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In 2019, an intranasal (IN) spray of esketamine SPRAVATO® was approved as a fast-acting antidepressant by drug Agencies US FDA and European EMA. At sub-anesthetic doses, (±)-ketamine, a non-competitive glutamate N-methyl-d-aspartate (NMDA) receptor antagonist, increases the overall excitability of the medial prefrontal cortex (mPFC), an effect being essential for its rapid antidepressant activity. We wondered if this effect of ketamine could come from changes in the balance between neuronal excitation and inhibition (E/I balance) in the mPFC. Here, we performed a preclinical approach to study neurochemical and behavioral responses to a single IN ketamine dose in BALB/cJ mice, a strain more sensitive to stress. By using in vivo microdialysis, we measured cortical E/I balance as the ratio between glutamate to GABA extracellular levels 24 h post-ketamine. We found, for the first time, that E/I balance was shifted in favor of excitation rather than inhibition in the mPFC but more robustly with IN KET than with a single intraperitoneal (IP) dose. Increases in plasma and brain ketamine, norketamine and HNKs levels suggest different metabolic profiles of IP and IN ketamine 30 min post-dose. A significantly larger proportion of ketamine and HNKs in the brain are derived from the IN route 30 min post-dose. It may be linked to the greater magnitude in E/I ratio following IN delivery relative to IP at t24 h. This study suggests that both IP and IN are effective brain delivery methods inducing similar sustained antidepressant efficacy of KET, but the way they induced neurotransmitter changes is slightly different.

An LC-MS/MS method for hair testing of glyphosate and aminomethylphosphonic acid (AMPA), its main biodegradation product, has been developed. After decontamination, 50 mg of hair was ground and sonicated in water for 2 h. The method was fully validated in the 5-500 pg/mg range for glyphosate and 10-500 pg/mg for AMPA, and the limits of detection were 2 and 5 pg/mg, respectively. Matrix effect for glyphosate and AMPA was compensated by an isotope-labeled internal standard. Hair samples from four farmers who regularly used glyphosate and one farmer who used glyphosate but not his wife and 14 hair samples from nonoccupationally exposed subjects were tested. Glyphosate was found in head hair of three farmers, with concentration in the range 14-188 pg/mg. The fourth was found negative but with hair colored in red. Glyphosate was detected in 10 of 14 hair samples from nonoccupationally exposed subjects at concentrations of 11.5 pg/mg or lower and only in one segment (0-3 cm) of the farmer's spouse (6 pg/mg). AMPA was detected in five subjects, above the limit of quantification only in two of three occupationally exposed subjects with positive glyphosate. Further studies should be conducted to validate this potential new biomarker that could be useful for assessing long-term exposure to glyphosate.

Objectives A method based on liquid chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry detection using 50 µL of plasma was developed and fully validated for quantification of remdesivir and its active metabolites GS-441524. Methods A simple protein precipitation was carried out using 75 µL of methanol containing the internal standard (IS) remdesivir-13C6 and 5 µL ZnSO4 1 M. After separation on Kinetex® 2.6 µm Polar C18 100A LC column (100 × 2.1 mm i.d.), both compounds were detected by a mass spectrometer with electrospray ionization in positive mode. The ion transitions used were m/z 603.3 → m/z 200.0 and m/z 229.0 for remdesivir, m/z 292.2 → m/z 173.1 and m/z 147.1 for GS-441524 and m/z 609.3 → m/z 206.0 for remdesivir-13C6. Results Calibration curves were linear in the 1–5000 μg/L range for remdesivir and 5–2500 for GS-441524, with limit of detection set at 0.5 and 2 μg/L and limit of quantification at 1 and 5 μg/L, respectively. Precisions evaluated at 2.5, 400 and 4000 μg/L for remdesivir and 12.5, 125, 2000 μg/L for GS-441524 were lower than 14.7% and accuracy was in the [89.6–110.2%] range. A slight matrix effect was observed, compensated by IS. Higher stability of remdesivir and metabolite was observed on NaF-plasma. After 200 mg IV single administration, remdesivir concentration decrease rapidly with a half-life less than 1 h while GS-441524 appeared rapidly and decreased slowly until H24 with a half-life around 12 h. Conclusions This method would be useful for therapeutic drug monitoring of these compounds in Covid-19 pandemic.

Objectifs Apporter des donnees sur la nature et la purete de produits contenant principalement des derives de la ketamine et des benzodiazepines ayant circules en France en 2020, et decrire les concentrations capillaires observees lors d’un usage regulier. Methode Un homme de 24 ans est suivi depuis plusieurs annees pour pharmacodependance liee principalement a l’usage de NPS. Neuf produits achetes en 2020 sous forme de poudres (n = 7) ou de timbres (n = 2), ainsi qu’un echantillon de cheveux châtain fonces du patient nous ont ete adresses pour analyse toxicologique par LC-MS/MS et LC-HRMS decrites precedemment [1] , [2] . Les poudres ont ete mises en solution dans le methanol a une concentration de 1 g/L, les timbres (9 mm2) ont ete maceres dans 2 mL de methanol. Dix microlitres des solutions diluees (1/100 et 1/1000) dans la phase mobile sont injectes dans le chromatographe. Les cheveux sont laves par un bain de dichloromethane, segmentes (A 0–3 cm, B 3–6 cm, C 6–9 cm) puis extraits par un melange de solvants. L’analyse par LC-MS/MS a ete realise en mode MRM sur un TSQ Endura (triple quadripole) et par LC-HRMS en mode data-dependent (ddms2) sur un Q-Exactive (Orbitrap) (Thermo Fisher Scientific®). Resultats Huit molecules ont ete identifiees et quantifiees aux teneurs suivantes : ephenidine (100 %, n = 2), 2-fluorodeschloroketamine (2F-DCK : Conclusion Ce cas illustre la circulation de nouvelles substances psychoactives en France avec une tendance accrue aux produits hallucinogenes de plus en plus purs, mais parfois coupes a l’achat ou par inadvertance des polyconsommateurs, ce qui constitue un risque supplementaire de survenue d’effets toxiques. L’analyse capillaire montre encore son interet comme outil de suivi a long terme des usagers de ces produits.

Objectifs Determiner s’il existe une relation entre la concentration capillaire d’une substance utilisee de maniere reguliere et les doses cumulees absorbees de cette substance. Methode Les resultats de 3 etudes seront analysees. Une premiere (E1) chez des patients souffrant de fievre mediterraneenne familiale traites par colchicine. La dose prescrite par jour (D) varie de 1 a 2,5 mg en fonction des sujets, sans changement depuis au moins 1 an. La seconde (E2) a consiste a mesurer des concentrations capillaires d’antiretroviraux (rilpivirine [RPV] D = 25 mg, efavirenz [EFV] D = 600 mg, dolutegravir [DTG] D = 50 mg, elvitegravir [EVG] D = 150 mg) chez des patients atteints par le VIH avec charge virale indetectable depuis au moins un an et suivis durant 96 semaines soit avec un traitement allege 4/7 j, soit en schema classique de traitement avec 7/7 j. Enfin dans (E3), les principaux composes du cannabis, le tetrahydrocannabinol (THC), le cannabidiol (CBD) et le cannabinol (CBN) ont ete mesures chez 15 consommateurs occasionnels (CO) consommant exactement 1 a 2 joints par semaine et 15 chroniques (CC) consommant 1 a 2 joints par jour de cannabis. Trois segments de 2 cm ont ete etudies dans E1, 2 segments de 2 cm dans E2 et 1 seul segment de 2 cm dans E3. Apres decontamination, les segments sont broyes et analyses (methodes validees et accreditees), les resultats exprimes en pg/mg pour chaque segment (A/B/C). L’analyse statistique est realisee par un test de Wilcoxon. Resultats Les moyennes des concentrations de colchicine retrouvees dans les 3 segments pour E1 sont 3,3/2,1/1,5 pour une posologie de 1 mg (n = 15), 4,1/4,3/3,1 pour 1,5 mg (n = 8), 1,3/3,6/3,6 pour 2 mg (n = 6) et 3,5/2,6/2,8 pour 2,5 mg (n = 14). Il n’y a pas de correlation entre la dose ingeree et la concentration capillaire mesuree, ni de difference en fonction de la couleur des cheveux. La concentration la plus elevee retrouvee (11,4/9,7/9,5) est celle d’un sujet portant toujours une perruque, la colchicine etant photosensible y compris dans la tige capillaire. Dans E2, il n’y a pas de difference significative pour la RPV (933/1003 [n = 24] vs 1012/1260, [n = 17], p = 0,34/0,55), l’EFV (2631/2596 [n = 4] vs 3472/4316, [n = 4], p = 0,88/0,70), ou le DTG (310/229 [n = 3] vs 385/385, [n = 11], p = 0,08/0,22). Par contre, une difference significative existe pour le premier segment seulement de l’EVG (265/185 [n = 6] vs 395/240, [n = 7], p = 0,02/0,10). Les concentrations sanguines sont toutes significativement differentes. Dans E3, les concentrations en THC (23,7 vs 42,1, p = 0,02) et en cannabinol (3,0 vs 15,8, p = 0,01) sont significativement differentes, celles de CBD, plus variables, ne montrant qu’une tendance (24,5 vs 82,2, p = 0,14). Dans E1 et E2, les ratios de doses sont de l’ordre de 2,5 fois maximum (2,5 mg de colchicine vs 1 mg), et inferieur a 2 dans E2 (4/4 j vs 7/7 j de traitement). Par contre, dans E3, les doses cumulees entre un CO et un CC tels que defini dans notre etude controlee sont au moins d’un facteur 7 (1–2 joint/j vs 1–2/semaine, sans compter la dose de THC dans chaque joint, probablement superieure chez un CC). Conclusion Ces trois etudes permettent de montrer qu’il n’existe une relation entre la concentration capillaire et la dose ingeree cumulee que dans certaines situations et pour certaines molecules. Un ratio de dose de 2 a 2,5 ne semble pas suffisant pour objectiver une augmentation de la concentration capillaire compte tenu de la variabilite d’integration, avec peut-etre un nombre d’echantillons insuffisants dans nos etudes. Des differences plus importantes de l’ordre de 7 semblent pouvoir s’accompagner d’une difference significative des concentrations.

International audience; To develop a population pharmacokinetic (PP) model of delta-9-tetrahydrocannabinol (THC) and its metabolites in blood and to determine the relationship between blood THC pharmacokinetics and results of on-site oral fluid (OF) testing in chronic (CC) and occasional (OC) cannabis users. Methods: Fifteen CC (1-2 joints/day) and 15 OC (1-2 joints/week) aged 18-34 years were included, genotyped for their CYP2C9 polymorphisms. Twelve measurements of blood THC, 11-OH-THC and THC-COOH were carried out during the 24-hour period after controlled cross-over random inhalation of placebo, 10 mg or 30 mg of THC. OF tests (DrugWipe® 5S) were performed up to 6 hours and then stopped after two successive negative results. The blood concentrations and their relationship to OF testing results were analysed using a PP approach with NON-MEM® and R. Results: A three-compartment model described the pharmacokinetics of THC, with zero-order absorption, and a two-compartment model the metabolites. The fraction of THC converted to 11-OH-THC was 0.27 and the fraction of 11-OH-THC to THC-COOH was 0.86. Smoking 30 mg of THC decreased the THC bioavailability to 0.68 compared to 10 mg. CC showed a 2.41 greater bioavailability than OC, leading to higher C max and AUC for the three compounds for the same dose. The best model describing the probability of a positive OF test included THC blood concentration and the group as covariate: for a similar THC blood concentration, a CC was less likely to be positive than an OC. Conclusion: OC are more likely to screen positive than CC for a similar blood concentration.

International audience; This study was to validate a LC–MS/MS method for the determination of 17 new synthetic opioids (NSOs) in hair including 3-fluorofentanyl, 3-methylfentanyl, acetylfentanyl, acetylnorfentanyl, alfentanyl, butyrylfentanyl, butyrylnorfentanyl, carfentanil, fentanyl, furanylfentanyl, furanylnorfentanyl, methoxyacetylfentanyl, norcarfentanil, norfentanyl, ocfentanil, sufentanil, and U-47700, and to apply it to 137 authentic samples. Twenty milligrams of hair was decontaminated in dichloromethane and underwent liquid extraction. 10 μL of the reconstituted residue were injected onto the system. The separation was performed in 12 minutes in a gradient mode at a flow rate of 300 μL/min using a Hypersyl Gold PFP column (100 × 2.1 mm i.d., 1.9 μm) maintained at 30°C. Compounds were detected in positive ionization and MRM modes using a TSQ Endura mass spectrometer (ThermoFisher). The method was validated according to EMA guidelines. The LLOQ was in the range 1–50 pg/mg, and the calibration ranged from the LLOQ-1000 pg/mg. Intra- and inter-day accuracy (bias) and precision were < 15%. Extraction recoveries of parent drugs and metabolites were 74–120% and 7–62%, respectively. The matrix effect was in the range 59–126% (CVs ≤ 12.9%). Fentanyl was found in six cases at concentrations of < 1–1650 pg/mg (n = 14 segments). Five fentanyl analogs were quantified in two cases: 3-fluorofentanyl (25–150 pg/mg, n = 5), furanylfentanyl (15–500 pg/mg, n = 5), methoxyacetylfentanyl (500–600 pg/mg, n = 2), acetylfentanyl (1 pg/mg, n = 2), carfentanyl (2.5–3 pg/mg, n = 2). This fully validated method allowed us to test for the first time 3-fluorofentanyl and norcarfentanil in hair among 15 other NSOs, and brings new data regarding 3-fluorofentanyl and methoxyacetylfentanyl hair concentrations.

Untargeted liquid chromatography-high resolution mass spectrometry (LC-HRMS) techniques have become indispensable tools for systematic toxicological analysis. They allow the research of an almost unlimited number of drugs within a single analytical cycle, but shared mass spectra libraries are still missing to identify newly marketed compounds, along with defined analytical procedures. This article describes the optimization, validation, and application of an untargeted screening method devoted to hair analysis using data-dependent analysis (DDA) and a shared HRMS database. This method used an ultra-high performance liquid chromatography coupled to a benchtop Orbitrap. Raw MS data were processed with Compound Discoverer software coupled to the mzCloud™ library. Optimizations were performed on blank hair spiked with 19 analytes having different physical and chemical properties. To validate the effectiveness of a shared spectra database, 20 compounds spectra were added and then retrospectively screened. Sensitivity and reliability were evaluated on 317 compounds of interest in toxicology. The method was then applied to 11 hair samples. The matrix effect range by ion suppression/enhancement was 40%-110%. The method allows the detection of 284 among the 317 screened compounds, including 72 new psychoactive substances (NPS). Lower limit of identification (LLOI) and lower limit of detection (LLOD) were 1 to 1000 pg/mg and 1 to 500 pg/mg, respectively. The method was successfully applied to 11 clinical cases and 144 compounds were identified including 24 NPS including AKB48-5F for the first time in hair. We developed and validated an LC-HRMS untargeted screening of 284 compounds and successfully applied it to 11 real hair samples.

Recently, the emergence of new psychoactive substances (NPS) has led to their wide use among clubbers and men who have sex with men (MSM) for their stimulant effects. However, their use in drug-facilitated sexual assault (DFSA) has rarely been described. Herein we report a case of a 44-year-old man who was assaulted after a party. Due to late reporting of the offense, only hair (black) was sampled 15 days later and a segmental analysis was achieved to look for most DFSA agents and NPS. Twenty mg of each segment (A: 0-1 cm, B: 1-3 cm, and C: 3-5 cm) were incubated in phosphate buffer pH 5.0. After alkaline liquid extraction and chromatographic separation on 1.9 μm Hypersil GOLD PFP column, compounds were detected by a TSQ Vantage mass spectrometer with electrospray ionization in positive mode with multiple reaction monitoring (MRM) acquisition. 4-methylethcathinone (4-MEC), methylenedioxypyrovalerone (MDPV) and doxylamine were found in proximal segment at very low concentrations (3, 5, and 9 pg/mg, respectively) which is in agreement with a single exposure in the previous month corresponding to the alleged facts. These substances were not detected in segments B and C showing a lack of repetitive exposure before the alleged event. Thus, the results do not contradict the patient's claim of being assaulted. Doxylamine has already been encountered in such cases but no publications referring to 4-MEC or MDPV use have ever been documented. Our case reports the unusual administration of cathinones to achieve a sexual assault and stresses the interest of looking for designer drugs when dealing with DFSA cases.

