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The resolution of inflammation is an active process, guided by specialized pro-resolution lipid mediators (SPMs). These mediators originate from polyunsaturated fatty acids, such as omega-3. Sufficient evidence suggests that the beneficial effects attributed to omega-3 are, at least in part, the result of the immunomodulatory action of the SPMs, which act systemically by overcoming inflammation and repairing tissue damage, without suppressing the immune response. Recent studies suggest that an imbalance in the synthesis and/or activity of these compounds may be associated with the pathogenesis of several inflammatory conditions, such as inflammatory bowel disease (IBD). Thus, this review highlights the advances made in recent years with regard to the endo-genous synthesis and the biological role of lipoxins, resolvins, protectins, and maresins, as well as their precursors, in the regulation of inflammation; and provides an update on the participation of these mediators in the development and evolution of IBD and the therapeutic approaches that these immunomodulating substances are involved in this context.

Orientador: Licio Augusto Velloso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, FAculdade de Ciencias Medicas Resumo: O consumo de dietas ricas em gordura é o mais importante fator ambiental que contribui para o aumento da prevalência de obesidade na sociedade moderna. Em modelos animais com obesidade, induzida por dieta, a ativação da resposta inflamatória no hipotálamo produz resistência molecular e funcional aos hormônios anorexigênicos insulina e leptina, o que resulta em defeitos no controle da ingestão alimentar e do gasto energético. Para explorar a hipótese de que ácidos graxos podem desencadear resposta inflamatória e aumentar a expressão de citocinas no hipotálamo por induzir a ativação de TLR2/4 e/ou estresse de RE, ratos foram canulados e submetidos ao tratamento, por via intracerebroventricular (icv), com ácido graxo saturado e em seguida o extrato de proteínas hipotalâmicas foi obtido para determinação da expressão de proteínas por imunoblot. A localização de marcadores inflamatórios foi obtida por imunohistoquímica. Observou-se que ácidos graxos saturados de cadeia longa ativam predominantemente TLR4, o que determina não só a indução da expressão local de citocinas, mas também promove estresse de RE. Ratos alimentados com dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos monoinsaturados não desenvolveram resistência hipotalâmica à leptina, enquanto que a mutação com perda da função do TLR4 e a inibição imunofarmacológica do TLR4 protegeu os camundongos da obesidade induzida por dieta. O TLR4 age como um alvo molecular predominante para ácidos graxos saturados no hipotálamo, o que desencadea resposta inflamatória e resistência a sinais anorexigênicos. Assim, conclui-se que ácidos graxos saturados ativam as vias de TLR2/TLR4 e estresse de RE em hipotálamo sendo a ativação mais significativa para TLR4, o que, por sua vez, determina a indução de estresse de RE. O TLR4 é um importante mediador da disfunção hipotalâmica durante o desenvolvimento da obesidade, como esse é um fenômeno importante durante a instalação da obesidade, esse receptor é um alvo terapêutico atrativo para tal condição epidêmica Abstract: In animal models of diet-induced obesity, the activation of an inflammatory response in the hypothalamus produces molecular and functional resistance to the anorexigenic hormones insulin and leptin. The primary events triggered by dietary fats that ultimately lead to hypothalamic cytokine expression and inflammatory signaling are unknown. Here, we test the hypothesis that dietary fats act through the activation of Toll-like receptors 2/4 and endoplasmic reticulum stress to induce cytokine expression in the hypothalamus of rodents. Rats were treated icv with different types of fatty acids and hypothalamic protein extracts were obtained for determination of inflammatory and endoplasmic reticulum stress protein expression by immunoblot. Localization of inflammatory markers were performed by immunohistochemistry. Long-chain saturated fatty acids activate predominantly Toll-like receptor 4 signaling, which determines not only the induction of local cytokine expression but also promotes endoplasmic reticulum stress. Rats fed on a monounsaturated fat-rich diet do not develop hypothalamic leptin resistance, while Toll-like receptor 4 loss-of-function mutation and immunopharmacological inhibition of Toll-like receptor 4 protects mice from diet induced obesity. Toll-like receptor 4 acts as a predominant molecular target for saturated fatty acids in the hypothalamus, triggering the intracellular signaling network that induces an inflammatory response and determines the resistance to anorexigenic signals Doutorado Ciências Básicas Doutor em Clínica Médica

Crohn’s disease (CD) is a chronic inflammatory disorder, characterized by cytokine imbalance and transcription signaling pathways activation. In addition, the increase of mesenteric adipose tissue (MAT) near the affected intestinal area is a hallmark of CD. Therefore, we evaluated the transcription signaling pathways and cytokines expression in intestinal mucosa and MAT of active CD patients. Ten patients with ileocecal CD and eight with noninflammatory diseases were studied. The biopsies of intestinal mucosa and MAT were snap-frozen and protein expression was determined by immunoblotting. RNA levels were measured by qPCR. The pIkB/IkB ratio and TNFa level were significantly higher in intestinal mucosa of CD when compared to controls. However, STAT1 expression was similar between intestinal mucosa of CD and controls. Considering the MAT, the pIkB/IkB ratio was significantly lower and the anti-inflammatory cytokine IL10 was significantly higher in CD when compared to controls. Finally, the protein content of pSTAT1 was higher in MAT of CD compared to controls. These findings reinforce the predominance of the proinflammatory NF-kB pathway in CD intestinal mucosa. For the first time, we showed the activation of STAT1 pathway in MAT of CD patients, which may help to understand the physiopathology of this immune mediated disease FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Aberto

Orientadores: Raquel Franco Leal, Marciane Milanski Ferreira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A doença de Crohn (DC) é caracterizada por uma inflamação de etiologia ainda desconhecida. A hipertrofia do tecido adiposo mesentérico reflete a atividade da doença, uma vez que o mesmo recobre toda a área acometida pela doença. Além disso, os adipócitos sintetizam leptina e adiponectina, adipocinas com ações pró e antiinflamatórias. Objetivo: Avaliar as concentrações séricas de leptina e adiponectina na DC em remissão e em atividade, como também a expressão tecidual de adiponectina na DC em atividade. Casuística e Método: Dezesseis pacientes com DC ileocecal atendidos no ambulatório de Doenças Inflamatórias Intestinais da Universidade Estadual de Campinas participaram do estudo. A análise de leptina e adiponectina foi realizada por ELISA nos pacientes com DC em atividade (grupo DCAT), DC em remissão (grupo DCR) e seis controles saudáveis. Também dez pacientes com DC ileocecal em atividade (grupo DCG) e oito controles (grupo CG) com doença não inflamatória participaram do estudo, para avaliação da adiponectina tecidual. As biópsias foram armazenadas em nitrogênio líquido, e a expressão de adiponectina foi realizada por imunoblot de extrato protéico total. Resultados: Os níveis de proteína C reativa foram maiores no grupo DCAT quando comparado aos demais grupos (p0,05). Os níveis de colesterol total e pré-albumina foram menores no grupo DCAT (p0.05). Serum total cholesterol and pre-albumin were lower in the DCAT group when compared to controls (p

