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Introduction et but de l’etude Selon le CIRC, plus de 10 % des cancers seraient lies a une alimentation desequilibree et un surpoids. La localisation mammaire est la plus frequente chez la femme et concerne chaque annee, en France, pres de 50 000 patientes. Notre etude a pour objectif de clarifier le role des acides gras omega 3 sur la severite de la pathologie mammaire, selon la nature des lipoproteines qui les transportent. Materiel et methodes L’etude a ete realisee chez des patientes atteintes de pathologie mammaire cancereuse (n = 100, CRB-Tumorotheque -ICO) se differenciant par leur index de proliferation (KI67 30 % ou Prolif + ). Les caracteristiques clinicobiologiques des patientes ont ete collectees. Apolipoproteines et acides gras omega3 seriques ont ete quantifies par LC-MS/MS apres separation des lipoproteines contenant l’apo B (LpB) ou ne la contenant pas (LpA). Les criteres principaux de l’etude ont fait l’objet d’une analyse univariee par regression logistique sur les 2 groupes de patientes, exprimes en mediane [25e–75e], OR [5e–95e]. Resultats et analyse statistique Les patientes sont majoritairement atteintes de Carcinome Infiltrant de Type Non Specifique ou CITNS (98 %), le groupe Prolif- etant significativement plus âge (63,8 ans [43–79] vs 55,4 ans [27–82]; p Conclusion Les taux seriques d’EPA des lipoparticules contenant l’apolipoproteine B (VLDL et LDL) varient selon la severite de la pathologie cancereuse mammaire avec des taux plus eleves dans les situations les moins pejoratives. Cette etude preliminaire suggere donc un effet protecteur specifique de certains AG omega3 transportes par des lipoparticules specifiques. Une confirmation de ces observations cliniques est envisagee a travers une approche mecanistique in vitro.

Objectives Preeclampsia (PE) is a hypertensive disorder of pregnancy associated with abnormal placentation leading to poor placental perfusion, oxidative stress, and inflammation, which then leads to the dysfunction of the maternal endothelium. High density lipoproteins (HDL) exert protective effects on the vascular endothelium, especially by exerting an antioxidant effect and by stimulating the NO (nitric oxide) production by a mechanism involving sphingosine-1 phosphate (S1P). However, HDL can become dysfunctional and lose these protective properties. An increase in low-density lipoprotein (LDL) oxidation and a decrease in NO production have been described in PE. We hypothesized that HDL become dysfunctional in PE and fail to protect the maternal endothelium with, in particular, a loss of their antioxidant properties, explaining the increase of LDL oxidation and an S1P depletion explaining the decrease in NO production. Methods We conducted a case-control study in 10 pregnant women with early severe PE matched by age and gestational age to 10 control healthy pregnant women. We isolated HDL from the serum of patients and control women by ultracentrifugation. In order to evaluate the antioxidant effect of HDL, we incubated human endothelial cells with the purified HDL, LDL and CuSO4 for 6 hours. Then, we measured TBARs (ThioBarbituric Acid Reactive Substances) produced in cell culture supernatants. We have also measured the concentrations of S1P and apoM (apolipoprotein M), the apolipoprotein which binds S1P in HDL, by LC-MS-MS. Results The TBARs levels in culture supernatants were significantly raised when the endothelial cells were incubated with HDL purified from PE women rather than with HDL purified from control pregnant women (respectively 3.24 ± 1.25 μM versus 2.50 ± 0.95 μM, mean ± SD, P = 0.02). These data show that HDL from PE patients have less antioxidant effect than HDL from pregnant control women. S1P and apoM concentrations were significantly lower in HDL purified from PE women compared to HDL purified from control pregnant women, with a strong correlation (r = 0.75) between the concentrations of these 2 parameters (respectively, 477 ± 131 versus 659 ± 120 nM/L for S1P and 1.5 ± 0.3 versus 2.1 ± 0.7 mg/dL for apoM, P Conclusion We showed that HDL from PE pregnant women lose their antioxidant properties and are depleted in S1P and apoM, which could explain respectively the increase in LDL oxidation and the decrease in NO production by the endothelium previously described in the PE. These dysfunctional HDL, whose composition is modified, may be less protective for the vascular endothelium, a mechanism potentially involved in the pathophysiology of endothelial dysfunction seen in PE.

An ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC™-MS/MS) assay was developed for the simultaneous analysis of histamine, its major metabolite tele-methylhistamine, and an internal standard (N-tele-(R)-α-dimethylhistamine) from human cerebrospinal fluid (CSF) samples. The method involves derivatization of primary amines with 4-bromobenzenesulfonyl chloride and subsequent analysis by reversed phase liquid chromatography with mass spectrometry detection and positive electrospray ionization. The separation of derivatized biogenic amines was achieved within 3.5 min on an Acquity® BEH C(18) column by elution with a linear gradient of acetonitrile/water/formic acid (0.1%). The assay was linear in the concentration range of 50-5000 pM for each amine (5.5-555 pg/ml for histamine and 6.25-625 pg/ml for tele-methylhistamine). For repeatability and precision determination, coefficients of variation (CVs) were less than 11.0% over the tested concentration ranges, within acceptance criteria. Thus, the developed method provides the rapid, easy, highly sensitive, and selective requirement to quantify these amines in human CSF. No significant difference was found in the mean ± standard error levels of these amines between a group of narcoleptic patients (histamine=392 ± 64 pM, tele-methylhistamine=2431 ± 461 pM, n=7) and of neurological control subjects (histamine=402 ± 72 pM, tele-methylhistamine=2209 ± 463 pM, n=32).

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Introduction PCSK9 reduit les recepteurs des LDL et son inhibition reduit fortement le LDL-C. Cependant, peu d'information est disponible sur la regulation physiologique de PCSK9. Une etude recente a montre une reduction de PCSK9 par un jeune de courte duree. Notre objectif a ete d'analyser ce phenomene lors d'un jeune plus prolonge et de preciser l'effet de l'alimentation ainsi que l'impact sur la cinetique des LDL. Materiels et methodes 6 volontaires sains ont ete soumis en ordre randomise a deux infusions continues de ²H3 leucine pendant 12 heures afin de marquer l'ApoB-LDL. Ils devaient durant chaque infusion, soit etre a jeun, soit recevoir toutes les heures 1/12 e de leur apport calorique journalier. Des prelevements veineux ont ete realises pour mesurer l'enrichissement isotopique de l'ApoB et determiner des LDL. PCSK9 a ete mesure 6 heures et 12 heures apres le debut de l'infusion. Resultats Le catabolisme des LDL avait une tendance a etre plus eleve avec le jeune (0,027 + 0,001 vs 0,023 + 0,001 h-1, p =0.1).La concentration de PCSK9 etait reduite par le jeune et augmentait avec l'alimentation a 6 heures (157 + 10 vs 224 + 20ng/ml, p =0,01) et 12 heures (133 + 12 vs 269 + 33ng/ml, p =0,003). Les aires sous courbe de PCSK9 ajuste a la valeur basale etaient differentes (– 838 + 118 vs +530 + 121ng/ml × 12 heures, p =0,01). Des correlations ont ete constatees entre FSR et PCSK9 a 6 heures et 12 heures ( r =0,5, p Conclusion les concentrations plasmatiques de PCSK9 sont reduites par le jeune et augmentees par l'alimentation. Ces variations influencent l'epuration des LDL. Le role specifique des nutriments ou l'impact de PCSK9 sur la lipemie postprandiale meritent d'etre explore. Declaration d’interet Les auteurs declarent ne pas avoir d'interet direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme prive, industriel ou commercial en relation avec le sujet presente.

Introduction La lipodystrophie congenitale de Berardinelli-Seip (BSCL) est caracterisee par une absence generalisee de tissu adipeux et une lipotoxicite responsable d'une insulinoresistance. Dans 50 % des cas, la BSCL est causee par des mutations dans le gene BSCL2 codant pour la seipine. Il est etabli que la seipine joue un role cle dans la differenciation adipocytaire. Nous avons developpe un modele cellulaire unique pour etudier la fonction de la seipine in vitro dans l'adipocyte mature. Materiels et Methodes Des pre-adipocytes 3T3L1 sont infectes par un lentivirus portant un ARN interferent inductible, dirige contre l'ARNm de Bscl2. Le shRNA est induit 4 jours apres le debut de la differenciation par ajout de doxy-cycline. Le phenotype portant le shRNA dirige contre l'ARNm de Bscl2 (SKD) est comparee a celui d'une lignee portant un shRNA controle (NTC). Resultats A la fin de la differenciation (jour 8), les cellules SKD traitees par la doxycycline (SKDi) presentent une baisse de 80 % de l'expression de l'ARNm de la seipine. Des analyses de coloration a l'huile rouge, du profil d'expression genique, de la signalisation de l'insuline et de la lipolyse stimulee permettent d'affirmer que les SKDi possedent a ce stade toutes les caracteristiques des adipocytes matures. Cependant, a partir de 14 jours de culture, les SKDi ont une apoptose elevee illustree par une forte augmentation de l'activite caspase-3 (+ 400 % comparee aux cellules controles). En parallele, les voies de signalisation de NFKB et de la p38-MAPK, impliquees dans le stress cellulaire, sont activees dans les SKDi. Apres 21 jours de culture, une diminution drastique du nombre d'adipocytes matures est observee uniquement chez les SKDi. Enfin, l'analyse du profil lipidomique des SKDi revele une importante diminution de la quantite de phosphatidylcholine (− 25 %). Conclusions Nos donnees demontrent que la deficience en seipine dans l'adipocyte mature provoque in fine la mort par apoptose. Nos resultats suggerent que l'absence de seipine affecte la synthese des phospholipides ce qui pourrait alterer la composition membranaire et activer les voies du stress cellulaire. Des travaux sont encours pour identifier les mecanismes moleculaires impliques.

Introduction Les etudes cinetiques du metabolisme des lipoproteines font appel a des analyses ciblees sur peu d'elements de leur composition (apolipoproteines, cholesterol, acide gras). De nouveaux outils de spectrometrie de masse permettent d'identifier un spectre plus large de composes mais leur apport pour des etudes cinetiques n'a pas ete etabli. Notre objectif a ete d'explorer l'utilite et les difficultes de ces nouvelles techniques pour l'analyse cinetique d'un grand nombre de composes lipidiques des lipoproteines et/ou plasmatiques. Materiels et methodes Huit chiennes Beagle obeses, ovariectomisees et insulino-resistantes (2,7±0,1 ans ; 19,2±1,1 kg) ont ete soumises a une infusion continue de 13C-Acetate (2 µmol/kg/min-8 heures). Des prelevements sanguins ont ete realises toutes les heures. Les lipides plasmatiques ont ete extraits, puis analyses par chromatographie liquide couplee a la spectrometrie de masse haute resolution. Resultats L'analyse multivariee des empreintes lipidiques globales du plasma a permis de mettre en evidence 155 marqueurs lipidiques complexes (phospholipides, sphingolipides, acylglycerides, sterols…). L'etude des rapports isotopiques 13C/12C a detecte une incorporation significative du traceur pour certains d'entre eux. Ainsi l'abondance en 13C de l'acide hydroxyeicosatetraenoique (HETE), le triglyceride (52: 3), le cholesterol et le zymosterone a ete accrue respectivement de 0,8 ; 1,9 ; 5,5 et 12,0 % en 12 heures ( p Conclusion Ces methodes analytiques, simples a mettre en œuvre, constituent de puissants outils pour l'etude: 1) des profils lipides, 2) de la repartition isotopique qui est tres heterogene et probablement tres sensible aux situations metaboliques, 3) pour les plus forts enrichissements, des etudes cinetiques specifiques pourront etre realisees. Les signaux obtenus apportent de nouvelles et plus larges informations utiles a la comprehension des mecanismes physiopathologiques. Declaration d’interet Les auteurs declarent ne pas avoir d'interet direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme prive, industriel ou commercial en relation avec le sujet presente.

