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CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico As lesões mais frequentes envolvendo o bulbo ocular são de natureza neoplásica e as melanocíticas são as mais comuns na úvea dos cães e na íris dos gatos. Podem ser classificadas como melanocitomas (benignas) e melanomas (malignas). Para melhor compreensão do comportamento biológico de neoplasias melanocíticas uveais em cães e gatos, foram utilizadas ferramentas histológicas e imuno-histoquímicas em 32 bulbos oculares, 27 de cães e cinco de gatos. As neoplasias dos bulbos oculares destes animais foram classificadas em benignas (19/27 - cães) ou malignas (8/27 - cães; 5/5 - gatos), e a localização das estruturas oculares envolvidas foi descrita. Determinaram-se, também, os tipos celulares destas neoplasias, os quais foram denominados como epitelioides, fusiformes e mistas, bem como tipos especiais, como de células balonosas, células gigantes multinucleadas e células em anel de sinete. Além disso, foram caracterizadas porcentagem de células com melanina, intensidade de melanina nas células, anisocitose e anisocariose, índice mitótico, presença de inflamação e necrose intratumoral, invasão vascular e desenvolvimento de glaucoma secundário à neoplasia. Para a confirmação da origem melanocítica, foi realizada imuno-histoquímica com os anticorpos anti-PNL2 (29/32) e anti-melan-A (3/3). O índice proliferativo foi verificado, utilizando-se o anticorpo anti-Ki-67, que variou de 2,8 a 12% em melanocitomas de cães, com média de 6,45 ± 4,1 e de 15,8 a 70% em melanomas de cães, com média de 38,3 ± 25,21. Os melanomas em gatos tiveram variação do índice proliferativo de 10,8 a 30,4%, com média de 18,96 ± 7,36. Também foi avaliado o índice apoptótico, utilizando o anticorpo anti-caspase-3, que variou de 3,8 a 50% em melanocitomas de cães, com média de 16,62 ± 13,26 e de 30 a 84% em melanomas de cães, com média de 58,04 ± 24,25. Nos gatos, o índice apoptótico variou de 3,6 a 92%, com média de 23,16 ± 38,62. A proteína BAP1, cujo padrão de marcação poderia refletir a agressividade tumoral, similar ao relatado para neoplasias oculares melanocíticas em seres humanos, foi também avaliada, e todas as neoplasias uveais do presente estudo foram imunomarcadas. As características histológicas e imuno-histoquímicas encontradas nas neoplasias melanocíticas uveais em cães e gatos deste estudo ampliaram o conhecimento sobre o uso destas ferramentas como fatores prognósticos; entretanto, recomenda-se mais estudos com acompanhamento da sobrevida do animal após o diagnóstico. The most frequent lesions involving the eye are of neoplastic nature and melanocytic lesions are the most common in the uvea of dogs and in the iris of cats. They can be classified as melanocytomas (benign) and melanomas (malignant). For a better understanding of the biological behavior of uveal melanocytic neoplasms in dogs and cats, histological and immunohistochemical tools were applied to 32 eyes, 27 from dogs and five from cats. The ocular neoplasms of these animals were classified as benign (19/27 - dogs) or malignant (8/27 - dogs; 5/5 - cats), and the location of the involved ocular structures was described. The cell types of these neoplasms were also determined, including epithelioid, spindle and mixed, as well as special types, such as balloon cells, multinucleated giant cells and signet rings cells. In addition, the percentage of cells with melanin, the intensity of melanin within the cells, anisocytosis and anisokaryosis, the mitotic index, the presence of intratumoral inflammation and necrosis, vascular invasion and the development of secondary glaucoma were determined. To confirm the melanocytic origin, immunohistochemistry was performed with anti-PNL2 (29/32) and anti-melan-A (3/3) antibodies. The proliferative index in dogs was verified using the anti-Ki-67 antibody, which varied from 2.8 to 12% in melanocytomas, with an average of 6.45 ± 4.1 and from 15.8 to 70% in melanomas, with an average of 38.3 ± 25.21. The proliferative index for cats varied from 10.8 to 30.4%, with an average of 18.96 ± 7.36. The apoptotic index was also evaluated for both species, using the anti-caspase-3 antibody. For dogs, the apoptotic index varied from 3.8 to 50% in melanocytomas, with an average of 16.62 ± 13.26 and from 30 to 84% in melanomas, with an average of 58.04 ± 24.25. For cats, the apoptotic index ranged from 3.6 to 92%, with an average of 23.16 ± 38.62. The BAP1 protein, the marking pattern of which might influence tumor aggressiveness as reported for melanocytic ocular neoplasms in humans, was also evaluated in all uveal neoplasms in the present study. The histological and immunohistochemical characteristics found in uveal melanocytic neoplasms in dogs and cats in this study expanded the knowledge about the use of these tools as prognostic factors; however, further studies with animal survival follow-up after diagnosis are recommended.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Mastocitomas são neoplasias cutâneas frequentes em cães que apresentam comportamento biológico e prognóstico variável. A avaliação de características do tumor e do paciente ajudam o clínico a determinar sua conduta. O objetivo deste trabalho foi comparar a apresentação das principais características histológicas, imunohistoquímicas e genéticas avaliadas nos mastocitomas em tumores primários e sua respectiva metástase em linfonodo. Para tanto, foram incluídos animais atendidos no serviço de Oncologia do Hospital Veterinário da UFMG com diagnóstico histopatológico de mastocitoma e metástase em linfonodo comprovada histopatologicamente. Foram avaliadas as graduações dos mastocitomas pelos sistemas de Kiupel e Patnaik, o índice mitótico, a fração de crescimento estimada pelo valor percentual de Ki-67, o padrão de expressão do receptor KIT e o status mutacional do exon 11 do gene c-KIT. Não foi encontrada correlação significativa entre as características do linfonodo e do tumor primário para nenhum dos fatores avaliados, demonstrando a necessidade de avaliar as duas lesões quando houverem, para melhor definição do prognóstico e do tratamento. Também foi encontrado uma incidência de duplicações internas em tandem no exon 11 do gene c-KIT de 35%, maior do que a média relatada em outros estudos, sugerindo que a presença de mutações é mais frequente em pacientes de estadio avançado e prognóstico pior. Também foi demonstrada a necessidade de avaliar os fatores prognósticos em conjunto, pois isoladamente podem levar o clínico a subestimar ou superestimar a agressividade de um mastocitoma. Concluiu-se que em casos de mastocitoma com metástase em linfonodo, é importante avaliar um conjunto amplo de fatores prognósticos no tumor primário e no linfonodo. Mast cell tumors are one of the most important cutaneous malignancies in dogs, and can present with variated biological behaviour and prognostic. Gathering and evaluating tumor and patient prognostic characteristics can be of great value in the decision making process for the clinical oncologist. The goal of this research was to compare the presentation of the main histological, imunohistochemical and genetical characteristics evaluated commonly in mast cell tumors, in both the cutaneous mass and its lymphonodal methastasis. To achieve that, patients referred to the Oncology sector of Federal University ou Minas Gerais (Brazil) that presented with histologically diagnosed mast cell tumor with also histologically detected lymphonodal methastasis were evaluated. The evaluated characteristics included histological graduation bt the Kiupel and Patnaik systems, mitotic index, growth fraction estimated by the percentage of Ki-67, KIT receptor pattern and mutational status in exon 11 of the c-KIT oncogene. No correlation was found between the cutaneous mass and its lymphonodal methastasis regarding the evaluated features, thus showing the need to perform these analysis in both locations, when affected, to better determine the prognostic and course of treatment for the patient. It was also noted a greater incidence of internal tandem duplications in exon 11 of the c-KIT oncogene, which happened in 35% of cases, suggesting that patients of advanced clinical staging and worse prognosis have these mutations more frequently. The study also demonstrated a need to evaluate a panel of prognostic characteristics, and not any of the aspect individually, under risk of underestimating or overestimating the aggressiveness of a mast cell tumor. The conclusion was that, in cases of metastatic mast cell tumors, it is important to evaluate a comprehensive panel of prognostic characteristics in the primary tumor but also in the metastatic lymphnode.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O modelo canino é indicado para aplicações translacionais com humanos, devido à alta incidência de tumores espontâneos, exposição aos mesmos fatores ambientais e porque o desenvolvimento da doença apresenta características muito similares. Portanto, é possível presumir que as alterações estruturais observadas no mapeamento de tumores caninos podem ser comparadas ao câncer humano. O espalhamento de raios X em médio ângulo (WAXS) fornece informações a respeito na organização molecular dos tecidos, que podem contribuir para o entendimento da infiltração de tumores, levando a diagnósticos precisos e técnicas terapêuticas mais eficazes. O objetivo desse trabalho foi mapear as características estruturais de tecidos adjacentes a tumores mamários caninos, benignos e malignos, a fim de se determinar a abrangência de alterações estruturais, utilizando a microdifração de raios X em médio ângulo. Cinco amostras foram investigadas, incluindo um adenoma simples, um adenoma policístico, um carcinoma sólido e dois adenocarcinomas. Foram conservadas em formalina em temperatura ambiente e cobertas com uma fina camada de filme \textit{Kapton} durante as medidas. Em seguida, as amostras foram liofilizadas e novamente submetidas ao experimento, a fim de se determinar a influência da água no processo de espalhamento elástico. Foi utilizado um difractômetro D8 Discover da Bruker, com uma fonte de microfoco de cobre (Ka = 8,04 keV) e um detector de área Vantec 500. O momento transferido analisado foi de 5,8 nm-1a 41,3 nm-1com passos de 0,005º para as amostras fixadas em formalina e 8,7 nm-1a 39,1 nm-1, com passos de 0,01º para as liofilizadas, ambos com 600 segundos de exposição por passo. Fatores de correção relacionados à atenuação pela própria amostra e contribuições espúrias foram aplicados. Regiões de tecido fibroglandular apresentaram um pico principal em torno de q = 19,8 nm-1, associado à distância entre moléculas de água vizinhas. Um pico menos intenso em q = 30 nm-1também é observado, tanto nos perfis predominantemente glandulares quanto nos adiposos, e pode corresponder à conexão de hidroxilas entre moléculas de água ou ao espalhamento harmônico do pico de ácidos graxos. Tecidos adiposos apresentaram um pico mais estreito em torno de q = 13,8 nm-1, correspondente ao espaçamento da cadeia de ácidos graxos. Foi possível concluir que diferentes pontos de uma mesma amostra apresentaram perfis bastante variados, provando o quão heterogêneos são os tecidos ao redor do tumor. A redução da intensidade nas medidas pós-liofilização foi variada de ponto para ponto, mostrando que a perda de água é proporcional à quantia de tecido fibroglandular na região. A supressão do pico em q = 19,8 nm-1nas amostras liofilizadas comprova a relação deste com as moléculas de água. Canine mammary tumors have been suggested as a model to study humans due to its high incidence rates, exposure to the same environmental factors and because both present similar development characteristics. Therefore, it is possible to assume that structural changes found in canine tumor monitoring can be extended to human cancer. Wide-angle X-ray scattering (WAXS) provides information regarding the molecular organization of tissues, which can increase the understanding of cancer infiltration and thus aid in its diagnosis and treatment. The purpose of this study was to map the structural changes in canine mammary tissues surrounding benign and malign tumors, using X-ray microdiffraction. Five samples were investigated, including simple and polycystic adenoma, solid carcinoma and two adenocarcinomas. These were stored in formalin at room temperature and covered with a thin layer of Kapton film during the experiment. After measuring five points in each sample, these were lyophilized, in order to study the influence of water in the scattering process. Measurements were carried out in a D8 Discover Bruker Diffractometer, with a microfocus source (Ka = 8.04 keV), and a 2D Vantec 500 detector. The momentum transfer ranged from 5.8 nm-1 to 41.3 nm-1, with steps of 0.005º for samples fixed in formalin, and from 8.7 nm-1 to 39.1 nm-1, with 0.01º steps for the lyophilized ones, both with 600 seconds of exposition per step. Correction factors related to self-attenuation in the sample and external contributions were applied. Regions of glandular tissue peaked at q = 19.8 nm-1, which is related to the distance between oxygen particles in neighboring water molecules. A less intense peak around q = 30.0 nm-1 is also noticeable, both in glandular and adipose tissues, and can be related either to the connection of hydroxyl groups between water molecules or to the harmonic scattering of the fatty acids’ peak. Adipose tissue presented a narrower peak at q = 13.9 nm-1, consistent with the fatty acids chain. In conclusion, the analyzed spots presented very different profiles, proving how heterogeneous the tumoral sample is. By analyzing the lyophilized samples, it is observed that points containing more fibroglandular tissue lose more hydric content than others. In these samples the peak q = 19.8 nm-1 was supressed, reinforcing its link to water molecules.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A expectativa de vida canina cresceu significativamente na última década. Como consequência, observou-se um aumento no aparecimento de doenças relacionadas à idade, como as neoplasias. Para as cadelas, neoplasias mamárias são o tipo de câncer mais comum, e aproximadamente 50% delas são malignas. Uma vez que os tumores são causados por alterações químicas e físicas nas células, estudos que caracterizem essas anormalidades são essenciais. A fluorescência de raios X (XRF) é uma das técnicas mais utilizadas para determinar a composição elementar dos tecidos. A técnica de espalhamento Compton, por sua vez, permite o cálculo da densidade eletrônica das amostras, fornecendo informações sobre a matriz tecidual. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar as variações nas concentrações de elementos-traço (Fe, Cu e Zn) e densidade eletrônica, em amostras de tecido mamário canino normais e neoplásicos, combinando técnicas de XRF e espalhamento Compton. Inicialmente, foram realizadas simulações computacionais visando a otimização das condições experimentais. Após as simulações, treze amostras foram analisadas no Instituto de Física Gleb Wataghin (IFGW), utilizando um arranjo de fluorescência de raios X por dispersão de energia (ED-XRF), para se obter simultaneamente as concentrações dos elementos-traço e as densidades eletrônicas das amostras. Outras sete amostras foram analisadas no Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS), em dois experimentos separados. Primeiramente, aplicou-se a técnica de microfluorescência de raios X (µ-XRF) para mapear a distribuição espacial de Fe, Cu e Zn ao redor dos tumores. Em seguida, medições de espalhamento Compton foram feitas em pontos selecionados das amostras, com o intuito de se obter valores de densidade eletrônica nesses pontos. Os resultados das simulações permitiram otimizar as condições experimentais, proporcionando um melhor uso do tempo de feixe para os experimentos realizados no LNLS. Os resultados obtidos nos experimentos com o arranjo de ED-XRF, apesar das flutuações percentuais, serviram como base para uma estimativa dos valores de concentração de Cu e Zn e de densidade eletrônica das amostras. Os experimentos de µ-XRF forneceram mapas com as distribuições espaciais dos elementos Fe, Cu e Zn ao redor dos tumores, que foram comparados aos laudos das lâminas histológicas e aos valores de densidade eletrônica encontrados no experimento de espalhamento Compton. Observou-se uma concentração elevada do elemento Cu em uma amostra de tumor benigno (adenoma simples), e aumento de Fe em regiões próximas a tumores, e o Zn estava distribuído de maneira homogênea em grande parte das amostras. Quanto às densidades eletrônicas, verificou-se concordância com outros trabalhos presentes na literatura, com valores mais altos em regiões tumorais, e menores nas áreas de tecido adiposo. Dessa forma, observa-se que a combinação das técnicas de XRF e espalhamento Compton é uma forma eficaz de se obter informações complementares em estudos com tumores mamários caninos. Canine life expectancy has increased significantly in the last decade. Consequently, there was a higher incidence of age-related diseases, such as neoplasms. For female dogs, breast neoplasms are the most common type of cancer, and approximately 50% of them are malignant. Once tumors are caused by chemical and physical changes in the cell, studies that characterize these abnormalities are essential. X-Ray Fluorescence (XRF) is one the most common technique used for determining the elemental composition of tissues. The Compton scattering technique, on the other hand, allows determining the electron density of samples, providing information about the tissue matrix. In this sense, the objective of this work was to study the variations in trace elements (Fe, Cu and Zn) concentration and electron density, in normal and neoplastic canine mammary tissues, combining XRF and Compton scattering techniques. Initially, computational simulations were carried out aiming the optimization of the experimental conditions. After the simulations, thirteen samples were analyzed at the Instituto de Física Gleb Wataghin (IFGW), using an energy dispersive X-ray fluorescence (ED-XRF) arrangement, to obtain the trace elements concentrations and the electron densities of the samples, simultaneously. Another seven samples were analyzed at the Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS), in two separate experiments. First, the micro X-ray fluorescence (µ-XRF) technique was applied for mapping the spatial distribution of Fe, Cu and Zn around the tumors. Then, the Compton scattering measurements were performed at selected points of the samples, in order to obtain values of electron density at these points. The simulations results optimized the experimental conditions, providing a better use of the beam time for the experiments carried out at the LNLS. The results obtained in the experiments with the ED-XRF arrangement, despite the percentage fluctuations, served as the basis for an estimation of the concentration values of Cu and Zn and the sample's electron densities. The µ-XRF experiments provided maps with the spatial distributions of Fe, Cu and Zn around the tumors, which were compared to the histological slides and the electron density values found in the Compton scattering experiment. A higher concentration of Cu was observed in a benign tumor sample (simple adenoma), and increased Fe in regions close to tumors, and Zn was homogeneously distributed in most of the samples. Regarding the values of electron density, there was agreement with other works present in the literature, with higher values in tumor regions, and smaller in the areas of adipose tissue. Therefore, it is observed that the combination of XRF and Compton scattering techniques is an effective way for obtaining complementary information in studies with canine mammary tumors.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A maioria dos tumores mamários caninos são malignos, fazendo com que o animal venha a óbito. Um dos fatores envolvidos nessa patogênese é a alteração no nível de expressão do gene P21, que codifica uma proteína que pode inibir a iniciação e a progressão tumoral. Um evento que pode afetar o nível celular da proteína p21 e o perfil de metilação desse gene, podendo ocasionar um silenciamento gênico ou uma superexpressão dele. Considerando a importância funcional desse gene, este estudo tem o objetivo de avaliar o perfil de metilação e expressão do gene P21 em tumores mamários de cadelas do estado do Pará, com o intuito de identificar marcadores moleculares de diagnóstico precoce, sobrevida e prognóstico. Para isso, 83 amos-tras de tecidos tumoral e não tumoral foram coletadas no Hospital Universitário Mário Dias Teixeira, em Belém. O DNA e RNA de cada amostra foram extraídos utilizando kits específi-cos. Para as análises de metilação, o DNA obtido foi submetido ao processo de modificação, com posterior técnica de Bisulfite Sequencing PCR, utilizando iniciadores específicos para re-gião e posterior visualização em gel de agarose 2%. Os resultados do sequenciamento foram analisados no software BiQ Analyzer a fim de avaliar o padrão de metilação. Para análise de expressão gênica, foi realizada a quantificação do mRNA do gene-alvo utilizando a técnica de PCR em tempo real, utilizando como controles constitutivos os genes GAPDH e HPRT1. Com análise estatística feita por meio dos testes Exato de Fisher, Odds Ratio e Mann-Whitney no programa GraphPad Prism, considerando os resultados significativos quando p ≤0.05, com in-tervalo de confiança 95%. Para avaliação do perfil de metilação, foi realizada a caracterização das ilhas CpGs do gene P21, sendo que a ilha 1 está localizada em um íntron e possui 34 sítios CGs, enquanto que a ilha 2 foi identificada no éxon 2, com 22 sítios CGs. Na ilha 1 não foi detectada metilação, enquanto que a ilha 2 estava metilada, contudo o perfil de metilação não foi diferente entre as amostras tumorais, não tumorais e controles, não sendo possível correla-cionar os valores de metilação com os dados clínicos e de expressão. Os níveis de expressão das amostras tumorais foram baixos quando comparados com as amostras não tumorais e con-trole, demostrando que o papel de p21 nesses tumores pode se apresentar alterado. No entanto, nenhuma correlação estatisticamente significativa foi observada entre a expressão e os dados clínicos e histopatológicos dos pacientes. Apesar disso, foi observada uma expressão reduzida em animais com sobrevida >1 ano de idade, e uma expressão elevada em animais com sobrevida < 1 ano de idade, sugerindo a influência de p21 como um marcador de prognóstico. Ainda são necessários estudos mais detalhados do gene P21 para verificar se essas alterações poderão ser utilizadas como marcadores moleculares, e assim colaborar no prognóstico e detecção do câncer na espécie. The most of canine mammary tumors are malignant and associated with the animal death. One of the factors involved in this pathogenesis is the change in the expression level of the gene P21, which in turn encodes a protein that can inhibit tumor initiation and tumor progression. The methylation profile of gene can affect the cellular level of p21 and lead gene silencing or overexpression. Whereas the functional importance of the P21 gene, this study aimed to evalu-ate the methylation profile and expression in mammary tumors of dogs, in order to identify molecular markers of early diagnosis, survival and prognosis. Therefore, 83 tumor and non-tumor tissue samples were collected from dogs, undergoing surgery at the Veterinary Hospital "Mário Dias Teixeira”, in Belém -Pará. the DNA and RNA from each sample were submitted to extraction using a commercial kit. For the methylation analyzes, the obtained DNA was sub-mitted to the modification process, with a subsequent technique of Bisulfite Sequencing PCR, using region-specific primers and subsequent visualization in 2% agarose gel. The sequencing results were analyzed in BiQ Analyzer software in order to evaluate the methylation pattern. For gene expression analysis, the target gene mRNA was quantified using the real-time PCR technique using the GAPDH and HPRT1 genes as constitutive controls. Statistical data was performed using the Fisher Exact, Odds Ratio and Mann-Whitney tests in the GraphPad Prism program, considering the significant results when p ≤0.05, with a 95% confidence inter-val. In order to evaluate the methylation profile, the CpG islands of the P21 gene were characterized. The island 1 is located in an intron with 34 CGs, while an island 2 was identified in the exon, with 22 CGs. Both amplified generating a fragment of ~ 300bp. At island 1 no methylation was detected, whereas island 2 was methylated, but the island methylation profile was not different between the tumor, non-tumor and control samples. With these results was impossible compare the methylation values with clinical and expression data, suggesting that these regions are not altered. The expression levels of the tumor samples were low when compared to the non-tumor samples and control, with p (0.0001), show that the role of p21 in these tumors may be altered but not statistically significant when correlated with clinical histopathological data of patients. However, a reduced expression in the survival of animals> 1 year of age was observed, and a high expression in animals with survival

Os tumores de mama têm grande importância na clínica de animais de companhia e são as neoplasias mais frequentes nas cadelas. O linfonodo sentinela é definido como o primeiro linfonodo de uma cadeia linfática regional a drenar a linfa do sítio neoplásico. A possibilidade de identificação do linfonodo axilar sentinela com o corante azul patente tem auxiliado na determinação de metástase regional, definindo prognóstico, sobrevida e terapias adjuvantes necessárias. O objetivo desse estudo foi avaliar o linfonodo axilar de cães com neoplasia mamária submetidas à mastectomia, avaliar o método de identificação pela técnica do azul patente e correlacionar a presença de metástase em linfonodo com alguns fatores prognósticos e tipos histológicos das neoplasias. Foram avaliados 50 cães (49 fêmeas e um macho) provenientes da rotina clínico-cirúrgica do Hospital Veterinário da UFMG de abril/2015 a maio/2017 com tumores mamários em mamas de localização de drenagem linfática axilar, estadiamento clínico II ou III e linfonodo axilar não palpável. Todos os animais foram submetidos à mastectomia e aplicação de azul patente 2,5% para identificação do linfonodo axilar. Em 38 animais (76%) foi possível a identificação do linfonodo corado, nos demais casos o linfonodo não foi identificado. A probabilidade de encontrar o linfonodo axilar não diferiu quando correlacionada ao tamanho do tumor e peso do animal e nenhum animal apresentou reação ao corante. Dos 38 animais com linfonodo axilar avaliados histologicamente, 14 (36,84%) possuíam metástase. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre a probabilidade de encontrar metástase e a localização do tumor, a presença de aderência e o tipo histológico da neoplasia. No entanto, a probabilidade de encontrar metástase foi significativa (p 0.05) between the likelihood of finding metastasis and the location of the tumor, the presence of adhesion and the histological type of the neoplasm. However, the probability of finding metastasis was significant (p

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O complexo Polycomb (PcG) é constituído por fatores multiproteicos que medeiam a repressão de diversos genes no organismo. As proteínas PcG são divididas em dois complexos distintos, PRC1 e PRC2, sendo que PRC1 tem atividade ligase E3, catalisando a mono-ubiquitinação da histona H2A nos resíduos de lisina na posição 119 (H2AK119ub), enquanto PRC2 tem atividade metiltransferase, mediando a mono, di, e trimetilação na histona H3 nos resíduos de lisina na posição 27 (H3K27me2/3). Sabe-se que PRC1 é subdivido em complexos não canônicos e canônicos, sendo este último composto por proteínas CBX (CBX2, CBX4, CBX6, CBX7 ou CBX8). Já PRC2, compreende três proteínas centrais: SUZ12, EED e EZH1 ou EZH2, que é a proteína metiltransferase responsável por conferir a principal atividade enzimática ao complexo PRC2. Sabe-se que a desregulação das proteínas PcG pode alterar vias relacionadas ao desenvolvimento, ocasionando um aumento desordenado de proliferação celular, inibição da apoptose, e aumento das células tumorais. Dentre os tumores com alteração na expressão de PcG, estão os tumores mamários. Em caninos, este tipo de tumor é a neoplasia mais frequente em cadelas. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo avaliar o padrão de metilação e expressão dos genes CBX2 e CBX7 (PRC1), e EED, EZH2 e SUZ12 (PRC2) em tumores de mama em cadelas do estado do Pará. Para isso, foram avaliadas 83 amostras de tecido neoplásico e não-neoplásico, provenientes de 40 animais, coletadas no Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural da Amazônia. Para a análise do padrão de metilação, as amostras foram convertidas por ação do bissulfito de sódio e submetidas à técnica de Bissulfite sequence PCR para detecção das possíveis áreas metiladas. Para a análise da expressão de RNA, foi feita a conversão a cDNA e posterior quantificação dos transcritos usando a detecção por sonda Taqman. A emissão da fluorescência foi captada com o auxílio do ABI PRISM 7500 Sequence Detection System. As análises estatísticas foram realizadas pelos testes Kruskal-Wallis e Teste T Mann Whitnae, para avaliar as associações dos padrões de metilação com os níveis de expressão, e destes com progressão tumoral e demais características clinicopatológicas, sendo os resultados considerados significativos quando p< 0,05. The Polycomb complex (PcG) consists of multiprotein factors that mediate the repression of various genes in the body. PcG proteins are divided into two distinct complexes, PRC1 and PRC2, with PRC1 having E3 ligase activity, catalyzing the mono-ubiquitination of histone H2A at lysine residues at position 119 (H2AK119ub), while PRC2 has methyltransferase activity, mediating mono, di, and trimethylation on histone H3 at lysine residues at position 27 (H3K27me2 / 3). It is known that PRC1 is subdivided into non-canonical and canonical complexes, the latter being composed of CBX proteins (CBX2, CBX4, CBX6, CBX7 or CBX8). Already PRC2, it comprises three central proteins: SUZ12, EED and EZH1 or EZH2, which is the methyltransferase protein responsible for conferring the main enzymatic activity to the PRC2 complex. It is known that deregulation of PcG proteins may alter developmental pathways, causing a disordered increase in cell proliferation, inhibition of apoptosis, and increase of tumor cells. Among the tumors with altered expression of PcG are mammary tumors. In canines, this type of tumor is the most frequent neoplasm in bitches. Thus, the objective of this study was to evaluate the methylation and expression pattern of the CBX2 and CBX7 (PRC1), and EED, EZH2 and SUZ12 (PRC2) genes in breast tumors in dogs from the state of Pará. Samples of neoplastic and non-neoplastic tissue from 40 animals collected at the Veterinary Hospital of the Federal Rural University of Amazônia. For the analysis of the methylation pattern, the samples were converted by sodium bisulfite and submitted to the Bissulfite sequence PCR technique to detect possible methylated areas. For analysis of RNA expression, cDNA conversion and subsequent quantification of transcripts were performed using Taqman probe detection. Fluorescence emission was captured with the aid of the ABI PRISM 7500 Sequence Detection System. Statistical analyzes were performed using the Kruskal-Wallis test and the Mann Whitnae test to evaluate the associations of methylation patterns with expression levels, and those with tumor progression and other clinicopathological characteristics. The results were considered significant when p

As neoplasias mamárias são o terceiro tipo mais frequente de neoplasias em felinos e a busca por fatores prognósticos para este tipo de tumor nas gatas tem se intensificado nos últimos anos, dada sua alta frequência e relevância na clínica de felinos. Dentre os marcadores imunohistoquímicos utilizados para prognóstico destaca-se o receptor do fator de crescimento epidérmico humano tipo 2 (Human Epidermal Growth Factor Receptor type 2 – Her-2) que em mulheres está associado a um pior prognóstico. Objetivou-se avaliar a expressão de Her-2 em hiperplasias e neoplasias mamárias, benignas e malignas, de gatas e relacionar a expressão ao tipo e grau histológico dos carcinomas mamários. Foram selecionados 38 casos de neoplasias e hiperplasias mamárias de gatas, no período de 2006 a 2016. A partir dos protocolos selecionados obteve-se informações epidemiológicas e características macroscópicas das lesões nas mamas. Os tumores foram individualmente classificados e graduados histologicamente por dois patologistas. A expressão de Her- 2 foi determinada por imunohistoquímica, por meio de análise semi quantitativa das lâminas conforme escore recomendado pelo Herceptest (Dako). Utilizou-se Teste Quiquadrado (χ2) para avaliação da relação entre expressão de Her-2 e tipo de lesão mamária, tipos histológicos de carcinoma e grau histológico (P

Orientador : Prof. Dr. Fabiano Montiani-Ferreira Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 31/03/2017 Inclui referências ao final de cada capítulo Resumo:Os estudos, investigações e publicações sobre as alterações clínicas e histopatológicas das doenças que afetam as pálpebras de cães são muito escassos. Isso provavelmente se deve ao fato de as pálpebras serem estruturas que pertencem à área de atuação comum a duas especialidades médicas: a dermatologia e a oftalmologia, não se encaixando completamente em nenhuma delas. Tanto os dermatologistas não se sentem confortáveis em tratar de uma área que pertence ao olho; quanto os oftalmologistas, hesitam em abordar uma região tão ligada à dermatologia. Certamente o diagnóstico e consequente tratamento exitoso das afecções palpebrais exige conhecimentos sólidos de cada umas dessas especialidades. Assim sendo, estudos mais aprofundados e específicos das alterações patológicas palpebrais e que incluam conhecimentos e experiências das duas especialidades têm grande relevância no desenvolvimento da clínica veterinária de pequenos animais. Além disso, é importante que aqueles responsáveis pelo diagnóstico histopatológicos das alterações palpebrais, os patologistas, sejam apresentados a essa área de intersecção de especialidades e, uma vez habituados e conhecedores dela, tornem-se aliados dos oftalmologistas e dermatologistas no diagnóstico das afecções palpebrais. A presente tese de doutorado está dividida em dois capítulos. O primeiro capítulo trata-se de um estudo retrospectivo de 290 casos de adenomas e epiteliomas da glândula tarsal em cães. Nele determina-se a frequência destas neoplasias palpebrais em dois laboratórios de Patologia Veterinária que recebem amostras de todo o Brasil. Além disso, discutem-se os aspectos histopatológicos dessas duas neoplasias e propõe-se uma nova forma de diferenciação entre elas. Este estudo deu origem a um artigo publicado no periódico Brazilian Journal of Veterinary Pathology. O segundo capítulo avalia os achados histopatológicos e imuno-histoquímicos das lesões despigmentantes das pálpebras de cães. O estudo sugere que a despigmentação palpebral acompanhada do padrão histopatológico de dermatite de interface é uma manifestação localizada do lúpus eritematoso discoide. Além disso, o demonstra que o lúpus eritematoso discoide localizado pode ser restrito às pálpebras de cães e propõe o termo blefarite lupoide para essa manifestação. O estudo também avaliou a expressão da proteína p53 nas pálpebras despigmentadas com dermatite de interface. A correlação entre a expressão da proteína p53 com a presença de dermatite de interface em pálpebras despigmentadas pode ajudar no entendimento dos mecanismos das dermatopatias que levam à despigmentação, resultando em diagnósticos e prognósticos mais precisos. Esse artigo será publicado em periódico direcionado a clínicos veterinários dermatologistas ou oftalmologistas. Palavras-chave: pálpebra, adenoma, epitelioma, dermatite de interface, blefarite lupoide, p53. Abstract: Studies, investigations and publications about clinical and histopathological alterations of diseases affecting the eyelids in dogs are very scarce. This is probably because the eyelids are structures belonging to an area common to two medical fields: dermatology and ophthalmology, and do not totally fit into neither. Dermatologists usually do not feel confident to treat an area belonging to the eye; and ophthalmologists hesitate to approach an area so connected to dermatology. Certainly, the diagnosis and consequent successful treatment of palpebral conditions demand solid knowledge from each of these specialties. Therefore, it is clear the need of deeper and more specific studies of palpebral diseases including knowledge and experience from both specialties. Besides, it is important that the pathologists themselves should be more familiar with this intersection area of specialties and make the connection between ophthalmologists and dermatologists in the diagnosis of eyelid diseases. The present doctorate thesis was divided into two chapters. The first one is about a retrospective study of 290 cases of adenomas and epitheliomas of the tarsal gland in dogs. In this chapter, the frequency of these eyelid neoplasias was determined in two Veterinary Pathology laboratories that receive samples from all over Brazil. Besides, the histopathological aspects of both neoplasias have been discussed and a new form of differentiation between them has been proposed. This study gave origin to an article published in the Brazilian Journal of Veterinary Pathology. The second chapter evaluates the histopathological and immunohistochemical findings on the depigmenting lesions in eyelids of dogs. The study suggests that depigmented eyelids with interface dermatitis are, in fact, a clinical manifestation of localized discoid lupus erythematosus. Besides, the study demonstrates that localized discoid lupus erythematosus can be restricted to the eyelids of dogs and proposes the term lupoid blepharitis for those cases. The expression of p53 protein in depigmented eyelids with interface dermatitis also was investigated. The results of this study may help to better understanding of the mechanisms behind the disorders that lead to depigmentation, resulting in more precise diagnosis and prognosis. The manuscript will be published in a periodical with the focus directed to veterinary clinicians specialized in dermatology or ophthalmology. Keywords: eyelids, adenoma, epithelioma, interface dermatitis, lupoid blepharitis, p53.

Orientadora : Profª Drª Giseli Klassen Coorientadora : Profª Drª Edneia A. S. R. Cavalieri Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa: Curitiba, 29/03/2017 Inclui referências : f. 52-58 Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer mais incidente em cadelas não castradas e dentre os fatores envolvidos em sua patogênese está a exposição ao estrógeno e a ação de seu receptor. O receptor de estrógeno-? (RE?) é uma proteína, codificada pelo gene ESR1, amplamente utilizada como marcador molecular de prognóstico para o câncer de mama em mulher, porém na cadela ainda é pouco utilizado. Um dos mecanismos envolvidos na regulação do gene ESR1 em neoplasias mamárias em mulheres é a metilação do DNA, um evento epigenético onde há a adição de um grupamento metil em citosinas ao lado de guaninas. Nos últimos anos vem aumentando o número de trabalhos investigando a expressão da proteína RE? em cadelas, entretanto, ainda são poucos os estudos buscando entender os mecanismos moleculares de regulação do gene ESR1 nestes animais. Neste trabalho, foi avaliada a expressão do gene ESR1 e da proteína em amostras de mama normal, tumores mamários benignos e malignos, bem como verificada a influência da metilação na regulação da expressão deste gene. Neste estudo foram utilizadas quatro amostras de mama normal, oito tumores benignos e nove malignos. Observou-se uma menor expressão do gene ESR1 (p < 0,05) e da proteína RE? (p=0,0037) nos tumores malignos em relação às mamas normais e aos tumores benignos. Embora a correlação encontrada entre mRNA e proteína seja forte e positiva (rho=0,72 e p < 0,05), três das seis amostras RE? negativas (escore zero) apresentaram níveis de mRNA semelhantes aos das amostras RE? positivas classificadas como escore 2 na imuno-histoquímica. Os resultados do sequenciamento evidenciaram um baixo percentual de metilação, sendo observados 2,5% no grupo de mamas normais, 1,9% no grupo receptor de estrógeno positivo e 2,6% no grupo receptor de estrógeno negativo, não havendo diferença estatística entre os grupos (p>0,05). Como não foi evidenciada diferença significativa na metilação entre os três grupos é possível inferir que no câncer de mama canino o gene ESR1 provavelmente não é silenciado por metilação, entretanto estudos com maior número amostral são necessários. Palavras chave: câncer de mama canino, receptor de estrógeno ?, ESR1, metilação do DNA, epigenética Abstract: The mammary cancer is the most prevalent cancer type in no spayed bitches. Exposure to estrogen and its receptor action is a factor involved in mammary carcinogenesis. The estrogen receptor-? (ER?) is a protein encoded by the gene ESR1 widely used as prognostic biomarker in women breast cancer but poorly used in canine mammary tumor. The DNA methylation is a regulatory mechanism of the gene ESR1 in women breast cancer. It is an epigenetic event where the methyl group is added to a cytosine next to a guanine. In the past few years it has been increasing the number of studies about the ER? expression in bitches, however it still few researches investigating the molecular mechanisms of the ESR1 gene regulation in these animals. The goal of this study was to evaluate the protein and mRNA expression of the ESR1 gene in samples of normal mammary gland, benign and malignant tumors and identify the role of DNA methylation in this gene regulation. It was used samples of four normal mammary gland, eight benign tumors and nine malignant tumors. It was observed a significant lower expression of ER? mRNA (p0,05). We can infer that in canine mammary tumors the gene ESR1 probably is not silenced by DNA methylation. Further studies with higher number of samples are needed. Key words: canine mammary cancer, estrogen receptor ?, ESR1, DNA methylation, epigenetic

Orientadora : Profª. Drª. Rosângela Locatelli Dittrich Coorientadora : Profª. Drª. Ananda Portella Felix Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 27/03/2017 Inclui referências ao final de cada capítulo Resumo: Nas últimas décadas foram crescentes os estudos em humanos a respeito da concentração sérica da vitamina D na saúde sistêmica. No entanto, na medicina veterinária ainda há pouco conhecimento sobre isso e não há um consenso em relação aos seus valores de referência. Estudos em cães associam a deficiência de vitamina D a maior predisposição para o desenvolvimento de neoplasias, em humanos os resultados sãos mais consistentes e já relacionam essa deficiência ao pior prognóstico e menor sobrevida. Porém, não existe nenhum estudo em cães que relacione as concentrações séricas de 25(OH)D como fator de risco para neoplasia mamária. A presente dissertação está dividida em uma breve descrição e atualização sobre a vitamina D e em dois capítulos. O capítulo I determina valores de referência para 25(OH)D em cães saudáveis e avalia as concentrações séricas de 25(OH)D em relação ao sexo, a faixa etária (adultos e filhotes) e ao tipo de dieta. Foram selecionados 59 cães saudáveis, população total (G), dividido em dois grupos: Grupo 1 (G1): Beagles, faixas etárias distintas (adultos e filhotes), dieta padronizada e Grupo 2 (G2): raças variadas, mesma faixa etária (adultos) e dietas variadas. O intervalo de referência obtido na população total (G) tem limite inferior de 12,2 ng/ml e superior de 74,4 ng/ml. Não foi observada diferença nos níveis séricos de 25(OH)D entre machos e fêmeas. No G1 os filhotes apresentaram uma concentração de 25(OH)D mediana (30,6 ng/ml) inferior aos adultos (34,9 ng/ml). No G2 não foi observada diferença significativa entre os cães que recebiam diferentes tipos de dieta. A ausência de correlação significativa entre a ingestão de vitamina D por quilograma de peso corporal e a concentração de 25(OH)D (G1) sugere que outros fatores podem influenciar nessa relação. O capítulo II aborda a relação entre os níveis séricos de 25(OH)D e o risco de desenvolvimento de neoplasia mamária em cadelas, o prognóstico e a sobrevida. Os cães foram separados em grupo controle (GC) e grupo com neoplasia mamária (GN). Para o GC foram selecionadas 78 cadelas adultas, saudáveis. No GN foram incluídas 65 cadelas, adultas, diagnosticadas com tumor mamário. As cadelas do GN apresentaram níveis significativamente inferiores de 25(OH)D (24,9 ng/ml) em relação ao GC (43,7 ng/ml). As cadelas com valores séricos de 25(OH)D menores que 26,2 ng/ml apresentaram um risco 6,2 vezes maior de desenvolver neoplasia mamária. Fatores prognósticos como malignidade, grau histológico do tumor, presença de metástase não apresentaram relação significativa com as concentrações séricas de 25(OH)D. Porém em cadelas com níveis séricos inferiores a 26,2 ng/ml o risco de mortalidade aumentou em mais de 5 vezes e a curva de sobrevivência foi significativamente menor. Ainda não é possível definir quais os níveis séricos de 25(OH)D são considerados adequados para cães, mas a deficiência de vitamina D pode ser um fator de risco para neoplasia mamária em cadelas e estar relacionada uma menor sobrevida. Palavras-chave: vitamina D, cão, dieta, valor de referência, tumor de mama, mortalidade, sobrevida. Abstract: In recent decades there has been a growing number of studies in humans regarding serum vitamin D concentration in systemic health. However, in veterinary medicine there is still not much data about this and there is no consensus regarding its reference values. Studies in dogs associate vitamin D deficiency with a greater predisposition to the development of neoplasias. In humans results are more consistent and have already related this deficiency to worse prognosis and lower survival. However, there is no study in dogs that correlates serum concentrations of 25(OH)D as a risk factor for breast cancer. This dissertation is divided in a brief description and update about vitamin D and in two chapters. The chapter I determines reference values for 25(OH)D in healthy dogs, and evaluates serum 25(OH)D levels in relation to gender, age (adult and pups), and type of diet. A total of 59 healthy dogs were selected, divided into two groups: Group 1 (G1): Beagles, different age groups (adults and puppies), standardized diet and Group 2 (G2): varied breeds, same age group (adults) and various diets. The reference range obtained in the total population (G) has a lower limit of 12.2 ng/mL and higher of 74.4 ng/mL. No difference was observed in the serum levels of 25(OH)D between males and females. In G1 puppies had a mean 25(OH)D concentration (30.6 ng/mL) lower than adults (34.9 ng/mL). In G2, no significant difference was observed between dogs receiving different types of diet. The absence of a significant correlation between vitamin D intake per kilogram of body weight and the concentration of 25(OH)D (G1) suggests that other factors may influence this relation. Chapter II discusses the relationship between serum 25(OH)D levels and the risk of developing breast cancer in bitches, prognosis and survival. The dogs were separated in control group (CG) and group with mammary neoplasia (GN). For GC, 78 adult, healthy bitches were selected. In GN 65 adult bitches diagnosed with breast tumor were included. In GN bitches showed significantly lower levels of 25(OH)D (24.9 ng/mL) than GC (43.7 ng/mL). Bitches with serum values of 25(OH)D lower than 26.2 ng/ mL had a 6.2-fold higher risk of developing breast cancer. Prognostic factors such as malignancy, histological grade of the tumor, presence of metastasis did not show significant relation with the serum concentrations of 25(OH)D. However, in bitches with serum levels below 26.2 ng/mL the risk of mortality increased more than five fold and the survival curve was significantly lower. It is not yet possible to determine which serum levels of 25(OH)D are considered suitable in dogs, but vitamin D deficiency may be a risk factor for breast cancer in bitches and may be associated with decreased survival. Keywords: Vitamin D, dog, diet, reference value, breast tumor, mortality, survival

