Search

Ekilibrasyon, spermanın sıcaklığının düşürüldüğü ve faz değişimlerinin meydana geldiği aşama olarak, sperma dondurulmasında en önemli basamaklardan biridir. Ekilibrasyonun gerçekleştirildiği ortam çoğu zaman göz ardı edilmekte, ekilibrasyon koşullarının başarısı ampirik tecrübelere dayanmaktadır. Bu çalışmanın amacı farklı ekilibrasyon ortamlarının toplam motilite (TMOT), progresif motilite (PMOT), spermatozoa hareket parametleri (VCL, VSL, VAP, LIN, STR, WOB, ALH, BCF), plazma membran ve akrozom bütünlüğü (PMAI) ve DNA fragmentasyon indeksi (DFI) üzerine etkisinin araştırılmasıdır. Çalışmada 4 baş boğadan iki kez sperma alınarak üç eşit hacme bölündü. Andromed® ile sulandırılan spermalar 24 saat 4°C’de payet içinde (Deneme 1), kapta (Deneme 2) ve çalkalayıcıda (Deneme 3) ekilibrasyona bırakıldı. Çözüm sonu sperma kalitesi TMOT, PMOT, VCL, VSL, VAP, LIN, STR, WOB, ALH, BCF, PMAI ve DFI parametreleri değerlendirilerek belirlendi. Farklı ekilibrasyon koşulları arasında, hareket özellikleri olan TMOT, PMOT, VSL, VAP, BCF ve morfolojik özellikler olan PMAI ve DFI açısından istatistiki bir farklılık bulunamadı (p>0,05). En yüksek VCL değeri Deneme 3’te, en yüksek LIN, STR, WOB ve ALH değerleri Deneme 2’de gözlendi (p, Equilibration is the one of the important steps of semen cryopreservation and it is the stage in which semen is cooled and phase changes occur. The condition of equilibration is mostly regarded; and success of the equilibration conditions depend on empirical experiences. The aim of this study was to investigate the effects of three different equilibration methods on post-thaw total motility (TMOT), progressive motility (PMOT), kinetic parameters of spermatozoa (VCL, VSL, VAP, LIN, STR, WOB, ALH, BCF), plasma membrane and acrosome integrity (PMAI) and DNA fragmentation index (DFI). In each of 4 bulls; two ejaculates were split into three aliquots, diluted by Andromed® and equilibrated for 24h at 4°C in Drawed Straw (Experiment 1), Cups (Experiment 2) and Shaker (Experiment 3). After thawing, sperm quality was determined by examination of TMOT, PMOT, VCL, VSL, VAP, LIN, STR, WOB, ALH, BCF, PMAI and DFI. There were no differences (p>0.05) depending on equilibration conditions for TMOT, PMOT, VSL, VAP, BCF as kinetic parameters and for PMAI and DFI as morphological parameters. The highest VCL value was observed in experiment 3, when the highest LIN, STR, WOB and ALH values were observed in experiment 2 (p

Bu çalışmanın amacı, dondurulmuş spermanın -152 ° C derin dondurucuda sıvı azot içinde depolanmasının geleneksel yöntemlerde kullanılan depolama yöntemine alternatif bir çözüm olup olmayacağının araştırılmasıdır. Farklı günlerde iki boğadan toplam 80 payet toplandı. Aynı günde toplanan spermalar iki farklı gruba ayrıldı. Çalışmanın deney grubu bir hafta boyunca -152 ° C'de saklanan spermadan ve kontrol grubu da geleneksel şekilde -196 ° C'de saklanmış spermalardan oluşturuldu. Deney süresinin sonunda donmuş sperma, 30 saniye boyunca 37 ° C buhar banyosunda -196 ° C ve -152 ° C sıcaklık derecelerinde çözdürüldü. Sonra CASA sistemi kullanılarak spermanın hareketsel parametreleri ve morfolojik özelikleri incelendi.CASA sistemi kullanılarak yapılan değerlendirmenin sonucunda, -196 ° C'de dondurulmuş ve saklanmış spermanın hareketi ve ilerleme hareketi (%69.66, %37.61) -152 ° C'de (% 54.54,% 28.72) depolanan değerlerden daha yüksek bulundu (p 0.05). Anormal sperma oranı göz önüne alındığında, sıvı nitrojende depolanan sperm için % 32 ve -152°C'de buzdolabında saklanan spermanın %45 olduğu saptandı. Sperma değerlendirilmesinden sonra alınan verilerin istatistiksel analizi sonucunda, -152°C derin dondurucuda depolanan spermaların çözüm sonu spermatolojik parametrelerinin kabul edilebilir aralıklarda olduğu saptandı. The purpose of this study is to control if storing frozen semen in liquid nitrogen in a frozen freezer in -152 °C is an alternative solution to storing with conventional methods. 