Search

Rhipicephalus microplus (Canestrini, 1888) é um importante ectoparasito na criação de bovinos em regiões tropicais, subtropicais e temperadas no mundo. Esse carrapato atua na transmissão de patógenos, levando a quadros patológico em bovinos, e diminuindo a produtividade na bovinocultura de corte e de leite. Como o carrapato R. microplus possui importância médico veterinária, elevando os custos de produção de bovinos, torna-se importante a realização de controle, que é atualmente realizado quase que exclusivamente com a utilização de carrapaticidas organossintéticos. Atualmente, existem formulações comerciais disponíveis para controle de R. microplus com base na associação dos princípios ativos, fipronil e fluazuron, que tem sido amplamente utilizada. Contudo, não existem informações a respeito das alterações histológicas dessas moléculas sobre esse carrapato, e tais estudos permitirão melhor compreensão do mecanismo de ação e toxicidade desses ingredientes ativos em diferentes órgãos. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial efeito na biologia reprodutiva e histológico de uma formulação comercial, contendo fipronil e fluazuron em ovários de fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Para a realização do estudo, três bezerros foram infestados com aproximadamente 5.000 larvas nos dias -24, -21, -19, -17, -14, -12, -10, -7, -5 e -3, considerando o dia 0, o dia do tratamento. O tratamento consistiu na aplicação da formulação carrapaticida comercial contendo fipronil (1,25 %) e fluazuron (2,5%) (Tick Gard®- MSD Saúde Animal). Antes da aplicação da formulação carrapaticida, foram recuperadas 20 fêmeas ingurgitadas, naturalmente desprendidas dos bovinos, para formação do grupo controle. Após a aplicação da formulação comercial, foram coletadas fêmeas ingurgitadas naturalmente desprendidas dos animais nos dias +5, +10 e +20 para acompanhamento da biologia reprodutiva e +4, +12 e +20 para avaliação da histologia dos ovários. As fêmeas coletadas para acompanhamento da biologia reprodutiva foram mantidas em câmara climatizada para oviposição, posteriormente, incubação desses ovos, enquanto as fêmeas utilizadas para as análises histológicas foram mantidas em câmara climatizada por 4 dias e após esse período, foram dissecadas. Na avaliação da biologia reprodutiva, foi observado que as fêmeas provenientes dos grupos tratados produziram uma menor quantidade de ovos (p

Introdução: A disseminação de culturas de transgênicos resistentes ao glifosato levou a um aumento considerável da aplicação de formulações à base desse herbicida em lavouras brasileiras. Uma alternativa para controlar as populações de ervas daninhas tolerantes ao glifosato é a sua aplicação associada a outro herbicida, o imazetapir, que pertencente ao grupo das imidazolinonas. Considerando que, menos de 0,1% dos herbicidas aplicados às culturas atingem os seus alvos específicos, sabe-se que grandes quantidades desses compostos podem ser encontradas em diferentes compartimentos ambientais, incluindo os recursos hídricos. Objetivo: Assim, esse trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos induzidos pelas formulações comerciais Glifosato Atanor (ATN) e Imazetapir (IMZT) isolados e associados (M1, M2 e M3) sobre organismos não-alvo, através de ensaios de toxicidade aguda com semente de Cucumis sativus, microcrustáceo Artemia salina e os estágios embrio-larvais de zebrafish, incluindo a análise da citotoxicidade. Métodos: Para tanto foram realizados teste de fitotoxicidade (USEPA,1996), o ensaio com A. salina (Meyer et al., 1982 e OECD 202, 2004), teste com o estágio embrio-larval de zebrafish (OECD 236, 2013) seguido pelos ensaios de citotoxicidade (Hoechst 33342, Mitotracker red e alaranjado de acridina). Resultados: Para a germinação de C. sativus, as formulações ATN e IMZT (CE50 > 1000 mg/L) e as misturas de ATN + IMZT não foram fitotóxicas. Já para o crescimento da raiz, o IMZT (CE50 = 0,37 mg/L) foi mais fitotóxico do que o ATN (CE50 = 1,97 mg/L), e as misturas de ATN + IMZT apresentaram taxa de crescimento de 37,9; 24,7 e 17,2%, respectivamente. Apenas ATN induziu toxicidade aguda significativa para A. salina (CL50-48h = 9,62 mg/L) e as misturas não induziram efeitos significativos sobre a letalidade ( 55 mg/L). Ambas as formulações inibiram a inflação da bexiga natatória com CE50-120h de 26,94 mg/L (ATN) e 53,87 mg/L (IMZT). Tanto as formulações individuais ATN e IMZT como as misturas de ATN + IMZT mostraram uma redução na porcentagem de fluorescência em células coradas com Hoechst, sugerindo a perda de DNA. ATN e IMZT também reduziram o potencial mitocondrial das larvas expostas a 5 e 50 mg/L, além de células marcadas com alaranjado de acridina em regiões de cabeça, tronco e cauda nas menores concentrações. As misturas de ATN + IMZT não induziram efeitos letais e subletais significativos, mas alteraram o conteúdo de DNA e o potencial mitocondrial em células de zebrafish. Conclusões: Portanto, as formulações ATN e IMZT e as misturas de ATN + IMZT (M2 e M3) foram fitotóxicas para o crescimento da raiz de C.sativus. ATN foi mais tóxica do que IMZT para A. salina, e apenas a M3 foi tóxica para essa espécie. Apesar das formulações ATN e IMZT serem embriotóxicas para zebrafish, as misturas de ATN+IMZT não induziram toxicidade aguda. A nível celular, ATN e IMZT em baixas concentrações foram citotóxicas com efeitos sobre o núcleo e mitocôndrias e ainda acumularam células apoptóticas em algumas regiões do corpo das larvas de zebrafish. Introduction: The dissemination of transgenic crops resistant to glyphosate led to a considerable increase in the application of formulations based on this herbicide in Brazilian crops. An alternative to control populations of glyphosate tolerant weeds is its application associated with another herbicide, imazethapyr, which belongs to the group of imidazolinones. Considering that less than 0.1% of herbicides applied to crops reach their specific targets, it is known that large quantities of these compounds can be found in different environmental compartments, including water resources. Objective: Thus, the objective of this work was to evaluate the effects induced by the commercial formulations Glifosato Atanor (ATN) and Imazetapir (IMZT) isolated and associated (M1, M2 and M3) on non-target organisms through acute toxicity tests with Cucumis sativus, microcrustacean Artemia salina and the embryo- larval stages of zebrafish, including cytotoxicity analysis. Methods: For this purpose, the test with A. salina (Meyer et al., 1982 and OECD 202, 2004), embryo-larval stage of zebrafish (OECD 236, 2013), cytotoxicity assays (Hoechst 33342, Mitotracker red and acridine orange). Results: For the germination of C. sativus, the ATN and IMZT formulations (EC50> 1000 mg / L) and mixtures of ATN + IMZT were not phytotoxic. For the root growth, the IMZT (EC50 = 0.37 mg / L) was more phytotoxic than the ATN (EC50 = 1.97 mg / L), and the ATN + IMZT mixtures had a growth rate of 37.9; 24.7 and 17.2%, respectively. Only ATN induced significant acute toxicity to A. salina (LC50-48h = 9.62 mg/L) and the mixtures did not induce significant effects on the lethality ( 55 mg/L). Both formulations inhibited swim bladder inflation with EC50-120h of 26.94 mg/L (ATN) and 53.87 mg/L (IMZT). Both the individual ATN and IMZT formulations as well as the ATN + IMZT mixtures showed a reduction in the percentage of fluorescence in Hoechst stained cells, suggesting the loss of DNA. ATN and IMZT also reduced the mitochondrial potential of larvae exposed to 5 and 50 mg/L, as well as acridine orange stained cells in head, trunk and tail regions at the lowest concentrations. Mixtures of ATN + IMZT did not induce significant lethal and sublethal effects but altered DNA content and mitochondrial potential in zebrafish cells. Conclusions: Therefore, ATN and IMZT formulations and mixtures of ATN + IMZT (M2 and M3) were phytotoxic for C. sativus root growth. ATN was more toxic than IMZT to A. salina, and only M3 was toxic to this species. Although the ATN and IMZT formulations were embryotoxic to zebrafish, the ATN + IMZT mixtures did not induce acute toxicity. At the cellular level, ATN and IMZT at low concentrations were cytotoxic with effects on the nucleus and mitochondria and still accumulated apoptotic cells in some regions of the body of zebrafish larvae. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A próstata é uma glândula acessória do aparelho reprodutor dos mamíferos e tem importante função na reprodução. O tecido prostático é regulado por hormônios esteroides, sendo que sua homeostase depende de uma interação hormonal equilibrada. A exposição a químicos ambientais que apresentam atividade hormonal pode ocasionar distúrbios na próstata, aumentando a probabilidade dessa glândula desenvolver lesões. Compostos químicos hormonalmente ativos estão presentes em grande quantidade e de diversas formas no meio ambiente. Dentre estas substâncias estão os parabenos, uma classe de conservantes com ação antimicrobiana e antifúngica amplamente utilizada na indústria cosmética, farmacêutica e alimentícia. Os parabenos são conhecidos por perturbar o sistema reprodutivo e agir como desreguladores endócrinos que mimetizam os efeitos fisiológicos dos estrógenos. Até o momento, não está claro se os parabenos podem alterar a morfofisiologia da próstata. Portanto, é relevante entender se o metilparabeno pode predispor a próstata a desenvolver lesões na idade adulta. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a próstata de gerbilos adultos expostos ao metilparabeno. Para isto, machos e fêmeas com 90 dias de idade receberam, por gavagem, 500 mg/kg de metilparabeno diluídos em hidroxietil-celulose a 1%. Estes animais foram divididos em três subgrupos que foram sacrificados após 3, 7 e 21 dias de tratamento. As próstatas foram coletadas para análises estruturais, citoquímicas e imunohistoquímicas. Os resultados monstraram que a exposição ao metilparabeno diminuiu o peso dos testículos dos grupos 7 e 21 dias. Nas fêmeas houve aumento do peso do complexo prostático do grupo de 21 dias. Em ambos os sexos, a Reticulina de Gömöri mostrou um remodelamento do compartimento estromal com desorganização das fibras reticulares e aumento das fibras colágenas. Além disso, machos e fêmeas apresentaram alterações morfológicas importantes como focos de crescimento hiperplásico do epitélio secretor. Nas fêmeas observou-se a presença de neoplasia intraepitelial prostática, focos inflamatórios estromais, e aumento de células ERα- positivas. Houve um aumento do número de células AR-positivas, e aumento das taxas de proliferação celular em ambos os sexos. Em conjunto, estes dados indicam que o metilparabeno foi capaz de interferir com receptores androgênicos e estrogênicos, sugerindo que este químico pode ter atividade estrogênica e antiandrogênica na próstata. Nos machos houve uma intensa imunomarcação para MGMT (O6-Metilguanina-DNAMetiltransferase) em todos os grupos tratados e nas fêmeas apenas no grupo 3P. A imunomarcação para MGMT na próstata masculina e feminina sugere que a exposição ao metilparabeno tornou a glândula mais suscetível a modificações epigenéticas. Os resultados obtidos com este estudo são relevantes, pois demonstram que o consumo crescente de parabenos pelas populações humanas pode estar relacionado com o surgimento de alterações morfofisiológicas da próstata. The prostate is an accessory gland of the mammalian reproductive system with important role in reproduction. The prostatic tissue is regulated by hormones with its homeostasis dependent on a balanced hormonal interaction. The exposure to environmental chemicals with hormonal activities can cause disorders in the prostate increasing the probability of this gland to develop major lesions. Hormonally active chemicals are present in the environment in substantial amounts and forms. Amongst them are the parabens, a class of preservatives with antifungal and antimicrobial activities commonly used in the cosmetic, pharmaceutical and food industry. They are known for affecting the reproductive system and act as endocrine disruptors that mimics the physiological effects of estrogens. Up their, it is unclear whether the exposure to parabens alters the prostate morphophysiology. Therefore, it is relevant to comprehend whether the methylparaben can lead to the development of lesions in the prostate in adult gerbils. Thus, the aim of this work was to evaluate the prostate of adult gerbils exposed to methylparaben. For this, males and females aging 90 days received, through gavage, 500 mg/kg of methylparaben diluted in 1% hydroxyethyl cellulose. These animals were divided into three subgroups that were euthanized after 3 (3P), 7 (7P) and 21 days of treatment (21P). The prostates were collected for structural, cytochemical and immunohistochemical analysis. The results demonstrated that the exposure to methylparaben reduced the body weight of males of 3P and 7P groups, and testis weight of 7P and 21P groups. In the females we observed an increase in the prostatic complex weight of the 21P group. In both sexes, Gömöri’s reticulin staining showed a remodeling of the stromal compartment with reticular fibers disorganization and collagen fibers increase. Besides, males and females presented important morphological alterations as hyperplasic growth foci. In females, it was observed the presence of prostatic intraepithelial neoplasia, stromal inflammatory foci and an increase of ERα-positive cells. Immunohistochemical data showed an increase of ARpositive cells and in the proliferation rates for both genders. Altogether, these data demonstrate that methylparaben was capable to interfere in androgenic and estrogenic receptors, suggesting that this chemical might have estrogenic and anti-androgenic activity in the prostate. In males there was an intense immunostaining for MGMT in all treated groups whereas in females only in the 3P group. The immunostaining for MGMT in the prostate of males and females suggests that the exposure to methylparaben made the gland more susceptible to epigenetic modifications. The results obtained with this study are alarming, as they indicate that the increasing consumption of parabens by urban population can be related with the arising of morphophysiological alterations in prostate. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A próstata é um órgão que durante o seu desenvolvimento, crescimento, diferenciação e homeostase na vida adulta está sob controle hormonal, principalmente por hormônios esteroides. O bisfenol-A (BPA) é um químico utilizado na elaboração de produtos à base de policarbonato, com capacidade de mimetizar estrógenos. A exposição a este composto durante períodos críticos do desenvolvimento tem causado alterações permanentes em diversos órgãos reprodutivos de fêmeas e machos. A próstata está presente nos machos e em algumas espécies de fêmeas de mamíferos. Pouco se sabe acerca do desenvolvimento da próstata nas fêmeas e quais são os mecanismos que o regem, além da sua função no trato reprodutor feminino. O objetivo deste estudo foi descrever comparativamente o desenvolvimento prostático de machos e fêmeas de gerbilos com um dia de vida e avaliar os efeitos da exposição intrauterina a níveis ambientais de BPA na próstata ventral de machos e na próstata das fêmeas destes roedores durante o primeiro dia de vida neonatal e na fase adulto-jovem. Para isso, 20 machos e 20 fêmeas de gerbilo entre 3 e 4 meses de idade foram utilizados aleatoriamente para o acasalamento. A cópula foi confirmada pela presença de espermatozoides no trato vaginal. As fêmeas grávidas receberam doses diárias de óleo mineral (grupo controle) ou de 40μg/kg/dia de BPA (grupo BPA) entre os dias 17 e 24 de gestação. Após o nascimento, os machos e fêmeas foram separados e eutanaziados com um dia e noventa dias de idade. As próstatas foram coletadas para análise estruturais, citoquímicas e imunohistoquímicas. Além disso, o tecido prostático dos animais de um dia de idade foi submetido à análise de reconstrução tridimensional (3D). Com o presente estudo, foi possível descrever comparativamente o desenvolvimento da próstata de gerbilos machos e fêmeas com um dia de vida, e avaliar os efeitos da exposição ao BPA, em níveis similares aos disseminados no meio ambiente, sobre a próstata destes animais. Os resultados demonstraram que não ocorreram alterações morfológicas no padrão de brotamento e ramificação ductal nos diferentes grupos experimentais. Em machos neonatos, ocorreu uma redução na imunomarcação para o receptor de andrógenos (AR) e para o antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA). Nos machos adultos observou-se uma redução na frequência relativa do compartimento epitelial. Em fêmeas neonatas ocorreu uma redução de AR e PCNA, e um aumento da imunomarcação para o receptor