Objectif Le syndrome d’hyperemese cannabinoide (SHC) a ete decrit suite a la consommation de tetrahydrocannabinol (THC) ou de cannabinoides de synthese, mais pas de cannabidiol (CBD) [1] . Nous rapportons ici un cas probable de SHC suite a la consommation d’huile de CBD. Historique du cas Le Centre AntiPoison de Paris a ete contacte par une femme de 41 ans, suite a l’apparition de symptomes digestifs deux mois apres la consommation reguliere d’huile de CBD, achete sur le site internet d’une entreprise specialisee americaine. Elle en aurait ingere plusieurs fois par semaine 10 a 30 gouttes. Elle rapporte l’apparition de nausees, de vomissements et de douleurs abdominales, soulagees uniquement par des bains chauds. Les symptomes ont disparu spontanement a l’arret de la consommation. La patiente a ete vue en consultation dans notre service un mois apres l’arret de sa consommation. Les examens complementaires demandes par son medecin traitant (coloscopie et gastroscopie) etaient normaux. Elle ne rapportait aucune consommation de stupefiants. Une meche de cheveux de 8 cm a ete prelevee et la bouteille d’huile de CBD a ete conservee. Methodes Les analyses ont ete realisees par LC-MS/MS, avec une limite de quantification a 5 pg/mg. Resultats Dans les cheveux, les concentrations de CBD et de THC etaient de 290 [135 ; 380] et de 7 [ Discussion La presentation clinique de cette patiente est en faveur d’un SHC. Ce syndrome est decrit chez des consommateurs chroniques de THC, avec des concentrations capillaires de THC autour de 220 pg/mg et de faibles concentrations de CBD. La physiopathologie de cette pathologie n’est pas connue. Des etudes animales mettent en evidence une reponse biphasique au CBD avec un effet anti-emetique a faible dose mais un effet pro-emetique a forte dose [2] . Notre cas pourrait s’inscrire dans ce cadre. L’implication du THC ne peut pas etre exclue meme si peu probable au vu de sa faible teneur. Ce cas illustre le manque de transparence et la dangerosite potentielle des produits contenant du CBD. La presence de THC n’est mentionnee ni sur la bouteille, ni sur le site internet du vendeur. Le THC etant interdit en France, les consequences d’une telle consommation pourraient etre legales mais aussi medico-legales, en cas d’accident de la voie publique par exemple. Enfin, sur le plan medical, une ingestion accidentelle du produit (chez un enfant notamment) pourrait entrainer une intoxication. Conclusion Nous presentons ici un probable cas de SHC dans les suites de l’ingestion reguliere d’huile de CBD. Les fortes concentrations capillaires de CBD, ainsi que les conclusions d’etudes animales sont en faveur d’un SHC lie au CBD. Ce cas souligne les risques medicaux et judiciaires lies a la consommation de ces produits, pourtant presentes comme inoffensifs par les vendeurs.

Tranexamic acid is a widely used antifibrinolytic drug but its pharmacology and pharmacokinetics remains poorly understood. Owing to the recent knowledge on phospholipid-induced matrix effects during human plasma analysis, our aim was to develop a liquid chromatography-mass spectrometry method for the quantitation of tranexamic acid after efficient sample clean-up. Sample preparation consisted in phospholipid removal and protein precipitation. Hydrophilic interaction liquid chromatography was used and the detection was achieved with multiple reaction monitoring. The method was validated according to the European Medicine Agency guideline in the range 1.0–1000.0 μg/mL. The performance of the method was excellent with a precision in the range 1.2-3.0%, an accuracy between 88.4 and 96.6% and a coefficient of variation of the internal standard-normalized matrix factor below 6.7%. This method is suitable for the quantification of tranexamic acid in the wide range of concentrations observed during clinical studies, with all the advantages related to phospholipid removal.

Resume Objectif La fabrication et la vente illegale de peptides recombinants deviennent de plus en plus facile et frequente. Nous rapportons ici le cas d’une poudre blanche etiquetee comme etant du CJC-1295, un derive d’un analogue peptidique synthetique de la GHRH, analysee afin d’en determiner la composition reelle. Methode Un echantillon de poudre a ete analyse sur un systeme CL-SM/SMHR de type Q-Exactive (Thermo, Etats-Unis). L’instrument fonctionnait en mode data-dependent ( full scan suivi d’une fragmentation des ions d’abondance significative) a une resolution de 70 000 avec une ionisation de type electrospray fonctionnant en mode positif. Resultats Le chromatogramme a montre que la poudre etait pure. L’analyse spectrale a mis en evidence 5 ions multicharges. L’ion monoisotopique le plus abondant etait le m/z 674,1855 ( z = 5) correspondant a une masse de 3365,8885 Da. La masse observee correspondait a l’analogue peptidique de la GHRH de 29 acides amines contenu dans le CJC-1295 (3365,8930 Da) avec une erreur de masse de 1,3 ppm. Cet analogue peptidique n’etait pas conjugue contrairement a celui present dans le CJC-1295. Conclusion L’interpretation du spectre SMHR associe a la connaissance de la structure de la molecule nous a permis d’identifier l’analogue peptidique contenu normalement dans le CJC-1295, sans pour autant etre du CJC-1295 dans lequel cet analogue est couple a un complexe qui en prolonge la demi-vie. Il s’agit a notre connaissance de la premiere saisie de ce produit en France.

Dear Editor,Hyperemesis has been described in tetrahydrocannabinol (THC) and/or synthetic cannabinoid users, but not with cannabidiol (CBD) [1]. We report a case of hyperemesis associated with CBD ...