Essa tese teve como objetivo avaliar a eficiência de fatores prognósticos e de diferentes abordagens terapêuticas do mastocitoma canino, considerando à elevada incidência e heterogeneidade de apresentação clínica e comportamento biológico dessa neoplasia, consituindo um guia para prognóstico e tratamento. Foram incluídos cães referenciados ao Hospital Veterinário (Universidade Federal de Minas Gerais, Brasil) e Queen's Veterinary School Hospital (University of Cambridge, Reino Unido), com diagnóstico histopatológico de mastocitoma. Foram avaliados fatores prognósticos clínicos, anátomo-patológicos, imuno-histoquímicos e genéticos, resultando na realização de cinco estudos distintos. O estudo 1 (n = 62) demonstrou elevada taxa de resposta aos glicocorticóides (64,5%), no tratamento de doença mensurável, e evidenciou o impacto negativo no prognóstico, na ausência de resposta a esses fármacos. No estudo 2 (n = 149), foi avaliada a importância dos diferentes fatores prognósticos, com a proposta de uma modificação no estadiamento clínico preconizado pela Organização Mundial de Saúde, definição de novos valores de corte para o índice mitótico e percentual de Ki-67. O estudo 3 (n = 98) evidenciou o benefício da quimioterapia em dose maxima tolerada, no controle do mastocitoma de alto risco, enquanto o estudo 4 (n = 21), demonstrou elevada eficácia da radioterapia adjuvante no controle, a longo prazo, de mastocitomas de risco intermediário. Por fim, ficou demonstrada, no estudo 5 (n = 31), a eficácia dos inibidores tirosina-quinase em pacientes com risco elevado, no tratamento de doença mensurável, inoperável, mas também no cenário adjuvante, embora o uso de glicocorticóides e agentes antineoplásicos possa comprometer essa resposta. The objective of this thesis was to evaluate the effectiveness of prognostic factors and different therapeutic approaches towards canine mast cell tumour, considering its high incidence and heterogeneity in clinical presentation and biological behavior, representing a guideline for prognosis and treatment. It included dogs referred to the Veterinary Hospital (Universidade Federal de Minas Gerais, Brazil) and Queen's Veterinary School Hospital (University of Cambridge, United Kingdom), with histological diagnosis of mast cell tumour. Evaluated prognostic factors included clinical, histological, immunohistochemical and genetic features, resulting in five distinct studies. Study 1 (n = 62) demonstrated high response rate to glucocorticoids (64.5%) in the treatment of measurable disease, and showed a negative impact on prognosis in the absence of response to these drugs. In study 2 (n = 149), the importance of different prognostic factors was evaluated, with a proposal of a modification for the World Health Organization´s recommended clinical staging, definition of new cut-off values for mitotic index and Ki-67. Study 3 (n = 98) showed the benefit of chemotherapy at maximum tolerated dose, in the control of high-risk mast cell tumours, while the study 4 (n = 21) demonstrated a high efficacy of adjuvant radiotherapy in the long-term control, of mast cell tumours of intermediate risk. Finally, it was demonstrated in the study 5 (n = 31), the effectiveness of tyrosine kinase inhibitors in patients at high risk, in the treatment of gross, unresectable disease, but also in the adjuvant setting, although the use of glucocorticoids and antineoplastic agents may compromise such response.

Eletroquimioterapia é uma modalidade de tratamento local contra o câncer em que a administração de quimioterápicos não penetrantes à membrana plasmática é associada à aplicação de pulsos elétricos com parâmetros bem estabelecidos, que abrem poros na membrana plasmática e facilitam a entrada destes fármacos nas células, aumentando sua citotoxicidade e reduzindo efeitos colaterais. A avaliação dos efeitos da eletroquimioterapia sobre o desenvolvimento do tumor sólido de Ehrlich em camundongos Swiss neste trabalho teve como objetivo testar o uso in vivo do aparelho eletroporador desenvolvido pelo Departamento de Engenharia Elétrica da Escola de Engenharia da UFMG para, em procedimentos futuros, aplicar a técnica no Hospital Veterinário da Escola de Veterinária da UFMG. Para tanto, foram utilizados 40 camundongos fêmeas da linhagem Swiss, nos quais foram inoculadas células de tumor de Ehrlich, para o desenvolvimento do tumor na forma sólida. Após 21 dias, os camundongos foram submetidos ao protocolo de tratamento específico e 17 dias depois foram eutanasiados e seus tumores coletados para análise histopatológica. A eletroquimioterapia induziu perda de peso discreta e uma resposta inflamatória no tumor que não foi observada nos outros grupos. O grupo tratado com bleomicina apenas apresentou maior porcentagem de necrose. Ambos os grupos apresentaram menor índice de proliferação celular. A partir desse estudo pode-se concluir que o tratamento sob anestesia foi bem tolerado pelos animais e que o aparelho eletroporador desenvolvido pela Escola de Engenharia da UFMG é adequado para utilização em um protocolo de eletroquimioterapia Electrochemotherapy is a local anticancer treatment in which non-permeant chemotherapeutic drugs are associated with electric pulses of well-established parameters. The electric pulses cause pores to open on the plasma membrane and facilitate drug transport, enhancing cytotoxicity and reducing side effects. Assessment of electrochemotherapy effects on Ehrlich solid tumor development in this work aims to evaluate in vivo usage of the electroporator device developed by Electric Engineering Department of Escola de Engenharia of UFMG, so it can be used on future procedures on Hospital Veterinário of Escola de Veterinária of UFMG. Therefore, 40 Swiss mice were inoculated with Ehrlich tumor cells, and developed the tumor in solid form. After 21 days, mice were subjected to specific treatment protocols and 17 days later they were euthanized and the tumors collected for histopathology analysis. Electrochemotherapy induced discrete weight loss and an inflammatory response in the tumor, which was not seen on the other treatment groups. Bleomycin alone induced necrosis. Both groups showed lower cellular proliferation rates. From this study, it was concluded that the animals tolerated well electrochemotherapy treatment under anesthesia and the electroporator device developed by Escola de Engenharia of UFMG was adequate when used in an electrochemotherapy protocol.

Orientador : Profª. Drª. Tilde Rodrigues Froes Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 15/03/2016 Inclui referências : f. 34-46;59-60;76-79 Área de concentração : Ciências Veterinárias Resumo: O presente trabalho buscou contribuir com informações sobre a aplicabilidade do diagnóstico por imagem em cães e gatos com neoplasias, especialmente abordando a utilização da ultrassonografia como técnica de estadiamento e diagnóstico em animais com suspeita de câncer. O trabalho foi subdividido em três capítulos independentes. No primeiro capítulo foi apresentada uma breve revisão de literatura sobre a utilização das técnicas mais usuais de diagnóstico por imagem (radiografia simples e ultrassonografia) na oncologia de pequenos animais. O enfoque da revisão foi apresentar de forma aplicada como estas técnicas podem contribuir em todas as etapas da abordagem ao paciente com neoplasia, desde a triagem oncológica até o seguimento clínico após o tratamento. Desta forma, demonstrou-se uma sistemática de tomada de decisões na escolha do melhor método de imagem abordando contribuições e limitações da técnica durante a investigação das principais neoplasias de cães e gatos. O segundo capítulo discorre sobre a utilização da ultrassonografia intraoperatória em nove cães com suspeita de neoplasia intra-abdominal. Neste estudo, a performance da ultrassonografia durante o ato cirúrgico foi especialmente avaliada em pacientes com neoplasia hepática e esplênica, verificando-se que é possível a realização da técnica de ultrassonografia intraoperatória em cães de forma muito semelhante à realizada na medicina (em pessoas), evidenciando-se lesões que não podem ser visualizadas ou palpadas pelo cirurgião. No terceiro capítulo foram apresentados os resultados de um estudo retrospectivo sobre os achados ultrassonográficos abdominais no momento do diagnóstico clínico de neoplasia mamária em 201 cadelas. Neste trabalho, observou-se que 78% dos animais apresentaram alguma anormalidade ultrassonográfica abdominal, sendo baço, útero e fígado os órgãos com maior frequência de alterações. Ainda, verificou-se que a identificação ultrassonográfica de linfonodos intra-abdominais aumentados está associada com menor sobrevida e com a presença de metástase em linfonodo regional (inguinal ou axilar). Em associação, os três capítulos contribuíram com abordagens inéditas, e direcionadas à aplicabilidade na rotina clínica, do diagnóstico por imagem no paciente oncológico veterinário. Palavras-chave: cão, estadiamento, neoplasia hepática, neoplasia mamária, ultrassonografia Abstract: The goal of the present study was contribute with information about the applicability of diagnostic imaging in dogs and cats with tumors, particularly using the ultrasonographic exam for staging and diagnosis in animals with suspected cancer. Therefore, the study was divided into three independent chapters. In the first chapter was presented a brief reviewed about the main diagnosis imaging methods (simple radiographic and ultrasonographic) available in small animal oncology. The aim of the reviewed was to present the applicability of the radiographic and ultrasonographic methods in all times of the approach to the oncology patient, from the screening to the follow-up after the treatment. Thus, it was demonstrated the steps to making decisions in choosing the best imaging method, advantages and limitations during the investigation and treatment of the main tumors of dogs and cats. The second chapter discussed about intraoperative ultrasonography in nine dogs with intra-abdominal suspected tumor. The performance of ultrasonography during the surgical procedure was evaluated specially in dogs with hepatic and splenic neoplasms. It was observed that intraoperative ultrasonography in dogs is similar to that used in medicine, evidencing lesions non-palpable by the surgeon. In the third chapter were presented the results of a retrospective study concerning abdominal ultrasonographic changes in 201 female dogs with mammary tumor. In this study, it was observed that 78% of the dogs had some ultrasonographic abnormality. Spleen, uterus and liver were the organs with the highest frequency of changes. The ultrasonographic evidence of enlargement intra-abdominal lymph nodes was associated with regional metastasis and decreased survival after unilateral mastectomy. In association, all the three chapters contributed with new approaches targeted to the applicability of imaging diagnosis in clinical routine of the veterinary cancer patient. Keywords: dog, staging, hepatic tumor, mammary tumor, ultrasound

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-20. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:01:21Z : No. of bitstreams: 1 000860377.pdf: 2435020 bytes, checksum: 6715f67910c92671c2473b587aa60da5 (MD5) O tumor venéreo transmissível canino (CTVT) é um câncer transmissível que propaga-se, naturalmente, entre os cães pela transferência alogênica de células tumorais, principalmente, durante o coito. Trata-se da mais antiga linhagem tumoral conhecida na natureza e uma de suas características marcantes é a habilidade de se desenvolver e se evadir da rejeição imunológica, como enxerto alogênico, apesar da estrita e contínua vigilância do sistema imunológico. Há a hipótese de que as células do CTVT não expressam MHC-II, como um mecanismo de escape à detecção imune, e que a positividade detectada em muitas amostras tumorais possa ser atribuída à infiltração de células do hospedeiro no sítio do tumor. Objetivou-se avaliar a expressão gênica e proteica e a caracterização genotípica do loco DLADQA-1 (MHC-II) em tumores venéreos transmissíveis de ocorrência espontânea em cães. Adicionalmente, detectar a interação entre anticorpos séricos e antígenos tumorais específicos do CTVT. Para tanto, foram incluídos neste estudo 20 cães provenientes de São José do Rio Preto, São Paulo, Brasil, com CTVT de ocorrência natural. As amostras tumorais foram coletadas antes do tratamento quimioterápico (M1) e três semanas após o início da quimioterapia (M2). A análise de expressão gênica foi realizada pelo método de qPCR e de expressão proteica de CD3, CD79, MAC387, Ki67 e MHC-II, pelo método de imuno-histoquímica. Foi realizado sequenciamento por capilaridade para caracterização genotípica e estudo dos antígenos tumorais pela técnica de Western Blotting. Amostras de CTVT e de seus hospedeiros provenientes de outros países foram empregados para estudos comparativos. Foi observada diferença significativa de células imunomarcadas para MHC-II e CD3 entre M1 e M2 detectando-se maior expressão em M2. Não houve expressão gênica de DLADQA-1 em nenhuma amostra de CTVT em M1 e M2. O elevado grau de... The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a transmissible cancer that is spread between dogs by the allogeneic transfer of living cancer cells during coitus. It is the oldest cancer lineage known in nature and one of the most remarkable features of CTVT is its ability to develop and evade the immune rejection, as an allogeneic graft, despite the strict and continuous surveillance of the immune system. It has been hypothesized that CTVT cells do not express MHC-II as an escape mechanism to immune detection, and MHC-II positivity detected in tumor samples can be attributed to infiltrating host cell at the tumor site. The aims of this study were: evaluate gene and protein expression and genotypic characterization of DLADQA-1 locus (MHC-II) in spontaneous transmissible venereal tumours in dogs. Additionally, to detect the interaction between serum antibodies and specific tumor antigens of CTVT. For this, 20 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, Brazil with naturally occurring CTVT were included and samples were collected before chemotherapy (M1) and three weeks after starting chemotherapy (M2). The gene expression analysis was performed by qPCR method and protein expression of CD3, CD79, MAC387, Ki67 and MHC-II by immunohistochemistry method. Sequencing was performed by capillary method and the study of tumor antigens by the Western Blotting technique. CTVT samples and their hosts from other countries have been used for comparative studies. Significant differences were observed in MHC-II and CD3 immunostained cells between M1 and M2 with higher expression in M2. There was no gene expression of DLADQA-1 in any sample of CTVT in M1 and M2. The genotypic similarity between tumor samples, which differ from their respective hosts, is consistent with a clonal origin of this tumour. There was no significant difference between the genotypes of hosts and control dogs. The detection of two protein bands in different CTVT from Brazil ...

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-13. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:13:45Z : No. of bitstreams: 1 000866002.pdf: 1774918 bytes, checksum: 7a85fafd4477aa0f0f75ad8c323e976f (MD5) Os tumores mamários constituem a neoplasia mais comum das cadelas, sendo que mais da metade são consideradas malignas e com muitos animais apresentando morte associada à doença. Estes tumores geralmente são tratados cirurgicamente por meio de mastectomia, porém os resultados frequentemente não são satisfatórios. Visto que novas abordagens terapêuticas são necessárias nos tumores mamários caninos, especialmente no que diz respeito ao tratamento adjuvante e à terapia alvo, o conhecimento acerca de possíveis componentes relacionados com a resistência à fármacos e que funcionem como possíveis alvos moleculares para a terapia deve ser garantido. Em vista disso, o objetivo da pesquisa descrita nesta tese foi caracterizar o papel da família de receptores do fator de crescimento epidermal (EGFR) e da superfamília de transportadores ligadores de ATP (ABC) nos tumores mamários caninos como biomarcadores do câncer e sua relação com o desfecho da doença para caracterizar sua patobiologia. Neste estudo, os receptores tirosina cinase EGFR/HER1, HER2, HER3 e HER4, assim como as proteínas da família ABC glicoproteína-P/MDR1, MRP1 e MRP2 foram avaliadas por meio de imunoistoquímica, sendo os resultados relacionados com características clinicopatológicas em 43 tumores. A expressão simultânea de todos os membros da família e a coexpressão de EGFR/HER1, HER2 e HER4 se mostraram associadas com um desfecho desfavorável para a doença. A expressão de glicoproteína-P e MRP1 se apresentaram relacionadas com características clinicopatológicas nos tumores estudados, ao passo que a expressão de MRP1 foi caracterizada como um indicador prognóstico independente nestes tumores. Em síntese, esta tese fornece novas informações acerca da expressão da família EGFR nos tumores mamários caninos e associa os transportadores ABC com um desfecho desfavorável para a doença, consequentemente sugerindo que eles também podem estar... Mammary tumors comprise the most common neoplasms in female dogs with more than half with malignat characteristics. Such tumors are usually treated using surgical mastecty, but results are frequently not satisfying. Since new therapeutical approaches are needed in canine mammary tumors, especially regarding adjuvant therapy and targeted therapy, an understanding regarding possible cellular components related to drug resistance and that work as possible targets for therapy is straightforward to achieve. Accordingly, the aim of the research described in this thesis was to study the possible role of epidermal growth factor receptor family (EGFR) and ATP-binding cassete (ABC) superfamily members in canine mammary tumors as cancer biomarkers and its relation with disease outcome in order to better characterize their pathobiology looking forward the future improve in canine mammary cancer treatment. In this study, tyrosine kinase receptors EGFR/HER1, HER2, HER3, and HER4, as well ABC transporters P-glycoprotein/MDR1, MRP1, and MRP2 were immunohistochemically evaluated and results were related with clinicopathologic characteristics and overall survival in 43 tumors. Expression of all family members and simultaneous expression of EGFR/HER1, HER2, and HER4 were related with a poor disease outcome. P-glycoprotein and MRP1 expression showed to be related with clinicopathologic features and MRP1 was characterized as a independent prognostic indicator in such tumors. In summary, this thesis provides new information about EGFR family expression in canine mammary tumors and associates ABC transporters with a poor disease outcome, consequently suggesting that they may also be related to prognosis in patients with mammary cancer

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:17Z : No. of bitstreams: 1 000845406.pdf: 1146282 bytes, checksum: 60f04846ef59edc815960a1c18e29bf7 (MD5) A inflamação é um componente crítico para a progressão de tumores e sua malignidade está correlacionada com a resposta inflamatória induzida por citocinas e leucócitos infiltrados no sítio tumoral. O presente estudo teve por objetivo caracterizar, por imuno-histoquímica, o infiltrado inflamatório e citocinas pró e anti-inflamatórias nos carcinomas mamários caninos e determinar a identidade molecular dos tumores em luminal A ou B, C-erbb-2 ou basal. Para isso fez-se a imunodetecção de macrófagos, linfócitos (CD4, CD8, Treg), citocinas (MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β e IFN-ɣ), além de C-erbb-2, receptor de estrógeno e receptor de progesterona e avaliou-se as médias das imunomarcações por meio do Teste T e análise de variância nos tecidos mamários com ou sem carcinomas. Houve diferença estatística (p

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:22Z : No. of bitstreams: 1 000856441.pdf: 618033 bytes, checksum: 7a27adb2d522a5bde6dd4aaa8ff06bed (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A doxorrubicina (DOX), quimioterápico da família das antraciclinas, é utilizada no tratamento de diversos tumores sólidos em animais e seres humanos, e é fármaco de segunda escolha para o tratamento, em cães, do tumor venéreo transmissível (TVT) resistente a outros quimioterápicos. Seu uso terapêutico é limitado em decorrência da cardiotoxicidade e mielossupressão, efeitos dose-dependentes. A cardiotoxicidade da DOX já foi constatada em cães hígidos, porém, o perfil farmacocinético e os efeitos tóxicos neste modelo animal submetido ao regime posológico para o tratamento do TVT ainda não foram investigados. Ainda, têm sido propostas novas formulações contendo o quimioterápico com o intuito de melhorar sua eficácia e diminuir a toxicidade. Este trabalho teve como objetivo investigar o perfil farmacocinético da DOX administrada na forma de cloridrato na dose de 30 mg/m2 a cada 21 dias, em quatro ciclos, por infusão contínua por 30 minutos, em cães com TVT (n=10) assim como avaliar efeitos tóxicos através de parâmetros bioquímicos, hematológicos e de urinálise de amostras colhidas antes e após a exposição ao quimioterápico. Ainda, neste trabalho, propôs-se avaliar o perfil farmacocinético e toxicidade sistêmica da DOX veiculada em sistema microemulsionado em cães com TVT tratados sob o mesmo regime posológico da DOX cloridrato. Para a investigação do perfil farmacocinético, em ambos os grupos, um método bioanalítico por cromatografia líquida de ultra eficiência (CLUE) para a determinação de DOX foi desenvolvido e validado. O método bioanalítico apresentou limites de confiança adequados para sua aplicação na investigação do perfil farmacocinético, com limite de quantificação (LIQ) de 19 ng/ml e limite de detecção (LD) de 9 ng/ml. Os parâmetros farmacocinéticos da DOX calculados a partir da administração da formulação... Doxorubicin (DOX), the anthracycline family of chemotherapy is used in the treatment of various solid tumors in animals and humans, and is a second-line drug for the treatment of dogs, transmissible venereal tumor (TVT) resistant to other chemotherapeutic agents. Its therapeutic use is limited due to cardiotoxicity and myelosuppression, dose-dependent effects. The cardiotoxicity of DOX has been observed in healthy dogs, however, the pharmacokinetics and toxicity in this animal model subjected to the dosing regimen for the treatment of TVT have not been investigated. Also, there have been proposed new formulations containing the drug with the aim to improve efficacy and decrease toxicity. This study aimed to investigate the pharmacokinetic profile of DOX administered as hydrochloride at a dose of 30 mg / m2 every 21 days, in four cycles, by continuous infusion for 30 minutes in dogs with TVT (n = 10) as well as assess toxic effects through biochemical, hematological and urinalysis samples taken before and after exposure to chemotherapy.Still, this work proposed to evaluate the pharmacokinetic profile and systemic toxicity of DOX conveyed in microemulsion system in dogs with TVT treated under the same dose of DOX hydrochloride regime. For the investigation of the pharmacokinetic profile in both groups, a bioanalytical method performance liquid chromatography ultra efficiency (CLUE) for determining DOX was developed and validated. The bioanalytical method was appropriate confidence limits for application in the investigation of the pharmacokinetic profile, with limit of quantitation (LLQ) of 19 ng / mL and detection limit (LLD) of 9 ng / ml. Pharmacokinetic parameters of DOX calculated from the administration of the hydrochloride formulation, the first and fourth treatment cycle were: elimination half-life 30.7 and 19.16 hours; volume of distribution 652.18 and 397.45 L/kg and ...

Orientador : Prof. Dr. Ricardo Guilherme D'Otaviano de Castro Vilani Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 29/07/2015 Inclui referências : f. 34-39;-57-60;80-82 Área de concentração : Ciências Veterinárias Resumo: Pacientes com neoplasias mamárias sofrem de dor tanto pela própria neoplasia quanto pelo seu tratamento cirúrgico, a mastectomia. A mastectomia é um procedimento cirúrgico bastante agressivo que frequentemente causa sensibilização central devido a estímulos repetidos aos nociceptores periféricos, levando, consequentemente, à dor neuropática. Tendo em vista maior conforto e qualidade na cirurgia e na recuperação destes pacientes, faz-se necessário o uso de um protocolo analgésico adequado ao nível de dor ao qual o paciente é submetido, considerando tanto a doença quanto o procedimento. Os opioides apresentam-se como uma boa alternativa, uma vez que apresentam potente atividade analgésica e estabilidade hemodinâmica durante a manutenção da anestesia, além de diminuírem a dose necessária de propofol para a manutenção. São escassos os estudos que envolvem a utilização de anestesia intravenosa total com propofol associada à infusão contínua de opioides bem como outras técnicas analgésicas para mastectomia em cães. Por isso, são necessários estudos que avaliem a eficácia analgésica destes opioides tanto no transoperatório como no pós-operatório e a sua influência no requerimento de propofol para a manutenção do plano anestésico, proporcionando alívio da dor aos animais e redução do volume de anestésico utilizado durante a cirurgia. Os opioides apresentam-se como uma boa alternativa, uma vez que apresentam potente atividade analgésica e estabilidade hemodinâmica durante a manutenção da anestesia, além de diminuírem a dose necessária de propofol para a manutenção. A pesquisa foi dividida em 2 etapas. A primeira avaliou e comparou a associação de fentanil, alfentanil, sufentanil e remifentanil com propofol em mastectomia unilateral em cães. A segunda avaliou e comparou a associação de fentanil, cetamina e lidocaína ou a peridural alta com ropivacaína e morfina com propofol em mastectomia unilateral em cães. Quando comparado com a infusão de fentanil, as infusões de sufentanil e alfentanil reduziram o requerimento de propofol. Sufentanil, alfentanil e remifentanil permitiram reduzir o requerimento de propofol precocemente, indicando a possibilidade da não realização de um bolus inicial. O remifentanil esteve associado a menores escores de dor durante as primeiras 24 horas após a cirurgia quando comparado ao fentanil e ao alfentanil. Palavras-chave: TIVA, dor, mastectomia, cão, analgesia. Abstract: Patients with breast cancer suffer from pain originated from neoplasia and for their surgical treatment, mastectomy. Mastectomy is a very aggressive surgical procedure that often causes central sensitization due to repeated stimuli to the peripheral nociceptors, leading consequently to neuropathic pain. Looking for comfort and quality during surgery and recovery of these patients, it is necessary to use an appropriate analgesic protocol considering the level of the pain which the patient is subjected, considering both disease and the procedure. Opioids are presented as a good alternative, since they have potent analgesic activity and hemodynamic stability during maintenance of anesthesia as well as they decrease the required dose of propofol for maintenance. There are few studies involving the use of total intravenous anesthesia with propofol associated with continuous infusion of opioid analgesics, as well as other analgesic techniques for mastectomy in dogs. Therefore, studies are needed to evaluate the analgesic effectiveness of opioids both during surgery and in the postoperative period and its influence on propofol requirement for the maintenance of anesthesia, providing pain relief and reducing the volume of anesthetic used during surgery. Opioids are presented as a good alternative, since they have potent analgesic activity and hemodynamic stability during maintenance of anesthesia as well as they decrease the required dose of propofol for maintenance. The research was divided into two stages. The first evaluated and compared the association of fentanyl, alfentanil, sufentanil and remifentanil with propofol for unilateral mastectomy in dogs. The second evaluated and compared the association of fentanyl, ketamine and lidocaine or high ropivacaine and morphine epidural with propofol for unilateral mastectomy in dogs. When compared with fentanyl infusion, the infusion of sufentanil and alfentanil reduced propofol application. Sufentanil, alfentanil and remifentanil have reduced the propofol requirement earlier, indicating the possibility of avoiding a loading dose. The remifentanil was associated with lower pain scores during the first 24 hours after surgery when compared to fentanyl and alfentanil. No difference was observed in the propofol requirement using cranial morphine ropivacaine epidural analgesia or continuous intravenous infusion of remifentanil, ketamine and lidocaine in dogs underwent mastectomy. However, the anesthetic recovery was faster and the application of analgesic rescues was lower when used intravenous technique. Keywords: TIVA, pain, mastectomy, dog, analgesy