Objectif Une etude lipidomique non ciblee a ete realisee sur des sujets hypertriglyceridemiques traites avec la niacine afin d'identifier de nouveaux marqueurs lipidiques associes a ce traitement. Patients et methodes Huit sujets hypertriglyceridemiques âges de 48±12 ans (IMC moyen=31,2±1,8 kg/m²) ont ete inclus dans une etude en chasse-croise pendant 8 semaines. Chaque patient a recu de facon randomisee, soit une dose quotidienne de niacine (Niaspan ® ) soit un placebo. Une analyse lipidomique a ete realisee sur les echantillons plasmatiques avant et apres traitement par UHPLC-ESI-HRMS. Resultats Par rapport au placebo, une reduction des TG plasmatiques de 46 % ( p p p p p =0,021), sphingomyeline (d18: 1/22: 0) (– 60 %, p =0,025), lysophosphatidylcholine (20: 5) (+ 67 %, p =0,035), et TG (16: 0/16: 1/18: 2) (– 25 %, p =0,049). Ces composes lipidiques ont ete prealablement impliques dans l'atherogenese. Conclusion Quatre nouveaux marqueurs lipidiques susceptibles d'etre impliques dans un effet anti-atherogene de la niacine ont ete caracterises avec une analyse lipidomique non ciblee. Il reste a determiner comment ces marqueurs sont associes, en comparaison aux lipides plasmatiques habituels, a la prevention d'evenements dans les etudes d'intervention cardiovasculaire. Declaration d’interet Les auteurs declarent ne pas avoir d'interet direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme prive, industriel ou commercial en relation avec le sujet presente.

Introduction et but de l’etude La lecithine cholesterol acyltransferase ou LCAT, enzyme responsable de l’esterification du cholesterol plasmatique, joue un role crucial dans le transport inverse du cholesterol, en facilitant l’elimination de l’exces de cholesterol sous forme de cholesterol esterifie, des tissus peripheriques vers le foie pour y etre ensuite elimine. Cette enzyme permet la formation de la majorite des esters de cholesterol (CE) par hydrolyse et transfert d’un acide gras (AG) de la phosphatidylcholine (PC) et la formation de la lysophosphatidylcholine (LPC). Il a ete reporte in vitro que les acides gras omega 3 stimulent l’activite de la LCAT (VAYSSE-BOUE C et al , 2007). L’objectif de cette etude etait de montrer si une supplementation en AGPI omega 3 chronique chez des sujets hypertriglyceride-miants, permettait une augmentation de l’activite in vivo de la LCAT. Materiel et methodes Six sujets hypertriglyceridemiants (IMC 27 kg/m 2 ) ont ete supplementes avec un melange EPA/DHA de 1,8 g/jour pendant deux mois. Les patients ont recu une double perfusion pendant 14 h de [ 2 H 3 ] leucine et de 13 C 2 -acetate. L’enrichissement isotopique de l’Apolipoproteine A1, le cholesterol libre et esterifie des HDL a ete determine par GC-MS et GC-C-IRMS. Les courbes d’enrichissement ont ete analysees par modelisation multi-compartimentale et le debit d’esterification du cholesterol, correspondant a l’activite in vivo de la LCAT a ete mesure. L’analyse lipidomique globale plasmatique a ete realisee par LC-ESI-MS/MS. Resultats et Analyse statistique Resultats Apres traitement nutritionnel avec les AGPI omega 3, l’analyse lipidomique globale a permis de montrer un enrichissement des LPC, PC, triglycerides, et cholesterol esterifie en EPA et DHA ainsi qu’une diminution de ces lipides contenant des AGS et AGPI omega 6 consideres comme pro-inflammatoires et pro-atherogenes. L’activite in vivo de la LCAT a montre une augmentation significative de 30 % . Conclusion Une augmentation parallele des deux biomarqueurs PC et LPC de la LCAT ainsi qu’une augmentation significative de l’activite de la LCAT dans les HDL montre une activite renforcee de cette enzyme en presence d’AGPI omega 3 favorisant une protection contre le risque cardiovasculaire.