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Objetivo: Establecer y caracterizar un modelo in vitro de diferenciación de células dendríticas tolerogénicas a partir de PBMCs para estudios de estimulación con pramipexol. Antecedentes: Las células dendríticas (CD) son una población heterogénea, cuyas funciones principales son procesar y presentar antígenos a los linfocitos T, e inducir y mantener tolerancia. Las CD pueden generarse in vitro a partir de progenitores CD34+ o de monocitos CD14+ en presencia de GM-CSF e IL-4. En pacientes con enfermedad de Parkinson (EP), el número de CD en la sangre se reduce, por lo que la generación in vitro de CD en la sangre ayudaría a comprender la relación entre la presencia de CD en el SNC y la progresión de la enfermedad. En un modelo murino de EP inducido con MPTP, se observó que la generación de CD tolerogénicas (CDtol) con GM-CSF produjo una respuesta reguladora, aumentando la neuroprotección. Métodos: A partir de concentrados eritrocitarios de donadores se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) por gradiente de densidad. Las células se aislaron, cultivaron y diferenciaron in vitro con GM-CSF e IL-4. Posteriormente, se aislaron las CDtol por sorting celular y se estimularon (24 h) con pramipexol. Finalmente, se aisló el RNA de los cultivos. Núm. de registro del protocolo: 145/19 Resultados: Se estableció un modelo de cultivo y diferenciación in vitro de CDtol a partir de PBMCs utilizando GM-CSF e IL-4. Se caracterizó la presencia de CD11c e ILT-3. Se estandarizó la purificación de la población cultivada para estimular los cultivos con pramipexol. Se estandarizó la obtención de RNA de CDtol, para incluirlos en un chip de Fluidigm. Conclusiones: Se obtuvieron, aislaron y cultivaron CD a partir de PBMCs, y se diferenciaron hacia un fenotipo tolerogénico. Se obtuvo ARN para la genotipificación de las CDtol estimuladas con pramipexol. [ABSTRACT FROM AUTHOR]