Search

Immunodiagnostic tests for detecting dengue virus infections encounter challenges related to cross-reactivity with other related flaviviruses. Our research focuses on the development of a synthetic multiepitope antigen tailored for dengue immunodiagnostics. Selected dengue epitopes involved structural linearity and dissimilarity from the proteomes of Zika and Yellow fever viruses which served for computationally modeling the three-dimensional protein structure, resulting in the design of two proteins: rDME-C and rDME-BR. Both proteins consist of seven epitopes, separated by the GPGPG linker, and a carboxy-terminal 6 × -histidine tag. The molecular weights of the final proteins rDME-C and rDME-BR are 16.83 kDa and 16.80 kDa, respectively, both with an isoelectric point of 6.35. The distinguishing factor between the two proteins lies in the origin of their epitope sequences, where rDME-C is based on the reference dengue proteome, while rDME-BR utilizes sequences from prevalent Dengue genotypes in Brazil from 2008 to 2019. PyMol analysis revealed exposure of epitopes in the secondary structure. Successful expression of the antigens was achieved in soluble form and fluorescence experiments indicated a disordered structure. In subsequent testing, rDME-BR and rDME-C antigens were assessed using an indirect Elisa protocol against Dengue infected serum, previously examined with a commercial diagnostic test. Optimal concentrations for antigens were determined at 10 µg/mL for rDME-BR and 30 µg/mL for rDME-C, with serum dilutions ranging from 1:50 to 1:100. Both antigens effectively detected IgM and IgG antibodies in Dengue fever patients, with rDME-BR exhibiting higher sensitivity. Our in-house test showed a sensitivity of 77.3 % and 82.6 % and a specificity of 89.4 % and 71.4 % for rDME-C and rDEM-BR antigens. No cross-reactivity was observed with serum from Zika-infected mice but with COVID-19 serum samples. Our findings underscore the utility of synthetic biology in crafting Dengue-specific multiepitope proteins and hold promise for precise clinical diagnosis and monitoring responses to emerging Dengue vaccines.

Introdução/Objetivo: Em 2003, os primeiros casos de transmissão do vírus monkeypox (MPXV) fora do continente Africano foram confirmados em um surto nos EUA. Desde então, casos esporádicos em viajantes retornados da África foram descritos. No ano de 2022, a mpox se disseminou rapidamente por diferentes países e foi declarada emergência de saúde pública de importância internacional pela OMS. O vírus monkeypox (MPXV) apresenta manifestações clínicas similares à varíola humana, porém de menor intensidade, usualmente lesões cutâneas, de evolução sincrônica, associadas ou não a sintomas sistêmicos. Neste estudo buscamos caracterizar o perfil clínico-epidemiológico de casos de mpox no surto atual e investigar a ocorrência da doença em grupos populacionais com menor visibilidade inicial. Metodologia: Estudo de corte transversal realizado pelo Núcleo de Enfrentamento e Estudos de Doenças Infecciosas Emergentes e Reemergentes (NEEDIER - UFRJ), onde foram incluídos pacientes com quadro suspeito de mpox do estado Rio de janeiro investigados na UFRJ de 01 de junho a 31 de dezembro de 2022. O diagnóstico foi realizado por PCR, os dados clínico-epidemiológicos foram obtidos na plataforma (REDCap) e analisados por meio do software R(versão-4.2.2). O estudo foi aprovado pelo CEP-HUCFF (CAAE: 62281722.5.0000.5257). Resultados: Foram incluídos 2919 pacientes que possuíam informações na plataforma REDCap, 787 (27%) dos quais foram diagnosticados com mpox. Dentre os positivos, a mediana da idade foi de 33 anos, 725 (92%) pertenciam ao sexo masculino, 430 (55%) se identificavam como homens que fazem sexo com homens e 284 (36%) viviam com HIV. As manifestações clínicas mais frequentes nos casos positivos foram: lesões cutâneas 676 (86%), febre 464 (59%), linfadenopatia 365 (46%), e cefaleia 340 (43%). Houve forte associação de sintomas, como lesões anogenitais (OR = 3,8, p valor < 0,001), proctite (OR= 5,96, p valor < 0,001), edema peniano (OR = 3,68, p valor < 0,001) e linfadenopatias (OR= 4,38, p valor = 0,001), com a infecção por MPXV na coorte total. Foram detectados 62 (8%) mulheres e 34 (4%) menores de 18 anos entre os casos positivos. Conclusão: Foram observadas mudanças em relação a apresentação clássica da doença, padrão de transmissão e acometimento de mulheres e crianças. Baixo limiar de suspeição clínica e testagem precoce favorecem o diagnóstico rápido, permitindo a intervenção efetiva na cadeia de transmissão e o manejo adequado da doença.