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Alkaline phosphatase from Pseudomonas fluorescens has been partially purified. Labelled 65ZnCl2 in the culture medium is incorporated in the most purified preparations. The enzyme shows a pH optimum of 7.2-7.5 and a Km value for p-nitrophenyl phosphate of 1 times 10(-4). Zinc ions at high concentration inhibit enzyme activity. The protective effect of Mg on the inactivation of alkaline phosphatase by heat is also reported.

Consta este trabajo de varias partes íntimamente relacionadas entre sí y expuestas siguiendo un orden deductivo, que fue al mismo tiempo el orden cronológico que siguieron los hallazgos que lo jalonan. Así: 1º.- Nuestros trabajos sobre transesterificaciones nos llevaron a establecer los fundamentos de una técnica original para la valoración de glicerina en presencia de sus esteres fosfóricos. 2º.- Esta técnica constituye el fundamento teórico de lo que después llegó a ser muestra técnica para la valoración de fosfatasa. 3º.- Hubo necesidad de crear nuestra Unidad de fosfatasa, inherente a la nueva técnica. 4º.- Se establecen variantes para aplicarla a la determinación de fosfatasa alcalina y fosfatasa ácida en suero o plasma. 5º.- Se estudian los valores normales de ambas enzimas a la luz de nuestra técnica. 6º.- Dada su gran sensibilidad la convierten en técnica de elección para trabajos de investigación y por ello hemos podido acometer el estudio de los efectos enzimáticos con absoluta regularidad de resultados. 7º.- Hemos hecho una larga serie de experiencia estudiando la acción de los iones cítricos y tartáricos dentro del sistema hemático y discutidos estos resultados frente a los obtenidos por distintos autores con enzimas extraídas del tejido prostático. 8º.- Ensayamos cierto número de funciones orgánicas en su posible papel de efectores enzimáticos para establecer alguna relación entre su constitución química y las variaciones del poder catalíticos de la fosfatasa ácida del suero. 9º.- Se estudia asimismo la acción competitiva de algunos efectores. 10º.- Y por último, nos enfrentamos con el problema tan debatido para otros fermentos, de si el incremento advertido en algunos procesos patológicos (por ejemplo: el cáncer de próstata) lleva consigo cambios en los caracteres físico-químicos de la enzima. Conclusiones Finales: 1º.- Presentamos los fundamentos de nuestra técnica original para valoración de glicerina en suero. 2º.- Presentamos nuestra técnica original para determinación de fosfatasas ácida y alcalina en suero. 3º.- Definimos nuestra Unidas de Fosfatasa. 4º.- Se establecen los valores normales de fosfatasas ácida y alcalina en suero en las distintas edades, sexo, periodo menstrual, embarazo y lactancia, determinados con nuestra técnica y expresados en nuestra Unidad. 5º.- Se fija la fosfatasa ácida el pH óptimo de acción sobre substratos de glicerofosfato sódico y de fenilfosfato disódico. 6º.- Se ha estudiado el papel del ácido cítrico como efector enzimático de la fosfatasa ácida, comprobándose su gran poder como anti-inhibidor. 7º.- Estudiamos también el comportamiento como efector enzimático de la fosfatasa ácida de varias funciones orgánica, comprobándose: a) Un marcado poder inactivador en los oxiacidos alifáticos saturados cuando el grupo oxhidrilo ocupa la posición alfa. b) Acción francamente inactivante del ácido oxálico siendo en cambio sus homólogos superiores totalmente inactivos. c) Un poder activador de los cetoacidos cuando el grupo cetónico se encuentra en posición alfa. d) Una acción inactivante de los alfa-aminoácidos que se incrementa con la entrada en la molécula de nuevos grupos básicos. e) Notable efecto activador de la cisteína. f) Acción inactivante del L-tartrato y activante del D-tartrato. 8º.- Se ha estudiado la influencia de los citratos frente al poder inactivador de los fluoruros, encontrándose una marcada acción competitiva de aquellos sobre estos. 9º.- Igualmente hemos ensayado la posible acción competitiva de los citratos frente al poder inactivador de los oxalatos, no pudiendo ser comprobada. 10º.- Hemos estudiado las principales características cinéticas de la fosfatasa ácida en enfermos de cáncer de próstata y la acción específica de algunos efectores frente a determinaciones análogas en suero normal tomado como testigo, comprobándose la absoluta igualdad de ambas enzimas.

Falta palabras clave El estudio del problema de las Disproteinemias es atrayente, dada las numerosas fuentes que presenta y por ser de opinión que al clínico le es eficaz las lecturas bibliográficas siempre que las contraste con su personal experiencia, aceptando o rechazando, según su criterio imperfecto pero siempre, nos desprendimos del desánimo experimentado en los primeros momentos al comprobar el caudal de literatura actual sobre el tema que nos ocupa. Por ello y por sólo tener en cuenta en nuestro trabajo los resultados en valores absolutos de las alteraciones del pretaiaograma , hemos limitado la bibliografía a las que utiliza estas o las que a través de los datos expresados lo hemos podido obtener, sin llegar en ningún momento a tener un afán cumulativo y menos aún farragoso de nombres y citas. La presente Tesis Doctoral consta de unos comentarios previos en los que nos limitamos a exponer los datos imprescindibles a la valoración y compresión de las alteraciones del pretsiaograma y de una aportación personal cuya sistemática se expone al comienzo de la misma. Se ha realizado el estudio de las fracciones proteicas del plasma mediante las técnicas de electroforesis en papel, que reúne grandes ventajas sobre las clásicas de TISELIUS, como expresamos en los comentarios previos. Se ha utilizado un aparato de microelectroferasis de doble cámara de condensación, a una tensión de noventa voltios durante un tiempo de exposición de ocho horas. El papel de filtro utilizado en esta experiencia ha sido el Watmaan I, con el que hemos obtenido los mejores resultados. Como electrolitos hemos empleado una solución tampón de varenal ácido –veronal sódico a un Ph de 8,6, siendo los límites útiles en cuanto a éste Ph entre 8,4 y 8,9. Se utilizó para cada estudio dos bandas, en las que una vez humedecidas con la solución tampón y colocadas en el aparato, se depositaban sobre las mismas 0,02 c.c. del suero a estudiar mediante una pipeta de décimas divididas en centésimas dejándolo caer cuidadosamente sobre el papel, de modo que se distribuya de manera lineal y uniforme, sin que la punta toque a aquel. Después se introducen los extremos de la banda de papel en las cubetas de electrolitos, juntamente con los electrodos, recubriéndose todo con la campana de vidrio a fin de evitar la evaporación. Conseguido el desplazamiento de las proteínas plasmáticas se retiran las buenas secándolas rápidamente con un radiador para este uso.