Resume Objectif Determiner l’interet du dosage de naltrexone (NTX) dans les cheveux comme marqueur de l’observance du traitement de l’alcoolo-dependance. Methode Deux meches de cheveux châtains de 6 cm d’une patiente traitee par naltrexone (Revia®, 100 mg/j depuis plus de 4 ans) pour alcoolo-dependance et jugee compliante ont ete analysees. Apres decontamination et lavage, la premiere meche est coupee en 3 segments de 2 cm, puis broyee. Vingt milligrammes de cheveux sont extraits en milieu basique a l’aide des melanges hexane/acetate d’ethyle (1:1, v/v), puis chloroforme/isopropanol (4:1, v/v) en presence d’hydromorphone-d3 (HM) comme standard interne. Les deux phases organiques reunies sont evaporees et le residu repris par 80 μL de phase mobile. 10 μL sont alors analyses par CL-SM/SM. La deuxieme meche de cheveux a ete utilisee pour le dosage d’ethyglucuronide (EtG) afin de confronter les resultats obtenus. Resultats La methode est lineaire sur l’intervalle 2,5 a 1000 pg/mg (R2 > 0,999). L’exactitude varie de 96,6 a 104,1 % (n = 6) et la precision totale (intra- et inter jours) est inferieure a 6,3 % (n = 18). La limite de detection et de quantification sont de 1 et 2,5 pg/mg, respectivement. Les concentrations de naltrexone retrouvees a 1500, 1450, et 810 pg/mg dans les trois segments semblent en faveur d’une exposition reguliere a la naltrexone dans les 6 mois precedant le prelevement. Les concentrations en EtG dans les segments 1–3 cm et 4–6 cm sont de 20 et 25 pg/mg, inferieures au seuil fixe par la Society of Hair Testing (SOHT) de 30 pg/mg, ce qui suggere une consommation moderee et non excessive d’alcool durant cette periode, probablement en lien avec les proprietes pharmacologiques de la naltrexone sur la diminution de consommation chez le sujet alcoolo-dependant. L’analyse capillaire a par ailleurs permis de controler la compliance de la patiente a l’integralite des molecules qui lui sont prescrites. Conclusion A ce jour, aucune donnee dans la litterature ne fait etat des concentrations de naltrexone mesurees dans les cheveux, et de l’interet de son dosage pour le suivi de l’efficacite du traitement. Il s’agit donc du premier cas de dosage de naltrexone dans les cheveux au cours d’un traitement chronique de l’alcoolo-dependance. Ces resultats, valides sur un plus grand nombre de patients, pourraient etre utiles pour le suivi therapeutique des patients alcoolo-dependants sous naltrexone.

Objectifs Les CS sont le plus grand groupe de NPS consommes dans le monde avec plus de 179 molecules identifiees en Europe depuis 2017, et representent donc un defi majeur en matiere de detection et de surveillance. Neanmoins, la realite de leur consommation en France demeure incertaine [1] . Nous rapportons le cas d’une polyconsommation de 9 CS et demonterons leur incorporation dans les cheveux a travers les concentrations observees. Methode Un homme de 42 ans est hospitalise en psychiatrie en decembre 2019 pour dependance au cannabis (10 joints/j) et alcool (180 g/j) suivie depuis 2008. Le patient est consommateur occasionnel de cocaine (1 prise/mois), de codeine, et ponctuellement d’heroine. Il presente des antecedents de troubles de la personnalite et une tentative de suicide et decrit un sevrage non respecte depuis 5 mois, suite au deces de sa mere. L’examen clinique revele un craving important avec sueurs, tremblements et palpitations. Un traitement anxiolytique et hypnotique est initie. Une analyse capillaire sur une meche noire de 20 cm (dreadlocks) a ete demandee pour caracteriser l’usage de drogues. Trois segments de 20 mg (A : 0–2 cm ; B : 2–4 cm ; C : 4–6 cm) sont decontamines, extraits par hexane/acetate d’ethyle (1 :1, v/v) en presence de JWH-018-d11 et analyses par LC-MS/MS en mode gradient (formiate d’ammonium 2 mM, 0.1 % d’acide formique (A) et acetonitrile (B)) sur une colonne Hypersyl Gold PFP (1,9 μm, 100 × 2,1 mm, ThermoFisher) maintenue a 30 C°. La detection est en mode MRM apres ionisation positive. La methode dediee a la recherche de plus de 300 molecules d’interet en toxicologie a recemment ete enrichie par l’ajout de 16 CS [2] . Resultats Les limites de detection (LDD) et de quantification des CS varient de 0,3 a 8 pg/mg et de 1 a 25 pg/mg respectivement (CV ≤ 15 %) et la limite superieure de quantification a 1000 pg/mg permet d’atteindre une bonne linearite (r2 > 0,996). La justesse intra-journaliere et inter-journaliere (biais) et les precisions (CV) correspondantes sont respectivement ≤ 8,2 %, ≤ 14,3 %, ≤ 8,3 % et ≤ 14,9 %. Le rendement de recuperation varie de 61 a 94 % et l’effet de matrice de 31 a 110 %. Aucune interference endogene ni de contamination inter-echantillons n’ont ete observees. L’analyse capillaire confirme l’exposition du patient au cannabis (A/B/C, pg/mg : THC 700/1071/1763 ; CBD 1096/1533/1977 ; CBN 433/813/1389), a la cocaine (350/230/960) et ses metabolites (BZE, EME, norcocaine, AEME, cocaethylene), ainsi qu’a la MDMA (9/5/5) et la codeine (180/170/30). De plus, 9 CS non declares par le patient ont ete identifies et quantifies : JWH-019 (50/27/12), JWH-200 (20/13/5), JWH-250 (30/42/40), AM-2201 (32/10/3), BB-22 (10/10/10), 5F-PB-22 (64/14/10), 5F-APINACA (20/ Conclusion Malgre une prevalence des CS qui demeure faible en France par rapport aux cathinones, ce cas illustre la necessite de les rechercher systematiquement et montre l’interet majeur des cheveux pour l’etude des expositions aux NPS.

Inductively coupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS) is currently the reference method for the determination of inorganic elements, and has many applications in healthcare and the environmental field. The objective of the present study was to develop and validate a high-resolution ICP-MS method for the simultaneous quantification of 38 elements in samples of human whole blood, urine, hair and tissues after microwave mineralization. The samples were incubated with nitric acid, hydrogen peroxide and internal standards prior to microwave mineralization for 25 min. The analysis was performed with an Element XR ICP-MS and validated using commercial reference standards (whole blood, urine, and hair) and in-house quality control samples. The 38 elements were detected in low-, medium- or high-resolution mode, depending on interferences and sensitivity. The lower and upper limits of quantification were adjusted for each element. The method was linear for all elements (correlation coefficient >0.996), and the inter- and intraday precision values (coefficient of variation) were below 15%. Samples from a clinical trial were used to confirm the high-resolution ICP-MS method’s suitability for the assessment of patient samples.

