Search

Einleitung: Bei den sogenannten vaskulären Anomalien (VAs) des Kopf- und Halsbereiches handelt es sich um eine heterogene Gruppe von Gefäßfehlbildungen. Das Ausmaß der Vaskularisierung von VAs kann in höchstem Maße variieren. Ein Vergleich der Expression möglicher Kandidatenproteine zwischen verschiedenen VA-Geweben kann hierdurch verzerrt werden und falsch-positive bzw. falsch-negative Resultate liefern. Eine Möglichkeit dieses Problem zu umgehen, ist es VA-Endothelzellen (ECs), welche das zentrale pathomorphologische Korrelat der Gefäßfehlbildungen darstellen, aus diesen zu isolieren und weiterführenden Untersuchungen zugänglich zu machen. Unterschiede in der Vaskularisierung verschiedener VAs sollten hierbei weniger ins Gewicht fallen, da unabhängig von der untersuchten VA gleiche Mengen an ECs miteinander verglichen werden. Methoden: Die Isolierung von ECs aus VAs wurde entsprechend eines modifizierten Protokolls von van Bejnum et al. (Nat Protocols, 2008) durchgeführt. Hierbei erfolgte eine positive Selektion von CD31+ Zellen aus der Zellsuspension nach Inkubation mit paramagnetischen anti-CD31 beads und nachfolgender MACS (Magnetic Cell Separation). Zur Expansion des Zellpools erfolgte eine Kultivierung von CD31+ und CD31- (Kontrolle) Zellen und anschließender Einsatz in nachfolgenden Untersuchungen. Ergebnis und Schlussfolgerung: Auch aus kleinen VA-Gewebeproben konnten nach Expansion in der Zellkultur ausreichende Mengen an CD31+ ECs generiert werden, welche den Einsatz in nachfolgenden Untersuchungen wie z.B. Western Blot, PCR, FACS Analyse, Immunzytochemie und Angiogenese Assays erlauben. Ein Vergleich isolierter ECs aus verschiedenen VAs könnte daher zukünftig zu einer präziseren Klassifikation dieser Gefäßfehlbildungen beitragen.Der Erstautor gibt keinen Interessenkonflikt an.

Einleitung: Vaskuläre Anomalien (VAs) gehören zu den häufigsten angeborenen und frühkindlichen Weichgebewebsfehlbildungen im Kopf-Hals-Bereich (Mulliken and Glowacki, Plast Reconstr Surg, 1982). Unterschieden werden hierbei vaskuläre Malformationen (VMs), wie beispielsweise arteriovenöse oder lymphatische Malformationen (AVMs und LMs), und Hämangiome. Die (immun)histologische Abgrenzung der verschiedenen VA-Typen innerhalb der genannten Gruppen gestaltet sich aufgrund der ausgeprägten Heterogenität der Fehlbildungen als äußerst schwierig. Das Ziel des vorliegenden Projektes war es zu beurteilen, inwiefern eine Quantifizierung immunhistologischer VA-Präparate mittels digitaler Bildanalyse eine genauere Einteilung verschiedener VA Subtypen ermöglichen kann. Methoden: 22 VA-Gewebe wurden immunhistologisch unter Einsatz von Antikörpern gegen CD31, CD34, D2-40, CK1, CK19, Vimentin, Claudin-5 und beta-Actin untersucht. Das Expressionsmuster der Kandidatenproteine innerhalb der untersuchten Gewebe wurde digital mit Hilfe des Programms ImageJ (National Institutes of Health, USA) analysiert. Ergebnis und Schlussfolgerung: Es zeigten sich deutliche Unterschiede in den Expressionsmustern der untersuchten Biomarker sowie ihrem Expressionsgrad nach digitaler Quantifizierung zwischen den verschiedenen VAs. Die (immun)histologische Beurteilung und Quantifizierung VA-assoziierter Kandidatengene mittels digitaler Bildanalyse könnte daher dazu beitragen die sehr heterogene Gruppe dieser Gefäßfehlbildungen genauer zu klassifizieren.Der Erstautor gibt keinen Interessenkonflikt an.

Einleitung: Eine wesentliche Schwierigkeit bei der Untersuchung vaskulärer Malformationen (VMs) ist das Fehlen experimenteller Modellsysteme. Unsere Arbeitsgruppe konnte das CAM (chorioallantoic membrane) Hühnerei Modellsystem, welches seit Jahren bei Untersuchungen insbesondere zur Tumor-assoziierten Angiogenese eingesetzt wird erfolgreich für Untersuchungen von VMs adaptieren . Das Ziel der hier dargelegten Untersuchungen war es proangiogene Faktoren bei lymphatischen Malformationen (LMs) zu identifizieren sowie das LM-Wachstumsverhalten im CAM Assay zu dokumentieren. Methoden und Ergebnisse: LM-Gewebe als auch aus lymphatischen Malformationen gewonnene Lymphflüssigkeit (LF) wurden mittels des Proteome Profiler(TM) - Human Angiogenesis Array untersucht, um potentielle Kandidatenproteine, welche bei der LM-Pathogenese eine Rolle spielen zu identifizieren. Sowohl im LM Gewebe als auch in der aus LM gewonnenen LF, zeigte sich eine starke Expression von Angiogenin, TIMP-1 (tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1) sowie MMP-9 (matrix metalloproteinase-9). Im CAM Hühnereimodell konnte ein deutliches proliferatives Potential der LF nachgewiesen werden, wobei die Charakterisierung der aus der CAM eingewanderten Zellen noch aussteht. Schlussfolgerungen: Die aus LMs gewonnene LF zeigt ein deutliches proliferatives Potential im CAM Assay. Die in der LM und LF identifizierten Kandidatenproteine Angiogenin, TIMP-1 und MMP-9 könnten bei der Pathogenese von LMs eine Rolle spielen. Neben seiner Funktion als MMP Inhibitor, hat TIMP-1 auch proliferationsfördernde und anti-apoptotische Eigenschaften, welche z.B. für die Aufrechterhaltung bzw. Größenprogredienz von LMs mitverantwortlich sein könnten.Der Erstautor gibt keinen Interessenkonflikt an.

Einleitung: Vaskuläre Anomalien (VAs) des Kopf-Halsbereiches sind eine heterogene Gruppe von Gefäßfehlbildungen. Hierbei werden Hämangiome von vaskulären Malformationen (VMs) insbesondere den lymphatischen und arteriovenösen Malformationen (LMs und AVMs) unterschieden. Die diesen Erkrankungen zugrunde liegende Pathogenese ist weitgehend ungeklärt. Methoden und Ergebnisse: Bei immunhistochemischen Untersuchungen an VA-Geweben konnte gehäuft eine Expression des HPV E6 Onkoproteins in Endothelzellen sowie den die Gefäßfehlbildung durchziehenden Nerven beobachtet werden. Das virale E6 Onkoprotein konnte hierbei sowohl in AVMs, LMs als auch Hämangiomen nachgewiesen werden. E6 konnte jedoch auch in Kontrollgeweben (Rachenschleimhaut) von Nicht-VA-Patienten detektiert werden, was auf eine hohe Durchseuchung hinweist. Schlussfolgerungen: Die hier gemachten Beobachtungen an Gefäßfehlbildungen sind in Übereinstimmung mit dem Bericht einer anderen Gruppe, welche im Bereich HPV-positiver Kopf-, Hals- und Zervixkarzinome ebenfalls E6-positive Endothelzellen und nervale Strukturen nachweisen konnte . Ebenfalls wurde berichtet, dass E6 über eine Hochregulation von VEGF121 eine pro-angiogene Wirkung ausüben kann . Darüber hinaus berichtete unsere Gruppe, dass VEGF121 in VMs signifikant hochreguliert ist . Der Nachweis des viralen Onkoproteins in VAs des Kopf-Halsbereiches zeigt die mögliche Assoziation einer HPV Infektion mit der Entstehung dieser Gefäßanomalien. Die Expression des E6 Onkoproteins in Endothelzellen bzw. deren Vorläuferzellen, könnte so zu einer Störung der normalen Angiogenese mit der Entwicklung des klinischen Bildes einer Gefäßanomalie führen.Der Erstautor gibt keinen Interessenkonflikt an.

Background. With a frequency of about 90%, head and neck squamous cell carcinomas (HNSCCs) are the most common malignancies of the upper aerodigestive tract. The cancer stem cell (CSC) hypothesis postulates that CSCs are the dangerous part of the tumor and are relevant to metastasis, invasiveness and resistance to chemotherapy. Methods. Tissue samples taken from HNSCCs and normal mucosa were tested for the expression of several established CSC markers. The expression and activity of the matrix metalloproteinase MMP-9 was also investigated. Results. Cells of the invasive tumor front expressed the basal stem cell markers CD44, ALDH1 and CK14. However, in contrast to the noninvasive basal cell layer of normal mucosa, HNSCC samples were also positive for active MMP-9, which lends the tumor its gelatinolytic activity. Conclusion. These observations suggest a model in which cells of the invasive front are derived from the basal cell layer of normal mucosa and harbour the CSCs. Future studies should thus focus on the cells of the invasive front in particular, since the activity of these cells may form the basis for tumor recurrence and therapy resistance.

Background. With a frequency of about 90%, head and neck squamous cell carcinomas (HNSCCs) are the most common malignancies of the upper aerodigestive tract. The cancer stem cell (CSC) hypothesis postulates that CSCs are the dangerous part of the tumor and are relevant to metastasis, invasiveness and resistance to chemotherapy. Methods. Tissue samples taken from HNSCCs and normal mucosa were tested for the expression of several established CSC markers. The expression and activity of the matrix metalloproteinase MMP-9 was also investigated. Results. Cells of the invasive tumor front expressed the basal stem cell markers CD44, ALDH1 and CK14. However, in contrast to the noninvasive basal cell layer of normal mucosa, HNSCC samples were also positive for active MMP-9, which lends the tumor its gelatinolytic activity. Conclusion. These observations suggest a model in which cells of the invasive front are derived from the basal cell layer of normal mucosa and harbour the CSCs. Future studies should thus focus on the cells of the invasive front in particular, since the activity of these cells may form the basis for tumor recurrence and therapy resistance.

Einleitung: Beim Prozess der Metastasierung kommt es zu morphologischen Veränderungen der Tumorzellen, welche auf post-translationalen Modifikationen zytoskelettaler Proteine beruhen. Plattenepithelkarzinome des Kopf-Halsbereiches (HNSCCs) zeigen häufig morphologisch deutlich unterschiedliche Tumorzellphänotypen auch bei gleichem anatomischen Ursprungsort. HNSCC Tumoren überexprimieren in bis zu 100% den Rezeptor für den epidermalen Wachstumsfaktor (EGFR), was mit einer erhöhten Metastasierungstendenz und damit schlechteren Prognose einhergeht. Ziel der Untersuchung ist es, Änderungen in der Zytokeratinzusammensetzung mit dem Tumorzellphänotyp zu korrelieren. Methoden: Als Untersuchungsmaterial dienten etablierte HNSCC Zelllinien. Die SDS-PAGE, Western Blot Analyse sowie Immunzytochemie wurden unter Standardbedingungen durchgeführt. Für die 2-D Gel Elektrophorese erfolgte vor Durchführung von SDS-PAGE und Western Blot Analyse eine Auftrennung der Proteine anhand ihres isoelektrischen Punktes. Ergebnisse: In HNSCC Zelllinien zeigten sich nach Behandlung mit EGF Veränderungen im isoelektrischen Punkt der untersuchten Keratine. Behandlung der Zellen mit EGF zeigte eine Zunahme der Keratin 6 bzw. Reduktion der Keratin 14 Expression. Schlussfolgerungen: Die hier vorgestellte Untersuchung weist auf einen Zusammenhang des EGFR-Signaltransduktionsweges mit dem Grad der Expression bzw. posttranslationalen Modifikation von Zytokeratinen hin. Das Ziel weiterführender Untersuchungen ist es aufzuweisen, ob unterschiedliche Tumorzell-Phänotypen (Keratinexpressionsmuster) mit dem Grad der Tumorzellinvasivität und damit der Prognose des Patienten korrelieren. Dies könnte für die histopathologische Beurteilung der Tumorprognose von diagnostischem Nutzen sein. Unterstützt durch: Alfred und Ursula Kulemann Stiftung, Marburg

Einleitung: Sialadenose ist eine Erkrankung unbekannter Ätiologie und befällt vorwiegend die großen Kopfspeicheldrüsen. In einem Case Report berichtete unsere Gruppe kürzlich über eine mögliche Assoziation von Sialadenose mit ADH-behandeltem Diabetes insipidus. ADH stimuliert Aquaporin (AQP)-Wasserkanäle in der Niere. Es war daher von Interesse zu untersuchen, ob es Hinweise gibt auf eine Assoziation von Sialadenose mit AQP. Material: Für die Untersuchungen wurde in Paraffin eingebettetes Glandula Parotis-Gewebe von 8 Patienten sowie 5 Kontrollpersonen herangezogen. Bei einer Hälfte der Patienten zeigte sich klinisch eine asymptomatische unilaterale Raumforderung im Bereich der Ohrspeicheldrüse. Bei der anderen Hälfte der Patienten fand sich histopathologisch zwar ebenfalls eine Sialadenose, diese jedoch als Nebenbefund anderer Grunderkrankungen. Methoden: Gewebeschnitte wurden entparaffiniert und mittels der ABC Methode unter Standardbedingungen gefärbt. Polyklonale AQP5 Primärantikörper (1:20) waren von Santa Cruz Biotechnology. Resultate: Bei allen Patientenproben zeigte sich ein spezifisches, jedoch verschieden starkes, AQP5-Signal an der apikalen Membran der Azinuszellen. Das AQP5 Signal zeigte sich in der ersten Patientengruppe bei 2/4 Patienten deutlich positiv, bei den übrigen zwei eher mäßig oder nur in Teilabschnitten vorhanden. Innerhalb der zweiten Patientengruppe war das Signal bei 5/6 variabel bis schwach, bei 1/6 deutlich. Ein spezifisches AQP5-Signal war im Normalgewebe regelmäßig schwach darstellbar. Schlussfolgerung: Es finden sich Hinweise auf eine Assoziation von Störungen des Körperwasserhaushaltes, repräsentiert durch eine variable Expression der AQP-Wasserkanäle, mit der Entwicklung einer Sialadenose.

Einleitung: Charakteristisch für Plattenepithelkarzinome des Kopf- und Halsbereiches (HNSCC) ist ihre frühe vorwiegend lymphogene Metastasierung sowie stark reduzierte Prognose bei Vorliegen von Lymphknotenmetastasen. Nach operativer Versorgung des Tumors schließt sich regelmäßig eine Radio(chemo)therapie an mit dem Ziel, verbliebene Tumorzellen durch Einleitung von Apoptose zu zerstören. Nicht selten zeigt sich hierbei jedoch eine Apoptose-Resistenz. Es wurde gezeigt, dass EGFR-überexprimierende Tumoren eine deutlich schlechtere Prognose aufweisen. Es ist daher von Interesse zu untersuchen, ob es hier zu einer EGFR-abhängigen Beeinflussung anti-apoptotischer Proteine kommt. Material und Methoden: 10 zuvor etablierte HNSCC Zelllinien wurden für die Untersuchungen herangezogen. Es erfolgte eine Stimulation mit steigenden EGF Konzentrationen (0; 0,1; 1; 10; 100; 1000 ng/ml) für jeweils 12h. Western Blot Analysen der Zelllysate (35 µg) wurden unter Standardbedingungen angefertigt. Aktin diente als Kontrolle. Resultate. Mit zunehmender EGFR-Stimulation zeigte sich eine Zunahme der Bcl-xL Expression. Dieser Effekt zeigte unterschiedliche Ausprägungen zwischen den untersuchten Zelllinien. Schlussfolgerung: Stimulation des EGFR führt zu einer, zwischen den untersuchten Zelltypen teilweise variablen, Hochregulation von Bcl-xL. Da verschiedene Zelllinien unterschiedlich auf EGF-Stimulation reagieren ist anzunehmen, dass es zwischen verschiedenen Tumoren in vivo ebenfalls deutliche Unterschiede im Grad der EGFR-abhängigen Bcl-xL Expression gibt. Dies kann zumindest teilweise die häufig beobachtete, bei verschiedenen Patienten oft unterschiedlich starke, Apoptose-Resistenz und damit reduzierte Prognose von EGFR-positiven HNSCC Tumoren erklären.