de estrógenos alfa (ERα). Em fêmeas adultas observou-se um aumento significativo do AR e PCNA. Deste modo, pode se concluir que, a exposição ao BPA durante a vida intrauterina não altera o padrão de desenvolvimento prostático nem a morfologia deste tecido em machos e fêmeas neonatos e adultos. Os efeitos da exposição se manifestam de maneira diferente nos animais neonatos e adultos, devido a mudanças no ambiente hormonal que acontece desde a vida neonatal até a adulta. E, finalmente, a exposição intrauterina ao BPA teve mais efeito nas próstatas de fêmeas do gerbilo. The prostate is an organ that during its development, growth, differentiation and homeostasis in adult life is under hormonal control, mainly by steroid hormones. Bisphenol-A (BPA) is a chemical used in the manufacture of polycarbonate-based products with the ability to mimic estrogens. The exposure to this compound during critical periods of development has caused permanent changes in several reproductive organs of females and males. The prostate is present in males and some species of female mammals. Little is known about prostate development in females and what are the mechanisms that govern it, further of its function in the female reproductive tract. The aim of this study was to describe comparatively the prostate development of male and female gerbils with one day of life and evaluate the effects of intrauterine exposure to environmental levels of BPA in the ventral prostate of males and the prostate of females of these rodents during the first day of neonatal life and a young-adult stage. For this, 20 female and 20 male of gerbils, all between 3 and 4 months old, were randomly matched for mating. We randomly matched one male to one female to form independent families. The mating day was determined by the presence of spermatozoids in the vaginal smears; this day was considered as day zero, being the initial day of the pregnancy period. Pregnant females received daily doses of mineral oil (control group) or 40 μg/kg/day of BPA (BPA group) from the 17th until the 24th day of gestation. After the birth, males and females were separated and euthanized with a day and ninety days. The prostates were collected for structural, cytochemical and immunohistochemical analysis. Furthermore, the prostate tissue of animals from one day of age was subjected to analysis three-dimensional reconstruction (3D). With this study, we describe the development of prostate compared gerbils males and females with a day of life, and evaluate the effects of exposure to BPA at levels similar to the spread in the environment, on the prostate of these animals. The results showed that there were no morphological alterations in the pattern of ductal budding and branching in the different experimental groups. In newborn males, there was a decrease in immunostaining for the androgen receptor (AR) and the proliferating cell nuclear antigen (PCNA). In adult males was observed a reduction in the relative frequency of the epithelial compartment. In newborn females was a decrease in AR and PCNA, and an increase in the immunostaining for estrogen receptor alpha (ERα). In adult females there was a significant increase in AR and PCNA. Thus, it can be concluded that BPA exposure during intrauterine life did not change the prostate development pattern or the morphology of the tissue in both, male and female newborns and adults. The effects of exposure are manifested differently in newborn and adult animals, due to changes in the hormonal environment that occur through the neonatal to adult life. Finally, the intrauterine exposure to BPA had more effect on the prostate gland of female gerbil. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Orientadores: Karina Carvalho Mancini, Mary Anne Heidi Dolder Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Apesar de Formicidae constituir um dos grupos animais mais significativos em riqueza de espécies no Brasil, suas relações filogenéticas permanecem controversas. Uma notável fonte de caracteres para análises taxonômicas e filogenéticas é a caracterização espermática e do aparelho reprodutor. Tal caracterização tem se mostrado uma ferramenta na clarificação de questões da biologia reprodutiva e sistemática de diversos grupos de insetos. Desta forma, o presente estudo analisou, através de microscopia de luz e eletrônica de transmissão, a morfologia espermática de quatro espécies do gênero Pachycondyla (Formicidae: Ponerinae), bem como o aparelho reprodutor masculino: P. marginata, P. termitofane comutata, P. harpax e P. striata. A ultraestrutura dos espermatozoides de tais espécies é semelhante à descrita para outros Hymenoptera por apresentar: (1) acrossomo cônico do tipo bicamada; (2) adjunto do centríolo situado entre o núcleo e ambos os derivados mitocondriais e (3) flagelo constituído por dois derivados mitocondriais alongados, dois corpos acessórios triangulares e um axonema de padrão 9+9+2. Entretanto, as mesmas compartilham inúmeras características cujas evidências indicam evoluir como homoplasia via paralelismo, não conferindo, pois, suporte para uma resolução filogenética entre tais espécies e demais clados próximos. Dentre estes caracteres se destacam a organização espacial dos componentes acrossomais, o caráter cromatínico nuclear, a configuração da extremidade da transição núcleo-flagelo, além da condição simétrica do adjunto do centríolo. Além dessas, várias outras características corroboram a definição do estado parafilético do respectivo gênero, tais como o aspecto cromatínico, a condição simétrica do adjunto do centríolo e a organização terminal flagelar, por serem compartilhadas entre determinadas espécies de Pachycondyla e grupos filogeneticamente distantes, evidenciando, pois, as divergências dentro da mesma espécie. Por fim, a análise morfológica do aparelho reprodutor de P. marginata e P. striata evidenciou a existência de um padrão morfológico reprodutivo para Formicidae, uma vez que tais espécies exibiram íntima similaridade às descrições realizadas à respectiva família Abstract: Although Formicidae be one of the most important animal groups in species richness in Brazil, their phylogenetic relationships remain controversial. One notable source of characters for taxonomic and phylogenetic analysis is the characterization of the spermatozoa and male reproductive tract. This characterization has shown to be a tool in clarifying issues of reproductive biology and systematics of many insect groups. Thus, this study analyzed by light and transmission electron microscopies, the sperm morphology of four species of the genus Pachycondyla (Formicidae: Ponerinae), and their male reproductive system: P. marginata, P. termitofane comutata, P. harpax and P. striata. The ultrastructure of spermatozoa of these four species is similar to that described to other Hymenoptera: (1) bilayer tapered acrosome; (2) centriolar adjunct located between nucleus and both mitochondrial derivatives and (3) flagellum comprises two elongate mitochondrial derivatives, two triangular bodies and an axoneme of 9 + 9 + 2 pattern. However, they share a number of features whose evidence indicates evolve as homoplasy via parallelism, not giving, support for a phylogenetic resolution among species and other nearby clades. Among these characters stand out, the spatial organization of acrosomal components, the nuclear chromatin character, setting the end of the transition nucleus-flagellum, in addition to symmetrical condition centriolar adjunct. Besides these, various other features confirm the setting of the paraphyletic status of its genus, such as chromatin aspect, symmetrical condition centriolar adjunct and flagellar terminal organization, by being shared among certain species phylogenetically distant and Pachycondyla groups, highlighting, therefore, the differences within the same species. Finally, the morphological analysis of the reproductor system of P. striata and P. marginata highlighted the existence of a reproductive morphology pattern to Formicidae, since such species showed close similarity to the descriptions made to its family Mestrado Biologia Celular Mestra em Biologia Celular e Estrutural CNPQ 131276/2014-0

Orientadores: Shirlei Maria Recco Pimentel , Gisele Orlandi Introíni Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os anuros da família Leptodactylidae estão alocados em três subfamílias: Leiuperinae, Leptodactylinae e Paratelmatobiinae. Com o auxílio da microscopia eletrônica, foram observados os espermatozoides de 23 espécies de leptodactilídeos buscando-se contribuir com elementos para o entendimento de incertezas filogenéticas. Em Pseudopaludicola, gênero alocado em Leiuperinae, é comparado o espermatozoide de representantes do grupo P. pusilla e de espécies dos quatro clados recuperados na filogenia molecular, os quais correspondem aos grupos cromossômicos 2n=22, 20, 18 e 16. A análise das espécies de Pseudopaludicola mostrou que as cabeças dos espermatozoides são semelhantes e contém a vesícula acrossomal cobrindo o cone subacrossomal. Já as caudas dos espermatozoides de Pseudopaludicola apresentam diferenças marcantes. Nas espécies com número cromossômico 2n=22, Pseudopaludicola sp. 1 (grupo P. pusilla), P. saltica, P. falcipes e P. mineira, as caudas exibem fibras acessórias (justa-axonemal, membrana ondulante e a fibra axial). Essas fibras também são observadas em P. ternetzi e P. ameghini, ambas do clado com 2n=20, mas nas suas caudas a fibra axial é mais desenvolvida. Nos indivíduos do clado com número cromossômico 2n=18, P. canga, P. facureae, P. giarettai, P. atragula e Pseudopaludicola sp. 2 e com 2n=16, P. mystacalis, a cauda apresenta a membrana ondulante espessa, caracterizando um bastão para-axonemal, o qual é mais curto do que a membrana ondulante da cauda dos Pseudopaludicola com número cromossômico 2n=22 e 20. As diferenças morfológicas ultraestruturais observadas nas caudas dos espermatozoides indicam que esses caracteres podem ser filogeneticamente informativos, quando mapeados na filogenia molecular, pois os perfis ultraestruturais da cauda coincidem parcialmente com a formação dos quatro clados filogenéticos e possibilitam levantar a hipótese de uma progressiva simplificação do espermatozoide durante a evolução do gênero Pseudopaludicola. A análise comparativa de espécies entre os gêneros de leiuperíneos mostra que as caudas dos espermatozoides de Physalaemus (P. albifrons, P. centralis, P. cicada e P. cuvieri), também exibem fibras acessórias, como a fibra justa-axonemal e a membrana ondulante, contudo, a membrana ondulante nesse gênero é mais longa que aquela encontrada em Pseudopaludicola. Além disso, as caudas dos espermatozoides de Physalaemus não mostram fibra axial. Do gênero Engystomops, grupo irmão de Physalaemus, foram analisadas E. petersi, E. freibergi e E. puyango, cujas caudas apresentam fibra justa-axonemal, membrana ondulante e fibra axial. Esses gêneros diferem ainda pela membrana ondulante mais curta em Engystomops, corroborando a revalidação do gênero Engystomops. A cauda de Engystomops puyango difere de E. petersi e E. freibergi, clado Duovox, e é igual a E. pustulosus, do clado Edentulus, indicando a necessidade de ampliar os estudos desse gênero. A espécie Pleurodema diplolister, do gênero próximo a Physalaemus e Engystomops, apresenta na cauda do espermatozoide a fibra justa-axonemal e a membrana ondulante, as quais são semelhantes àquelas observadas nas espécies de Physalaemus, entretanto, a membrana ondulante de P. diplolister é menor que a observada em Physalaemus. A comparação dos espermatozoides de representantes das outras subfamílias de Leptodactylidae mostrou que Paratelmatobiinae, representada por P. poecilogaster, apresenta estruturas iguais àquelas observadas nos Pseudopaludicola do clado com número cromossômico 2n=22. Por outro lado, a espécie analisada, Leptodactylus natalensis, Leptodactylinae, apresenta fibra axial bem desenvolvida, diferente daquela exibida nos espermatozoides de Engystomops, Pseudopaludicola e P. poecilogaster. A outra espécie de Leptoctylinae, Adenomera marmorata, a qual era alocada em Leptodactylus, apresenta apenas o axonema na cauda do espermatozoide. Essa diferença ultraestrutural das caudas de A. marmorata e L. natalensis, corrobora com a re-alocação de A. marmorata como espécie válida e diferente de Leptodactylus. A descrição ultraestrutural dos gametas masculinos leptodactilídeos mostra caracteres filogenéticos informativos, principalmente aqueles das caudas dessas células, que podem ser usados para o entendimento dos relacionamentos intragenérico e intergenérico. Abstract: The anurans of the family Leptodactylidae are distributed in three subfamilies ¿Leiuperinae, Leptodactylinae and Paratelmatobiinae. The spermatozoa of 23 leptodactylid species were analyzed under an electron microscope in order to provide evidence for the better understanding of a number of phylogenetic uncertainties. In the case of the leiuperine genus Pseudopaludicola, the sperm of the representative of the P. pusilla group and those of four clades identified in the molecular phylogeny, which correspond to well-defined chromosomal groups with 2n=22, 20, 18, and 16, were compared. The analysis of the different Pseudopaludicola species found spermatozoa with heads of similar shape, which contain an acrosomal vesicle covering the subacrosomal cone. However, the tails present marked differences. In the species with 2n=22, that is, Pseudopaludicola sp. 1 (P. pusilla group), P. saltica, P. falcipes and P. mineira the tails present accessory fibers (juxtaxonemal fiber, undulating membrane and axial fiber). Fibers of this type are also observed in P. ternetzi and P. ameghini (representatives of the 2n=20 clade), although the axial fiber is more developed. In the specimens of the 2n = 18 clade (P. canga, P. facureae, P. giarettai, P. atragula and Pseudopaludicola sp. 2) and the 2n=16 clade (P. mystacalis), the tail has a thick undulating membrane, characterized by a paraxonemal rod, which is shorter than the undulating membrane of the tail of Pseudopaludicola (2n=22 and 20). The ultrastructural morphological differences observed in the tails of the spermatozoa indicates that these traits are phylogenetically informative, given their partial correspondence to the four clades identified in the molecular studies, and provide evidence of a progressive simplification of the spermatozoa during the evolution of the genus Pseudopaludicola. The comparative analysis of the leiuperine genera indicates that in Physalaemus (P. albifrons, P. centralis, P. cicada and P. cuvieri), the tail of the spermatozoon also shows accessory fibers, such as the juxtaxonemal and the undulating membrane, although in this genus, the membrane is longer than that observed in Pseudopaludicola. In addition, there is no axial fiber on the tail of the spermatozoon in Physalaemus. In the case of Engystomops, sister group of Physalaemus, the species E. petersi, E. freibergi, and E. puyango the sperm tail presents all three types of fiber (juxtaxonemal, undulating membrane and axial fiber). The tail of these two genera also differ each other for the shorter undulating membrane in Engystomops, corroborating the revalidation of the genus Engystomops. Additionaly, the tail of E.puyango differs from E. petersi and E. freibergi, Duovox clade, and it is similar to E. pustulosus, Edentulus clade, indicating the need of more studies in this genus. In Pleurodema diplolister, representing the genus closest to Physalaemus and Engystomops, the sperm tail has a juxtaxonemal fiber and undulating membrane, which are similar to those found in Physalaemus, although the membrane observed in Pleurodema diplolister is shorter than that observed in Physalaemus. Comparisons with other leptodactylid subfamilies indicated that the Paratelmatobiinae, represented by P. poecilogaster, has the same structures as those observed in the 2n = 22 clade of Pseudopaludicola. On the other hand, the leptodactyline species analyzed, Leptodactylus natalensis, has a well-developed axial fiber, distinct from that found in the sperm of Engystomops, Pseudopaludicola and P. poecilogaster. However, in the other leptodactyline species analyzed, Adenomera marmorata, previously allocated to Leptodactylus, the sperm tail has only an axoneme. This ultrastructural difference in the tails of A. marmorata and L. natalensis supports the status of A. marmorata as a valid taxon distinct from Leptodactylus. Overall, then, the ultrastructural description of the male gametes of a selection of leptodactylid species provided informative phylogenetic characters, especially with regard to the morphology of the sperm tails, which can be used for understanding of the intrageneric and intergeneric relationships Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural FAPESP CNPQ CAPES