According to French law, the roadside testing for drugs of abuse (DOA) should be performed in oral fluid (OF) using an immunological screening kit. If the screening is positive, confirmation has to be done in OF collected by a special swab, called the FLOQSwab™ (FS). Unlike other sampling kits, this device was not designed to collect OF since it does not contain an elution buffer. An analytical method was developed for the simultaneous detection of 10 DOA under control in France: tetrahydrocannabinol (THC) at 1 ng/mL, and cocaine, benzoylecgonine (BZE), morphine, 6-monoacetylmorphine (6-MAM), amphetamine, methamphetamine, 3,4-methylenedioxy-N-ethylamphetamine (MDEA), 3,4-methylenedioxyamphetamine (MDA), and 3,4-methylenedioxy-N-methylamphetamine (MDMA) at 10 ng/mL. Samples were eluted using the Quantisal® buffer and extracted by liquid-liquid extraction for THC and by solid-phase extraction for the remaining analytes. Analyses were performed by ultra-high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). The validated method made it possible to detect the concentrations required by law and was successfully applied to samples from drivers who screened positive. The main limitations of this kit are the large variability of the collected OF volume and the poor stability of DOA in OF, requiring the use of a conservation buffer.

Objective To evaluate the multi-analyte BAT versus LC-MSMS for the screening of NPS and conventional DoA on real blood and urines samples from forensic and clinical cases. Methods A total of 77 blood samples (B) (9 clinical and 67 forensic cases: 46 deaths, 17 DUID, 3 DFC, 2 homicides) and 81 urines samples (U) (5 forensic: 4 deaths, 1 drugs possession, and 75 clinical: 21 drugs abuse, 18 suspected poisonings, 25 workplace drug testing WPDT, 12 clinical investigation) were screened on Evidence MultiSTAT (Randox®) for: alpha-PVP (Cut-off: (B): 5 ng/mL; (U): 5 ng/mL), JWH18 (only U: 20), UR-144 (only U: 10) and AB PINACA (2; 2) derivatives, fentanyls (1; 2), benzoylecgonine BZE (25; 150 ng/mL), amphetamine (50; 200), methamphetamine (50; 200), THC (10; 20), opiates (80; 200), oxycodone (10; 50), 6-MAM (10; 10), methadone (10; 300), buprenorphine (2; 1), benzodiazepines (20; 150), tricyclic antidepressants (60; 150), barbiturates (50; 200), tramadol (5; 5) and pregabalin (only B: 1000). 200 μL of urine or a diluted blood (1:4) were centrifuged, spiked into the biochip and loaded into the system, the remaining process is fully automated and allows to image the sample signal against a cut-off material in 17 min. Results were compared to LC-MSMS and/or LCHRMS screenings. The sensitivity (false negative FN) and specificity (false positive FP) of BAT was calculated based on mass spectrometry cut-offs. Results BAT assay has allowed the detection of newly marketed NPS in urine like αPHP, MDPHP, pentylone, pentedrone and hexedrone (n = 4). As alpha-PVP panel does not include the detection of mephedrone derivatives, 3 of them (mephedrone, 3-MMC and 4-MEC) were not detected in 4 urines samples. No blood sample was tested positive for alpha-PVP. Screening of synthetic cannabinoids was also negative in both BAT and LC-MSMS experiments. Tow fentanyls derivatives (3-fluorofentanyl at 3.3 ng/mL and ocfentanyl at 284 ng/mL) and one synthetic benzodiazepines (etizolam at 125 ng/mL) were detected in urine. THC screening presents a good sensitivity/specificity (n = 44, 17B, 27U). 2 blood samples with low concentrations (0.1 to 2 ng/mL) were tested negative by MultiSTAT. BZE was found in 29 samples (14B, 16U), one FN in urine was observed (BZE at 18 ng/mL). A total of 53 samples (31B, 22U) were tested positive for opiates, 6 were missing from BAT assay in blood (concentrations 2000 ng/mL) or some alpha-PVP derivatives (n = 2). Screening of benzodiazepines (n = 55), TCA (n = 5), and barbiturates (n = 2) was satisfactory. Low sensitivity (8 FN, concentration range: 55 to 160 ng/mL) and specificity (19 FP) of methamphetamine/amphetamine panels should be addressed with regard to the interference of some putrefactive bases like β-phenylethylamine, formed in post-mortem samples. Conclusion This is a promising screening approach that allows the detection of a wide panel of DoA and designer drugs in a variety of matrices including postmortem blood. The limitation of some tests should be addressed and improved.

There are many differences between the hair from children and that of adult subjects, the hair being thinner, more porous with a different growth rate from the usual 1 cm/month observed in adults. In order to determine whether hair analysis could discriminate between chronic use and acute administration of a drug in children like in adults, we analyzed hair from 18 children aged between 1 day and 15 years in whom the administration of different drugs was known (single therapeutic administration or acute intoxication). A strand of hair was sampled within 1 to 45 days after treatment or intoxication. Analysis was conducted using LC/MS/MS. In the 10 youngest children, aged between 1 day and 29 months, the compounds administered in hospital or responsible for intoxication (lidocaine, ropivacaine, diazepam, midazolam, levetiracetam, morphine, ketamine, methadone, buprenorphine, THC, MDMA) were found in all segments of the hair independently of the time of sampling (1–45 days after ingestion). The concentrations detected were similar along the hair shaft, showing a radial diffusion and incorporation of the analytes in the hair of young children from the sebum. Concentrations could be very high when sampled shortly after administration (72 ng/mg for methadone, 75 ng/mg for MDMA after 3 days) and lower when sampling later (1.2 ng/mg for MDMA after 45 days). In these cases, hair analysis allowed to highlight the compounds responsible for intoxication even when they had disappeared from the blood or urine but should not be used to discriminate long-term exposure to a drug. In the eight remaining children aged from 34 months to 15 years, the drugs used in hospital (lidocaine, diazepam, morphine) or responsible for intoxication (THC, codeine, buprenorphine) were not found in any analyzed segments sampled 1 to 5 days after administration of the drugs, in agreement with the non-incorporation of the drugs from the sebum into the hair. For those children aged over 34 months, hair analysis allows to determine the chronic administration of a drug, like in adults.

Objectif Developper et valider une methode permettant de quantifier 7 neuroleptiques dans le plasma et le sang total en LC-MS/MS par micro-extraction liquide–liquide dispersee (MELLD). Cette methode a ensuite ete comparee a une methode d’extraction liquide–liquide (ELL) conventionnelle, puis appliquee au suivi therapeutique pharmacologique (STP) de l’aripiprazole, ainsi qu’a deux cas medicolegaux. Methodes La prise d’echantillon pour les deux methodes de pretraitement (DLLME vs LLE) est de 200 μL de plasma ou de sang total. La DLLME utilise respectivement le chloroforme (0,1 mL) et le methanol (0,2 mL) comme solvants extractif et dispersif, la LLE etant realisee a l’aide de 3 mL d’un melange acetate d’ethyle:dichloromethane:heptane (40:22:38). Les molecules incluses dans l’etude sont : l’aripiprazole, le flupentixol, l’haloperidol, le penfluridol, la pipamperone, la trifluoperazine et le zuclopenthixol. Resultats Une bonne linearite est obtenue pour les deux methodes entre 1 et 1000 ng/mL. La comparaison a mis en evidence une excellente correlation pour les sept composes evalues (r2 > 0,98). L’effet matrice est moins important avec la DLLME compare a celui de la LLE : −24,1 a 7,5 % vs −59,3 a −39,7 % respectivement, ce qui a permis d’ameliorer considerablement la sensibilite de la methode malgre un rendement d’extraction de la DLLME nettement inferieur a celui de la LLE (15,8 a 23,9 % vs 60,6 a 107,7 %). Trente-cinq dosages ont ete realises dans le cadre du STP de l’aripiprazole. La mediane des concentrations plasmatiques etait de 148 ng/mL avec un intervalle interquartile allant de 64 a 260 ng/mL. Cette methode a egalement ete appliquee a deux cas medicolegaux. Cas no 1 : un homme de 26 ans aux antecedents de depression et de psychose est decede suite a un accident de voiture, l’analyse du sang peripherique a retrouve une concentration en aripiprazole a 7680 ng/mL. Cas no 2 : Une femme de 45 ans est retrouvee morte a son domicile, l’analyse du sang peripherique retrouve la presence de deux neuroleptiques, aripiprazole : 434 ng/mL et zuclopenthixol : 120 ng/mL, associee a 3 psychotropes, alprazolam : 130 ng/mL (hydroxy-alprazolam : 12 ng/mL), mirtazapine : 816 ng/mL (desmethyl-mirtazapine : 790 ng/mL) et acide valproique : 311 mg/L. Conclusion Nous avons developpe et valide une methode de MELLD sensible et rapide, utilisant un faible volume de solvant et permettant la quantification de 7 neuroleptiques dans le plasma et le sang total. Celle-ci a ete appliquee avec succes au STP de l’aripiprazole et a l’analyse de prelevements realises en post-mortem.

Objectif La consommation de drogue semble se generaliser parmi les hommes ayant des relations sexuelles avec les hommes (HSH) notamment lors de « chemsex ». Cette pratique serait associee a des comportements a risque plus importants. Toutes les etudes reposent toutefois sur le declaratif des HSH. Cette etude a pour objectif de mesurer la proportion de consommation de drogues dans cette population par analyse capillaire et son association aux pratiques a risque. Methodes Dans le cadre de l’etude ANRS Ipergay (evaluant la PrEP, prophylaxie pre-exposition contre le VIH), il a ete preleve chez des participants a une sous-etude 1 meche de cheveux tous les 4 mois afin de determiner leur consommation de substances (excepte GHB/GBL, poppers et THC). Une analyse segmentaire a ete pratiquee lorsque la longueur de la meche le permettait (≥ 3 cm). Apres decontamination et extraction liquide/liquide, un criblage en LC-MS/MS Haute Resolution Q-Exactive et une quantification par triple quadripole TSQ Vantage (Thermofisher®) ont ete effectues, incluant les stupefiants classiques (opiaces, cocaine, amphetamines, ketamine) mais egalement les nouveaux produits de synthese (NPS). Resultats Soixante-neuf volontaires ont ete inclus avec des caracteristiques demographiques similaires aux 429 participants de l’etude Ipergay. L’âge median est de 35 ans [28;41]. Deux cent dix-neuf segments de cheveux (1,5 a 2,5 cm) provenant de 137 meches ont ete analyses correspondant chacun a une consommation entre 1,5 et 2,5 mois. Trente-deux molecules ont ete identifiees, 9 considerees comme therapeutiques bien que probablement utilisees comme drogues recreatives (sildenafil, vardenafil, tadalafil). Huit stupefiants classiques ou substances detournees ont ete detectes sur au moins 1 segment chez 53 volontaires, soit une prevalence de 77 % : cocaine (n = 47, 68 %), MDMA (31, 45 %), ketamine (26, 38 %), metamphetamine (6), amphetamine (4), dextrometorphane (4), methylphenidate et butorphanol (1). Quinze NPS ont ete mis en evidence chez 27 patients, correspondant a une prevalence de 39 %. Par ordre de frequence, on retrouve la mephedrone (14), 4-MEC (11), ethylphenidate (5), methylone (4), methoxetamine (4), methiopropamine (3), PMMA (3), MDPV (3), metamfepramone (1), 5F-PB22 (1), diphenidine (1), phendimetrazine (1), phentermine (1), N-methyl-2-AI (1) et dimethylone (1). Aucune piperazine type TFMPP ou m-CPP n’a ete retrouvee. Aucun cas de consommation de NPS seul n’a ete retrouve : les NPS sont associes a la cocaine dans 25/27 cas (93 %), a la MDMA dans 20/27 (74 %) ou la ketamine dans 19/27 (70 %). L’analyse capillaire permet une meilleure detection des consommateurs que les auto-questionnaires puisque 21/53 (40 %) ayant des drogues dans les cheveux avaient declare ne pas en consommer. Les HSH consommant des drogues ont un nombre declare de partenaires dans les 2 mois precedant le prelevement significativement plus eleve que les non consommateurs (mediane = 7 [4;15] vs 5 [2;10], p Conclusion La prevalence de consommation des NPS et en particulier des cathinones chez les HSH utilisant la PrEP est elevee, mais moindre que celle des drogues classiques comme la cocaine et la MDMA. L’analyse capillaire est la seule methode qui permet d’evaluer precisement cette consommation, car sous-declaree. Cela est d’autant plus important que cette consommation s’accompagne d’une augmentation des pratiques a risque, en particulier du nombre de partenaires.

