Orientador : Silvia das Graças Pompolo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Das 13 espécies de Trypoxylon com número cromossômico conhecido, somente T. albitarse possui cromossomos B, os quais são totalmente heterocromáticos e podem apresentar-se em dois tipos morfológicamente distintos, um metacêntrico e um acrocêntrico. Ao longo dos últimos cinco anos (1996 a 2000), 1003 espécimens de T. albitarse provenientes de 692 ninhos foram estudados citogeneticamente com relação à ocorrência, distribuição, frequência e evolução de seus cromossomos B e muitos destes indivíduos foram submetidos às técnicas de hibridação in situ fluorescente (FISH) ou impregnação por nitrato de prata para localização dos genes ribossômicos e estudo dos nucléolos, respectivamente. Todos os espécimens analisados foram obtidos em diferentes populações naturais na Zona da Mata Mineira, das quais 11 estão localizadas no município de Viçosa (Amoras, Campus, Centro, Marrecos, Palmital, Paraíso, Silvestre, Vila Cristal, Vila Chaves, Fundão e Barrinha), duas no município de Cajuri (Cajuri e Arraial Paraguai), uma no município de Coimbra (Coimbra), uma no município de Porto Firme (Nova Ilha) e uma no município de Piranga (piranga). Com exceção da populaçao de "Centro", as oito primeiras populações de Viçosa e a população de Porto Firme foram amostradas em dois intervalos de tempo diferentes (1996-1998 e 1998-2002), enquanto as populações dos municípios de Cajuri, Coimbra e Piranga, assim como as populações viçosences de Fundao e Barrinha, foram estudadas apenas na segundo amostragem. Os resultados obtidos na primeira etapa de coletas revelaram que, em maior ou menor freqüência, todas as populações analisadas possuem cromossomos B. Entre as populações de Viçosa, a grande maioria das fêmeas e machos analisados portaram um cromos somo B por genoma haplóide, ou seja, a mesma dosagem dos cromossomos do complemento A. Por outro lado, na única população analisada em Porto Firme, somente 14.3% dos indivíduos apresentaram cromossomos B. Considerando que uma das principais características dos cromossomos B é seu modo de transmissão não-mendeliano, a possibilidade de que, em Viçosa, os cromos somos B de T. albitarse estivessem regularizando seu comportamento meiótico e, conseqüentemente, alcançando sua estabilização como um membro normal do complemento cromossômico, foi postulada. Na tentativa de testar esta hipótese, o processo de estabilização dos cromossomos B foi estatisticamente quantificado em todas as populações analisadas. Em Porto Firme, o índice de estabilização (SI) dos B foi bastante baixo, indicando uma invasão recente. Não obstante, em Viçosa, o SI foi igual a 100% em três diferentes populações, onde todos os indivíduos portavam um B por genoma haplóide e indicou uma forte tendência à estabilização dos B nas demais populações. Um estudo comparativo desses dados com os obtidos no seguinte período de amostragem forneceram evidências diretas do processo invasivo dos B em Porto Firme, onde a frequência de Bs aumentou drasticamente. Entretanto em Viçosa, a despeito do aumento em frequência do tipo metacêntrico e da significativa reduçao do tipo acrocêntrico em várias populações, a frequência geral de cromossomos B permaneceu estável. As novas populações analisadas, mostraram uma frequência de Bs e parametros de estabilidade semelhantes aos observados em Viçosa, indicando que se encontram em um estágio evolutivo similar, com a maioria dos indivíduos portando um cromos somo B por genoma haplóide e altos valores de SI. A técnica de FISH com sonda de rDNA não revelou a presença de genes ribossômicos nos cromos somos B, não obstante, demonstrou que, em T. albitarse, os genes ribossômicos estão localizados em toda extensão do braço heterocromático do cromossomo 14. Embora a técnica de impregnação por prata não tenha sido efetiva na localização cromossômica da NOR ativa, foi aplicada com bastante exito na quantificação da atividade nucleolar nos núcleos interfásicos de machos e fêmeas de T. albitarse, mostrando que, a despeito da grande variabilidade no tamanho do 'braço ribossômico' em machos e fêmeas dessa espécie, a atividade nuc1eolar é proporcional ao nível de ploidia dos indivíduos Abstract: Among the 13 cytogenetica1ly analysed species of Trypoxylon genus, only T. albitarse possess B chromosomes. Two types morphologically distinct of B chromosomes have been found in this wasp, one metacentric and other acrocentric, which are totally heterochromatic. Over the last five years (1996 the 2000), 1003 specimens of T. albitarse obtained from 692 nests, had been cytogenetically studied with respect to the occurrence, distribution, frequency and evolution of its B chromosomes. Many of these individuals had been subjected to techniques of fluorescent in situ hybridisation (FISH) or silver nitrate staining for location of ribosomal genes and nucleoli, respectively. All analysed individuals were collected in different natural populations in the Zona da Mata Mineira (Minas Gerais State, Brazil), of which 11 are located in the city of Viçosa (Amoras, Campus, Centro, Marrecos, Palmital, Paraíso, Silvestre, Vila. Cristal, Villa Chaves, Fundão and Barrinha), two in the city of Cajuri (Cajuri and Arraial Paraguai), one in the city of Coimbra (Coimbra), one in the city of Porto Firme (Nova Ilha) and one in the city of Piranga (piranga). Besides the Centro population, the eight first populations from Viçosa and the population of Porto Firme were sampled twice (1996-1998 and 1998-2002), while the populations located in Cajuri, Coimbra and Piranga, as well as Fundao and Barrinha (Viçosa), were studied only included in the second sampling. The results observed in the first stage of collections have revealed that, although in different frequency, all analysed populations possess B chromosomes. Among the Viçosa's populations, most bore females and males carried a B chromosome per haploid genome, the same dosage of standard (A) chromosomes. On the other hand, in Porto Firme, only 14.3% of individuals carried B chromosomes. Because one of the most conspicuous features of B chromosomes is their non-mendelian transmission mode, we hypothesized that at least in Viçosa, the B chromosomes of T. albitarse were regularizing their meiotic behaviour and, consequently, reaching their stabilization as a normal member of the normal chromosomal complement. To test this hypothesis, the stabilization process of B chromosomes was statistically quantified in all populations. In Porto Firme, the stabilization index (SI) of the B was sufficiently low, indicating a recent invasion. On the other hand populations from Viçosa carried a B per haploid genome, the SI value was equal to 100% while the other populations indicated a strong trend toward the stabilization of B chromosomes. A comparative analysis performed with both set of data (obtained in the first and second period of sampling) had supplied direct evidences of the invasive process of B in Porto Firme, where the B frequency has increased significantly. However in Viçosa, in spite of the increase in the metacentric B frequency and the significant reduction, in some populations, in the acrocentric B frequency, the general frequency of B chromosomes remained stable. The additional populations sampled showed B frequency and stability parameters similar to these observed in the Viçosa region, indicating that they are in a similar evolutionary stage, with most individuals carrying one B per haploid genome and high SI values. Fluorescent in situ hybridization (FISH) showed all ribosomal genes located in the heterochromatic arm of chromosome 14. The silver impregnation method was successfully applied in the nuc1eolar activity quantification of interfasic nuc1ei in males and females of T. albitarse. These results suggested that, despite the great variability in the size of ribosomal arm in this species, nuc1eolar activity is adjusted to the ploidy level Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural