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Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The presence of microbial biofilm attached milking equipment, formed by inadequate cleaning, are a constant source of contamination of the milking animals and which goes to the milk industry, compromising both the animal health and the quality of the milk produced. The objective of this study was to identify strains of Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Escherichia coli producing biofilm in cows with mastitis milk samples, milk samples from the expansion tank and swabs of the set of liners for milking, and evaluate training biofilm coatings on four different stainless steel, comprising polypropylene, polypropylene with zeolite to 3% polypropylene with 6% zeolite and polypropylene with glass and silver. For phenotypic characterization of the strains were used for tests with congo red agar (CRA) microplate assay with crystal violet dye, counting colony forming units of biofilm cells, extracting the matrix by sonication, quantification of extracellular proteins and polysaccharides, confirmed by analysis of images generated by laser confocal microscopy. Of the 294 samples analyzed were identified eight strains of Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and 22 three Escherichia coli, those eight, 1:11 were producing biofilm, respectively. Escherichia coli bacteria that has been formed over biofilm in all materials, and for coating stainless steel comprising polypropylene with 6% zeolite had a higher bond biofilm when compared to polypropylene and glass with silver (p < 0,05). The material consists of silver, glass and polypropylene had microbial biofilms of grip, but at a lower concentration than the other materials tested, representing themselves in this way as an alternative to coat surfaces of utensils and equipment related to milking. A presença de biofilme microbiano aderido em equipamentos de ordenha, formado por limpezas inadequadas, constituem uma constante fonte de contaminação para os animais ordenhados e do leite que vai para a indústria, comprometendo tanto a saúde do animal quanto a qualidade do leite produzido. O objetivo deste estudo foi identificar cepas de Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, e Escherichia coli produtoras de biofilme em amostras de leite de vacas com mastite, amostras de leite do tanque de expansão e suabes do conjunto de teteiras para ordenhadeira, e avaliar a formação de biofilme em quatro revestimentos para aço inox diferentes, composto por polipropileno, polipropileno com zeolita a 3%, polipropileno com zeolita a 6% e polipropileno com vidro e prata. Para caracterização fenotípica das cepas foram utilizados os testes com ágar vermelho congo (CRA), teste de microplacas com o corante cristal violeta, contagem de unidades formadoras de colônias das células em biofilme, extração da matriz por sonicação, quantificação de proteínas extracelulares e polissacarídeos, confirmados por análise de imagens geradas pela microscopia confocal a laser. Das 294 amostras analisadas foram identificadas oito cepas de Staphylococcus aureus, três Staphylococcus epidermidis e 22 Escherichia coli, dessas oito, uma e 11 foram produtoras de biofilme, respectivamente. A Escherichia coli foi a bactéria que mais formou biofilme em todos os materiais, e o revestimento para aço inóx composto por polipropileno com zeolita a 6% teve uma maior adesão de biofilme microbiano quando comparado ao polipropileno com prata e vidro (pvalor < 0,05). O material composto por prata, vidro e polipropileno teve aderência de biofilmes microbianos, porém em menor concentração que os outros materiais testados, representando-se desta forma como alternativa para revestir superfícies de utensílios e equipamentos relacionados a ordenha. Mestre em Ciências Veterinárias