Search

TEZ9819 Tez (Yüksek Lisans) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2013. Kaynakça (s. 77-83) var. xvi, 92 s. : res. (bzs. rnk.), tablo ; 29 cm. Son yıllarda, enzim immobilizasyonu için manyetik nanopartiküllerin kullanılmasına olan ilgi oldukça artmıştır.Bu çalışmada lipaz enziminin immobilizasyonu için yeni bir destek materyali olarak manyetik özellikte ve nanoboyutta Fe3O4 tanecikleri sentezlenmiş ve lipaz enziminin Fe3O4 manteyik nanopartiküllere farklı arakollar üzerinden(GA ve ECH) immobilizasyonu ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Fe3O4 nanopartikülünün karakterizasyonu için SEM, FTIR, XRD kullanılmıştır. Sentezlenen nanopartiküllerin yaklaşık 158,2 nm çapında olduğu gözlemlenmiştir. Serbest ve immobilize lipazların ortam koşullarına göre aktivite ölçümleri yapılarak, optimum sıcaklık, optimum pH, depolama kararlılığı, termal kararlılığı ve tekrar kullanım kararlılığı incelenmiş ve kinetik sabitler belirlenmiştir.Serbest ve immobilize lipazlar için optimum pH 7,0 olarak bulunmuştur. Serbest ve immobilize lipazlar için optimum sıcaklık 40 0C olarak belirlenmiştir. Serbest ve immobilize lipazların farklı sıcaklıklarda belirlenen termal kararlılıkları karşılaştırılmış ve immobilize enzimlerin dayanıklılığının serbest haline göre daha fazla olduğu gözlenmiştir. Belirlenen optimum koşullarda serbest lipaz için Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km değerleri sırasıyla 0,48 mM, 420,7 U/mg protein, 2,82x104 dk-1, 58,8x103 dk-1 mM-1, immobilize lipaz (GA) için sırasıyla 1,3 mM, 33,6 U/mg protein, 2,25x103 dk-1, 1,73x103 dk-1 mM-1, immobilize lipaz (ECH) için sırasıyla 9,4 mM, 51,7 U/mg protein, 3,47x103 dk-1, 0,37x103dk-1 m M-1 olarak hesaplanmıştır. İmmobilize lipazın tekrar kullanılabilirliği kesikli reactor modelinde araştırılmıştır ve 20 kullanım sonrası immobilize lipazların başlangıç aktivitelerini sırasıyla % 71 (GA) ve % 63 (ECH) ‘ ünü koruduğu belirlenmiştir. Serbest lipazın 50C ve 250C’ de 30 gün depolama süresi sonunda kalan aktivitesi sırasıyla başlangıç aktivitesin %37 ve %23’ üdür. Bununla birlikte immobilize lipazların 50C ve 250C’de 30 gün depolama süresi sonunda sırasıyla başlangıç aktivitelerinin %50 (GA), %44 (ECH) ve %44 (GA), %28 (ECH)’ ini korumuştur. In recent years, much attention has been paid toward synthesis of magnetic nano sized particles and their use for immobilization of enzyme. In this study, magnetic nano sized Fe3O4 particles were synthesized and covalent immobilization and characterization of lipase enzyme on magnetic nanoparticles by various intermediate arms (GA and ECH) are researched. Characterization of Fe3O4 nanoparticles was conducted using FTIR, SEM and XRD. The size of prepared nano particles was found approximately 158,2 nm diameter. Activitiy measurements of free and immobilized lipases were conducted in order to determine optimum temperature, optimum pH, storage stabilitiy, heat stability and reusability as well as kinetic parameters ( Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km ). Optimum pH was determined as 7,0 for free and immobilized lipases. Optimum temperature was determined 40 0C for free and immobilized lipases. The termal stabilities of free and immobilized lipases have been improved greatly .For freelipase at optimum conditions Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km values were calculated as sırasıyla 0,48 mM, 420,7 U/mg protein, 2,82x104 dk-1, 58,8x103 dk-1 mM-1 , the same values of immobilized lipase (GA) were calculated as respectively 1,3 mM, 33,6 U/mg protein, 2,25x103 dk-1, 1,73x103 dk-1 mM-1and for immobilized lipase (ECH) calculated as sırasıyla 9,4 mM, 51,7 U/mg protein, 3,47x103 dk-1, 0,37x103 dk-1 m M-1 .Reusability of immobilize lipases was investigated in a batch type reactor. After 20 reuses, residual activites of immobilized lipase were about %71 (GA) and %63 (ECH) of its initial activity. The residual activity for free lipase stored at 50C and 250C for 30 days were %37 and %23 of its initial activity, respectively. However, the immobilized lipases protected %50 (GA), %44 (ECH) and to %44 (GA) ,%28 (ECH) of its original activities at 50C and 250C,respectively for 30 days. Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: FEF2012YL12.

TEZ9176 Tez (Doktora) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2013. Kaynakça (s. 89-98) var. xvii, 105 s. : res. (bzs. rnk.), tablo ; 29 cm. Tıbbi amaçlı uygulamalar için immobilizasyon sistemlerinin geliştirilmesinde en çok kullanılan enzimlerin başında üreaz gelir. Üreaz, ürenin amonyum ve karbondioksite dönüşmesini sağlayan bir enzimdir. Enzim taşıyıcı materyallerin boyutundaki küçülmeler genellikle immobilize enzimin etkinliğini arttırır ve bu sayede partikülün birim kütlesi başına bağlanan enzim miktarı artar. Bu çalışmada, Fe3O4 magnetik nanopartiküllerin sentezi ve üreaz enziminin Fe3O4 magnetik nanopartiküllere farklı ara kollar üzerinden kovalent olarak immobilizasyonu ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Serbest ve immobilize enzimlerin maksimum aktivite gösterdiği koşullar (pH, tampon derişimi ve sıcaklık) belirlenerek kinetik parametreleri (Km, Vmax, kcat/Km, Ea) bulunmuştur. İmmobilize üreaz örneklerinin termal kararlılıkları, depolama kararlılıkları ile tekrar kullanılabilirlikleri kesikli reaktörlerde araştırılmıştır. Ayrıca immobilize üreaz örneklerinin taramalı elektron mikroskobunda görüntüleri incelenmiştir. Üreaz enziminin glutaraldehit (GA) ve epiklorohidrin (ECH) ara kolları üzerinde magnetik nanopartiküllere immobilizasyonu sonucu Km ve Vmax değerlerinin arttığı görülmektedir. Glutaraldehit ara kolu üzerinden immobilize üreazın kcat/Km (2,746dk- 1M-) ve epiklorohidrin ara kolu üzerinden immobilize üreazın kcat/Km (2,761 dk-1M-1) oranları serbest üreazın kcat/Km (4,139 dk-1M-1) oranına göre yaklaşık 1,5 kat azalmıştır. Serbest ve immobilize üreazın farklı sıcaklıklarda belirlenen termal kararlılıkları karşılaştırılmış ve serbest enzime göre immobilize enzimler yüksek sıcaklık ve sürede aktivitesini daha fazla koruduğu tespit edilmiştir. Tekrar kullanılabilirliği kesikli reaktör modelinde araştırılmış ve 20 kullanımdan sonra immobilize enzimlerin aktivitelerini sırasıyla %57 (GA) ve %61 (ECH)’ini koruduğu belirlenmiştir. Serbest üreazın 5°C’de ve 25°C’de 30 gün depolanma süresi sonunda kalan aktivitesi sırasıyla başlangıç aktivitesinin %30 ve %23’üdür. İmmobilize enzimler için 5°C’de ve 25°C’de 30 gün depolanma süresi sonunda sırasıyla başlangıç aktivitesini %72, %71’ini (GA) ve %60, %57’sini (ECH) koruduğu tespit edilmiştir. Urease is one of the foremost enzymes used mostly in the development of immobilization systems for medical applications. Diminution in the extent of materials carrying enzymes generally increases the efficiency of immobilized enzyme and so the amount of the enzyme bounded to the per unit of the particle increases. In this study, the synthesis of Fe3O4 magnetic nanoparticles and covalent immobilization and characterization of urease enzyme on magnetic nanoparticles by different intermediate arms are researched. By defining the conditions in which free and immobilized enzymes show maximum activity (pH, buffer concentration and temperature) kinetic parameters (Km, Vmax, kcat/Km, Ea) are found. Thermal stability, storage stability and reusability of immobilized urease samples are searched in batch reactors. Besides, the images of immobilized urease samples in scanning electron microscope are investigated. As a result of the immobilization of urease enzyme to magnetic nanoparticles on glutaraldehyde, epichlorohydrin intermediate arms, it is seen that the values of Km and Vmax increase. Compared to free urease’s kcat/Km (4,139 dk-1M-1) rate, the rate of immobilized urease on glutaraldehyde arms kcat/Km (2,746dk-1M-) and the rate of immobilized urease on epichlorohydrin arms kcat/Km (2,761 dk-1M-1) decrease almost one and a half fold. The thermal stabilities of free and immobilized urease are compared and it is determined that immobilized enzymes can maintain their activities in high temperatures and to a longer extent compared to free enzymes. Its reusability is searched on batch reactor model and after 20 uses, it is determined that immobilized enzymes retain their activities %57 (GA) and %61 (ECH) respectively. The activity of free urease maintained after the 30 days of storage time in 5°C and 25°C is %30 and %23 of its initial activity. For immobilized enzymes, it is figured that in 5°C and 25°C after 30 days of storage time, it maintains %72, %71 (GA) and %60, %57 (ECH) of its initial activity respectively. The thermal stability of free and immobilized urease designated in different temperatures are compared and it is found that immobilized enzymes retain their activity more. Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: FEF2011D31.

Tez (Yüksek Lisans) -- İstanbul Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 2006, Thesis (M.Sc.) -- İstanbul Technical University, Institute of Science and Technology, 2006, Bu çalışmada proteaz enziminin çitin ve çitosan üzerine kovalent bağ ile immobilize edilmesi incelenmiştir. Denenen taşıyıcılar içinde en yüksek immobilize enzim aktivitesi elde edilmesi nedeniyle, Proteaz-PFS’nin glutaraldehitle çapraz bağlanma metoduyla aktive edilenleri seçilmiştir. En yüksek aktivite geri kazanımı (AGK) ve etkinlik oranını (EO) elde edecek şekilde immobilizasyon koşullarının optimizasyonu gerçekleştirilmiştir. Çapraz bağlanma için kullanılan glutaraldehit konsantrasyonun optimum değeri %1 (h/h) olarak belirlenmiştir. Kullanılan tampon çözeltinin pH ve konsantrasyon değerleri, immobilizasyon üzerinde iyonik şiddetin önemi sebebiyle araştırılmış ve en yüksek değerler pH 12, 0.5 M tampon (Tris-HCl) kullanıldığı durumlarda elde edildiği gözlenmiştir. Optimum taşıyıcı(mg) / enzim oranı(ml) çitin için 1.4 mg/ml, çitosan için ise 1 mg/ml olarak belirlenmiştir. Her iki taşıyıcı için de en iyi kontağın sağlandığı enzim(ml) / tampon(ml) oranı 0.25 ml/ml’dir. İmmobilize edilen proteazın sıcaklık kararlılığı her iki taşıyıcı için de 50oC’den 70oC’ye kaymıştır. Serbest enzimin %7 aktivite gösterdiği pH 12’de immobilize enzim çitin üzerine %54 çitosan üzerinde ise %34 aktivite göstermiştir. Tekrar kullanımlarına bakıldığında çitin üzerine immobilize edilmiş proteazın 6 tekrar kullanım sonunda başlangıç aktivitesinin %68’ini çitosan üzerine immobilize edilmiş proteazın ise başlangıç aktivitesinin %62’sini koruduğu tespit edilmiştir. Deterjan uyumluluğunda ise immobilize enzimin sıcaklık etkisiyle gösterdiği aktivite düşüşüne ek olarak çitin üzerindeki immobilize enzimde yaklaşık %24 çitosan üzerindeki immobilize enzimde ise yaklaşık %20’lik bir aktivite kaybı daha gösterdiği gözlenmiştir. Saklama kararlılığa bakıldığında ise 65 gün sonunda immobilize enzimin koruğu aktivite çitin için, %83, çitosan için ise % 87 olarak belirlenmiştir., Immobilization of protease, by covalent binding on chitin and chitosan was investigated in this study. Protease-PFS was activated by cross linking with glutaraldehyde, was selected among the tested carriers, because of the highest immobilized enzyme activity. The optimization of immobilization conditions was performed to obtain the highest activity recovery (AR) and effluent ratio (ER). The optimum concentration of glutaraldehyde was selected as 1% (v/v). Buffer pH and concentrations were investigated because of their influence of ionic strength on immobilization. Highest values were obtained when pH 12, 0.5M buffer (Tris-HCl) was used. The optimum carrier/enzyme ratio was 1.4 for chitin and 1 for chitosan. Enzyme/buffer ratio was 0.25 as a result of good contact between the carriers and enzyme molecules. Temperature stability of protease enzymes was shifted from 50oC to 70oC when immobilized on both carriers. While free enzyme could save only 7% of its original activity at pH 12, immobilized enzymes on chitin and chitosan could preserve 54% and 34% of their original activities respectively. To evaluate the reusability of proteases immobilized on chitin and chitosan, they were assayed 6 times consecutively, after 6 cycles, immobilized proteases on chitin and chitosan saved 68% and 62% of their activities. In the presence of detergent enzymes immobilized on chitin and chitosan lost 24% and 20% of their activities respectively. In the case of storage stability, after 65 days, proteases immobilized on boths carriers saved 83% and 87% of their original activities., Yüksek Lisans, M.Sc.