Orientador: Marciane Milanski Ferreira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: O hipotálamo mediobasal é conhecido como o local primário que coordena o balanço entre a ingestão alimentar e o gasto energético. Nesse contexto, dietas com alto conteúdo de ácidos graxos saturados são apontadas como fatores dietéticos importantes responsáveis pelo desenvolvimento da obesidade. Dados recentes demonstraram que a autofagia, um processo que regula a homeostase celular por degradar organelas e proteínas disfuncionais, é crucial para a manutenção da funcionalidade de neurônios hipotalâmicos AgRP e POMC, que por sua vez, são responsáveis por coordenar o balanço energético corporal. Nesse trabalho, avaliamos a distribuição e o conteúdo de proteínas da maquinaria da autofagia em um modelo animal de obesidade induzida por dieta hiperlipídica com 8 ou 16 semanas de dieta e também em resposta a injeções intracerebroventriculares de ácido graxo esteárico. Demonstramos que a exposição crônica à dieta hiperlipídica levou ao aumento da expressão de marcadores inflamatórios e diminuição de autofagia. Além disso, o tratamento intracerebroventricular com ácido esteárico parece ser capaz de diminuir a autofagia em hipotálamo, sugerindo que ácidos graxos saturados podem ser os responsáveis pela diminuição da autofagia encontrada nos animais obesos. Por fim, a indução de autofagia em animais obesos com rapamicina foi capaz de melhorar a homeostase da glicose e reverter parâmetros inflamatórios e metabólicos, sem alterar o peso e a ingestão alimentar dos animais. Entender os mecanismos celulares e moleculares destes processos é crucial para identificar novos alvos terapêuticos para a obesidade Abstract: The mediobasal hypothalamus is known as the primary site which coordinates the balance between food ingestion and energy expenditure. In this context, diets with high content of saturated fatty acids are pointed as the main diet factor responsible for the development of obesity. Recent data have shown that autophagy, a process which regulates cellular homeostasis by degrading dysfunctional proteins and organelles, is crucial to maintain the functionality of hypothalamic AgRP and POMC neurons, which in turn are responsible for coordinate body energy homeostasis. In this study we evaluated the hypothalamic distribution and content of autophagy's machinery proteins in an animal model of diet-induced obesity at 8 or 16 weeks of high-fat diet and in response to intracerebroventricular injections of a saturated fatty acid. We demonstrate that chronic exposure to a high-fat diet can lead to an increased expression of inflammatory markers and downregulation of autophagy. Also, intracerebroventricular treatment with stearic acid appears to contribute to the decrease of hypothalamic autophagy, suggesting that saturated fatty acids can contribute to the downregulation of autophagy found in obese mice. Finally, induction of autophagy in obese mice with rapamycin was able to improved glucose homeostasis and reverse inflammatory and apoptosis markers, the main mechanisms involving dysregulation of energy balance related to hypothalamic neurons, while no weight loss was observed during the treatment Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Orientadores: Lício Augusto Velloso, Marciane Milanski Ferreira Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Dentre os fatores ambientais que contribuem para o desenvolvimento de obesidade, o consumo de dietas ricas em ácidos graxos saturados desempenha o papel mais importante. Estudos recentes realizados por vários grupos, inclusive o nosso, revelam que ácidos graxos saturados presentes na dieta levam ao desenvolvimento de resistência hipotalâmica à ação dos hormônios leptina e insulina, fenômeno este fundamental para que ocorra a quebra no equilíbrio entre ingestão e gasto calórico. Até o momento caracterizaram-se dois mecanismos moleculares potencialmente envolvidos na iniciação do processo que resulta na disfunção hipotalâmica na obesidade, a ativação de TLR4 e a indução de estresse de retículo endoplasmático, ambos levando a uma resposta inflamatória local e, eventualmente, a apoptose neuronal. Estudos recentes têm revelado que frente a situações que oferecem risco de dano celular, ativa-se um mecanismo de controle de tráfico e degradação protéica chamado sistema ubiquitina-proteassoma (UPS). O acúmulo de agregados protéicos positivos para ubiquitina pode gerar toxicidade celular e regular a plasticidade neuronal. Também a modulação de componentes do UPS pode gerar neurodegeneração hipotalâmica e fenótipo obeso em animais experimentais. Neste estudo aventamos a hipótese que durante períodos prolongados de obesidade a ativação anômala do UPS contribuiria para a perpetuação do quadro de obesidade. De fato, os resultados obtidos revelam que roedores com predisposição para a obesidade induzida por dieta mantém, a princípio, a capacidade de regular adequadamente a UPS no hipotálamo. Com o passar do tempo esta capacidade é perdida resultando numa maior dificuldade para perda de peso frente à redução do aporte calórico. Roedores com mutações que os protegem da inflamação, não apresentam distúrbio funcional do UPS quando expostos a dieta rica em ácidos graxos e, são também protegidos da obesidade. Portanto, o defeito funcional do UPS no hipotálamo no curso de obesidade prolongada, constitui-se num fator importante contribuindo para a refratariedade ao tratamento e perpetuação da doença Abstract: The consumption of high-fat diets, especially those rich in saturated fatty acids, plays the most important role in the development of obesity. Recent studies by several groups, including ours, have shown that dietary long-chain saturated fatty acids lead to the development of hypothalamic resistance to leptin and insulin, an important condition contributing for breaking of the balance between caloric intake and energy expenditure. Two molecular mechanisms are currently known to play a triggering role in this process; activation of TLR4 and endoplasmic reticulum stress, both leading to local inflammation and eventually apoptosis of neurons. The ubiquitin-proteasome system (UPS) plays an important role in the control of protein recycling in the cell. The accumulation of ubiquitin-positive protein aggregates can cause cell toxicity and regulate neuronal plasticity. Also the modulation or differential activation of UPS can produce hypothalamic neurodegeneration and obese phenotype in experimental animals. Here, we hypothesized that under prolonged diet-induced obesity, a defect in the UPS in the hypothalamus could contribute for the defective control of energy homeostasis leading to the refractoriness of obesity to caloric restriction. In fact in an obesity-prone rodent strain, prolonged, but not short-term obesity was accompanied by functional abnormality of the UPS in the hypothalamus. In mutants protected from inflammation, resistance to diet-induced obesity was accompanied by stability of the UPS in the hypothalamus. Thus, defect of the UPS in the hypothalamus, during prolonged obesity is an important factor contributing the refractoriness of obesity to caloric restriction Doutorado Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento Doutora em Fisiopatologia Médica