80 samples were collected from two bulls in different dates. Semen collected in the same day were separated into two different groups. Experimental group of the study was composed of semen kept in -152 °C for one week and the control group was composed of semen preserved in -196 °C in conventional methods. At the end of the experiment period, the frozen semen were thawed in 37 °C steam bath from -152 °C and -196 °C. Afterwards CASA system was used to examine sperm parameters. (Motility parameters, Morphology parameters). In the end of the evaluation made by CASA, the values of movement and advancement movement of sperm frozen and kept in -196 °C were (%69.66, %37.61) and higher than the values of samples stored in -152 °C (% 54.54,% 28.72), (P 0.05). When the abnormal sperm ratio is taken into consideration, for the sperm kept in liquid nitrogen it was 32% and for the sperm kept in -152 °C in freezer was 45% of the sperm liquid. As a result of the statistical analysis of the data obtained after the sperm evaluation, it is observed that after the melting of the ice, the sperm kept in -152 centigrade degrees had lower kinetic (movement) values than the sperm kept in -196 centigrade degrees. Besides, the data obtained from this research revealed that the sperm kept in -152 °C is above international normospermic levels. 48

Tez çalışmasının amacı, güncel bir yöntem olan nanopartiküller ile sperm seleksiyonunun Ankara tekesi spermasında uygulanabilirliğinin araştırılmasıdır. Nanopartiküller ile sperm seleksiyonu, ya da diğer adıyla nanopürifikasyon işlemi, günümüze kadar 37ºC sıcaklıkta; insan, boğa ve domuz sperması üzerinde denenmiş bir yöntemdir. Tez çalışması kapsamında, nanopürifikasyon yönteminin saha koşullarına adapte edilebilmesi açısından farklı sıcaklıklarda (37ºC, 21ºC ve 4ºC) uygulanmasının sperma kalitesi üzerindeki etkilerinin belirlenmesi hedeflenmiştir. Ön çalışma olarak doz optimizasyonu (1µg/ml, 5µg/ml, 10µg/ml ve 20µg/ml) yapılmıştır. Doz optimizasyon çalışmasının sonucunda, bilgisayar-destekli sperm analiz (CASA) ekipmanı parametreleri (total motilite-TM, progresif motilite-PM, eğrisel hız-VCL, doğrusal hız-VSL, eğrisel yol doğrusallığı-LIN, ortalama yol doğrusallığı-STR, kararsızlık-WOB, sperm başının sapma mesafesi-ALH, çapraz geçiş frekans ritmi-BCF ve hiperaktivite) açısından herhangi bir farklılık belirlenmemiştir (p>0,05). Bu nedenle, farklı sıcaklıklarda nanopürifikasyon çalışması aşamasında, daha önce nanopürifikasyon hakkında çalışma yapmış olan araştırıcılardan elde edilen bilgiler doğrultusunda 10µg/ml dozunda nanopartikül kullanılmıştır. Tez çalışması kapsamında kullanılan 3 Ankara tekesinden elektro ejakülatör yardımı ile 7'şer tekrar oluşturulacak şekilde sperma örnekleri toplanmış; bu örneklerin her biri taze sperma muayeneleri gerçekleştirildikten ve sulandırıldıktan sonra 4 gruba bölünmüştür. İlk grup kontrol grubu olarak belirlenmiş ve rutin prosedürler ile ekilibrasyon sonrası sıvı azot buharında dondurularak sıvı azot içerisinde saklanmıştır. İkinci gruba 37ºC'de, 3. gruba 21ºC'de ve 4. gruba 4ºC'de nanopürifikasyon işlemi uygulanmış; sonrasında bu gruplar da rutin prosedür doğrultusunda ekilibrasyonu takiben sıvı azot buharında dondurularak sıvı azot içerisinde saklanmıştır. Sperma örneklerinin çözüm-sonu motilite ve morfolojik parametreleri analiz edilmiştir. Elde edilen bulgulara göre; 37ºC'de nanopürifikasyon işlemi sonrası kontrol grubuna göre TM (37ºC, %72,75; Kontrol, %60,48), PM (37ºC, %9,76; Kontrol, %5,15), VCL (37ºC, 58,31 µm/s; Kontrol, 39,80 µm/s), VSL (37ºC, 26,90 µm/s; Kontrol, 15,84 µm/s), LIN (37ºC, %45,42; Kontrol, %38,08) ve akrozom bütünlüğü (37ºC, %65,29; Kontrol, %32,02) parametreleri yüksek bulunurken (p0,05). Bu bulgulara göre, teke spermasında nanopürifikasyon işleminin fertiliteyi etkileyen parametreler açısından faydalı olduğu ve nanopürifikasyon işleminin saha koşullarına adapte edilmesi açısından 37ºC'nin yanı sıra 21ºC sıcaklıkta da uygulanabileceği sonucuna ulaşılmıştır. The aim of the thesis study was to investigate the applicability of an up-to-date method, sperm selection with nanoparticles, on Angora buck semen. Sperm selection with nanoparticles, alias nanopurification, has been tried on human, bull and boar semen at 37ºC until today. Within the scope of the thesis study, determining the effects of application of the nanopurification method on the semen quality at different temperatures (37ºC, 21ºC and 4ºC) was targeted, in order to adapt the method to field conditions. Dose optimization (1µg/ml, 5µg/ml, 10µg/ml and 20µg/ml) was performed as a preliminary study. As a result of the döşe optimization study; no difference was observed in terms of computer-aided sperm analysis (CASA) equipment parameters (total motility-TM, progressive motility-PM, curvilinear velocity-VCL, straight line velocity-VSL, linearity-LIN, straightness-STR, wobble-WOB, amplitude of lateral head displacement-ALH, beat cross frequency-BCF and hyperactivity). Therefore, in the nanopurification in different temperatures stage of the study; in accordance with the information obtained from researchers who had previously studied nanopurification a nanoparticle dose of 10µg/ml was used. Semen samples were collected from 3 Angora bucks used in the thesis study to form 7 repetitions; each of these samples were divided into 4 groups after fresh semen analyses and dilution were completed. The first group was determined as control group and was preserved in liquid nitrogen after routine procedures of equilibration and freezing in liquid nitrogen vapour. Nanopurification procedure was applied to 2nd group at 37ºC, 3rd group at 21ºC and 4th group at 4ºC; and then these groups were preserved in liquid nitrogen after routine procedures of equilibration and freezing in liquid nitrogen vapour. Post-thaw motility and morphology parameters of the sperm samples were analysed. According to the findings; after nanopurification at 37ºC TM (37ºC, %72,75; Control, %60,48), PM (37ºC, %9,76; Control, %5,15), VCL (37ºC, 58,31 µm/s; Control, 39,80 µm/s), VSL (37ºC, 26,90 µm/s; Control, 15,84 µm/s), LIN (37ºC, %45,42; Control, %38,08) and acrosome integrity (37ºC, %65,29; Control, %32,02) parameters were higher than the control group (p0.05). According to the findings it was concluded that, nanopurification procedure on buck semen was useful in terms of parameters that affect fertility and that nanopurification can be performed at 21ºC, as well as 37ºC, in order to adapt the procedure to field conditions. 103