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En esta investigación un total de dieciséis cepas de bacterias ácido lácticas nativas fueron aisladas de una biorrefinería colombiana, provenientes de mostos de fermentación alcohólica (10) y mieles de caña de azúcar (6) Este clúster fue evaluado para la producción de ácido láctico en el medio de Man, Rogosa y Sharpe (MRS) (100 mL) en condiciones anaeróbicas, a 150 rpm y sin control de pH. Los efectos de la temperatura (37, 39.5, 42 °C) y del tiempo de fermentación (0, 8 y 24 horas) fueron evaluados sobre la producción del ácido láctico. Las bacterias acido lácticas (BAL) que lograron una producción del metabolito de interés, similar a la cepa patrón Lactobacillus delbrueckii ATCC 9649 fueron Pediococcus acidilactici y Pediococcus pentosaceus 1 con concentraciones de 12 gL-1 y parámetros cinéticos, 0.61 Yp/s y 0.51 gL-1h-1 en 24 horas a 42°C. Posteriormente, estas dos cepas fueron escaladas a nivel biorreactor en un medio rico en sacarosa a 42 °C, 150 rpm y NaOH 3N como agente para el control del pH en 6.8. La producción de ácido láctico (AL) y otros metabolitos fueron analizados durante las 44 horas de fermentación. Pediococcus acidilactici presentó el mejor desempeño fermentativo con una producción de 30 gL-1 ácido láctico, 0.66 Yp/s y 0.68 gL-1h-1. Adicionalmente se produjeron, bajo las condiciones evaluadas, ácido acético y etanol con rendimientos de 0.13 y 0.04 gg-1 respectivamente.