Orientadores: Márcio Alberto Torsoni, Marciane Milanski Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A obesidade materna está relacionada ao desenvolvimento de distúrbios metabólicos na prole. O processo inflamatório desencadeado pelo consumo materno de dieta rica em gordura parece envolver a ativação da via TLR4/NFkB. O reflexo anti-inflamatório colinérgico é ativado por meio do nervo vago e através da subunidade ?7 dos receptores nicotínicos de acetilcolina (?7nAChR) que reduz a ativação do NF-kB e diminui a produção de citocinas inflamórias e a intensidade da resposta imune. O bloqueio destes receptores ou a denervação da via eferente provoca intensa produção de mediadores inflamatórios em resposta ao lipopolissacarídeo (LPS). Neste sentido, estudos com modelos experimentais têm mostrado que a prole de mães obesas apresenta a resposta inflamatória exacerbada após um desafio com (LPS) ou dieta hiperlipídica (HFD). Assim, é possível que estes animais apresentem o controle do ajuste fino da resposta inflamatória afetado pelo consumo materno de HFD. O objetivo central foi avaliar a funcionalidade da via anti-inflamatória colinérgica (AIC) na prole de mães obesas. Para isso prole de camundongos swiss machos com 28 dias de vida (d28) obtidos de mães alimentadas com dieta HFD (HFD-O) ou dieta controle (SC-O) durante a gestação e lactação foram empregados no estudo. O LPS e a nicotina foram administrado via intraperitoneal (IP) e intracerebroventricular (i.c.v), respectivamente, e a atividade da via foi avaliada. Os resultados mostram repressão nas proteínas chaves envolvidas na via AIC no fígado e tecido adiposo branco (WAT), elevado nível sérico de TNF-? e redução dos marcadores para macrófago do tipo M2 (Chil 3, Arg1 e IL10) no grupo HFD-O. O ?7nAChR foi detectado nas células do sistema imunitário (colocalizado com F4/80) e adipócitos de camundongos SC-O, não sendo obeservada a expressão do receptor nos adipócitos do grupo HFD-O. Além disso, foi obeservado reduzida associação entre STAT3 e NF-kB no grupo HFD-O em ambos os tecidos após estímulo de nicotina, maior atividade da acetilcolinesterase basal no grupo HFD-O e aumento da expressão de TNF-? e IL-1? no fígado e WAT de camundongos após estímulo com LPS, sendo este efeito ainda maior no grupo HFD-O. Assim podemos concluir que a obesidade materna e o consumo de HFD durante a gestação e lactação promove adaptações moleculares na via AIC e estas podem levar aos distúrbios metabólicos associados a supernutrição no período perinatal Abstract: Maternal obesity is related to the development of metabolic disorders in offspring. The inflammatory process triggered by maternal consumption of high-fat diet appears to be triggered by activation of the TLR4/NFkB. The cholinergic anti-inflammatory reflex is activated by the vagus nerve and by the ?7 subunit of the nicotinic acetylcholine receptors (?7nAChR) reduces the activation of NF-kB and consequently decreases the production of TNF? and intensity of the immune response. Blockade of these receptors or efferent causes denervation of intense production of cytokines in response to lipopolysaccharide (LPS). In this regard, studies on experimental models have shown that obese offspring of mothers shows the increased inflammatory response following a challenge with LPS or (HFD). Thus, it is possible that these animals have control of fine-tuning the inflammatory response affected by HFD maternal consumption. The main objective was to evaluate the cholinergic anti-inflammatory pathway functionality (AIC) in the offspring of obese mothers. For this offspring of swiss males with 28 days old mice (d28) obtained from mothers fed with HFD diet (HFD-O) or control diet (SC-O) during pregnancy and lactation were used in the study. The LPS and nicotine were administered intraperitoneally (IP) and intracerebroventricular (i.c.v), respectively, and the track activity was evaluated. The results show repression in key protein involved in the cholinergic anti-inflammatory pathway in the liver and white adipose tissue (WAT), high serum levels of TNF-? and reducing markers M2 type macrophage (Chil 3, Arg1 e IL10) in the group HFD-O. The ?7nAChR was detected in immune system cells (co-located with F4/80) and adipocytes of group SC-O, not being obeserved receptor expression in adipocytes of HFD-O group. Furthermore, it was observed reduced association between STAT3 and NFkB in group HFD-O in both tissues after nicotine stimulation, basal activity greater acetylcholinesterase in the HFD-O and increased expression of TNF-? and IL-1? in liver and WAT of mice after stimulation with LPS, being this effect even greater in HFD-O. So we can conclude that maternal obesity and the consumption of HFD during pregnancy and lactation promotes molecular adaptations towards cholinergic pathway and these can lead to metabolic disorders associated with overnutrition in the perinatal period Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP

Orientador: Marciane Milanski Ferreira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: O excesso na ingestão calórica e a obesidade têm afetado um número crescente de pessoas em diferentes países, sendo que a obesidade durante a gestação e lactação desempenha impacto negativo no fenótipo prole. Na vida adulta, a obesidade e a sobrecarga de lipídeos constituem fatores que resultam no comprometimento da autofagia, um processo de degradação lisossomal essencial para a manutenção da homeostase celular. A autofagia é responsável pela degradação e reciclagem de componentes citoplasmáticos como organelas senescentes, proteínas agregadas ou mal formadas, microrganismos invasores e macromoléculas. Apesar do conhecimento acerca do prejuízo na atividade autofágica no contexto da obesidade, alterações na homeostase deste processo na prole de mães obesas ainda não foram investigadas. Neste estudo, foi avaliada a hipótese de que a obesidade materna induzida por dieta hiperlipídica seria capaz de modular proteínas da via autofágica no hipotálamo e no fígado da prole de camundongos. Embora sem nenhuma alteração na atividade de autofagia no hipotálamo, a prole de mães obesas ao nascimento (d0) apresentou prejuízo nos marcadores de autofagia no fígado representado por aumento no conteúdo proteico de p62 e diminuição no conteúdo proteico de LC3-II. Ao desmame (d18), a prole de mães obesas teve comprometimento no conteúdo proteico dos marcadores de autofagia em ambos os tecidos (fígado e hipotálamo) quando comparados à prole de mães magras. Após o desmame, a prole de mãe controle e a prole de mãe obesa receberam dieta controle até a vida adulta (d82). Nessa condição não houve modulação dos marcadores de autofagia em nenhum dos tecidos avaliados, sendo que somente a reexposição à dieta hiperlipídica (dos 42 dias até 82 dias) foi responsável por alterar o conteúdo proteico dos marcadores de autofagia quando comparados aos animais com dieta hiperlipídica sem reexposição. Assim, parece que dieta hiperlipídica é essencial para a modulação negativa dos marcadores de autofagia na prole de mães obesas. Em conclusão, a prole de mãe obesa apresentou comprometimento precoce de marcadores de autofagia no fígado e no hipotálamo, o que poderia estar associado ao desenvolvimento de distúrbios metabólicos na prole na idade adulta Abstract: The nutritional excess and obesity have affected a growing number of people in different countries, being that obesity during pregnancy and lactation has negative impact on offspring phenotype. In adulthood, obesity and lipids overload constitute factors that result in impairment of autophagy, a lysosomal degradation process essential for maintaining cellular homeostasis. Thus, autophagy is responsible for degradation and recycling of cytoplasmic components as senescent organelles, aggregated proteins or proteins poorly formed, microorganisms invaders and macromolecules. It is known that obesity and the use of high fat diet have a negative impact on cellular homeostasis. However, modulation of autophagy in the offspring of obese mothers has yet to be investigated. This study tested the hypothesis that maternal obesity induced by high fat diet would be able to modulate proteins of autophagy in the hypothalamus and liver of mice offspring. At birth (d0), the offspring exhibited prejudice in autophagy markers in liver and after weaning (d18) both tissues (liver and hypothalamus) had compromised autophagy markers. The animals receiving control diet after weaning until adulthood (d82) had no impairment of autophagy proteins in both tissues examined. However, when the animals were re-exposed to high-fat diet they had alteration in protein content of autophagy, when compared to animals with high fat diet without re-exposure. Thus, high fat diet seems to be essential for negative modulation of autophagy markers. In conclusion, the offspring of obese mothers presented early impairment of autophagy proteins in the liver and hypothalamus, which may be associated with the development of metabolic disorders in the offspring in adulthood Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAEPEX FAPESP

Orientador: Rejane Maira Góes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Dietas hiperlipídicas e exposição a desreguladores endócrinos (EDC) são dois fatores ambientais aos quais a população está exposta e que afetam negativamente o desenvolvimento e a manutenção da próstata. O consumo de elevado teor lipídico afeta a homeostase dos hormônios esteroides sexuais, alterando a histofisiologia da próstata e aumentando o risco de adenocarcinoma prostático. Sabe-se que a ação dos lipídios na próstata é variável, depende da quantidade e também do tipo de lipídio ingerido, e está longe de estar bem compreendida. O di-n-butil ftalato é um EDC envolvido na desregulação do desenvolvimento do aparelho genital masculino quando administrado durante o período fetal, comprometendo a formação dos órgãos andrógeno-dependentes. Porém, seu impacto sobre o desenvolvimento e as consequências para a histofisiologia prostática ainda são poucos conhecidos. Nesse contexto, esse estudo investigou se os componentes lipídicos (óleo de milho) da dieta materna podem (1) levar à programação do desenvolvimento da próstata do gerbilo da Mongólia e (2) interferir nos efeitos causados nessa glândula pela exposição gestacional ao di-n-butil ftalato, e também analisou (3) os efeitos do consumo de elevado teor de lipídios saturados (dieta enriquecida com banha), do desmame até a idade adulta, sobre a histofisiologia prostática. Para tanto, foram utilizados lobos ventrais prostáticos de gerbilos adultos (16 semanas de idade) nascidos de mães controle (C) ou expostas, do 8º ao 23º dia gestacional, ao óleo de milho (CO) ou ao di-n-butil ftalato (DBP), bem como de animais alimentados com dieta contendo elevado teor de lipídios saturados, do desmame até a idade adulta (D). Os dados obtidos indicam que a ingestão materna de óleo de milho durante a gestação não alterou o peso corporal e os depósitos de gorduras da prole, porém aumentou os níveis séricos de colesterol não-HDL e 17beta-estradiol. A análise histopatológica revelou a presença de hiperplasia reativa e PIN na próstata dos animais CO, associada ao aumento da atividade proliferativa e expressão de AR e ER? e à ativação da via de sinalização da AKT. A exposição gestacional a altas doses de di-n-butil ftalato não alterou os parâmetros metabólicos, a histofisiologia e as vias de sinalização celular na próstata dos animais DBP. Contudo, essa exposição promoveu tumorigênese. O consumo de dieta rica em lipídios saturados, do desmame até a idade adulta, induziu obesidade, causou hipercolesterolemia, alterou a sinalização de AR, AKT e TNF-alfa e induziu a proliferação das células estromais na próstata, favorecendo o surgimento de desordens inflamatórias, pré-malignas e malignas. A partir desses resultados, conclui-se que o consumo materno de óleo de milho leva à programação do desenvolvimento da próstata do gerbilo, induzindo aumento do 17beta-estradiol circulante e lesões inflamatórias e proliferativas na idade adulta. Seu uso como veículo diluidor em estudos de toxicologia reprodutiva, portanto, deve ser evitado. Esse óleo também mascara os efeitos da exposição gestacional ao di-n-butil ftalato, à exceção da promoção do adenocarcinoma prostático. O consumo de dieta rica em lipídios saturados a partir do desmame também prejudica a saúde prostática, favorecendo o desenvolvimento de lesões proliferativas e câncer no início da idade adulta Abstract: A high-fat diet and exposure to endocrine-disrupting chemicals (EDC) are two environmental factors to which the world population is exposed and which negatively affect prostate development and maintenance. The consumption of a high-lipid content diet affects the homeostasis of sex steroid hormones, altering prostate histophysiology and increasing the risk of prostate adenocarcinoma. It is known that lipid action on the prostate is variable, depending on the quantity and also the type of lipid ingested, and is far from being well understood. Dibutyl phthalate is an EDC involved in the deregulation of the development of the male reproductive tract when administered during the fetal period, impairing the formation of androgen-dependent organs. Nevertheless, its impact on development and consequences for prostate histophysiology are still little known. In this context, the present study investigated whether the lipid components (corn oil) of the maternal diet may (1) lead to developmental programming of the Mongolian gerbil prostate and (2) interfere with the effects caused in this gland by gestational exposure to dibutyl phthalate, and also analyzed (3) the effects of high-saturated lipid intake (diet enriched with lard), from weaning to adulthood, on prostate histophysiology. For this investigation, we used ventral prostatic lobes from adult gerbils (16 weeks old) born from mothers control (C) or those exposed, from gestational day 8 to 23, to corn oil (CO) or dibutyl phthalate (DBP), as well as from gerbils fed a diet with a high-saturated fat content, from weaning to adulthood (D). Data obtained indicate that the maternal intake of corn oil during gestation did not alter the body weight and fat deposits of offspring in adulthood. However, it did increase the serum levels of non-HDL cholesterol and 17beta-estradiol. Histopathological analysis revealed the presence of reactive hyperplasia and PIN in the prostate of the CO animals, associated with enhanced proliferative activity, and AR and ER? expression, and with an activation of the AKT signaling pathway. Exposure to high doses of dibutyl phthalate did not change the metabolic parameters, histophysiology and cell signaling pathways in the prostate of the DBP animals. Nevertheless, such exposure promoted tumorigenesis. The intake of a diet rich in saturated lipids, from weaning to adulthood, induced obesity, caused hypercholesterolemia, altered AR, AKT and TNF-alpha signaling and induced proliferation of stromal cells in the prostate of D animals, favoring the development of inflammatory, premalignant and malignant disorders. In conclusion, maternal intake of corn oil leads to developmental programming of the gerbil prostate, inducing an enhancement of circulating 17beta-estradiol and inflammatory and proliferative lesions in adult life. Its use as a dilutor vehicle in reproductive toxicology research should therefore be avoided. This vegetable oil also masks the effects of gestational exposure to dibutyl phthalate, except in relation to the promotion of prostate adenocarcinoma. High-saturated lipid intake from weaning is harmful to prostate health, favoring the onset of proliferative lesions and carcinoma at the beginning of adult life Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural CNPQ 147426/2014-6 FAPESP 2014/03300-8 CAPES

Orientadores: Bruno Geloneze Neto, Lício Augusto Velloso Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O diabetes mellitus tipo 2 é uma das enfermidades cuja prevalência apresenta crescimento mais acelerado no mundo. Isso se deve em parte pelo aumento do número de pessoas obesas. Múltiplas alterações fisiopatológicas estão envolvidas nesse quadro e afetam diferentes órgãos, entre eles o cérebro. O equilíbrio entre comportamento alimentar e gasto energético é um processo biológico coordenado pelo cérebro e com o hipotálamo como principal estrutura envolvida, particularmente o núcleo arqueado, onde duas subpopulações de neurônios, NPY/AgRP e POMC/CART, respondem a sinais periféricos que informam a respeito da disponibilidade de energia no organismo. Variações nos níveis sanguíneos de glicose são rapidamente detectadas por neurônios hipotalâmicos gerando sinais que participam do controle da fome e do gasto energético. Os mecanismos envolvidos na resposta hipotalâmica à glicose ainda são pouco conhecidos, porém acredita-se que seus transportadores de membrana, GLUT e SGLT desempenhem papel importante neste processo. O co-transportador sódio-glicose tipo 2 (SGLT-2) é expresso no rim e no cérebro, incluindo regiões hipotalâmicas envolvidas no controle alimentar. Estudos mostram que a inibição do SGLT-2 acarreta em glicosúria e perda de calorias contribuindo para a diminuição no peso corpóreo. No entanto, não são conhecidos os detalhes mecanísticos deste fenômeno. Nesse trabalho, em camundongos, observamos por imunofluorescência que o SGLT-2 está presente no núcleo arqueado e colocaliza com neurônios POMC e NPY, sugerindo que o SGLT-2 participa do controle alimentar. Camundongos tratados com dapagliflozina apresentaram glicosúria acompanhada de melhora na glicemia de jejum, bem como da menor área sob a curva de glicose durante o teste de tolerância à glicose (GTT). Observamos ainda diminuição no peso corpóreo e discreta redução, porém não significativa, da massa adiposa epididimal. Em mulheres voluntárias eutróficas e normoglicêmicas, tratadas com dapagliflozina 10mg/dia por uma semana, observamos redução numérica, porém não significativa no índice de massa corporal (IMC), da circunferência da cintura e do diâmetro abdominal sagital. Houve melhor eficiência na resposta glicêmica e na sensibilidade à insulina. O uso da dapagliflozina pode alterar as conexões do hipotálamo com outras regiões do cérebro e ter um possível papel no controle da fome. As novas ações do fármaco aqui descritas podem contribuir para o avanço na compreensão de mecanismos hipotalâmicos envolvidos no controle alimentar e do gasto energético e criar novas perspectivas terapêuticas para a obesidade Abstract: Type 2 diabetes mellitus is one of the diseases with the fastest increasing prevalence in the world. This is mostly due to the increased prevalence of obesity. Multiple pathophysiological abnormalities are involved in this problem and affect different organs, including the brain. The balance between eating behavior and energy expenditure is a biological process that is coordinate by the brain and the hypothalamus as the main structure involved, particularly the arcuate nucleus, where two subpopulations of neurons, NPY/AgRP and POMC/CART, respond to peripheral signals that inform about the availability of energy in the body. Variations in blood glucose levels are rapidly detected by hypothalamic neurons generating signals that play a role in the control of hunger and energy expenditure. The mechanisms involved in the hypothalamic response to glucose are still poorly understood, but it is believed that their membrane transporters, GLUT and SGLT play an important role in this process. The sodium-glucose co-transporter type 2 (SGLT-2) is expressed in the kidney and brain, including hypothalamic regions involved in food control. Inhibition of SGLT-2 leads to glycosuria and caloric loss concomitant with a decrease in body weight. However, it is currently unknown the mechanistic details involved in this phenomenon. In this work, in mice, we observed by immunofluorescence that SGLT-2 is present in the arcuate nucleus and colocalize with POMC and NPY neurons, suggesting that SGLT-2 is involved in feeding control. Also, mice treated with dapagliflozin showed glycosuria, which was accompanied by improved fasting glycemia, as well as a reduction in the area under glucose curve during a glucose tolerance test (GTT). We also observed a decrease in body weight and a slight but not significant reduction in epididymal adipose mass. In the clinical intervention in eutrophic and normoglycemic women volunteers treated with 10 mg per day of dapagliflozin for one week, we observed a numerical reduction, although not significant, in body mass index (BMI), waist circumference and sagittal abdominal diameter. In addition, there was a better efficiency in glycemic response and insulin sensitivity. The use of dapagliflozin can alter the connections of the hypothalamus with other regions of the brain and play a possible role in food control. The new actions of the drug described here may contribute to the advancement in understanding the hypothalamic mechanisms involved in food control and energy expenditure and create new therapeutic perspectives for obesity Mestrado Clínica Médica Mestra em Clínica Médica FAPESP 2014/26591-8 CAPES

Orientadores: Adriana Souza Torsoni, Marciane Milanski Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: O estado nutricional no início da vida está criticamente envolvido no fenótipo metabólico da prole na idade adulta. No entanto, as mudanças provocadas pelo consumo materno de dieta rica em gordura (DH) no período pré ou pós-natal devem ser melhor exploradas. No presente trabalho, avaliamos a contribuição do consumo de DH materna durante a gestação e lactação sobre os danos no metabolismo lipídico hepático da prole. Além disso, investigamos se a supernutrição precoce é capaz de programar a prole a uma resposta mais prejudicial à DH na vida adulta. No dia do nascimento (d0), a prole de mães obesas apresentou uma diminuição na expressão de Cpt1a e Acadvl, aumento na expressão de Agpat e Gpam, e menor conteúdo de miR-122 no fígado. Para confirmar a hipótese de que o período gestacional, por si só, poderia alterar o metabolismo lipídico da prole, foi utilizado o modelo de crossfostering. A prole gerada por mãe obesa, que foi amamentada por mãe controle, apresentou aumento no peso corporal e aumento da expressão de Agpat e Gpam no d28 em comparação com a prole de mãe controle que foi amamentada por mãe obesa. Na vida adulta (d82), a reintrodução de DH resultou em maior ganho de peso e maior teor de lipídio hepático na prole de mães obesas. Estes efeitos foram acompanhados por um desbalanço no metabolismo lipídico, demonstrado pela redução da expressão de Cpt1a e Acadvl e aumento na expressão de Agpat e Gpam, associados à menor expressão de miR-122 no fígado e menor conteúdo de p-HSL no tecido adiposo . Nossos dados sugerem que o consumo materno de DH durante a gestação leva à diminuição da expressão de miR-122 na prole, resultando em alterações metabólicas no início da vida que podem alterar permanentemente a homeostase lipídica e aumentar significativamente a susceptibilidade à obesidade e acúmulo ectópico de lipídios na vida adulta Abstract: Nutritional status in early life is critically involved in the metabolic phenotype of offspring in adulthood. However the changes triggered by maternal consumption of high-fat diet (HFD) in pre- or postnatal period should be better set out. Here we evaluated the contribution of maternal HFD consumption during gestation and lactation on hepatic lipid metabolism damages observed in the offspring. Moreover we investigate whether early overnutrition program offspring to harmful response to HFD in adult life. In the delivery day (d0) pups of obese dams showed a decrease in Cpt1a and ACADVL expression, increase in Agpat and Gpam expression, and lower miR-122 content in the liver. To confirm the hypothesis that the gestational period, by itself, could alter lipid metabolism, we used cross-fostered model. Pups fostered to chow dams presented an increase in body weight and higher Agpat and Gpam expression on d28 compared to pups fostered to HFD dams. In adult life (d82), the reintroduction of HFD resulted in higher body weight gain and hepatic lipid content in offspring from obese dams. These effects were accompanied by impaired in lipid metabolism, demonstrated by reduced Cpt1a and Acadvl and increased Agpat and Gpam expression associated with lower expression of miR-122 in liver and lower p-HSL in WAT. Our data suggests that maternal HFD consumption during gestational period leads to a decreased expression of miR-122 in the offspring resulting in metabolic changes in early life that can permanently alter lipid homeostasis and significantly increase susceptibility to obesity and ectopic lipid accumulation Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Orientadores: Adriana Souza Torsoni, Marciane Milanski Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: O estilo de vida moderno tem levado ao aumento na prevalência de obesidade e suas co-morbidades em gestantes e na população cada vez mais jovem. Muitos dos efeitos do consumo direto de dieta hiperlipídica (DH) no metabolismo de glicose e lipídios já são bem estabelecidos. No entanto, considera-se importante avaliar se o consumo de DH durante períodos críticos do desenvolvimento seria capaz de ativar mecanismos epigenéticos, perpetuando mudanças no metabolismo da prole e criando um ciclo vicioso que não poderia ser interrompido. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito potencial da programação metabólica em prejudicar a sinalização de insulina na prole recém desmamada de mães alimentadas com dieta hiperlipídica durante a gestação e lactação. Além disso, investigamos se a exposição precoce a um ambiente obesogênico seria capaz de exacerbar o prejuízo no metabolismo de glicose na vida adulta de animais reexpostos à dieta hiperlipídica. Para isso, camundongos fêmeas da linhagem Swiss foram alimentados com dieta controle ou DH durante os períodos de adaptação, gestação e lactação, e os tecidos da prole macho foram analisados nos dias 28 e 82. Os resultados mostram que a prole de mães obesas (HC-O) apresentou maior ganho de peso, adiposidade e ingestão alimentar que a prole de mães controle (CC-O). Além do mais, apresentou prejuízos na sinalização de insulina em tecidos periféricos como fígado, adiposo e músculo, e centrais, como o hipotálamo, provavelmente devido à maior ativação de vias inflamatórias. A reexposição à DH parece agir como um fator agravante para o desenvolvimento do fenótipo obeso, levando a resistência sistêmica à insulina e hiperleptinemia. É válido ressaltar que o tecido adiposo parece ser o tecido mais afetado na prole adulta após a reexposição da dieta (HH-O), o que pode contribuir para a desregulação metabólica observada. Em conjunto, nossos resultados sugerem que o consumo materno de dieta hiperlipídica durante a gestação e lactação pode ocasionar alterações no metabolismo glicídico da prole tanto em animais recém desmamados quanto adultos. Por fim, a obesidade materna leva à maior susceptibilidade ao desenvolvimento de obesidade e prejuízos na sinalização de insulina na prole que não podem ser revertidos pelo consumo de uma dieta controle, no entanto, podem ser agravados especialmente quando os animais são reexpostos à DH Abstract: Modern lifestyle has resulted in an increase in the prevalence of obesity and its comorbidities in pregnancy and young population. Many effects from direct consumption of a high-fat diet (HFD) on glucose and lipid metabolism are well established. However, it is important to assess whether maternal consumption of HFD during critical periods of development can trigger epigenetic mechanisms, perpetuating changes in offspring metabolism and creating a vicious circle that cannot be broken. This study evaluated the potential effect of metabolic programming in impairing the insulin signaling in recently weaned offspring of obese dams. In addition, we investigated if early exposure to obesogenic environment is able to exacerbate the impairment of glucose metabolism in adult life in response to a high-fat diet. For this, Swiss female mice were fed with Stardard chow (SC) or HFD before and during mating, gestation and lactation. Tissues from male offspring were obtained at d28 and d82 to analyze activation of key proteins of inflammatory and insulin signaling pathways by Western Blot. Offspring of obese dams (HC-O) showed greater weight gain, adiposity and food intake than offspring of control dams (CC-O). Furthermore, they showed impairment in insulin signaling in central and peripheral tissues, associated to increased activation of inflammatory pathways. The HFD re-exposure seems to be an aggravating factor in development of obese phenotype leading to systemic insulin resistance and hyperleptinaemia. Moreover, adipose tissue was ultimately the most affected tissue in adult offspring after HFD rechallenged (HH-O) which may have contributed to the metabolic deregulation observed. Together our results suggest that maternal consumption of high-fat diet during pregnancy and lactation can cause changes in glucose metabolism of offspring in both weaned and adult animals. Additionally, maternal obesity leads to increase susceptibility to the development of obesity and impairment in insulin signaling in offspring that cannot be reversed by SC consumption, but can be aggravated especially when re-exposed to HFD Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP CNPQ

Orientador: Helena Coutinho Franco de Oliveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A doença hepática gordurosa não alcoólica (Nonalcoholic fatty liver disease - NAFLD) é a principal manifestação hepática na obesidade e síndrome metabólica. A história natural da doença envolve a esteatose, estresse oxidativo, inflamação, fibrose e morte celular. Níveis plasmáticos elevados de lipoproteínas ricas em triglicérides são fatores de risco independentes para doenças cardiovasculares. Estudos clínicos e experimentais mostram forte correlação entre triglicérides plasmáticos (TG) e os níveis de apolipoproteína CIII. A apolipoproteína CIII também é aumentada no plasma de pacientes diabéticos. Ao comparar camundongos apoCIII transgênicos com controles não transgênicos irmãos (NTg), mostramos aqui que a super-expressão de apoCIII, independentemente da dieta rica em gordura (High fat diet - HFD), resulta em características NAFLD, ou seja, aumento do conteúdo de lípidos no fígado, diminuição poder antioxidante, aumento da expressão de TNF'alfa', receptor de TNF'alfa', caspase-1 clivada e interleucina-1'beta', diminuição do receptor de adiponectina-2 e aumento da morte celular. Além disso, os indicadores de inflamação sistêmica de TNF'alfa' e a proteína C-reactiva estão também elevados em camundongos apoCIII. Esse quadro é agravado e características adicionais da NAFLD são diferencialmente induzidas por HFD em camundongos apoCIII. A HFD induziu intolerância à glicose, juntamente com aumento da gliconeogênese, evidenciando a resistência hepática à insulina, induziu um aumento significativo da TNF'alfa' (8 vezes) e IL-6 (60%) no plasma em camundongos apoCIII comparados aos NTg. Os outros indicadores de inflamação (proteína C reativa plasmática e TNF?, TNFr, caspase-1 e IL-1'beta' hepática) mantiveram-se superiores em camundongos apoCIII em HFD. A ativação da via intrínseca (Bax / Bcl-2) e a proteina efetora (caspase-3) de apoptose foram aumentados em ambos os camundongos apoCIII com low fat diet (LFD) e HFD. Como esperado, o tratamento com fenofibrato reverteu vários dos efeitos da dieta e da apoCIII. No entanto, o fibrato não normalizou o padrão inflamatório nos animais apoCIII, tais como o aumento do TNF'alfa', TNFr, IL1'beta' e redução do adiponectina-R2, mesmo com total correção do teor de lipídios no fígado. Estes resultados indicam que a superexpressão apoCIII desempenha um papel importante na inflamação hepática e na morte celular e aumenta a suscetibilidade e a gravidade da esteatose hepática induzida pela dieta Abstract: Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is the principal liver manifestation in obesity and metabolic syndrome. The natural history of the disease involves steatosis, oxidative stress, inflammation, fibrosis and cell death. Elevated plasma levels of triglyceride-rich remnant lipoproteins are independent cardiovascular disease risk factors. Clinical and experimental studies show strong correlation and causal links between plasma triglycerides (TG) and apolipoprotein CIII levels. Apolipoprotein CIII is also increased in the plasma of diabetic patients. By comparing apolipoprotein (apo) CIII transgenic mice with control non-transgenic (NTg) littermates, we show here that the overexpression of apoCIII, independently of high fat diet (HFD), results in NAFLD features, namely, increased liver lipid content, decreased antioxidant power, increased expression of TNF'alfa', TNF'alfa' receptor, cleaved caspase-1 and interleukin-1'beta', decreased adiponectin receptor-2 and increased cell death. In addition, systemic indicators of inflammation TNF? and C-reactive protein are also elevated in apoCIII mice. This picture is aggravated and additional NAFLD features are differentially induced by HFD in apoCIII mice. HFD induced glucose intolerance together with increased gluconeogenesis, evidencing hepatic insulin resistance. Marked increases in plasma TNF'alfa' (8-fold) and IL-6 (60%) were induced by HFD in apoCIII mice compared to NTg mice. The other inflammatory indicators (plasma C reactive protein, liver TNF'alfa', TNFr, caspase-1 and IL1 'beta') remained higher in HFD apoCIII mice. Cell death signaling (Bax/Bcl2), effector (caspase-3) and apoptosis were augmented in both low and HFD apoCIII mice. As expected, fenofibrate treatment reversed several of the diet and apoCIII effects. However, fibrate did not normalize apoCIII inflammatory traits, such as increased TNF'alfa1, TNFr, IL1'beta' and reduced adiponectin-R2, even under fully corrected liver lipid content. These results indicate that apoCIII overexpression play a major role in liver inflammation and cell death increasing susceptibility to and the severity of diet induced NAFLD Doutorado Fisiologia Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Gabriel Forato Anhê Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A obesidade é caracterizada pela deposição ectópica de gordura no fígado. Este acúmulo de gordura hepática (NAFLD) pode gerar consequências graves, como a hepatite não alcoólica (NASH), fator de ricos para carcino hepatocelular (HCC). A morte de hepatócitos, evento chave na evolução da NAFLD para NASH, é causada pelo excesso de nutrientes e é dependente do estresse de retículo endoplasmático (RE). O estresse no RE resulta no acúmulo de proteínas não processadas desencadeia a "unfolded protein response" (UPR), podendo gerar apoptose. A mTOR é formada basicamente por dois complexos: mTOR1 e mTOR2; ambos são sensíveis a nutrientes, a insulina e a rapamicina. O complexo mTOR2/Rictor catalisa a fosforilação da AKT, aumentando a sinalização da insulina. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar a relação entre ativação da mTOR, do estresse de RE e da apoptose em hepatócito expostos a ácidos graxos livres. Observamos que a apoptose causada pelo palmitato ativa o estresse de RE de maneira tempo dependente. Não observamos alterações na fosforilação de proteínas alvo específicas para o complexo mTOR1. No entanto, a fosforilação geral da mTOR foi estimulada pelo palmitato. Altas doses de rapamicina inibiram a apoptose e do estresse de RE causado pelo palmitato, sugerindo a participação do complexo mTOR2. Estes resultados ainda foram confirmados pelo silenciamento gênico da Rictor. A fosforilação em serina 473 da AKT apresenta um caráter transitório, elevando-se em tempos que precedem morte e o estresse de RE, e diminuindo em tempos prolongados concomitantemente à apoptose. A inibição da AKT pelo "AKT inhibitor" gerou diminuição da apoptose, do estresse de RE e da incorporação lipídica na linhagem de hepatoma. Estes dados sugerem que a AKT, como alvo preferencial da mTOR2 é necessária para geração de morte e da UPR. A glicose (33.3mM) gera morte as células HepG2 e esta é inibida com baixas doses de rapamicina, mostrando possível atividade via mTOR1 nesta resposta. De outro modo, a frutose (4.5mM) que também desencadeia apoptose das células de hepatoma, tem seu efeito inibido por doses maiores de rapamicina, indicando atividade mTOR2 neste processo. No entanto, a possibilidade de diferentes monossacarídeos recrutarem complexos diferentes de mTOR para desencadear apoptose ainda precisa ser melhor explorada Abstract: Obesity is characterized by fat ectopic deposition in liver. This hepatic fat accumulation our non-alcoholic fat liver disease (NAFLD) can have serious consequences such as non-alcoholic hepatitis (NASH), that is a factor to liver cancer. The cell death of hepatocytes is an important event in the development to NAFLD to NASH, all that are caused by excess nutrients and dependent of endoplasmic reticulum (ER) stress. The ER stress is caused by accumulation of unfolded proteins triggers the unfolded protein response (UPR), which mau cause apoptosis. mTOR is basically formed by two complexes: mTOR1 and mTOR2, both are sensitive to nutrients, insulin and rapamycin. The mTOR2/Rictor complex catalyse AKT phosphorylation increasing the insulin pathway. All together, the aim of this study was evaluate the relationship between mTOR, ER stress and apoptosis in liver cells exposed to free fatty acids. We observed that apoptosis caused by palmitate activates ER stress in a manner dependent on time. We din¿t observed changes in phosphorylation of specific target proteins to mTOR1 complex. However, a general phosphorylation of mTOR was stimulated by palmitate. High doses of rapamycin inhibited apoptosis and ER stress caused by palmitate, suggesting the participation of the mTOR2 complex. These results were further confirmed by gene silencing of Rictor. The AKT phospholylation in serine 473 has a transitional character, rising in times that preceding cell death and ER stress, and decreasing concomitantly apoptosis in prolonged times. Inhibition of AKT by AKT inhibitor caused a decrease in apoptosis, ER stress and lipid incorporation in hepatoma cell line. These data suggest that AKT, preferential targets of mTOR2 is required for generation death and UPR. Glucose (33.3mM) generates HepG2 cell death and this is inhibited by low doses on rapamycin, showing possible mTOR1 activity. Otherwise, fructose (4.5mM) also triggers apoptosis of hepatoma cells; its effect is inhibited by higher doses of rapamycin, indicating mTOR2 activity in this process. However, the possibility of different monosaccharide recruit different complexes of mTOR to trigger apoptosis should be further explored Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

Orientador: Eduardo Rochete Ropelle Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A ingestão alimentar e o gasto energético são minuciosamente regulados por neurônios específicos localizados no hipotálamo. Durante as duas últimas décadas, a localização dos receptores da leptina em núcleos hipotalâmicos, bem como a descrição da via de transmissão intracelular disparado por este hormônio em neurônios hipotalâmicos, foi determinante para o entendimento do controle da ingestão alimentar e do gasto energético. Cada vez mais os distúrbios alimentares associados a doenças como obesidade são relacionados à disfunções na transmissão do sinal da leptina no hipotálamo. O processo inflamatório subclínica frequentemente observado em modelos experimentais de obesidade estão diretamente associados à distintos mecanismos de resistência à leptina no hipotálamo e resultam em aumento da ingestão alimentar e ganho de peso corporal. Por outro lado, estudos demonstram que o exercício físico é capaz de aumentar a sensibilidade da leptina no hipotálamo de animas obesos através de citocinas anti-imflamatórias, contudo, esses mecanismos permanecem apenas parcialmente conhecidos. Recentemente, a proteína S1PR1 (sphingosine-1-phosphate receptor-1) foi descrita como uma molécula com alta capacidade de exercer potentes efeitos sinérgicos sobre a via de sinalização da leptina, sustentando a ativação da via Jak2/STAT3 em algumas linhagens celulares. Assim, o presente estudo tem por objetivo investigar o os efeitos do exercício físico sobre a atividade da SIPR1 e a sensibilidade à leptina em hipotálamo de roedores obesos. Acreditamos que a realização do presente estudo contribuirá para caracterizar a participação da S1PR1 na sinalização da leptina no hipotálamo, bem como determinar os efeitos do exercício físico sobre a atividade da S1PR1 neuronal Abstract: The food intake and energy expenditure are closely regulated by specific neurons in the hypothalamus. During the last two decades, the location of the leptin receptor in hypothalamic nuclei as well as the description of the route of transmission Intracellular triggered by this hormone in hypothalamic neurons, were crucial to the understanding of the control of food intake and energy expenditure.Increasingly, eating disorders, diseases associated with obesity are related to signal transmission malfunction of leptin in the hypothalamus. The subclinical inflammatory process frequently observed in experimental models of obesity are directly associated with distinct mechanisms of leptin resistance in the hypothalamus and result in increased food intake and body weight gain. Furthermore, studies have shown that physical exercise can increase the sensitivity of leptin in the hypothalamus of obese animals, through of antiinflammatory cytokines, however, these mechanisms remain only partially understood. Recently, the protein S1PR1 (sphingosine-1-phosphate receptor-1) was described as a molecule with high ability to exert potent synergistic effects on the signaling pathway of leptin, supporting the activation of Jak2/STAT3 in some cell lines. Thus, this project aims to investigate the effects of exercise on the activity of SIPR1 and leptin sensitivity in hypothalamus of obese rodents. We believe that the completion of this project will contribute to characterize the involvement of S1PR1 in leptin signaling in the hypothalamus, and to determine the effects of exercise on the activity of neuronal S1PR1 Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestre em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo