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Introduction: Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis (AAV) is a multisystemic disease. Despite the improvement in mortality rate since the introduction of immunosuppression, long-term prognosis is still uncertain not only because of the disease activity but also due to treatment associated adverse effects. The neutrophil-to-lymphocyte ratio (NLR) has been demonstrated as an inflammatory marker in multiple settings. In this study, we aimed to investigate the prognostic ability of the NLR in AAV patients. Methods: We conducted a retrospective analysis of the clinical records of all adult patients with AVV admitted to the Nephrology and Renal Transplantation Department of Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norte from January 2006 to December 2019. NLR was calculated at admission. The outcomes measured were severe infection at 3 months and one-year mortality. The prognostic ability of the NLR was determined using the receiver operating characteristic (ROC) curve. A cut-off value was defined as that with the highest validity. All variables underwent univariate analysis to determine statistically significant factors that may have outcomes. Only variables which significantly differed were used in the multivariate analysis using the logistic regression method. Results: We registered 45 cases of AVV. The mean age at diagnosis was 67.5 ± 12.1 years and 23 patients were male. The mean Birmingham Vasculitis Activity Score (BVAS) at presentation was 26.0 ± 10.4. Twenty-nine patients were ANCA-MPO positive, 7 ANCA-PR3 positive and 9 were considered negative ANCA vasculitis. At admission, mean serum creatinine (SCr) was 4.9 ± 2.5 mg/dL, erythrocyte sedimentation rate (ESR) was 76.9 ± 33.8 mm/h, hemoglobin was 9.5 ± 1.7 g/dL, C-reactive protein was 13.2 ± 5.8 mg/dL and NLR was 8.5 ± 6.8. Thirty-five patients were treated with cyclophosphamide, eight patients with rituximab for induction therapy. Twenty patients developed severe infection within the first three months after starting induction immunosuppression. In a multivariate analysis, older age (73.6 ± 10.5 vs. 62.6 ± 11.3, p = 0.002, adjusted OR 1.08 [95% CI 1.01–1.16], p = 0.035) and higher NLR (11.9 ± 7.4 vs. 5.9 ± 5.0, p = 0.002, adjusted OR 1.14 [95% CI 1.01–1.29], p = 0.035) were predictors of severe infection at 3 months. NLR ≥4.04 predicted severe infection at 3 months with a sensitivity of 95% and specificity of 52% and the AUROC curve was 0.0794 (95% CI 0.647–0.900). Nine patients died within the first year. Severe infection at 3 months was independently associated with mortality within the first year (OR 6.19 [95% CI 1.12–34.32], p = 0.037). Conclusions: NLR at diagnosis was an independent predictor of severe infection within the first 3 months after immunosuppression start, and severe infection within the first three months was consequently correlated with one-year mortality. NLR is an easily calculated and low-cost laboratory inflammation biomarker and can prove useful in identifying AAV patients at risk of infection and poorer prognosis. Resumen: Introducción: La vasculitis asociada a anticuerpos (VAA) contra citoplasma de neutrófilos es una enfermedad multisistémica. A pesar de la mejora de la tasa de mortalidad desde la introducción de la inmunosupresión, el pronóstico a largo plazo sigue siendo incierto no solo por la actividad de la enfermedad sino también por los efectos adversos asociados al tratamiento. Se ha demostrado que la proporción entre neutrófilos y linfocitos (PNL) es un marcador de inflamación en varios contextos. En este estudio se propuso investigar la capacidad de pronóstico de la PNL en pacientes con VAA. Métodos: Se realizó un análisis retrospectivo de las historias clínicas de todos los pacientes adultos con VAA ingresados en el Departamento de Nefrología y Trasplante Renal del Centro Hospitalario Universitario Lisboa Norte entre enero de 2006 y diciembre de 2019. La PNL se calculó en el momento del ingreso. Los resultados medidos fueron la infección grave a los 3 meses y la mortalidad al año. La capacidad de pronóstico de la PNL se determinó utilizando la curva de características operativas del receptor (COR). Se definió un valor de corte como el de mayor validez. Todas las variables se sometieron a un análisis univariado para determinar los factores estadísticamente significativos que pueden tener resultados. En el análisis multivariado se utilizaron solo las variables que diferían significativamente, empleando el método de regresión logística. Resultados: Se registraron 45 casos de VAA. La edad media en el momento del diagnóstico era de 67,5 ± 12,1 años y 23 pacientes eran hombres. La media de la puntuación de actividad de la vasculitis de Birmingham (BVAS) en el momento de la presentación era de 26,0 ± 10,4. Veintinueve pacientes dieron positivo en MPO-ANCA, 7 dieron positivo en PR3-ANCA y 9 dieron negativo en vasculitis asociada a ANCA. En el momento del ingreso, el nivel de creatinina sérica (SCr) media era de 4,9 ± 2,5 mg/dl, la velocidad de sedimentación globular (VSG) era de 76,9 ± 33,8 mm/h, el nivel de hemoglobina era de 9,5 ± 1,7 g/dl, el nivel de proteína C reactiva era de 13,2 ± 5,8 mg/dl y la PNL era de 8,5 ± 6,8. Treinta y cinco pacientes se trataron con ciclofosfamida y 8 con rituximab para un tratamiento de inducción. Veinte pacientes desarrollaron una infección grave en los primeros 3 meses después de iniciar la inmunosupresión por inducción. En un análisis multivariado, una edad superior (73,6 ± 10,5 frente a 62,6 ± 11,3, p = 0,002, OR ajustado 1,08 [IC del 95%: 1,01-1,16], p = 0,035) y una PNL superior (11,9 ± 7,4 frente a 5,9 ± 5,0, p = 0,002, OR ajustado 1,14 [IC del 95%: 1,01-1,29], p = 0,035) fueron indicadores de una infección grave a los 3 meses. Una PNL ≥ 4,04 predijo una infección grave a los 3 meses con una sensibilidad del 95% y una especificidad del 52% y la curva AUROC fue de 0,0794 (IC del 95%: 0,647-0,900). Nueve pacientes fallecieron en el primer año. La infección grave a los 3 meses estaba asociada de manera independiente a la mortalidad en el primer año (OR 6,19 [IC del 95%: 1,12-34,32], p = 0,037). Conclusiones: La PNL en el momento del diagnóstico fue un indicador independiente de la infección grave en los primeros 3 meses después del inicio de la inmunosupresión. La infección grave en los primeros 3 meses se correlacionó como consecuencia con la mortalidad al año. La PNL es un biomarcador de inflamación para pruebas analíticas fácil de calcular y de bajo coste, y puede resultar útil para identificar a los pacientes con VAA que corren riesgo de contraer una infección y tienen un pronóstico más desfavorable.

La inmunodeficiencia combinada grave es una enfermedad hereditaria ligada al cromosoma X en donde existen anomalías en las funciones de los linfocitos T, B y NK, el cual puede ser mixta y afectar dos o más de estas poblaciones celulares, aún no existe un registro amplio de esta enfermedad dado que es de muy baja incidencia, y a pesar de no tener cura, su pronóstico es relativamente favorable si es detectado a tiempo. Actualmente existen algunos tratamientos para mejorar la calidad de vida del paciente como el trasplante de medula ósea, o remplazo de inmunoglobulina intravenosa (IGIV), esta revisión pretende explicar los procesos involucrados en el desarrollo de esta enfermedad.

Orientador: Magnun Nueldo Nunes dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O novo coronavírus (SARS-CoV-2), responsável pela Síndrome Respiratória Aguda Grave, surgiu como uma ameaça às humanas desde dezembro de 2019 e a busca por uma melhor compreensão da fisiopatologia da doença pelo coronavírus 2019 (COVID-19) e seu tratamento definitivo ainda está em andamento. O objetivo deste estudo foi avaliar as citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias plasmáticas, hemogramas, razões derivadas do hemogramas (HDRs) [isto é, razão neutrófilo-linfócito (NLR), razão plaqueta-linfócito (PLR), razão monócito-linfócito (MLR), relação neutrófilos-plaquetas (NPR) e índice de imunoinflamação sistêmica (SII)], e suas associações com a gravidade e o desfecho da doença em pacientes com COVID-19. Pacientes não vacinados com diagnóstico molecular positivo para COVID-19, confirmado por Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), atendidos no Hospital de Clínicas (HC), UNICAMP, Campinas-SP foram incluídos no estudo. Os dados clínicos e laboratoriais foram extraídos dos prontuários e as concentrações plasmáticas de citocinas foram quantificadas por LUMINEX e ELISA. Dos 154 pacientes (99 sobreviventes e 55 não sobreviventes) com COVID-19 foi observada a proporção homem:mulher de 1,4:1 e a média de idade de 60 anos. Os não sobreviventes eram mais velhos que os sobreviventes (65 vs 55 anos, p

Orientadores: Gilberto D'Assunção Fernandes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Alguns trabalhos relataram a participação de estruturas límbicas na modulação da resposta imune. Com relação aos núcleos septais, a lesão ampla desta área alterou a resposta humoral de ratos imunizados com hemácias de carneiro, enquanto a lesão septal medial inibiu a resposta mitogênica in vitro de linfócitos T. Neste trabalho, investigou-se a influência da área septal do cérebro sobre as freqüências de linfócitos T CD4+ e T CD8+ no baço de ratos durante o desenvolvimento tumora!. Para isso, ratos com a área septal do cérebro lesada através de cirurgia estereotáxica (LW) e ratos controles (cirurgia simulada, SW) foram comparados após receberem uma inoculação subcutânea (sc) do tumor de Walker 256 Ar (variante celular com elevado índice de regressão, obtida a partir das células tumorais de Walker 256 A). A possibilidade da atividade adrenocortical mediar os efeitos septais foi verificada pela dosagem de corticosterona sérica. Também foi investigada a influência da lesão septal sobre os efeitos sistêmicos tais como, anorexia, ganho de peso corpóreo, retenção renal de sódio e água induzidos pelo tumor (modelo de inoculação multifocal com células tumorais de Walker 256 A ), visto a possibilidade de variações destes parâmetros fisiológicos servirem como uma indicação indireta da atividade imunológica. Com relação aos efeitos sistêmicos tumorais foi observado que a lesão septal causou uma redução temporária na retenção de sódio e água induzida pelo tumor, possivelmente como conseqüência da inibição da liberação do hormônio antidiurético. Duas semanas após a inoculação do tumor de Walker 256 Ar foram identificadas regressões tumorais em 46,2 % do grupo SW e 57,1 % do grupo LW. Tanto no grupo SW como no LWo percentual de linfócitos T CD4+ nos ratos cujos tumores não regrediram (SW = 19,5 ::t 1,4 %; L W = 23,8 ::t 1,6 %) foi significativamente menor que naqueles com regressão tumoral (SW = 29,3 ::t 2,4 %; LW = 31,4::t 1,6 %). Como conseqüência a relação CD4+/CDS+ também foi significativamente menor nos ratos cujos tumores não regrediram (SW = 0,91 ::t 0,07; LW = 1,20 ::t 0,07) que naqueles com regressão tumoral (SW = 1,45 ::t 0,1; L W = 1,59 ::t 0,1). Concluiu-se que as variações nas freqüências de linfócitos T, bem como na relação CD4+/CDS+ estiveram associadas ao desenvolvimento tumoral e não foram afetadas pela lesão ampla da área septal. Através de um experimento com ratos adrenalectomizados foi observado que o crescimento contínuo ou a regressão dos tumores, bem como a resposta imune celular associada a estes eventos, não foram influenciados pela atividade adrenocortical Abstract: Some studies have shown the influence of limbie-hypothalamie areas on the immune response modulation. Concerning the septal nueleus, the whole lesion of this limbie area impaired the humoral immune response of rats immunized with sheep red blood eells, while lesions of the medial septal nueleus produced a long lasting inhibition of T Iymphoeyt proliferation induced by mitogens. The proposal of the present study was to investigate the influenee of septal area lesion on frequeneies of splenie T CD4+ and T CDS+ Iymphoeytes, during tumor development. Therefor, septal-Iesioned rats (LW), obtained through stereotaxie surgery, were compared with sham-operated rats (SW), afier one subeutaneous (se) inoculation of Walker 256 Ar tumor cells (a cell variant obtained from Walker 256 A tumor, distinguished by presenting a high regression ineidence). The adrenocortical aetivity in the mediation of septal lesion effects was evaluated by assessing serum corticosterone. The influenee of septal lesion on systemie effeets induced by the tumor, like body weight gain and, sodium and water renal retention was also investigated (by using the multifocal se inoeulation model of Walker 256 A cells). It was suggested that ehanges in these parameters would help as an indireet indication of the immunological function alterations. Conceming the systemie effects, sodium and fluid retention induced by the Walker 256 A tumor was temporarily reduced in animais with septal area lesions. This effect was possibly a result of an inhibition of antidiuretie hormone release. By using the Walker 256 Ar tumor cells, it was observed tumor regressions in 46.2 % of the SW group and 57.1 % of the LW group two weeks afier se inoculation. In both groups SW and LW, the frequency of splenic T CD4+ Iymphocytes was significantly reduced in rats which tumors did not regress (SW = 19.5:t 1.4 %; LW = 23.8:t 1.6 %) compared with rats with tumor regression (SW = 29.3:t 2.4 %; LW = 31.4 :t 1.6 %). As a consequence, the CD4+/CD8+ ratio was also significantly reduced in rats without tumor regression (SW = 0.91 :I:: 0.07; LW = 1.20 :t 0.07) in relation to those with tumor regression (SW = 1.45 :I:: 0.1; LW = 1,59 :t 0.1 %). Therefore, septal area lesion did not affect the frequencies of T Iymphocytes. Nevertheless, the alterations observed in the frequencies of T Iymphocytes, as well as in CD4+/CD8+ ratio were associated with tumor development (continuous growth or regression). It was also observed that tumor continuous growth or tumor regression, as well as the immune response associated with these events were not affected by adrenocortical activity Doutorado Fisiologia Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores : Irene Lorand-Metze, Carmen Silvia Passos Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Síndromes mielodisplásicas (SMD) são um grupo heterogêneo de doenças clonais caracterizadas por citopenias periféricas persistentes de uma ou mais linhagens e com possibilidade para transformação leucêmica. Níveis aumentados de apoptose nas células precursoras hematopoéticas (células CD34l foram observados em pacientes com SMD de baixo risco (AR e ARSA), sugerindo esse mecanismo como o responsável pela hematopoes e ineficaz nessa doença. A Amifostina (AMF) é considerada um agente citoprotetor, com ação antioxidante, potente estimulador da hematopoese normal e supressor apoptótico nos precursores mielodisplásicos. Analisamos a expressão dos marcadores da apoptose, (Fas e FasL) nas células CD34+ em pacientes com SMD de baixo risco, submetidos ao tratamento com a AMF. Foram estudados 17 pacientes, sendo 11AR e 6 ARSA. A resposta terapêutica em relação ao nível da hemoglobina, ao número de neutrófilos e às plaquetas, aos critérios de inclusão e às respostas foi definida pelo protocolo de tratamento da AMF. Dos 17 pacientes tratados, 10 apresentaram critérios de resposta em pelo menos uma série do hemograma após 2 ciclos de AMF, os quais receberam mais 4 ciclos adicionais. Quatro pacientes (3 não respondedores e um respondedor) apresentaram evolução da SMD (aumento de blastos medulares) durante ou após o tratamento. As atipias celulares na medula óssea (MO) e o número de células CD34+ diminuíram nos pacientes respondedores após o ciclo 2. No grupo dos não respondedores não houve alterações significativas em nenhum desses parâmetros. Os pacientes que responderam à amifostina tinham, antes do tratamento, uma percentagem menor de expressão de Fas e FasL nas células CD34+ e de linfócitos na medula óssea em relação aos que não responderam. A percentagem de linfócitos aumentou ainda mais após o tratamento neste último grupo. Esse resultado sugere que, no grupo que não respondeu à amifostina o sistema imune pode estar impedindo a resposta ao tratamento. Esses resultados favorecem a hipótese de que a resposta à AMF é influenciada pela expressão dos marcadores apoptóticos e/ou pela percentagem de linfócitos na MO. A resposta à AMF não depende apenas da supressão apoptótica. Um seguimento maior de pacientes é necessário para observar a durabilidadede resposta Abstract: Not informed. Mestrado Ciências Básicas Mestre em Clínica Médica

Orientador: Leonilda Maria Barbosa dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado Imunologia Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Helena Stangler Kraemer Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Diversos estudos tem relatado a associação entre as especificidades HLA-DR, DQ e doenças. Entretanto poucos tem correlacionado as associações dos antígenos HLA de classe II com estudos em família. Relatamos juntamente com as tipagens HLA de classe II as reações em cultura mista de linfócitos (CML) em 60 pacientes portadores de leucemia linfóide aguda (LLA), leucemia mielóide aguda (LMA) e anemia aplástica (AA) incluindo 202 indivíduos das famílias. As tipagens HLA de classe II foram realizadas pelo método de microlinfocitotoxicidade (TERASAKI et alli 1964). Os anti-soros utilizados, DR1 a DR18 e DQ1 a DQ8 eram provenientes de Pel-Freez, C-Six, Université Catholique de Louvain - Bruxelles - Belgique. Os testes de cultura mista de linfócitos foram realizados pelo micrométodo descrito por HARTZMAN et alli. (1971). As células utilizadas, respondedoras e estimuladoras, eram provenientes dos pacientes, dos irmãos, do pai e da mãe. O teste t, a análise da variância, e o X2 para a comparação das freqüências, foram utilizados para análise estatística. Comparando as tipagens sorológicas com os valores em cultura mista de linfócitos na LLA e AA, os dois métodos estavam significativamente associados entre os pacientes e indivíduos das famílias incompatíveis e indefinidos, enquanto que, na LMA não ocorreu associação. Entre os pacientes e indivíduos das famílias incompatíveis, ocorreu associação entre a tipagem sorológica e a cultura mista de linfócitos na LLA e LMA, e na AA não ocorreu associação. Para a resposta relativa nas três doenças, entre os pacientes e indivíduos das famílias, indefinidos, não ocorreu associação entre a tipagem sorológica e CML. Estes resultados sugerem que a cultura mista de linfócitos é capaz de discriminar especificidades entre os indivíduos incompatíveis e indefinidos na LMA, LLA e AA e que na anemia aplástica a cultura mista é indispensável para a identificação das especificidades HLA em todos os grupos testados Mestrado Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Mary Anne Heidi Dolder, Selma Candelaria Genari Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Alguns fármacos apresentam potencial quimioterápico contra neoplasias, por inibirem a proliferação celular e induzirem a morte celular. Muitos desses agentes podem apresentar efeitos citotóxicos em tecidos normais como linfopenia, devido à indução de apoptose com diminuição das células T CD4, podendo levar a implicações na resposta imune. O tamoxifeno (T AM) é um agente não esteróide antiestrógeno utilizado como quimioterápico coadjuvante no tratamento de câncer de mama. Trabalhos recentes têm demonstrado que o T AM pode causar câncer endometrial em pacientes pós-menopausa, como sério efeito colateral. O presente trabalho objetivou investigar a capacidade do T AM de induzir apoptose em linfócitos humanos cultivados in vitro. Para tanto, amostras de sangue de voluntárias jovens (grupo A= 25 a 30 anos;n=3) e idosas (grupo B= 58 a 77 anos;n=3), foram centrifugadas em gradiente de densidade de Percoll (percoll-50%) para separação de linfócitos e monócitos. Os monócitos foram excluídos por cultura dependente de adesão por 2 horas. O sobrenadante contendo linfócitos controle foram cultivados em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino por 24 e 48 horas, enquanto linfócitos, denominados tratados, receberam 20J.1M de T AM no meio de cultura. Após a cultura, as células foram: 1) contadas em hemocitômetro, sendo estipulado a porcentagem de células viáveis para o total de células analisadas, utilizando-se o método de exclusão pelo Azul Tripan; 2) incubadas com anexina-biotina, que possui alta afinidade pela fosfatidilserina, seguido de incubação com anti-biotina conjugada à fluoresceína, para marcação das células em apoptose e analisadas ao microscópio de fluorescência; 3) fixadas em formaldeído e coradas com Leishman para estudos em microscopia de luz (ML); 4) depositadas em lamínulas, fixadas em glutaraldeído seguido de pós-fixação com tetróxido de ósmio e analisadas ao microscópio eletrônico de varredura (MEV); 5) fixadas em solução de glutaraldeído, ácido pícrico e formaldeído seguido de pós-fixação com tetróxido de ósmio e analisadas ao microscópio eletrônico de transmissão (MET); 6) a análise estatística foi realizada a partir de análise de variância one-way ANOV A com p< 0,05. As culturas tratadas demonstraram menor viabilidade celular e maior índice apoptótico que seus controles. Ainda, culturas controle e tratadas de linfócitos de mulheres idosas apresentaram maior porcentagem de células em apoptose quando comparadas com linfócitos de mulheres jovens. Os estudos em ML e MET revelaram maior condensação cromatínica e redução do volume celular, e ainda, ao MET foram observados vacúolos autofágicos no citoplasma. A MEV revelou células com perda de microvilosidades e perda da morfologia arredondada após 48 horas de tratamento. Conclui-se, então que os linfócitos foram afetados pelo tratamento com o TAM em ambos os grupos, embora o grupo de mulheres idosas se mostrou mais susceptível a apoptose Abstract: Some drugs have a chemotherapic potential against neoplasms, through inhibition of proliferation and cell death induction. Many of these agents can display cytotoxic effects in normal tissues such as lymphopeny due apoptosis induction with a consequent decrease of T CD4 cells and its implications in the immune response. Tamoxifen is a synthetic non steroidal antiestrogenic drug which is currently being widely employed in the treatment of female breast cancer. Recent studies have shown that TAM can cause endometrial cancer in postmenopausal patients, considered a serious side effect. The purpose of this work was to investigate the capacity of T AM to induce apoptosis in human lymphocytes cultivated in vitro. Samples of peripheral blood were obtained from young (group A= 25-30 years 0Id;n=3) and old (group B= 58-77 years 01d;n=3) women and centrifuged in a Percoll density gradient, to separate lymphocytes and monocytes (percoll-50%). Monocytes were excluded by culturing for 2 hours. The supernatant with control lymphocytes was cultivated in RPMI containing 10% fetal bovine serum, for 24 and 48 h as controls, whereas treated lymphocytes received TAM (20JlM) added to the culture medium. After the culture, the cells were: 1) counted in a hemocytometer, and the viable cell number for each sample was obtained through an exclusion test of intact cells by using 1 % Tripan Blue and establishing the percentage of unstained, alive cells for the total of ressuspended cells; 2) incubated with annexin-biotin, which has high affinity for phosphatidilserine (PS), followed by incubation with FITC conjugated anti-biotin, to target apoptotic cells and examined by fluorescence microscopy; 3) fixed in formaldehyde and stained with Leishman and examined by light microscopy (LM); 4) placed on coverslips, where the cells were fixed, post fixed in osmium tetroxide and examined with the scanning electron microscope (SEM); 5) fixed in in glutaraldehyde, formaldehyde and picric acid, post fixed in osmium tetroxide, and examined in a transmission electron microscope (TEM); 6) statistical analysis was performed using one-way analysis of variance (ANOV A) with p< 0.05. The treated cultures showed less viable cells and more apoptotic cells than control cultures. Moreover, group B showed more apoptotic cells in comparison with group A, in both control and treated cultures. LM and TEM showed treated cells with more condensed chromatin and reduction of cell volume. In TEM some autophagic vacuoles in the cytoplasm were observed. SEM showed loss of microvilli and loss of spherical shape at 48 h, when compared with the controls. Thus, a response to TAM was observed in both groups, although group B was more susceptible to apoptosis Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Leonilda M. B. Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A Encefalomielite Experimental Autoimune (EAE) é um modelo de doença auto imune mediada por células T e tem sido utilizado para o entendimento da Esclerose Múltipla humana. Os linfócitos CD4 Th1 têm sido implicados na patogenia da EAE. Citocinas como IL2, TNFa e IFNg foram detectadas no Sistema Nervoso Central durante a fase aguda da doença. A administração oral de Proteína Básica de Mielina (MBP) tem sido utilizada para reduzir a gravidade da EAE. O presente estudo teve por objetivo estudar como a administração oral de neuro-antígenos pode modificar a padrão das citocinas produzidas pelos linfócitos Th1 e Tb2. A EAE foi induzida em camundongos SJL/J pela administração de MBP/CFA. A tolerância oral foi conseguida com a administração de 5x 0,25mg de MBP, administrou-se anticorpo monoclonal anti-IL4, obtido de clones 11B11 e as demais citocinas foram quantificadas utilizando-se o método de ELISA de captura. Anticorpos anti-MBP e subclasses de IgG foram quantificados por ELISA. Observou-se que a administração oral de MBP levou a significativa diminuição da EAE e redução na produção de IFNg e IL2, enquanto os níveis de IL4 não modificaram. Com relação aos isotipos de IgG específicos para MBP foi observado redução da IgG total mas não do isotipo IgG1 e IgE. A administração "in vivo" do anticorpo monoclonal anti-IL4 reverte parcialmente a proteção obtida pela indução de tolerância oral a MBP. Estes dados mostram que a administração oral de MBP toleriza mais facilmente os clones de linfócitos Th1, clones estes envolvidos na patogenia da EAE Mestrado Imunologia Mestre em Ciências Biológicas

Objectivo: Analisar as alterações hematológicas agudas induzidas por uma prova de triathlon longo. Avaliou-se o comportamento de diversos biomarcadores enzimáticos e da função imune em atletas portugueses masculinos de triathlon. Métodos: 10 atletas seniores masculinos (31,5 ± 1,2 anos; 69,3 ± 1,9 kg; 177,7 ± 1,4 cm; 22,0 ± 0,8 de IMC e 10,1 ± 2,2 % GC) divididos em grupos elite e não-elite. Foram recolhidas amostras de sangue venoso periférico antes e imediatamente após as provas. Utilizou-se estatí­stica descritiva, testes não-paramétricos de Wilcoxon e Mann-Whitney e coeficiente de correlação de Spearman. Resultados: Verificou-se o aumento da actividade das enzimas CK e AST (p < 0,05) em ambos os grupos. O aumento da actividade da enzima GGT (p < 0,05) ocorreu somente no grupo elite. Foi constatado, em ambos os grupos, um aumento da contagem leucocitária, fundamentalmente expressa pelo aumento da contagem de neutrófilos (p < 0,05). Após a prova, registou-se a diminuição da relação CD4/CD8 e aumento das concentrações dos linfócitos T CD3+CD8+, T CD4+reg e T CD4+CD69+ nos atletas dos grupos não-elite. Conclusão: Os resultados encontrados sugerem que a intensidade e a duração da prova de triathlon condicionam as respostas dos diversos biomarcadores analisados em função do ní­vel de treino dos atletas.Palavras-chave: triathlon, treino, actividade enzimática, sistema imune, linfócitos.

SUMMARY OBJECTIVE: Patients in intensive care units (ICU) have greater morbidity and mortality. We aimed to study neutrophil to lymphocyte ratio (NLR) and platelet to lymphocyte ratio (PLR) in the ICU population. METHODS: Medical and laboratory data of patients treated in ICU were retrospectively analyzed. Patients were divided into deceased and survived groups. RESULTS: The NLR of survived and deceased groups were 3.6 (0.2-31) and 9.5 (1-40), respectively (p

Orientador : Giberto da Assunção Fernandes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Ciencias Medicas Resumo: Centralmente aplicada, a Substância P (SP) interage com o sistema nervoso autônomo (SNA) e com o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (IlliA). Sabendo-se que esses sistemas modulam a função imune inata e têm sido implicados na resposta inflamatória associada com doenças auto-imunes, os efeitos da administração de SP intracerebroventricular (i.c.v.) na quantificação de linfócitos e na atividade citotóxica"natural killer" (NK) de células esplênicas foram estudados na Encefalomielite Alérgica Experimental (EAE), um modelo de estresse inflamatório crônico. Neste trabalho investigou-se a influência da SP e do seu antagonista sobre as subpopulações celulares CD3+, CD4+, CD8+, CDJNKR-PI+, CD3~-PI+, quantificadas por citometria de fluxo e a atividade imunológica citotóxica NK, obtida por ensaio de liberação de cromo radioativo CrSI, no curso desse processo inflamatório. A possibilidade de avaliar a atividade do eixo IlliA nessa doença foi verificada pelas dosagens hormonais séricas do hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) e corticosterona, e da arginina vasopressina (A VP), na eminência média. Os resultados mostraram que na EAE houve um aumento no baço nos subtipos celulares CD3+ (64,2 :!: 0,8 %), CD4+ (59,6 :!: 0,6 %), CD8+ (14,5 :!: 0,5 %) e CDTNKR-PI + (8,8 :!: 0,3 %) às custas de uma atividade esplênica citotóxica NK (5,2 :!: 0,6 %) significativamente menor que nos controles normais [CD3+ (47,8 :!: 2,2 %), CD4+ (45,6 :!: 1,3 %), CD8+ (10,7 :!: 0,4 %), CD3NKR-PI+ (4,9 :t 0,4 %), NKac (8,9 :!: 0,7 %), CD3~-PI+ (1,6:!: 0,2 %) , ACTH (10,2 :!: 1,4 pg/rnl), corticosterona (2,2 :!: O ng/rnl)]. Esses dados foram correlacionados a um aumento dos níveis plasmáticos de ACTH (92,2 :!: 38,5 pg/rnl) e corticosterona (152,1 :!: 42,5 ng/rnl). A administração de 20 nrnoles de SP aumentou a retenção de células CD4+ (5I,3:!: 1,7 %) e CD8+ (I5,0:!: 0,8 %) no baço, com um aumento da porcentagem de células CD3NKR-Pl+ (10,4 :!: 0,9 %) e conseqüente diminuição da citotoxicidade NKac (5,4 :!: 0,6 %) no pico dos sintomas clínicos, comparados aos controles salina [CD4+ (41,2 :!: 4 %), CD8+ (1I,8:!: 1,5 %), CD3NKR-PI+ (6,5:!: 1,7 %), NKac (7,6:!: 0,2 %), ACTH (47,1 :!: 6,1 pg/rnl), corticosterona (120,3 :!: 17,8 ng/rnl)]. Isto foi acompanhado por um decréscimo nos níveis dos hormônios adrenocorticotróficos (21,3 :f: 2,3 pg/rnl) e corticosterona (44,1 :f: 16,2 ng/mI). As células CD3~-P1+ [antagonista + salina (0,5 :f: 0,04 %) e antagonista + SP (0,6:f: 0,1 %)], um outro tipo celular implicado na auto-imunidade, foram reduzidas pela injeção do antagonista da SP, quando comparadas ao grupo salina (1,3 :f: 0,1 %), sugerindo um papel para a SP no fluxo migratório desse tipo celular no baço. Concluindo, os dados obtidos neste trabalho sugerem que a SP influencia o eixo HHA , podendo também modular o tráfego celular linfocitário e a resposta imune no baço e, portanto, deve ser um elemento importante nos processos de modulação da EAE Abstract: Substance P centrally injected (ICV) in rats acts on the autonomic nervous system and the hypotha1amic-pituitary-adrenal axis (HPA) to moduJate innate llmnune function and iDf1ammatory response in autoimmune diseases. The effects of modulation in migration and in natural killer cell activity of splenocytes in these systems were studied in experimental allergic encephalomyelitis (EAE) a model of autoimmune disease which acts as a chronic inf1ammatory stress. The migration characteristics observed by flow citometry were ofthe CD3+, CD4+, CD8+, CD3+m

Orientadores: Mary Luci de Souza Queiroz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O câncer é uma das doenças mais prevalentes no Brasil e no mundo. Atualmente, a radioterapia e a quimioterapia são utilizadas como tratamento de primeira escolha para esta doença e caracterizam-se por não possuir toxicidade seletiva, causando sérios efeitos adversos como a inibição da resposta imunológica e a mielossupressão. O desenvolvimento de novas drogas, visando terapias mais eficientes, vem aumentando a procura por fitoterápicos para o tratamento do câncer. A Withania somnifera (Ashwagandha) é uma planta bastante utilizada na medicina Ayurvédica devido sua eficácia em uma grande variedeade de doenças. Possui sinonímia bastante diversificada sendo conhecida por Cereja de Inverno, Ashwagandha, Ginseng Indiano entre outros nomes. Cresce em áreas subtropicais da Índia, África e oeste da Ásia. A Withania somnifera (WS) foi investigada extensivamente durante as últimas três décadas e resultados de estudos envolvendo indivíduos de diferentes faixas etárias e de ambos os sexos demonstram ação terapêutica potente com efeitos tóxicos mínimos. Neste sentido, investigamos os efeitos desta planta sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoéticos [Células formadoras de colônias de granulócitos/macrófagos (CFU-GM)], de camundongos normais e portadores do tumor ascítico de Ehrlich (TAE), os quais foram tratados com diferentes doses de Withania somnifera (20, 50 ou 100 mg/kg/dia). Nestes animais, avaliamos ainda a presença de fatores estimuladores de colônias no soro e a sobrevida. Além disso, foi avaliada também a proliferação de linfócitos e a lise específica de células natural killer (NK), a concentração das citocinas IL-1, IL-6, IL-10, IFN-g e TNF-a nos camundongos inoculados com TAE e tratados com o extrato da planta, bem como a presença de micronúcleos de eritrócitos da medula óssea dos camundongos tratados com o extrato da planta e ciclofosfamida, e por último a citotoxicidade do extrato nas linhagens leucêmicas HL-60, K-562 e MOLT-4. Nossos resultados demonstraram uma eficácia do extrato de Withania somnifera no crescimento de diferenciação dos precursores hematopoéticos da medula e baço dos camundongos inoculados com TAE. Como já esperado, o TAE produziu concomitantemente a mielossupressão e um aumento no número de CFU-GM esplênico. O tratamento dos animais portadores do TAE com WS (20, 50 e 100 mg/kg) produziu aumento na sobrevida e aumento na mielopoese, além da redução no número de colônias esplênicas e no peso do baço. Quanto à proliferação de linfócitos e a lise específica de células NK, ocorreu uma resposta dose-dependente dos animais inoculados e tratados com o extrato de WS. Da mesma forma, pudemos observar que o tratamento dos animais portadores do TAE e tratados com a planta impediu a polarização da resposta imunológica Th1-Th2 encontrada nos animais portadores do TAE. Neste sentido, a avaliação dos níveis de IL-1 revelou que a administração das doses de 20, 50 e 100 mg/Kg de WS por 10 dias consecutivos em camundongos normais produziu um aumento significativo (P

Orientador: Maria Heloísa de Souza Lima Blotta Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A psoríase é uma doença inflamatória crônica que afeta a pele e pode estar associada à maior frequência de eventos cardiovasculares, decorrentes de aterosclerose. A frequência de um subtipo de linfócitos T CD4, que não expressa a molécula de superfície CD28 (CD4+CD28null) e possui potencial citotóxico, está aumentada no sangue periférico de pacientes com síndrome coronariana aguda, bem como outras doenças inflamatórias crônicas. O objetivo do estudo foi a avaliação da frequência e características de células T CD4+CD28null no sangue periférico de pacientes com psoríase e indivíduos controle, além de correlacionar estes achados com a espessura da camada íntima-média (EIM) da artéria carótida comum. Foram incluídos 42 pacientes com psoríase e 42 indivíduos controle. As células mononucleares do sangue periférico (CMSP) dos participantes foram analisadas, por meio de citometria de fluxo, quanto à frequência de células T CD4+CD28null e sua expressão de grânulos citotóxicos, receptores relacionados à migração celular e citocinas inflamatórias. Além disso, as características destas células foram avaliadas em um subgrupo de pacientes em remissão clínica, após tratamento da psoríase. Na análise primária, não houve diferença na frequência de células CD4+CD28null entre os grupos. Entretanto, houve maior número de células expressando grânulos citotóxicos e menor número expressando o receptor de quimiocina CXCR3 no grupo psoríase. Estes resultados se mantiveram em análise multivariada. Detectou-se ainda correlação negativa entre a frequência de células CD4+CD28null e a gravidade da psoríase. Conforme esperado, alguns marcadores inflamatórios e moléculas de adesão, como proteína C reativa, VCAM e E-selectina, estavam aumentados em pacientes com psoríase. Por outro lado, não houve diferença na EIM entre os grupos ou correlação desta com a frequência de células T CD4+CD28null no sangue periférico. Na avaliação de nove pacientes em remissão clínica da psoríase, não houve diferença na frequência de células T CD4+CD28null, mas houve diminuição significativa no número de células expressando os grânulos perforina, granzima A e granzima B, após o tratamento. Estes resultados sugerem que além do ambiente inflamatório, a presença de células com potencial citotóxico poderia contribuir para imunopatogênese da psoríase, independente da presença de fatores de risco para aterosclerose. É possível ainda que, mesmo não sendo significativo, um menor número destas células no sangue periférico de pacientes com psoríase, além de correlação negativa desta frequência com a gravidade do quadro cutâneo, esteja refletindo o recrutamento destas células para locais de inflamação, como pele e articulações Abstract: Psoriasis is a chronic inflammatory disease that affects the skin and could be associated with increased frequency of cardiovascular events related to atherosclerosis. A subtype of CD4+ T lymphocytes, which does not express the surface molecule CD28 (CD4+CD28null) and is potentially cytotoxic, has increased frequency in peripheral blood of patients with acute coronary syndromes as well as other chronic inflammatory diseases. The objective of this study was to evaluate the frequency and characteristics of circulating CD4+CD28null T cells in patients with psoriasis and control subjects, attempting to correlate these findings with the carotid intima-media thickness (IMT). A total of 42 patients with psoriasis and 42 controls were included. Peripheral blood mononucleated cells (PBMC) from participants were analyzed through flow cytometry for the frequency of CD4+CD28null T lymphocytes and their expression of cytotoxic granules, homing receptors and inflammatory cytokines. Furthermore, these cells were reevaluated in a subgroup of patients that achieved clinical remission of psoriasis after therapy. The main analysis revealed no difference in the frequency of CD4+CD28null T cells between the two groups. However, there were increased numbers of these cells expressing cytotoxic granules and decreased number expressing the chemokine receptor CXCR3 in ex vivo samples of psoriasis patients. These results were sustained in multivariable analysis. Negative correlation was also observed between number of these cells and psoriasis severity. As expected, certain inflammatory markers, such as C-reactive protein, vascular cell adhesion molecule and E-selectin, were increased in patients with psoriasis. On the other hand, there were no differences in IMT between the groups or correlation with number of circulating CD4+CD28null T cells. Although, in the analyses of nine patients after clinical remission of psoriasis, there was no change in the frequency of CD4+CD28null T lymphocytes, numbers of these cells expressing cytotoxic granules were decreased after treatment. These data suggest that, in addition to the inflammatory environment, presence of cells with cytotoxic capabilities may have a role in the pathogenesis of psoriasis, aside from cardiovascular risk factors. Moreover, it is possible that, albeit not significant, decreased number of circulating CD4+CD28null T cells in psoriasis, in addition to a negative correlation with disease severity, could reflect their recruitment to inflammatory sites, such as skin and joints Doutorado Patologia Clínica Doutora em Ciências Médicas

Orientadores: José Andrés Yunes, Jorg Kobarg Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A IL-7 é uma citocina essencial para o desenvolvimento, sobrevivência, e proliferação dos timócitos prematuros normais no timo e linfócitos T maduros nos órgãos linfoides periféricos. O receptor da IL-7 é um heterodímero constituído pela IL-7Ra (codificado pelo gene IL7R) e IL-2Ry. A IL-2Ry participa também dos receptores da IL-2, IL-4, IL-9, IL-15 e IL-21, sendo por isso conhecida como cadeia comum gama ou yc. A sinalização via IL-7 é imprescindível para o processo de rearranjo V(D)J dos receptores de células T (TCR), pois leva à modificação da cromatina que permite o acesso da recombinase aos loci TCR no DNA Camundongos defeituosos para a cadeia alfa do receptor da IL-7 (IL-7Ra) desenvolvem imunodeficiências devido à falta de células T. A via IL-7/IL-7Ra é também importante para proliferação e sobrevivência da leucemia linfóide aguda de células T (LLA-T). Suspeitando da existência de mutações em IL7R resultando em ganho de função e hiperativação da via IL-7/IL-7Ra, procurou-se por mutações no gene do IL-7Ra em mais de 50 casos de LLA-T pediátrica. Procurou-se também mutações no domínio de autoinibição das JAK1 e JAK3, moléculas associadas ao IL-7Ra e IL-2Ry, respectivamente. Aproximadamente 9% das LLA-T pediátricas apresentaram mutações no IL-7Ra, resritas a uma região estreita do éxon 6, que resultaram, na maioria dos casos, em inserções de uma cisteína no domínio transmembrana/justamembrana da proteína. A presença dessa cisteína leva à homodimerização das cadeias IL-7Ra mediante a formação de pontes de dissulfeto e à ativação constitutiva do IL-7Ra independente de seu ligante, conforme verificado pela fosforilação de JAK1, STAT5, AKT e BAD e análise de mutantes artificiais do IL-7Ra com subtração ou adição de resíduo de cisteína. Verificou-se também que o local de inserção da cisteína é crítico para que a homodimerização das cadeias IL-7Ra mutantes resulte em ativação da via JAK/STAT. Receptores imitados tiveram um efeito transformante nas linhagens celulares Dl e Ba/F3, que sobreviveram na ausência dos fator de crescimento IL-7 e IL-3, respectivamente. Além disso, células Dl transduzidas com IL7R mutante, quando injetadas em camundongos knockout (KO) para IL7, causaram esplenomegalia, metástase e tumor no local da injeção. Resultados semelhantes foram obtidos com a expressão ectópica do IL7R mutante em células progenitoras hematopoiéticas de camundongos knockout para IL7R, JAK3 e/ou IL2RG, demonstrando que o homodímero IL-7Ra mutante atua independentemente dessas moléculas. Em conclusão, mutações no IL7R contribuem para a leucemogenese em 9% das crianças com LLA-T. Espera-se que a melhor caracterização do mecanismo responsável pela ativação constitutiva do IL-7Ra mutante abra caminho para o desenho de novas drogas e anticorpos monoclonais, o que permitirá avaliar o valor terapêutico do bloqueio/inibição do IL-7Ra mutante nas LLA-T .Abstract: The IL-7, a product of stromal cells, is normally required for T cells development and for survival of mature peripheral T cells. The IL-7R consists of two components, the IL-7Ra (encoded by IL7R) and the common gamma chain (yc), or IL-2Ry, that is shared by receptors for IL-2, IL-4, IL-9, IL-15 and IL-21. The IL-7 signaling has a role in V(D)J recombination in developing T and B cells by controlling access of the V(D)J recombinase to the locus. IL-7Ra deficiency mice showed a diminished T cell number and impaired lymphocyte development. Further, the IL-7/IL-7Ra pathway is important for T-acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) proliferation and survival. Hypothesizing that IL7R gain-of-function mutation could be occurring in T-ALL, 50 T-ALL samples were analyzed for mutations. The kinases JAK1 and JAK3, mat are associated with IL-7Ra and yc, respectively, were also studied for mutations. About 9% of childhood T-ALL presented mutations at the transmembrane domain encoded by éxon 6, and all of mem were in-frame insertions and deletions. In all but three cases there was an insertion of cysteine mat is essential for disulfide bond formation and constitutive activation of the receptor independent of IL-7. The constitutive signaling was confirmed by phosphorylation of JAK1, STAT5, AKT and BAD, and analysis of IL-7Ra artificial mutants with or without cysteine. The position of cysteine insertion is very important to disulfide bond formation, to activate the JAK/STAT pathway and to support the proliferation of Ba/F3 and Dl cell lines in the absence of cytokine. Moreover, IL7R mutant transduced Dl cells injected into ILT1' mice caused splenomegaly, metastasis and tumor at the injection site. Similar results were obtained with the ectopic expression of the IL7R mutant in hematopoietic progenitor cells of IL7K1', JAK3'1' and/or IL2RG'1' mice, demonstrating that the mutant homodimer IL-7Ra operates independently of these molecules. In conclusion, mutations in ÚÍQIL7R contribute to leukemo genes is in 9% of children with ALL-T. We hope mat a better comprehension of the mechanism responsible for the constitutive activation of IL-7Ra mutant opens new perspectives into the design of new drugs and monoclonal antibodies, which may turn into valuable therapeutic treatment Doutorado Genética Animal e Evolução Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Patrícia Maria Bergamo Favaro, Sara Teresinha Olalla Saad Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As síndromes mielodisplásicas (SMD) são um grupo heterogêneo de doenças caracterizadas por hematopoese ineficaz e risco de progressão para leucemia mieloide aguda (LMA). SMD de baixo de risco é caracterizada por um aumento de apoptose na medula óssea e alterações clínicas com perfil autoimune, enquanto que na SMD de alto risco há uma evasão imune, baixa apoptose e danos secundários ao DNA, contribuindo para a progressão para LMA. Essas evidências, junto com os dados de terapia imunossupressora em pacientes com SMD, sugerem o papel do sistema imune na progressão desta doença. Entretanto, o papel do sistema imune não é claro, e estudos que abordem o perfil das células T são importantes para o melhor entendimento da patogênese da SMD. Formin-like 1 (FMNL1) pertence à família de proteínas formina, indispensáveis para muitos processos fundamentais actina-dependentes. FMNL1 é restritamente expressa em células derivadas de linhagem hematopoética e superexpressa em células neoplásicas hematopoéticas malignas. Recentemente, foi descrito que FMNL1 está envolvida no processo de citotoxicidade de células CD8+. Desse modo, estudar a expressão de FMNL1 tanto nos linfócitos como nas células da MO dos pacientes com SMD, poderia contribuir para o melhor entendimento do papel dessa nova proteína neste modelo de neoplasia hematológica. No presente estudo, foi observada uma diminuição significativa na contagem absoluta de linfócitos periféricos no grupo SMD, após ajuste para idade, quando comparada com o grupo de doadores saudáveis (controle). Entretanto, houve um aumento da frequência de células CD3+, resultante do aumento significativo das subpopulações de células CD3+CD4+ no grupo de alto risco e CD3+CD8+ no grupo de baixo risco, de acordo com as classificações FAB e WHO. A razão CD4:CD8 encontrou-se aumentada no grupo de alto risco comparado com o de baixo risco. Dependência transfusional foi correlacionada positivamente com a porcentagem de CD3+CD4+, enquanto que a idade dos pacientes correlacionou-se de forma negativa com a porcentagem de CD3+ e CD3+CD8+. Os níveis de expressão de FOXP3, nas células CD3+ de sangue periférico, foram significativamente menores no grupo de baixo risco quando comparado com o grupo controle, e esse padrão se repetiu para a expressão de IL10. A quantificação dos transcritos de IL10 correlacionou-se negativamente com a porcentagem de células CD3+CD8+. Em conclusão, evidenciamos que pacientes com SMD apresentaram um menor número de linfócitos, porém com a frequências das células T CD3+, CD3+CD4+ e CD3+CD8+ aumentadas. Os pacientes de baixo risco apresentaram uma diminuição da expressão de FOXP3 e de IL10, quadro característico de um microambiente apoptótico e inflamatório. Já no grupo de alto risco, a expressão de FOXP3 e de IL10 aumenta em relação ao grupo de baixo risco. É interessante ressaltar que nos pacientes com SMD houve uma correlação entre o aumento da expressão de IL10 e a diminuição das células T CD3+CD8+, sugerindo a contribuição das Tregs na progressão da doença através da produção de IL10. A análise da expressão de FMNL1 em células CD3+ de sangue periférico não denotou diferenças significativas entre os pacientes com SMD e o grupo controle. Entretanto observou-se uma correlação positiva entre a expressão de FMNL1 e o número de células CD3+CD4+ e ambos com a dependência transfusional. Quanto à expressão de FMNL1 em amostras de MO, houve uma expressão significativamente menor nos pacientes com SMD quando comparado com as células de doadores normais, além de uma correlação negativa entre FMNL1 e número de citopenias. Usando modelos de linhagens celulares hematopoéticas para a diferenciação, observou-se um aumento significativo na expressão gênica e protéica de FMNL1 durante a diferenciação megacariocítica. Esses resultados sugerem a participação de FMNL1 na ativação de linfócitos CD4+ no sangue periférico e na diferenciação hematopoética na medula óssea Abstract: Myelodysplastic syndromes (MDS) are a heterogeneous group of disorders characterized by ineffective hematopoiesis and risk of progression towards acute myeloid leukemia. Low-risk MDS is characterized by increased apoptosis in the bone marrow (BM), with a clinical autoimmune profile, whereas in high-risk MDS an immune evasion, low apoptosis and secondary DNA damage occurs, contributing to the progression of AML. This evidence, together with the data of immunosuppressive therapy in patients with MDS, suggests a role of the immune system in the progression of this disease. However, this role of the immune system is remains unclear, and studies that address the profile of T cells are important for a better understanding of the pathogenesis of MDS. Formin-like 1 (FMNL1) belongs to the family of proteins formina indispensable for many fundamental processes in actin-dependent. FMNL1 is strictly expressed in hematopoietic lineage derived cells, and overexpressed in malignant hematopoietic neoplastic cells. FMNL1 has recently been reported to be involved in the cytotoxicity of CD8+ cells. Thus, studies on the expression of FMNL1, both in lymphocytes and BM cells of MDS patients, could contribute to a better understanding of the role of this protein in this new model of hematologic malignancy. In the present study, we observed a significant decrease in absolute peripheral lymphocyte counts in the MDS group, after adjusting for age, compared with the healthy donor group (control). However, there was an increased frequency of CD3+, resulting in a significant increase of the CD3+CD4+ subpopulation in high risk and CD3+CD8+ in MDS low risk, according to FAB and WHO classifications. CD4:CD8 ratio was increased in the high risk when compared to the low risk group. Transfusion dependence was positively correlated with the percentage of CD3+CD4+, whereas the age of patients correlated negatively with the percentage of CD3+ and CD3+CD8+. The expression levels of FOXP3, in peripheral blood CD3+ cells, was significantly lower in the low risk group compared to controls and this pattern was repeated for the expression of IL10. Interestingly, IL10 transcripts correlated negatively with the percentage of CD3+CD8+. In conclusion, we found that patients with MDS had a lower lymphocyte number, however presented an increased frequency of CD3+ and CD3+CD8+ T cells. Our low risk patients showed a decreased expression of FOXP3 and IL10, characteristic of apoptotic and inflammatory microenvironment. In the high risk group, the expression of FOXP3 and IL10 was normal. Interestingly, there was a correlation between increasing expression of IL10 and reduction of CD3+CD8+ T cells in patients, suggesting the contribution of Treg in disease progression due to IL10 production. Analysis of FMNL1expression in CD3+ cells of peripheral blood showed no significant differences between patients with MDS and the control group. However, there was a positive correlation between FMNL1 expression and the number of CD3+CD4+, and both were transfusion dependence. FMNL1 expression in BM samples was significantly lower in MDS patients when compared with cells from normal donors, and there was a negative correlation between FMNL1 and number of cytopenias. Using models of hematopoietic cell lineages for differentiation, we observed an increase in gene and protein expression of FMNL1 during megakaryocytic and granulocytic differentiation. These results suggest the participation of FMNL1 in the activation of CD4+ lymphocytes in peripheral blood and bone marrow hematopoietic differentiation Mestrado Fisiopatologia Médica Mestre em Ciências

Orientadores: Maria Heloisa Souza Lima Blotta, Juliano Lara Fernandes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Resumo: A aterosclerose é uma doença inflamatória caracterizada por uma intensa atividade imunológica que culmina na formação de lesões nos vasos sanguíneos. As síndromes coronarianas agudas (SCA) representam graves complicações da aterosclerose. Pacientes com SCA podem ser diferenciados de indivíduos saudáveis pela frequência aumentada de células T CD4+ CD28null no sangue periférico. Tais células têm sido relacionadas a processos inflamatórios crônicos, como os que ocorrem em indivíduos portadores de fatores de risco clássicos para a doença aterosclerótica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as possíveis diferenças quanto ao número e as características das células T CD4+ CD28null presentes no sangue periférico de pacientes com doença coronariana e indivíduos saudáveis com ou sem fatores de risco para o desenvolvimento de aterosclerose. Para tanto, células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de controles (C), indivíduos portadores de fatores de risco (FR), pacientes com angina estável (AE) e pacientes com síndromes coronarianas agudas (SCA) foram diretamente submetidas à citometria de fluxo (ex vivo) para quantificação de células CD4+ CD28null e detecção de perforina, granzimas A e B, granulisina, CD161, CCR5, CCR7, CXCR3, IFN-? e TNF-?. As células foram cultivadas na presença de anti-CD3 e ionóforo de cálcio por 6hs com posterior análise da expressão de citocinas inflamatórias e também com LPS por 48hs, seguida da avaliação da expressão de moléculas citotóxicas e receptores de homing frente a estímulo inflamatório. A concentração plasmática da proteína C reativa (PCR) também foi determinada. Nossos resultados mostraram que a porcentagem de células CD4+ CD28null em relação aos linfócitos totais do sangue periférico foi similar em todos os grupos. A análise ex vivo mostrou que a população de células CD4+ CD28null apresenta maior expressão de grânulos citotóxicos (granzimas A e B, perforina e granulisina) e dos receptores de homing CCR5 e CD161 quando comparadas à população de células CD4+CD28+, enquanto que a expressão do CCR7 e do CXCR3 é menor. A frequência de células IFN-g+ foi maior na população CD4+ CD28null. Tal padrão se repetiu em todos os grupos, com praticamente todos os parâmetros se comportando dessa maneira. Entretanto, quando comparamos as células CD4+ CD28null dos diferentes grupos, verificamos que a perforina e as granzimas A e B foram mais frequentes nas células de indivíduos com fatores de risco e pacientes com SCA. Com relação às moléculas de homing e ao IFN-?, houve maior positividade para CCR7 nas CD4+ CD28null de controles e pacientes AE, enquanto o IFN-? foi mais frequente nas células dos pacientes AE. A estimulação das CMSP com anti-CD3 e ionóforo de cálcio mostrou que as células CD4+ CD28null dos grupos FR e SCA têm maior capacidade inflamatória quando comparadas às células de controles e de pacientes AE, o que foi evidenciado por um maior aumento na positividade para o TNF-?. Após estimulação das CMSP com LPS, a população CD4+ CD28null apresentou diminuição da expressão dos grânulos citotóxicos analisados, o que ocorreu em todos os grupos. Com relação às moléculas de homing, a estimulação com LPS causou uma diminuição da frequência de CD4+ CD28null positivas para CCR5 em todos os grupos, enquanto houve aumento da positividade para o CXCR3 nas células do grupo AE. Os pacientes SCA apresentaram as maiores concentrações plasmáticas de PCR, seguido pelos indivíduos do grupo FR e finalmente pelos controles e pacientes AE. Coletivamente, nossos resultados mostraram que os fatores de risco para aterosclerose causam alterações fenotípicas na população CD4+ CD28null, tornando-a mais citotóxica e inflamatória, o que poderia estar associado com a inflamação subclínica observada nessas condições. Além disso, os dados sugerem que as células CD4+ CD28null degranulam e alteram a expressão de receptores de homing quando estão em ambiente inflamatório, como ocorre na placa aterosclerótica e/ou na vigência de infecções microbianas Abstract: Atherosclerosis is an inflammatory disease characterized by an intense immunological activity, resulting in vascular lesions. The acute coronary syndromes (ACS) are one of the complications of atherosclerotic disease. Patents with SCA can be differentiated from healthy individuals by an increased frequency of CD4+ CD28null T cells in peripheral blood. These cells have been associated with chronic inflammatory processes, which occur in individuals with risk factors for coronary artery disease. This study aimed to evaluate the possible differences regarding the number and characteristics of peripheral blood CD4+ CD28null cells from patients with coronary artery disease and healthy individuals with and without risk factors for atherosclerosis. In order to achieve this goal, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy controls (C), individuals with risk factors (RF), patients with stable angina (SA) and patients with acute coronary syndromes (ACS) were analyzed by flow cytometry (ex vivo) to quantify CD4+CD28null cells and to detect the expression of perforin, granzymes A and B, granulysin, CD161, CCR5, CCR7, CXCR3, IFN-? and TNF-?. Cells were cultured with anti-CD3 and calcium ionophore for 6 h and analyzed regarding inflammatory cytokine expression. The cells were also cultured with LPS for 48h to evaluate expression of cytotoxic molecules and homing receptors in response to inflammatory stimulus. The plasmatic concentrations of C reactive protein (CRP) were also measured. Our results showed that the percentage of CD4+ CD28null cells in relation to total lymphocytes in peripheral blood was similar in all groups. Regarding the CD4+ CD28null population phenotype, it was observed an increased expression of cytotoxic molecules (granzymes A and B, perforin and granulysin) and homing receptors CCR5 and CD161 compared to CD4+CD28+ population. In contrast, expression of CCR7 and CXCR3 was decreased in CD4+ CD28null population. IFN-? frequency was also increased in CD4+ CD28null cells. This pattern was found in all groups, in relation to almost all analyzed parameters. Nevertheless, when CD4+ CD28null cells from the different groups were compared, it was observed that the positivity for perforin and granzymes A and B were increased in cells from individuals with risk factors and ACS patients. On the other hand, granulysin was more frequent in CD4+ CD28null cells from AS patients and controls. Moreover, the positivity for CCR7 was increased in CD4+ CD28null cells from control and SA patients while IFN-? was more frequent in cells from SA patients. PBMC stimulation with a anti-CD3 and calcium ionophore for 6h showed that CD4+ CD28null cells from RF and ACS groups have an increased inflammatory capacity when compared to cells from control subjects and AE patients, which is evidenced by a bigger increase in positivity for TNF-?. After PBMC stimulation with LPS for 48hs, CD4+ CD28null population had a decrease in cytotoxic molecules expression, fact that occurred in all groups. Regarding the homing molecules, LPS stimulation caused a huge decrease of CCR5 frequency in CD4+ CD28null cells from all groups while there was a significant increase of positivity for CXCR3 in the cells from SA patients. The highest CRP plasmatic concentrations were found in ACS patients, followed by subjects from RF group. The lowest levels were found in controls and SA patients. Taking together, our results show that risk factors for atherosclerosis lead to phenotypic alterations in CD4+ CD28null population, which became more cytotoxic and inflammatory. Such alterations may be associated with the low-grade inflammation found in patients with hypertension, diabetes, dyslipidemia and smocking. Beyond that, our data suggests that CD4+ CD28null cells degranulate and modify homing receptor patterns when they are in an inflammatory environment, which takes place in atherosclerotic lesions and/or infections Mestrado Ciências Biomédicas Mestre em Ciências Médicas

Orientador: José Francisco Comenalli Marques Júnior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: INTRODUÇÃO: A ILD vem sendo utilizada como opção terapêutica para recaída de neoplasias hematológicas após transplante alogênico. Contudo, este procedimento não é isento de riscos e sua indicação deve ser criteriosa. Neste trabalho avaliamos a ILD quanto à eficácia da coleta; efeitos adversos para os doadores e pacientes e efeitos quanto à remissão da doença, redução de recaída e mortalidade. MÉTODOS: Foi realizado estudo retrospectivo dos pacientes (n=40) que receberam ILD, no Hemocentro da UNICAMP, de março 1995 a janeiro 2008, e dos respectivos doadores (n=40). As características dos pacientes, complicações e sobrevida foram comparadas a um grupo de pacientes (n=264) que realizou transplante alogênico e não recebeu ILD. RESULTADOS: As 54 coletas de linfócitos analisadas atingiram o alvo estabelecido de '10 POT. 7' CD3+/Kg receptor, sem nenhuma reação grave para os doadores. Não observamos diferença estatística na mortalidade (p= 0,85) ou incidência de DECHa (p=0,231) entre os grupos de pacientes. No entanto, as causas de óbito foram diferentes (p

Agradecimentos: This study was supported by National Institutes of Health (1R01DK126969-01) and Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (18/15313–8). The study was also financed by the National Council for Scientific and Technological Development (CNPq) and Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES)–Finance Code 001.L.P.P., J.L.F., and R.O.C are recipients of fellowships from FAPESP (2018/02208–1, 2017/06577–9, and 2016/23142-3, respectively). M.C. was supported by MIST (U01AI095542 Abstract: Oxygen (O2) availability is a key factor regulating microbiota composition and the homeostatic function of cells in the intestinal mucosa of vertebrates. Microbiotaderived metabolites increase O2 consumption by intestinal epithelial cells (IECs), reducing its availability in the gut and leading to hypoxia. This physiological hypoxia activates cellular hypoxic sensors that adapt the metabolism and function of IECs and mucosa-resident cells, such as type-3 innate lymphoid cells (ILC3s). In this review, we discuss recent evidence suggesting that the intricate andmultidirectional interactions among themicrobiota, hypoxia/hypoxic sensors, and mammalian host cells (IECs and ILC3s) determine how the intestinal barrier and host–microbiota–pathogens connections are molded. Understanding these interactions might provide new treatment possibilities for dysbiosis, as well as certain inflammatory and infectious diseases FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQ COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPES Fechado

Simple Summary Liquid biopsy is a noninvasive approach that provides tumor molecular profiling. On the other hand, the vast majority of pancreatic tumors are pancreatic ductal adenocarcinomas (PDAC), which are characterized by pronounced inflammation. Therefore, we hypothesized that the combination of biomarkers of systemic inflammation, such as the neutrophil-to-lymphocyte-ratio (NLR) and platelet-to-lymphocyte ratio (PLR), with liquid biopsy-based biomarkers may increase their clinical usefulness. Our study shows that combining NLR, PLR, and the standard PDAC marker CA19-9 with circulating cell-free DNA and circulating RAS-mutated DNA outperforms traditional clinical tools for the clinical management of metastatic PDAC patients. Abstract Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is an aggressive cancer with a highly inflammatory microenvironment and liquid biopsy has emerged as a promising tool for the noninvasive analysis of this tumor. In this study, plasma was obtained from 58 metastatic PDAC patients, and neutrophil–lymphocyte ratio (NLR), platelet–lymphocyte ratio (PLR), circulating cell-free DNA (cfDNA) concentration, and circulating RAS mutation were determined. We found that NLR was significantly associated with both overall survival (OS) and progression-free survival. Remarkably, NLR was an independent risk factor for poor OS. Moreover, NLR and PLR positively correlated, and combination of both inflammatory markers significantly improved the prognostic stratification of metastatic PDAC patients. NLR also showed a positive correlation with cfDNA levels and RAS mutant allelic fraction (MAF). Besides, we found that neutrophil activation contributed to cfDNA content in the plasma of metastatic PDAC patients. Finally, a multi-parameter prognosis model was designed by combining NLR, PLR, cfDNA levels, RAS mutation, RAS MAF, and CA19-9, which performs as a promising tool to predict the prognosis of metastatic PDAC patients. In conclusion, our study supports the idea that the use of systemic inflammatory markers along with circulating tumor-specific markers may constitute a valuable tool for the clinical management of metastatic PDAC patients.

Orientador: Ricardo de Lima Zollner Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Produtos de origem vegetal, como os polifenóis obtidos de diversos tipos de plantas, têm impulsionado as pesquisas na área da saúde e nutrição, com propriedades na modulação de mecanismos supressores da resposta inflamatória. A utilização tanto de modelos in vitro, quanto in vivo são ferramentas relevantes no estudo destas propriedades anti-inflamatórias e antiproliferativas. O camundongo NOD ShiLt/J é um modelo animal geneticamente predisposto ao desenvolvimento espontâneo do Diabetes mellitus tipo 1 (DM1), de forma similar ao observado em humanos. A farmacopeia brasileira descreve Passiflora sp como um fitoterápico, mais conhecido popularmente como maracujá, sendo utilizado, neste contexto, para o tratamento de diversas doenças associadas ao estresse oxidativo, tais como, câncer, Alzheimer, doenças cardíacas, degenerativas e diabetes. Relatos da literatura, sugerem que o maracujá apresenta efeito hipoglicemiante com consequente melhoria do controle do diabetes. Resultados prévios de nosso grupo demonstraram a atividade do extrato aquoso das folhas de Passiflora alata Curtis e sua ação no DM1. Devido provavelmente a sua ação antiproliferativa e antioxidante, camundongos NOD tratados com este extrato apresentaram menor incidência do DM1, acompanhada de diminuição dos infiltrados de células inflamatórias nas ilhotas pancreáticas, dentre elas, linfócitos T CD4+ e CD8+. Adicionalmente, o conjunto dos estudos com polifenóis, demonstram que sua ação depende de sua concentração, estrutura e capacidade de interação com outras moléculas. Desta forma, estes produtos podem promover a oxidação de alguns componentes celulares, dentre eles, proteínas e lipídios, apresentando dessa maneira, um efeito pró-oxidante. Nesse contexto, para melhor compreensão dos eventos celulares desencadeados no diabetes autoimune, investigamos em modelo in vitro, o efeito antioxidante/pró-oxidante do extrato aquoso liofilizado das folhas de P. alata e seus polifenóis catequina e rutina presentes nas folhas, na indução do estresse oxidativo e peroxidação lipídica em linfócitos ativados obtidos do baço de camundongos NOD ShiLt/J diabéticos. Em modelo in vitro de cultura celular mista utilizando-se linfócitos e células ? pancreáticas da linhagem de insulinoma murino (MIN6), observamos o efeito pró-oxidante do tratamento, ou seja, o aumento na presença de óxido nítrico e peroxidação lipídica nos linfócitos submetidos ao tratamento com extrato aquoso de P. alata e os polifenóis. Em contrapartida, ao avaliarmos o efeito do tratamento nos sobrenadantes das culturas mistas, observamos que tais pode exercer atividade antioxidante. Poucas são as informações referentes ao uso fitoterápico das folhas do maracujá em modelos in vitro para os estudos voltados ao diabetes mellitus. O conjunto de nossos resultados subsidiam com informações que contribuem para melhor compreensão das propriedades anti-inflamatórias dos polifenóis presentes nas folhas de P. alata, abrindo novas perspectivas de estudo de seus efeitos sobre células inflamatórias envolvidas no desencadeamento de doenças autoimunes e inflamatórias como o DM1 Abstract: Products from plant, such as polyphenols obtained from several plant types, have been driving research in the area of health and nutrition, with properties modulating mechanisms that suppress the inflammatory response. The use of both in vitro and in vivo models are relevant tools in the study of these anti-inflammatory and antiproliferative properties. The NOD ShiLt/J mice is an animal model genetically predisposed to the spontaneous development of type 1 diabetes mellitus (DM1), similar to that seen in humans. The Brazilian pharmacopoeia describes Passiflora sp as a herbal remedy, more popularly known as passion fruit, and is used in this context for the treatment of various diseases associated with oxidative stress, such as cancer, Alzheimer, heart and degenerative diseases and diabetes. Literature reports suggest that the passion fruit has a hypoglycemic effect with consequent improvement in diabetes control. Previous results of our group demonstrated the activity of the aqueous extract of Passiflora alata Curtis leaves and its action on DM1. Due to its antiproliferative and antioxidant action, NOD mice treated with this extract had a lower incidence of DM1, accompanied by a decrease in infiltrates of inflammatory cells in the pancreatic islets, such as CD4+ and CD8+ T lymphocytes. Additionally, polyphenol¿s studies, they demonstrate that its action depends on its concentration, structure and capacity of interaction with other molecules. In this way, these products can promote the oxidation of some cellular components, among them, proteins and lipids, thus presenting a pro-oxidant effect. In this context, in order to better understand the cellular events triggered by autoimmune diabetes, we investigated the antioxidant/pro-oxidant effect of the lyophilized aqueous extract of P. alata leaves and their polyphenols catechin and rutin, in induction of oxidative stress and lipid peroxidation in activated lymphocytes obtained from the spleen of diabetic NOD ShiLt/J mice. In an in vitro model of mixed cell culture using lymphocytes and murine insulinoma (MIN6) pancreatic ? cells, we observed the pro-oxidant effect of the treatment, that is, the increase in the presence of nitric oxide and lipid peroxidation in lymphocytes submitted treatment with aqueous extract of P. alata and polyphenols. In contrast, when evaluating the effect of the treatment in the supernatants of the mixed cultures, we observed that could exert antioxidant activity. There is very little information on the phytotherapeutic use of passion fruit leaves in in vitro models for studies on diabetes mellitus. All of our results subsidize with information that contribute to a better understanding of the anti-inflammatory properties of the polyphenols present in the P.alata leaves, opening new perspectives to study their effects on inflammatory cells involved in the autoimmune and inflammatory diseases like DM1 Mestrado Clínica Médica Mestra em Ciências FAPESP 2013/25256-8 CAPES

The immune system is mainly responsible for protecting the organism against agents that may interfere in its homeostasis. Thus, understand how this system develops and operates is very important, for create new therapies to assist this system in its operation, such as its failure. In domestic dogs, few studies show how actually occurs the development, maturation and functioning of the immune system. Therefore, this study demonstrates the development and possible activation of it on dog fetus from late gestational period by in situ and microscopic analyzes.

Objective To study the inflammatory profile and genes involved in the response to bacterial infections in women who developed spontaneous abortion in the presence of Ureaplasma parvum. Design Cross-sectional study. Setting A maternal and child referral center. Patient(s) Eighty-nine women with spontaneous abortion and 20 women with normal vaginal delivery (control group) were studied. Intervention(s) Samples of biopsied placental tissue were collected for Mollicutes detection. Main Outcome Measure(s) The samples were subjected to histologic analysis, immunohistochemical evaluation for macrophages and lymphocytes, cytokine quantification, and quantitative polymerase chain reaction array to evaluate the expression of 84 genes related to the innate and adaptive immune responses. Result(s) The presence of U. parvum in the abortion group was positively associated with the influx of polymorphonuclear cells in the placental tissue and increased concentrations of interleukin-6 and interleukin-12p70. U. parvum caused downregulation of genes involved in the immune response, such as attraction of immune cells, activation of an inflammatory response, T-helper cell 17 response activation, and activation of the complement system at the beginning and end of pregnancy. Conclusion The direct action of U. parvum on placental tissue altered the gestational tolerogenic state, reducing the immune response against pathogens and activating the extrinsic apoptotic pathway, causing spontaneous abortion.

Background: In spite of the importance of the use of gnotobiotic mice for human fecal transfer, colonization efficiency and immune stimulation after human microbiota inoculation in mice are poorly studied compared to mouse microbiota inoculation. We tested the colonization efficiency and immune responses in mice bred for one additional generation after inoculating the parent generation with either a human (HM) or a mouse microbiota (MM). Furthermore, we tested if colonization efficiency and immune stimulation could be improved in HM-colonized mice by dietary approaches: if these were fed a diet closer to the human diet either in its sources of animal fat and protein [the “animal source” (AS) diet] or in its proportions of macronutrients from the normal sources of a mouse diet [the “human profile” (HP) diet]. Results: Although significantly lower in mice with a human microbiota (30–40% vs. 61–70%) the colonization efficiency was significantly higher in HM mice fed the HP diet (40%), and in MM mice fed AS (70%). The microbiota of mice fed HP was comparable to the microbiota of mice fed a standard rodent chow, while the microbiota of mice fed the animal source diet (AS) clustered separately. Mice inoculated with mouse fecal matter had significantly more CD4+ T cells and Cd4 expression and significantly fewer regulatory T cells (Tregs) and FoxP3 expression than human microbiota inoculated mice, but cell proportions differences were mostly apparent between mice fed the AS diet. Mice fed the HP diet had significantly higher expression of Cd8a. Conclusion: It is concluded that a diet with a humanized profile could support the establishment of a human microbiota in mice, which will, however, still elicit a lower colonization efficiency compared to mice inoculated with a mouse microbiota.

SUMMARY OBJECTIVE The present study aimed to investigate the role of neutrophil/lymphocyte ratio (NLR), an inflammation marker, complete blood count, and biochemical parameters in the diagnosis of COVID-19. METHODS A total of 80 patients who had been hospitalized in the internal medicine clinic were enrolled in the study. The cases were allocated into two groups, i.e., COVID (+) and (-), based on real-time reverse transcription-polymerase chain reaction. The demographic, clinical, and laboratory [NLR, platelet/lymphocyte ratio (PLR), complete blood count, biochemistry, and serology] data of the patients were retrospectively obtained from the hospital data management system. RESULTS NLR and fever levels were found to be higher in COVID-19 (+) cases (P=0.021, P=0.001, respectively). There was no difference between males and females with regard to COVID-19 positivity (P=0.527). Total bilirubin levels were found to be lower in COVID-19 (+) cases (P=0.040). When the ROC analysis was carried out for NLR in COVID-19 (+) cases, the AUC value was found to be 0.660 (P=0.021), sensitivity as 69.01 %, specificity as 65.40 %, LR+: 1.98 and LR- : 0.48, PPV: 80.43, and NPV: 50.00, when the NLR was ≥2.4. The risk of COVID-19 was found to be 20.3-fold greater when NLR was ≥ 2.4 in the logistic regression (P=0.007). CONCLUSION NLR is an independent predictor for the diagnosis of COVID-19. We also found that fever and total bilirubin measurements could be useful for the diagnosis of COVID-19 in this population. RESUMO OBJETIVO O objetivo do presente estudo foi investigar o papel da razão neutrófilos/linfócitos (RNL), um marcador de inflamação, hemograma completo e parâmetros bioquímicos no diagnóstico de COVID-19. MÉTODOS Um total de 80 pacientes internados na clínica médica foram incluídos no estudo. Os casos foram alocados em dois grupos, COVID (+) e (-), de acordo com a reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real. Os dados demográficos, clínicos e laboratoriais [NLR, relação plaquetas / linfócitos (PLR), hemograma completo, bioquímica e sorologia]) dos pacientes foram obtidos retrospectivamente no sistema de gerenciamento de dados hospitalares. RESULTADOS Os níveis de NLR e febre foram maiores nos casos de COVID-19 (+) (P = 0,021, P = 0,001,respectivamente). Não houve diferença entre homens e mulheres em relação à positividade para COVID-19 (P = 0,527). Os níveis totais de bilirrubina foram menores nos casos de COVID-19 (+) (P = 0,040). Quando a análise ROC foi realizada para NLR nos casos COVID-19 (+), o valor da AUC foi de 0,660 (P = 0,021), sensibilidade 69,01%, especificidade 65,40%, LR +: 1,98 e LR-: 0,48 , PPV: 80,43 e NPV: 50,00 quando o NLR era> 2,4. The risk of COVID-19 was found to be 20.3-fold greater when NLR was ≥ 2.4 in the logistic regression (P=0.007). CONCLUSÃO NLR é um preditor independente para o diagnóstico de COVID-19. Também concluímos que aferições de febre e bilirrubina total podem ser úteis para o diagnóstico de COVID-19 nesta população.

Las plantas de uso en medicina tradicional constituyen una fuente importante de compuestos con actividad inmunomoduladora; entre ellas las especies del genero Baccharis, conocidas popularmente como “Jaguareteka´a” en nuestro pais, son ampliamente empleadas. En este estudio se evaluo la actividad inmunomoduladora de extractos metanolicos de tres especies del genero Baccharis (B. trimera, B. notosergilay B. punctulata) sobre la proliferacion de celulas mononucleares humanas de sangre periferica. Los extractos de las tres especies estudiadas estimularon la proliferacion de las celulas mononucleares. Especificamente, el extracto de B. notosergila estimulo la proliferacion celular a todas las concentraciones probadas (5, 10, 25 y 50 μg/mL), mientras que los extractos de B. trimera y B. punctulata mostraron este efecto a 5 y 10 μg/mL. Ademas, por presentar mayor induccion de la proliferacion, se realizo un fraccionamiento con diferentes solventes del extracto metanolico de B. notosergila y B. punctulata. La fraccion de acetato de etilo de ambos extractos vegetales aumento la proliferacion celular, sugiriendo que compuestos de polaridad media son los responsables de esta actividad. Estos resultados demuestran que los extractos de B. trimera, B. notosergila y B. punctulata poseen actividad inmunomoduladora sobre celulas mononucleares humanas y serviran de base a otros estudios para determinar el o los componentes activos de los extractos sobre el sistema inmune.

Peripheral T cell lymphoma (PTCL) is rare in the United States and Europe, accounting for about 10% of all lymphoma cases. In Latin America, PTCL accounts for about 15–20% of all lymphoma cases (Laurini et al, 2012). Aggressive subtypes of PTCL carry a poor prognosis with a 5‐year overall survival (OS) of approximately 30%, and include unspecified (PTCLU), anaplastic large cell lymphoma (ALCL) and angioimmunoblastic lymphoma, among others (Vose et al, 2008). The International Prognostic Index (IPI) and the Prognostic Index for PTCLU (PIT) scoring systems are powerful risk‐stratification tools that have been validated in patients with aggressive PTCL. The prognosis of aggressive PTCL patients is, however, heterogeneous and further refinement of prognostic tools is needed. The neutrophil‐lymphocyte ratio (NLR) has been shown to be prognostic in patients with a variety of haematological malignancies (Porrata et al, 2010; Marcheselli et al, 2016; Shi et al, 2017). In a previous study, we showed that the NLR was prognostic in patients with advanced stage PTCLU (Beltran et al, 2016). Early stage disease has been associated with a better survival than patients with advanced stage disease. The aim of this study was to evaluate whether the NLR is a prognostic factor in patients with early stage aggressive PTCL.

9 páginas El presente estudio tuvo como objetivo determinar los parámetros hematológicos de cuyes nativos de la zona de Ayacucho, Perú, teniendo en cuenta la edad, sexo y estado fisiológico (preñez, recría, destetado). Se tomaron muestras de sangre y se analizaron manualmente siguiendo los métodos rutinarios de laboratorio. El recuento de glóbulos rojos y los valores de hematocrito y hemoglobina fueron mayores en cuyes de la etapa recría en comparación con cuyes destetados, y en machos en comparación con hembras. Asimismo, el recuento de glóbulos rojos y los valores de hematocrito y hemoglobina de hembras preñadas fueron similares a los valores de cuyes de recría. En la fórmula leucocitaria, los linfocitos fueron los de mayor proporción, seguidos de los neutrófilos. Los valores de referencia reportados en los diferentes grupos etarios y estado fisiológico, permitirá la toma de mejores decisiones clínicas. Resumen. Abstract. Introducción. Materiales y métodos. Resultados y discusión. Conclusiones. Literatura citada.

BackgroundPrevious data have reported that the growth of established tumors may be facilitated by postsepsis disorder through changes in the microenvironment and immune dysfunction. However, the influence of postsepsis disorder in initial carcinogenesis remains elusive.MethodsIn the present work, the effect of postsepsis on inflammation-induced early carcinogenesis was evaluated in an experimental model of colitis-associated colorectal cancer (CAC). We also analyzed the frequency and role of intestinal T regulatory cells (Treg) in CAC carcinogenesis.ResultsThe colitis grade and the tumor development rate were evaluated postmortem or in vivo through serial colonoscopies. Sepsis-surviving mice (SSM) presented with a lower colonic DNA damage, polyp incidence, reduced tumor load, and milder colitis than their sham-operated counterparts. Ablating Treg led to restoration of the ability to develop colitis and tumor polyps in the SSM, in a similar fashion to that in the sham-operated mice. On the other hand, the growth of subcutaneously inoculated MC38luc colorectal cancer cells or previously established chemical CAC tumors was increased in SSM.ConclusionOur results provide evidence that postsepsis disorder has a dual effect in cancer development, inhibiting inflammation-induced early carcinogenesis in a Treg-dependent manner, while increasing the growth of previously established tumors.

El sistema inmune (SI) es el principal encargado de mantener la homeostasis del organismo frente a amenazas externas y también internas. Se conoce como inmunosenescencia al proceso de deterioro gradual del SI con el envejecimiento. Este proceso está relacionado con la aparición de patologías de diversidad etiológica y una decadencia del estado de salud. La práctica de ejercicio físico (EF) ejerce una influencia sobre muchos procesos fisiológicos de nuestro organismo. A lo largo de los últimos años muchos investigadores han indagado en la relación evidente que existe entre EF y SI. El objeto de este trabajo ha sido realizar una profunda búsqueda en la bibliografía científica que evidenciara esta conexión. La información procesada se ha organizado para facilitar su entendimiento en tres apartados: (1) efectos del EF sobre células inmunes, destacando los linfocitos, (2) impacto en la expresión de citoquinas pro y antiinflamatorias más importantes y (3) influencia en la liberación de inmunoglobulinas (Ig), principalmente de IgA en saliva. De forma general se puede afirmar que el EF agudo e intenso conlleva un impacto negativo sobre el SI, lo que conduce a un estado de deficiencia inmunológica denominado “ventana abierta” que se extiende durante las horas posteriores a la finalización del ejercicio y aumenta el riesgo de infecciones, especialmente respiratorias. Por el contrario, la literatura defiende que el EF moderado y regular tiene efectos beneficiosos sobre la función inmune. Por último, se ha llevado a cabo una revisión de las publicaciones existentes acerca de la influencia del EF en la infección por SARS-CoV-2 debido a la importancia de la pandemia por COVID-19 en la actualidad. Universidad de Sevilla. Grado en Farmacia

The essential branched chain amino acids (BCAAs) valine, leucine, and isoleucine, are widely studied because of their effects on immunity and metabolism. Mesenchymal stem cells (MSCs) are a type of cell also studied due to their immunomodulatory properties. Since both BCAAs and MSCs have immunomodulatory capacity, the objective of this study was to evaluate the influence of BCAAs on some immunomodulatory aspects of MSCs.MSCs were cultivated in BCAA-supplemented media to evaluate metabolic activity, including cell cycle, proliferative nuclear cell antigen, peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha, avian myelocytomatosis viral oncogene homolog, peroxisome proliferator activated receptor gamma, nuclear factor kappa B (NFкB), and signal transducers and activators of transcription 3 (STAT-3) expression. Additionally, some inflammatory mediators' synthesis, such as interleukin (IL) 1-beta, IL-10, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, transforming growth factor beta, nitric oxide, and prostaglandin ESupplementation with BCAA led not only to increased MSC proliferation with more cells in the S, G2, and M cycle phases, but also to increased metabolic activity. BCAA supplementation also altered the immunomodulatory capacity of MSCs by decreasing the p-NFкB/NFкB and increasing the p-STAT-3/STAT-3 gene expression ratios, in addition to increasing synthesis of the antiinflammatory mediators transforming growth factor beta and prostaglandin EBCAA supplementation affected some immunoregulatory aspects of MSCs.

La enfermedad celíaca es un trastorno que cada día afecta a más población siendo su diagnóstico complicado y poco concluyente. El linfograma intraepitelial es una técnica avanzada que demuestra la existencia de esta enfermedad, pero no puede aplicarse en aquellos hospitales que no cuentan con los equipos pertinentes para realizarla, ya que es necesario que se lleve a cabo transcurridas pocas horas tras la extracción de la muestra del paciente. Además, dicha técnica requiere del acceso a un citómetro de flujo que no siempre se encuentra disponible en los hospitales. Por ello, en este trabajo se propone la criopreservación del tejido intestinal como un método de ampliación de esta técnica, para que pueda efectuarse en mayor número de centros y mejorar así el diagnóstico de esta enfermedad y consecuentemente, la calidad de vida de los pacientes., Celiac disease is a disorder that is affecting more and more people every day, being its diagnosis complicated and inconclusive. The intraepithelial lymphogram is an advanced technique to prove the existence of this disease, but it cannot be applied in those hospitals that do not have the relevant equipment to perform it, since it must be performed within a few hours after the extraction of the sample from the patient. Furthermore, this technique requires access to a flow cytometer that is not always available in all hospitals. Therefore, this work proposes the cryopreservation of intestinal tissue as a method to extend this technique, so that it can be performed in more centers and thus improve the diagnosis of this disease and consequently, the quality of life of patients., Grado en Química

Summary Objective To investigate the relationship between tumor characteristics and the preoperative counts of immune cells in peripheral blood test in glioma patients. Methods We included 260 WHO grades II‐IV patients who had preoperative peripheral blood test result from Sanbo hospital as training set. The 66 patients from Tiantan hospital was obtained for validation. RNA sequencing data from CGGA and TCGA datasets were used to evaluate the features of neutrophil subtype and lymphocyte subtype in glioma. Results We revealed that the count of preoperative lymphocytes, eosinophils and neutrophils were associated with glioma grades. Neutrophil‐to‐lymphocyte ratio (NLR)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. A cromoblastomicose (CBM) é uma micose subcutânea, crônica, de distribuição cosmopolita, causada por vários fungos demáceos, pigmentados e dimórficos. Pacientes com a doença ainda são tidos como desafio terapêutico, principalmente devido à sua natureza recalcitrante. Tendo em vista a persistência do fungo no tecido e a cronicidade das lesões, a ativação do sistema imunológico do hospedeiro apresenta grande relevância nessa micose. Após infecção com diferentes formas do fungo Fonsecaea pedrosoi (conídios, hifas e células muriformes) isoladamente foi observado manifestações distintas da CBM murina experimental de modo que infecção com células muriformes promoveu o estabelecimento de doença mais duradoura em comparação à infecção com as demais formas do fungo. Ademais, foi visto que a presença de hifas e, principalmente, de células muriformes na lesão, mas não de conídios, está relacionada com alta produção de citocinas pro-inflamatórias durante o estabelecimento da CBM experimental. Sequenciamento de alto desempenho do RNA (RNA-seq) de macrófagos recém-migrados para o peritônio em co-cultivo com conídios ou células muriformes do fungo mostraram que a interação com células muriformes, mas não com conídios, acarreta em intensa regulação positiva de genes relacionados com a resposta inflamatória do hospedeiro repercutindo em alta produção de citocinas pró-inflamatórias, de modo que o estabelecimento de inflamação exacerbada foi correlacionado com a persistência do fungo na lesão. Mecanismos efetores e a expressão de genes importantes na ativação da resposta imune adaptativa estão inibidos na interação com as formas do fungo. Análise das subpopulações de linfócitos T no linfonodo drenante e no sítio de infecção no curso da CBM murina experimental por citometria de fluxo mostraram polarização de linfócitos T com perfil regulatório no linfonodo poplíteo ao passo que no coxim plantar foi observada a predominância de Th17 nos estágios iniciais da doença, sendo sucedida por uma polarização Th1 nos estágios mais tardios, relacionados com a remissão da doença. Ensaios in vivo de neutralização de IL-17A e IFN-γ obstaram o processo de eliminação do fungo no curso da doença. De modo semelhante, animais dectina-2 KO, os quais apresentaram redução na população de Th17 no curso da doença, mostrou redução da carga fúngica prejudicada nos primeiros 15 dias de infecção sem, contudo, afetar a resolução da doença. Por fim, depleção in vivo de células CD25+, a qual leva à redução de células Treg presentes no linfodo drenante, repercutiu em maior redução da carga fúngica nos primeiros 15 dias de infecção, todavia se opos ao processo de remissão da doença observada no modelo experimental murino. Assim, de modo geral, o presente trabalho traz novos elementos na compreensão da imunopatologia da doença, de forma que trabalhos futuros envolvendo a imunomodulação da resposta do hospedeiro para aquela mais efetiva pode representar uma estratégia promissora no tratamento, não só da CBM, como das demais micoses. Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic worldwide subcutaneous mycosis, caused by several dimorphic, pigmented dematiaceous fungi. Patients with the disease are still considered as therapeutic challenge, mainly because of its recalcitrant nature. Due to fungal persistence in the tissue and lesions chronicity, the immune system activation in the host is highly relevant in this mycosis. After infection with different Fonsecaea pedrosoi fungal forms alone (conidia, hyphae and muriform cells), it was observed distinct manifestations of experimental murine CBM so that infection with muriformes cells promoted the establishment of longer lasting disease compared to infection with other fungal forms. Moreover, the presence of hyphae and especially muriformes cells in skin lesions, but no conidia, is related with high production of pro-inflammatory cytokines during the establishment of experimental CBM. High throughput RNA sequencing (RNA-seq) of Thioglycollate-elicited peritoneal macrophages co-cultivated with conidia or muriformes fungal cells showed that the interaction with muriformes cells, but not with conidia, results in strong upregulation of genes related to inflammatory response leading to a high production of proinflammatory cytokines, while exacerbated inflammation was correlated with the persistence of the fungus on the lesion. Effector mechanisms and the expression of genes important to adaptive immune response activation are inhibited in the interaction with the fungal cells. Analysis of T lymphocyte subpopulations in draining lymph node and in the site of infection during the course of experimental CBM by flow cytometry showed polarization of T lymphocytes with regulatory status in the popliteal lymph node while in the footpad was observed predominance of Th17 in the early stages of disease, being succeeded by Th1 popularization in the later stages, which is associated with disease remission. In vivo analysis with IL-17A and IFN-γ neutralization hindered fungal cell elimination in the course of the disease. Similarly, dectin-2 KO animals, Th17 contraction in the course of the disease showed fungal burden impairment in the first 15 days of infection, but did not affected the disease resolution. Finally, in vivo depletion of CD25+ cells, which leads to reduction of Treg cells in the draining lymph node, reflected in greater reduction in fungal burden in the first 15 days of infection, however it opposes to disease remission observed in the experimental CBM. Thus, in general, this study brings new elements in the understanding of the immunopathology of CBM, so that future work involving immunomodulation of the host response to a more effective pattern can represent a promising strategy for the treatment, not only of CBM, but to other mycoses as well.

Fil: Cao, Qiuhua. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Cao, Qiuhua. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Gao, Xinghua. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Gao, Xinghua. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Lin, Yanting. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Lin, Yanting. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Yue, Chongxiu. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Yue, Chongxiu. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Wang, Yue. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Wang, Yue. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Quan, Fei. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Quan, Fei. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Zhang, Zixuan. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Zhang, Zixuan. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Liu, Xiaoxuan. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Liu, Xiaoxuan. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Lu, Yuan.China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Lu, Yuan. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Zhan, Yanling. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Zhan, Yanling. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Yang, Hongbao. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Yang, Hongbao. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Li, Xianjing. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Li, Xianjing. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Fil: Qin, Di. Nanjing sport institute. School of Sports and Health; China Fil: Birnbaumer, Lutz. National Institute of Environmental Health Sciences. Laboratory of Neurobiology; Estados Unidos Fil: Birnbaumer, Lutz. Pontificia Universidad Católica Argentina. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina Fil: Hao, Kun. China Pharmaceutical University. Key Lab of Drug Metabolism & Pharmacokinetics; China Fil: Yang, Yong. China Pharmaceutical University. State Key Laboratory of Natural Medicines; China Fil: Yang, Yong. China Pharmaceutical University. Center for New Drug Safety Evaluation and Research; China Background: Ulcerative colitis (UC) is a chronic inflammatory gastrointestinal disease, notoriously challenging to treat. Previous studies have found a positive correlation between thymic atrophy and colitis severity. It was, therefore, worthwhile to investigate the effect of thymopentin (TP5), a synthetic pentapeptide corresponding to the active domain of the thymopoietin, on colitis. Methods: Dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis mice were treated with TP5 by subcutaneous injection. Body weight, colon length, colon weight, immune organ index, disease activity index (DAI) score, and the peripheral blood profile were examined. The immune cells of the spleen and colon were analyzed by flow cytometry. Histology was performed on isolated colon tissues for cytokine analysis. Bacterial DNA was extracted from mouse colonic feces to assess the intestinal microbiota. Intestinal lamina propria mononuclear cells (LPMCs), HCT116, CT26, and splenocytes were cultured and treated with TP5. Results: TP5 treatment increased the body weight and colon length, decreased the DAI score, and restored colon architecture of colitic mice. TP5 also decreased the infiltration of immune cells and expression levels of pro-inflammatory cytokines such as IL-6. Importantly, the damaged thymus and compromised lymphocytes in peripheral blood were significantly restored by TP5. Also, the production of IL-22, both in innate and adaptive lymphoid cells, was triggered by TP5. Given the critical role of IL-22 in mucosal host defense, we tested the effect of TP5 on mucus barrier and gut microbiota and found that the number of goblet cells and the level of Mucin-2 expression were restored, and the composition of the gut microbiome was normalized after TP5 treatment. The critical role of IL-22 in the protective effect of TP5 on colitis was further confirmed by administering the anti-IL-22 antibody (αIL-22), which completely abolished the effect of TP5. Furthermore, TP5 significantly increased the expression level of retinoic acid receptor-related orphan receptor γ (RORγt), a transcription factor for IL-22. Consistent with this, RORγt inhibitor abrogated the upregulation of IL-22 induced by TP5. Conclusion: TP5 exerts a protective effect on DSS-induced colitis by triggering the production of IL-22 in both innate and adaptive lymphocytes. This study delineates TP5 as an immunomodulator that may be a potential drug for the treatment of UC.

RESUMENEl factor de bloqueo inducido por progesterona (PIBF) es una proteína inmunomoduladora por medio de la cual la progesterona ejerce varios de sus efectos inmunológicos en diferentes células de alta proliferación, que incluyen desde células embrionarias hasta células tumorales. El PIBF ocasiona un incremento en la síntesis de anticuerpos asimétricos y de citocinas tipo Th2 como las interleucinas (IL) 4, 6 y 10, así como una disminución en la actividad citotóxica de las células NK y en la producción de citocinas tipo Th1, como el factor de necrosis tumoral alfa (TNFα) e IL-12. Lo anterior provoca una reducción en la relación Th1/Th2 que es característica del embarazo sano, lo que tiene como consecuencia un aumento en la inmunidad humoral y una disminución en la inmunidad celular. Estos mecanismos inmunomoduladores tienen como resultado una evasión del sistema inmune de la madre por parte del feto para que el embarazo llegue a término. De manera interesante, diversos estudios sugieren que estos mismos mecanismos son utilizados por las células cancerosas para facilitar la progresión de tumores que presentan sobre-expresión del PIBF.ABSTRACTThe progesterone-induced blocking factor (PIBF) is a protein that mediates the immunomodulatory effects of progesterone in cells with high proliferation rate, including embryonic and tumor cells. PIBF increases the synthesis of asymmetric antibodies and Th2 cytokines such as interleukins (IL) 4, 6 and 10, but decreases NK cells cytotoxic activity and Th1 cytokines such as tumor necrosis factor alpha (TNFα) and IL-12. The former causes a reduction in the rate Th1/Th2 that is distinctive of a healthy pregnancy, which it provokes an increment in humoral immunity as well as a decrease in cellular immunity. These immunomodulatory mechanisms enable the fetus to evade the mother immune system allowing pregnancy proceeds to term. Interestingly, several studies suggest that these same mechanisms are used by cancer cells to facilitate progression of tumors that exhibit overexpression of PIBF.

ResumoJustificativa e objetivoDentre as muitas alterações causadas por uma ferida cirúrgica, uma das menos estudadas é a imunossupressão pós‐operatória. Esse fenômeno é uma causa importante das complicações infecciosas relacionadas à cirurgia, como infecção do sítio cirúrgico ou pneumonia nosocomial. Um dos mecanismos que levam à imunossupressão pós‐operatória é a apoptose de células imunológicas. Durante a cirurgia, a anestesia se destina a minimizar as alterações prejudiciais e manter a homeostase perioperatória. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da técnica anestésica usada para artroplastia total de joelho sobre a apoptose em linfócitos de sangue periférico no pós‐operatório.MétodosTrinta e quatro pacientes submetidos à artroplastia total primária de joelho foram randomicamente designados para dois protocolos de anestesia regional: raquianestesia e bloqueio combinado raqui‐peridural. Onze pacientes submetidos à artroplastia total do joelho sob anestesia geral formaram o grupo controle. Antes da cirurgia, logo após a cirurgia, durante o primeiro dia de pós‐operatório e sete dias após a cirurgia, amostras de sangue venoso foram colhidas e o estado imunológico do paciente foi avaliado com o uso de flow cysts 87 m, juntamente com apoptose de linfócitos com o uso de microscopia de fluorescência.ResultadosApoptose em linfócitos de sangue periférico foi observada imediatamente no pós‐operatório e acompanhada por uma redução do número de células T e B. Não houve diferença significativa no número de linfócitos apoptóticos de acordo com o protocolo anestésico. Alterações no número de células T CD3/8 e no número de linfócitos apoptóticos foram observadas no sétimo dia após a cirurgia.ConclusãoApoptose em linfócitos de sangue periférico é um evento precoce no período pós‐operatório que dura até sete dias e não é afetado pela escolha da técnica anestésica.AbstractBackgroundAmong the many changes caused by a surgical insult one of the least studied is postoperative immunosuppression. This phenomenon is an important cause of infectious complications of surgery such as surgical site infection or hospital acquired pneumonia. One of the mechanisms leading to postoperative immunosuppression is the apoptosis of immunological cells. Anesthesia during surgery is intended to minimize harmful changes and maintain perioperative homeostasis. The aim of the study was evaluation the effect of the anesthetic technique used for total knee replacement on postoperative peripheral blood lymphocyte apoptosis.Methods34 patients undergoing primary total knee replacement were randomly assigned to two regional anesthetic protocols: spinal anesthesia and combined spinal‐epidural anesthesia. 11 patients undergoing total knee replacement under general anesthesia served as control group. Before surgery, immediately after surgery, during first postoperative day and seven days after the surgery venous blood samples were taken and the immunological status of the patient was assessed with the use of flow cysts 87 m, along with lymphocyte apoptosis using fluorescent microscopy.ResultsPeripheral blood lymphocyte apoptosis was seen immediately in the postoperative period and was accompanied by a decrease of the number of T cells and B cells. There were no significant differences in the number of apoptotic lymphocytes according to the anesthetic protocol. Changes in the number of T CD3/8 cells and the number of apoptotic lymphocytes were seen on the seventh day after surgery.ConclusionPeripheral blood lymphocyte apoptosis is an early event in the postoperative period lasts up to seven days and is not affected by the choice of the anesthetic technique.

Background: Among the many changes caused by a surgical insult one of the least studied is postoperative immunosuppression. This phenomenon is an important cause of infectious complications of surgery such as surgical site infection or hospital acquired pneumonia. One of the mechanisms leading to postoperative immunosuppression is the apoptosis of immunological cells. Anesthesia during surgery is intended to minimize harmful changes and maintain perioperative homeostasis. The aim of the study was evaluation of the effect of the anesthetic technique used for total knee replacement on postoperative peripheral blood lymphocyte apoptosis. Methods: 34 patients undergoing primary total knee replacement were randomly assigned to two regional anesthetic protocols: spinal anesthesia and combined spinal–epidural anesthesia. 11 patients undergoing total knee replacement under general anesthesia served as control group. Before surgery, immediately after surgery, during first postoperative day and seven days after the surgery venous blood samples were taken and the immunological status of the patient was assessed with the use of flow cytometry, along with lymphocyte apoptosis using fluorescent microscopy. Results: Peripheral blood lymphocyte apoptosis was seen immediately in the postoperative period and was accompanied by a decrease of the number of T cells and B cells. There were no significant differences in the number of apoptotic lymphocytes according to the anesthetic protocol. Changes in the number of T CD3/8 cells and the number of apoptotic lymphocytes were seen on the seventh day after surgery. Conclusion: Peripheral blood lymphocyte apoptosis is an early event in the postoperative period that lasts up to seven days and is not affected by the choice of the anesthetic technique. Resumo: Justificativa e objetivo: Dentre as muitas alterações causadas por uma ferida cirúrgica, uma das menos estudadas é a imunossupressão pós-operatória. Esse fenômeno é uma causa importante das complicações infecciosas relacionadas á cirurgia, como infecção do sítio cirúrgico ou pneumonia nosocomial. Um dos mecanismos que levam à imunossupressão pós-operatória é a apoptose de células imunológicas. Durante a cirurgia, a anestesia se destina a minimizar as alterações prejudiciais e manter a homeostase perioperatória. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da técnica anestésica usada para artroplastia total de joelho sobre a apoptose em linfócitos de sangue periférico no pós-operatório. Métodos: 34 pacientes submetidos à artroplastia total primária de joelho foram randomicamente designados para dois protocolos de anestesia regional: raquianestesia e bloqueio combinado raqui-peridural. Onze pacientes submetidos à artroplastia total do joelho sob anestesia geral formaram o grupo controle. Antes da cirurgia, logo após a cirurgia, durante o primeiro dia de pós-operatório e sete dias após a cirurgia, amostras de sangue venoso foram colhidas e o estado imunológico do paciente foi avaliado com o uso de citometria de fluxo, juntamente com apoptose de linfócitos usando microscopia de fluorescência. Resultados: Apoptose em linfócitos de sangue periférico foi observada imediatamente no pós-operatório e acompanhada por uma redução do número de células T e B. Não houve diferença significativa no número de linfócitos apoptóticos de acordo com o protocolo anestésico. Alterações no número de células T CD3/8 e no número de linfócitos apoptóticos foram observadas no sétimo dia após a cirurgia. Conclusão: Apoptose em linfócitos de sangue periférico é um evento precoce no período pós-operatório que dura até sete dias e não é afetado pela escolha da técnica anestésica. Keywords: Total knee replacement, Regional anesthesia, General anesthesia, Lymphocytes, Apoptosis, Palavras-chave: Artroplastia total do joelho, Anestesia regional, Anestesia geral, Linfócitos, Apoptose

[eng] B lymphopoiesis is the result of several cell lineage choices and differentiation steps whose perturbation leads to B cell malignancies. Cellular transitions for B cell generation have been associated with gene activation and silencing by networks of B cell specific transcription factors (TFs) and dynamic changes in DNA methylation. How gene repression is established and which lineage-specific transcriptional repressors are involved during B cell lymphopoiesis is still not totally understood. The Cellular Differentiaion group had previously reported that the transcriptional repressor HDAC7 is highly expressed in B cell progenitors (pro-B cells) and B cell precursors (pre-B cells) but not in myeloid cells such as macrophages. Here, we have demonstrated that HDAC7 is essential for early B cell development and the acquisition of proper B cell identity. There is a block of pro-B to pre-B cell stages transition and a significant increase of cell death rate upon HDAC7 deletion in these populations. We found that HDAC7 represses myeloid and T lymphocyte genes in pro-B cells through specific interaction with the TF MEF2C. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) experiments revealed that HDAC7 is recruited to the promoters and enhancers of lineage inappropriate genes in normal pro-B, leading to their transcriptional silencing. Notably, by using in vivo and in vitro experimental approaches, we found that HDAC7 represses Tet2 in pro-B. On one hand, microarray and RT-qPCR analysis showed that Tet2 expression is up-regulated in pro-B cells from HDAC7-deficient mice. On the other hand, we found that HDAC7 is down-regulated during the conversion of pre-B cells into macrophages and its exogenous expression blocks the up-regulation of Tet2. Similarly to the case of other lineage inappropriate lineage genes, HDAC7 is recruited to the promoter and enhancer of the Tet2 gene in pro-B cells and its absence leads to an increase and a decrease in active and repressive histone marks, respectively. Additionally, we observed that the absence of HDAC7 from pro-B cells results in a significant increase in the percentage of global 5-hydroxymethylation (5-hmC). To definitively prove the role of HDAC7 in 5-hmC, we performed a genome-wide experimental approach. hMeDIP- sequencing experiments revealed an increase in the enrichment of this epigenetic modification at many loci related to lineage inappropriate genes in the absence of HDAC7. Interestingly, we observed 5-hmC enrichment at retrotransposon elements (LINE-1) in HDAC7 deficient pro-B cells, suggesting a potential protector function of HDAC7 against chromatin instability and DNA damage. Additonal results revealed that 5-hmC enrichment at microRNAs and their expression was also regulated by HDAC7. Several miRNAs involved in normal and aberrant hematopoiesis changed their expression levels depending on the presence of HDAC7 in pro-B cells. Finally, we found that HDAC7 is expressed at very low levels in certain hematological malignancies, such as Burkitt lymphoma and B cell acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) cell lines. In fact, induction of HDAC7 expression in these tumoral cells led to the activation of apoptotic processes, reducing significantly their viability, and to the reduction of oncogene c-MYC expression. Importantly, those effects were observed by interaction with the TF MEF2C and independently of the class I HDAC3 function. These results suggest an anti-oncogenic role for HDAC7 in some types of B cell malignancies. Altogether, our results demonstrate that HDAC7 is an essential transcriptional repressor during early B cell development that silences lineage or functionally inappropriate genes at multiple levels. It exerts its function by direct recruitment to target genes through specific TF, by regulating LINE-1 and miRNA expression and by controlling the expression levels of a critical epigenetic regulator such as TET2 demethylase enzyme., [cat] Les proteïnes de la família de desacetilases d’histones de classe IIa (HDACs per les seves sigles en anglès) són repressors transcripcionals amb expressió específica de teixit i juguen un paper essencial en processos de desenvolupament i diferenciació cel·lular. Dins del sistema hematopoètic, la HDAC de classe IIa HDAC7 s’expressa en cèl·lules B, T i NK. Dins del llinatge de les cèl·lules B, HDAC7 s’encarrega de reprimir l’expressió de gens d’altres tipus cel·lulars, com els macròfags i les cèl·lules T. Per tal de dur a terme aquest silenciament, HDAC7 és reclutada als promotors i regions reguladores més allunyades dels seus gens diana mitjançant la interacció amb el factor de transcripció MEF2C. Un dels gens reprimits per HDAC7 en els limfòcits B és l’enzim TET2, el qual s’encarrega de catalitzar l’hidroximetilació (5-hmC) de l’ADN, propiciant la subseqüent desmetilació i activació dels gens. Mitjançant la deleció d’ HDAC7 en cèl·lules B progenitores en un model de ratolí, vam observar un augment de l’expressió i l’activitat de TET2, el qual produïa un augment dels nivells d’hidroximetilació globals de l’ADN, d’hidroximetilació i expressió específica dels gens de llinatges alternatius, d’activitat dels retro-transposons LINE-1 i de l’expressió de microRNAs involucrats en el desenvolupament d’altres llinatges i en tumorogènesi. Pel que fa a la funció de HDAC7 en càncers hematològics, vam observar que aquesta proteïna presenta uns nivells d’expressió molt baixos en alguns tipus de leucèmia i limfoma. Curiosament, la inducció de l’expressió d’HDAC7 en cèl·lules d’aquestes patologies produïa la disminució d’expressió de l’oncogen c-Myc i l’activació de processos apoptòtics. En conjunt, els resultats obtinguts demostren que HDAC7 és un regulador crític i indispensable pel correcte desenvolupament dels limfòcits B i per al manteniment de la seva identitat cel·lular, essent la seva desregulació una causa potencial de transformació cel·lular maligna. Aquesta regulació la realitza a múltiples nivells, incloent el reclutament directe a regions reguladores dels seus gens diana, la modulació indirecte dels nivells de metilació de DNA i la influència sobre els nivells d’expressió de microRNAs. Els descobriments obtinguts amplien les perspectives funcionals de la família de desacetilases d’histones, com HDAC7, el context biològic de cada membre.

Bovine leukemia virus (BLV) is one of the most important virus in dairy cattle. The infection behavior follows what we call the iceberg phenomenon: 60% of infected animals do not show clinical signs; 30% develop persistent lymphocytosis (PL); and the remaining 10%, die due to lymphosarcoma. BLV transmission depends on infected cell exchange and thus, proviral load is determinant. Understanding the mechanisms by which cattle governs the control of viral dissemination will be desirable for designing effective therapeutic or preventive strategies for BLV. The development of high proviral load (HPL) or low proviral load (LPL) might be associated to genetic factors and humoral immune responses, however cellular responses are not fully described. It is known that BLV affects cellular homeostasis: proliferation and apoptosis. It is also known that the BLV tropism is directed towards B lymphocytes, and that lymphocytotic animals have elevated amounts of these cells. Usually, when an animal is infected by BLV, the B markers that increase are CD21, CD5 and CD11b. This increase could be related to the modulation of apoptosis in these cells. This is the first work in which animals infected with BLV are classified according to their proviral load and the subpopulations of B and T lymphocytes are evaluated in terms of their percentage in peripheral blood and its stage of apoptosis and viability. PBMCs from HPL animals proliferated more than LPL and non-infected animals. CD11b+/CD5+ lymphocytes in LPL animals presented greater early and late apoptosis than HPL animals and cells of HPL animals had increased viability than LPL animals. Our results confirm that BLV alters the mechanism of apoptosis and proliferation of infected cells. Fil: Nieto Farías, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Souza, Fernando Nogueira. Universidade de Sao Paulo; Brasil Fil: Lendez, Pamela Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Martinez Cuesta, Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Santos, Kamila Reis. Universidade de Sao Paulo; Brasil Fil: Della Libera, Alice Maria Melville Paiva. Universidade de Sao Paulo; Brasil Fil: Ceriani, Maria Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Dolcini, Guillermina Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina

Introduction: Several theories attempt to explain the pathophysiology of sudden hearing loss. Objective: The objective of this study was to investigate the possible role of inflammation and atherothrombosis in sudden hearing loss patients through the neutrophil-to-lymphocyte ratio and mean platelet volume. Methods: Study design - retrospective cross-sectional historical cohort. This study was conducted on two groups: one with 59 individuals diagnosed with sudden hearing loss, and other with 59 healthy individuals with the same characteristics of gender and age distribution, neutrophil-to-lymphocyte ratio and mean platelet volume levels were measured in patients diagnosed with sudden hearing loss as well as in the control group, and it was verified whether these results interfered for a better or worse prognosis with treatment of sudden deafness. Results: Neutrophil-to-lymphocyte ratio levels are much higher in patients diagnosed with sudden hearing loss compared to the control group. Similarly, mean levels of neutrophil-to-lymphocyte ratio are higher in non-recovered versus recovered patients (p= 0.001). However, we could not find a correlation with mean platelet volume levels (p>. 0.05). Conclusion: Neutrophil-to-lymphocyte ratio is a quick and reliable indicator regarding diagnosis and prognosis of sudden hearing loss; on the other hand, mean platelet volume may be considered a less important indicator in this aspect. © 2015 Associação Brasileira de Otorrinolaringologia e Cirurgia Cérvico-Facial. Introdução: Várias teorias tentam explicar a fisiopatologia da surdez súbita (SS).Objetivo: : O objetivo deste estudo foi investigar o possível papel da inflamação e da aterotrom-bose nos pacientes de SS através da relação neutrófilos/linfócitos (RNL) e volume plaquetáriomédio (VPM).Método: Forma de estudo --- coorte histórica com corte transversal (retrospectivo). Este estudofoi realizado com 59 indivíduos portadores de SS e 59 saudáveis, com as mesmas característi-cas em distribuição de gênero e idade. Os níveis de VPM e RNL foram medidos nos pacientesdiagnosticados com SS e no grupo controle, verificando-se se tais resultados implicavam em ummelhor ou pior prognóstico com o tratamento da surdez súbita.Resultados: Os níveis da RNL são muito mais altos em pacientes com SS, em comparação como grupo controle. De forma semelhante, níveis médios da RNL são mais altos nos pacientes nãorecuperados, em comparação com os recuperados (p = 0,001). Essas diferenças entretanto, nãoforam observadas em relação aos níveis de VPM (p > 0,05).Conclusão: RNL é um indicador rápido e confiável no que diz respeito ao diagnóstico e prognós-tico de SS; por outro lado, VPM pode ser um indicador menos importante neste aspecto.

The mechanisms involved in the symptoms of Sydenham’s chorea (SC) remain obscure. Taking into account the autoreactive antibody-mediated hypothesis of SC pathogenesis, the persistence of chorea may be associated with increased levels of B1 lymphocytes and other lymphocyte subsets. We evaluated lymphocyte subsets, including B1 and T cells, in patients with remitted (RSC) and persistent (PSC) SC by flow cytometry. Our results showed neither difference in the frequency of T and B lymphocytes subpopulations nor in their activation and functional states. These findings undermine the view of PSC as a sustained cytotoxic cellular-mediated condition. Alternative mechanisms may explain the pathogenesis of PSC. Os mecanismos subjacentes aos sintomas da coreia de Sydenham (CS) permanecem desconhecidos. Considerando-se a hipótese de que a patogênese da CS é mediada por anticorpos autorreativos, a persistência da coreia está provavelmente associada a níveis aumentados de linfócitos B1 e outros subtipos de linfócitos. No presente trabalho, foram avaliados subtipos de linfócitos B e T em pacientes com CS em remissão (CSR) e persistente (CSP), por citometria de fluxo. Nossos resultados demonstraram que não há diferença na frequência das subpopulações de linfócitos T e B circulantes e no perfil de ativação e estado funcional dessas células. Esses resultados enfraquecem a hipótese de que a CSP seja uma condição imune sustentada mediada por células citotóxicas. São necessários estudos que investiguem mecanismos alternativos que expliquem a patogênese da CSP.

Summary: Beyond sample curation and basic pathologic characterization, the digitized H&E-stained images of TCGA samples remain underutilized. To highlight this resource, we present mappings of tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) based on H&E images from 13 TCGA tumor types. These TIL maps are derived through computational staining using a convolutional neural network trained to classify patches of images. Affinity propagation revealed local spatial structure in TIL patterns and correlation with overall survival. TIL map structural patterns were grouped using standard histopathological parameters. These patterns are enriched in particular T cell subpopulations derived from molecular measures. TIL densities and spatial structure were differentially enriched among tumor types, immune subtypes, and tumor molecular subtypes, implying that spatial infiltrate state could reflect particular tumor cell aberration states. Obtaining spatial lymphocytic patterns linked to the rich genomic characterization of TCGA samples demonstrates one use for the TCGA image archives with insights into the tumor-immune microenvironment. : Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) were identified from standard pathology cancer images by a deep-learning-derived “computational stain” developed by Saltz et al. They processed 5,202 digital images from 13 cancer types. Resulting TIL maps were correlated with TCGA molecular data, relating TIL content to survival, tumor subtypes, and immune profiles. Keywords: digital pathology, immuno-oncology, machine learning, lymphocytes, tumor microenvironment, deep learning, tumor-infiltrating lymphocytes, artificial intelligence, bioinformatics, computer vision

El virus de la enfermedad de linfocistis (LCDV) infecta tanto a peces marinos como dulceacuícolas, produciendo una patología que supone un grave problema para la acuicultura debido a las pérdidas económicas asociadas a su alta morbilidad. En el presente estudio se ha desarrollado un plásmido recombinante con objeto de ser utilizado como vacuna DNA para limitar la incidencia de dicha enfermedad en el cultivo de dorada (Sparus aurata). Para ello, se clonó el ORF de la proteína principal de la cápside (MCP) del LCDV de dorada (LCDV-Sa) en el plásmido de expresión pcDNA3.1/NT-GFP-TOPO, y se utilizó para transfectar la línea celular de dorada SAF-1. Los resultados muestran la correcta expresión del plásmido vacunal en estas células mediante la detección de GFP por microscopía de fluorescencia e inmunodetección de la MCP viral. Posteriormente, se realizó un experimento de vacunación por inyección intramuscular (0,15 µg/g pez) en doradas juveniles, estudiándose la distribución y expresión del plásmido vacunal. Los análisis de PCR y RT-PCR realizados muestran que la vacuna se distribuye de forma sistémica, expresándose en los diferentes tejidos analizados. También se evaluó la protección conferida por la vacuna frente a la infección por LCDV inyectado intraperitonealmente (105 TCID50/g pez) a los 21 d post-vacunación, analizándose la presencia de genoma viral a los 10 d post-inoculación en peces vacunados y controles. Sólo se detectó el genoma viral en los grupos controles, demostrándose así que existe una protección frente a la infección por LCDV en los peces vacunados. Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech.

This study evaluated the effects of caffeine in combination with high-intensity interval training (HIIT) on sensitivity to glucocorticoids and proliferation of lymphocytes, IL-6 and IL-10 levels and NTPDase, adenosine deaminase (ADA) and acetylcholinesterase (AChE) activity in rat lymphocytes. The animals were divided into groups: control, caffeine 4 mg/kg, caffeine 8 mg/kg, HIIT, HIIT plus caffeine 4 mg/kg and HIIT plus caffeine 8 mg/kg. The rats were trained three times a week for 6 weeks for a total workload 23% of body weight at the end of the experiment. Caffeine was administered orally 30 min before the training session. When lymphocytes were stimulated with phytohaemagglutinin no changes were observed in proliferative response between trained and sedentary animals; however, when caffeine was associated with HIIT an increase in T lymphocyte proliferation and in the sensitivity of lymphocytes to glucocorticoids occurred. ATP and ADP hydrolysis was decreased in the lymphocytes of the animals only trained and caffeine treatment prevented alterations in ATP hydrolysis. HIIT caused an increase in the ADA and AChE activity in lymphocytes and this effect was more pronounced in rats trained and supplemented with caffeine. The level of IL-6 was increased while the level of IL-10 was decreased in trained animals (HIIT) and caffeine was capable of preventing this exercise effect. Our findings suggest that caffeine ingestion attenuates, as least in part, the immune and inflammatory alterations following a prolonged HIIT protocol.

The identification of anti-inflammatory mediators can reveal important targetable molecules capable of counterbalancing Trypanosoma cruzi-induced myocarditis. Composed of Ebi3 and IL-27p28 subunits, IL-27 is produced by myeloid cells and is able to suppress inflammation by inducing IL-10-producing Tr1 cells, thus emerging as a potential candidate to ameliorate cardiac inflammation induced by T. cruzi. Although IL-27 has been extensively characterized as a suppressive cytokine that prevents liver immunopathogenesis after T. cruzi infection, the mechanisms underlying its effects on T. cruzi-induced myocarditis remain largely unknown. Here, wild type (WT) and Ebi3 deficient animals were intraperitoneally infected with trypomastigotes of T. cruzi Y strain and used to evaluate the potential anti-inflammatory properties of Ebi3 during T. cruzi infection. The survival rates of mice were daily recorded, the frequency of inflammatory cells was analyzed by flow cytometry and inflammatory mediators were measured by ELISA, real-time PCR and PCR array. We reported that T. cruzi-induced myocarditis was prevented by Ebi3. Stressors mainly recognized by TLR2 and TLR4 receptors on myeloid cells were essential to trigger IL-27p28 production. In addition, Ebi3 regulated IFN-gamma-mediated myocarditis by promoting an anti-inflammatory environment through IL-10, which was most likely produced by Tr1 cells rather than classical regulatory T cells (Tregs), in the heart tissue of T. cruzi-infected animals. Furthermore, in vivo IFN-gamma blockade ameliorated the host survival without compromising the parasite control in the bloodstream. In humans, IL-27p28 was correlated with cardiac protection during Chagas disease. Patients with mild clinical forms of the disease produced high levels of IL-27p28, whereas lower levels were found in those with severe forms. In addition, polymorphic sites at Ebi3 gene were associated with severe cardiomyopathy in patients with Chagas disease. Collectively, we describe a novel regulatory mechanism where Ebi3 dampens cardiac inflammation by modulating the overproduction of IFN-gamma, the bona fide culprit of Chagas disease cardiomyopathy.

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an X-linked recessive disorder, caused by mutations in the dystrophin gene, affecting 1:3500–5000 boys worldwide. The lack of dystrophin induces degeneration of muscle cells and elicits an immune response characterized by an intensive secretion of pro-inflammatory cytokines. Immunoglobulins modulate the inflammatory response through several mechanisms and have been widely used as an adjuvant therapy for autoimmune diseases. Here we evaluated the effect of immunoglobulin G (IG) injected intraperitoneally in a severely affected double knockout (dko) mouse model for Duchenne muscular dystrophy. The IG dko treated mice were compared regarding activity rates, survival and histopathology with a control untreated group. Additionally, dendritic cells and naive lymphocytes from these two groups and WT mice were obtained to study in vitro the role of the immune system associated to DMD pathophysiology. We show that IG therapy significantly enhances activity rate and lifespan of dko mice. It diminishes muscle tissue inflammation by decreasing the expression of costimulatory molecules MHC, CD86 and CD40 and reducing Th1-related cytokines IFN-γ, IL-1β and TNF-α release. IG therapy dampens the effector immune responses supporting the hypothesis according to which the immune response accelerates DMD progression. As IG therapy is already approved by FDA for treating autoimmune disorders, with less side-effects than currently used glucocorticoids, our results may open a new therapeutic option aiming to improve life quality and lifespan of DMD patients.

Made available in DSpace on 2014-09-30T18:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-01Bitstream added on 2014-10-01T14:04:11Z : No. of bitstreams: 1 S0100-736X2014000400015.pdf: 298562 bytes, checksum: 4b1d3b337ffdf6ddba18726c946eb2cd (MD5) Considerando a importância do uso do sangue do cordão umbilical como fonte potencial de células tronco hematopoiéticas e o uso do suíno doméstico (Sus scrofa) como modelo para pesquisas biomédicas em medicina regenerativa, e por outro lado, visando dar um contributo sobre a quantificação das subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico, objetivou-se quantificar as células CD4+, CD5+ e CD8+ nas amostras de sangue de suínos neonatos. Analisaram-se as amostras do sangue do cordão umbilical e periférico de 48 leitões de linhagem Topigs, provenientes de porcas hígidas, inseminadas artificialmente e de parto natural. Foram coletadas amostras de sangue do cordão umbilical e periférico no momento do nascimento, por meio de venopunção da veia umbilical e seio venoso retro-oftálmico, respectivamente. As quantificações imunofenotípicas de células CD4+, CD5+ e CD8+ foram obtidas por citometria de fluxo. Os valores médios obtidos para as contagens das células CD4+, CD5+ e CD8+ do sangue do cordão umbilical e periférico apresentaram-se inferiores aos reportados para o sangue periférico de suínos adultos, sugerindo um componente imunológico imaturo. A proporção CD4+:CD8+ obtida no sangue do cordão umbilical (3,2±1,2%) e no sangue periférico (3,2±1,7%) ilustrou a predominância dos linfócitos TCD4+ com relação aos TCD8+. A quantidade relativa de células CD4+ e CD8+ no sangue do cordão umbilical e periférico foi de 1,37±0,86% e 1,15±0,57%, respectivamente. Considering the importance of umbilical cord blood as a potential source of stem cell and, on the other hand, the use of the domestic swine (Sus scrofa) as a useful model for biomedical research in regenerative medicine and aiming to contribute about the quantification of lymphocyte subsets in umbilical cord blood and peripheral blood of newborn piglets, this study aimed to quantify CD4+, CD5+ and CD8+ cells from umbilical cord blood and peripheral blood from pigs at term blood samples. Were analyzed samples of the umbilical cord blood and peripheral of 48 piglets of Topigs lineage, from healthy mothers, artificially inseminated and natural birth. Blood samples were collected from the umbilical cord at birth, by the umbilical vein, and peripheral blood by venous sinus retro-ophthalmic. The immunological measurements of CD4+, CD5+ and CD8+ were obtained by flow cytometry. The relative average values for the CD4+, CD5+ e CD8+ counts in umbilical cord blood and peripheral blood of newborn piglets were inferior to those reported for peripheral blood in adult pigs, suggesting immunological immaturity. The ratio CD4+:CD8+ in umbilical cord blood (3.2±1.2%) and peripheral blood (3.2±1.7%) showed a predominance of TCD4+ over TCD8+. The percentage of CD4+ and CD8+ cells was 1.37±0.86% and 1.15±0.57%, respectively, in umbilical cord blood and peripheral blood. University College of Londo Institute of Orthopaedics and Musculoskeletal Science Unesp FCAV Unesp FCAV

Production of IFN-γ3 contributes to host defense against Mycobacterium tuberculosis (Mtb) infection. We previously demonstrated that Signaling lymphocytic activation molecule-associated protein (SAP) expression on cells from tuberculosis (TB) patients was inversely correlated with IFN-γ3 production. Here we first investigated the role of NK, T- A nd B-cell antigen (NTB-A)/SAP pathway in the regulation of Th1 response against Mtb. Upon antigen stimulation, NTB-A phosphorylation rapidly increases and afterwards modulates IFN-γ3 and IL-17 secretion. To sustain a healthy immune system, controlled expansion and contraction of lymphocytes, both during and after an adaptive immune response, is essential. Besides, restimulation-induced cell death (RICD) results in an essential homeostatic mechanism for precluding excess T-cell accumulation and associated immunopathology during the course of certain infections. Accordingly, we found that the NTB-A/SAP pathway was required for RICD during active tuberculosis. In low responder (LR) TB patients, impaired RICD was associated with diminished FASL levels, IL-2 production and CD25high expression after cell-restimulation. Interestingly, we next observed that SAP mediated the recruitment of the Src-related kinase FYNT, only in T cells from LR TB patients that were resistant to RICD. Together, we showed that the NTB-A/SAP pathway regulates T-cell activation and RICD during human TB. Moreover, the NTB-A/SAP/FYNT axis promotes polarization to an unfavorable Th2-phenotype. Fil: Hernández del Pino, Rodrigo Emanuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones y Transferencia del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires. Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigaciones y Transferencia del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina Fil: Pellegrini, Joaquín Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina Fil: Rovetta, Ana Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina Fil: Peña, Delfina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina Fil: Alvarez, Guadalupe Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones y Transferencia del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires. Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigaciones y Transferencia del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina Fil: Rolandelli, Agustin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina Fil: Musella, Rosa María. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz"; Argentina Fil: Palmero, Domingo J.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz"; Argentina Fil: Malbrán, Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Hospital Británico de Buenos Aires; Argentina Fil: Pasquinelli, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina Fil: García, Verónica Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina

Prolonged stress hampers immune function and lessens disease resistance of fish, causing economic losses. Attention is thus been centered in the study of fish immunology. The main ‘in vivoʼ models used in immunological studies are: stimulation of immune response (by immunostimulant molecules); induction of inflammation; induction of immunosuppression by chronic stress; or administration of drugs. This trial aimed at evaluating existing protocols for immunosuppression by drugs in fish, adapted to slow release implants model, using hydrogenated vegetable fat (HVF), with the intention of set a controlled immunodeficiency state model for advanced studies. The implant model was not efficient in reducing the immune response in a controlled manner. Evidence of self, down-regulation in fish immune system was found in implanted fish, what should be further investigated using molecular tools.