hepatotoxizitat induziert. Eine Vorbehandlung der Mause mit 30mg/kg UDCA-LPE 1h vor Gal/LPS-Gabe konnte die akute Hepatitis stark abschwachen, einhergehend mit einer 80–90%-igen Abnahme der Serum-Aktivitaten von GOT, GPT und LDH. Die HE-Farbung der Leberschnitte zeigte einen deutlichen Ruckgang der histologischen Zeichen einer akuten Hepatitis durch UDCA-LPE. Die Aktivitaten von Caspase 3/7- und 8 im Serum der vorbehandelten Tiere waren um 90% reduziert, analog war eine Abnahme der apoptotischen Hepatozyten im TUNEL Assay nachweisbar. Der Schutz gegenuber Gal/LPS durch UDCA-LPE ging mit einer Hemmung der PhospholipaseA2-Aktivitat einher, sowie konsekutiv mit einer signifikanten Abnahme der Konzentration von Lysophosphatidylcholin (LPC) bzw. des LPC/PC Verhaltnisses in Leberlysaten, sowie mitochondrialen Lipiden. Microarray Analyse und quantitative RT-PCR aus Lebergewebe ergaben eine reduzierte Expression von proinflammatorischen Cyto- und Chemokinen, wie z.B. MCP1, RANTES und VCAM1, sowie eine signifikante Konzentrationsabnahme der Chemokine im Serum durch UDCA-LPE. Schlussfolgerung: Zusammenfassend konnte eine deutliche Reduktion des Gal/LPS-induzierten Leberschadens durch UDCA-LPE im Mausmodell nachgewiesen werden. UDCA-LPE zeigt damit ein vielversprechendes Wirkungsprofil, das in Hinblick auf mogliche therapeutische Anwendungen weiter evaluiert werden sollte.