Objectif Developpement et validation d’une methode de dosage simultane de 38 elements metalliques dans les cheveux par ICP-HRMS apres mineralisation par micro-ondes. Description L’analyse des elements traces constitue une necessite en medecine legale et en toxicologie clinique, notamment dans le suivi de l’exposition professionnelle. Les prelevements capillaires, peu invasifs et representatifs de l’exposition sur le long terme, sont une matrice de choix. Methode Apres lavage au TritonX 0,1 % et ajout d’un melange d’etalons internes (Ga, Ir, In, Sc), 10 mg de cheveux sont mineralises en tubes en quartz en presence de 200 μL d’HNO3 et 200 μL d’H2O2 sous l’action de micro-ondes (UltraWAVE®, Milestone), avec rampe de temperature et de pression en 10 min respectivement jusqu’a 230 °C et 100 bars. La detection et la quantification sont realisees avec un Element XR (Thermofisher). Trente-huit elements sont quantifies simultanement avec une courbe de calibration a 15 points : Al, Sb, Ag, As, Ba, Be, Bi, Cd, Ce, Cs, Cr, Co, Cu, Sn, Fe, Ge, Hf, La, Mn, Hg, Mo, Ni, Au, Pd, Pt, Pb, Rb, Ru, Sr, Te, Tl, Th, Ti, W, U, V, Zn, Zr. La methode a ete validee selon les recommandations de la Societe francaise de biologie clinique et d’apres la methode validee par J.P. Goulle et al. [1] en utilisant un materiau de reference de l’Institut National de Sante Publique du Quebec comportant 25 elements (QC 1418-H) et un controle de qualite interne pour les elements restants. Resultats La mineralisation des echantillons a abouti a une digestion totale et rapide. Les courbes de calibrations sont lineaires (r > 0,989) pour chaque element dans un large intervalle de concentrations, pertinent avec les concentrations habituellement observees. La limite de quantification est definie par la valeur du signal egale a 10 fois l’ecart-type du blanc. Les valeurs s’etendent de 1 × 10−7 a 25 μM en fonction des elements. Les limites superieures de quantification sont comprises entre 1 × 10−3 et 500 μM selon l’element. La comparaison entre les valeurs theoriques et les valeurs mesurees pour les controles de qualite externes et internes sont satisfaisantes (biais Conclusions La methode developpee et validee permet le dosage simultane de 38 elements. La methode de mineralisation par micro-ondes a permis l’obtention d’echantillons totalement mineralises de maniere rapide et complete. Elle permet de s’affranchir de la matrice utilisee et garantie une liberation totale des elements contenus dans cette matrice. La methode est applicable a toute matrice solide, y compris les visceres.

Objectif Le projet de recherche IRAM a pour but d’etudier de maniere pluridisciplinaire les restes de 7 momies andines, conservees depuis 1840 aux Musees Royaux d’Art et d’Histoire de Bruxelles, afin de leur redonner une identite. Dans ce contexte, nous avons realise une etude toxicologique des cheveux de 5 de ces momies (datees d’environ −900 av J.C. a 1450 ap. J.-C.) ainsi que d’une tresse retrouvee a proximite d’un des individus afin de connaitre leur exposition a differentes drogues d’origine vegetale. Methode Les meches sont lavees au dichloromethane et a l’eau chaude puis decoupees finement. Lorsque cela etait possible, des segments de 2 cm ont ete realises. Les cheveux subissent ensuite une hydrolyse a pH 5 a 95 °C pendant 10 minutes en presence d’un melange d’etalons internes deuteres. L’extraction est realisee par un melange hexane/acetate d’ethyle a pH5. L’extrait est analyse sur une chaine UPLC-MS/MS (Endura, Thermo Fischer®). La separation est realisee sur une colonne Hypersyl Gold PFP (200 × 2,1 mm, 1,9 μm), l’elution est en mode isocratique avec un melange d’acetonitrile et de tampon formiate 2 mM, 0,1 % d’acide formique. Ont ete recherchees 25 molecules dont la cocaine, la nicotine, la cafeine, la bufotenine et la dimethyltryptamine (DMT). Resultats De la cocaine a ete mise en evidence dans les cheveux de 3 des 5 momies analyses et sur la tresse a des concentrations extremement faibles (mediane : 2 pg/mg IQ25–75 : 1,4–2,6 pg/mg), la benzoylecgonine (BZE) a ete identifiee dans l’ensemble des echantillons (mediane 10 pg/mg, IQ25–75 : 8–40 pg/mg) et la norcocaine dans 4 echantillons (8 pg/mg, IQ25–75 : 6–11 pg/mg). De la cafeine a ete retrouvee dans l’ensemble des meches analysees. La concentration mediane est de 284 pg/mg (IQ25–75 : 168–678 pg/mg). La nicotine et la cotinine ont egalement ete retrouvees dans l’ensemble des meches analysees a une concentration mediane de 878 pg/mg (IQ25–75 : 444–1805 pg/mg) pour la nicotine et 100 pg/mg (IQ25–75 : 65–205 pg/mg) pour la cotinine. Discussion Les concentrations de cocaine sont tres faibles, cependant la presence de norcocaine dans 4 echantillons semble en faveur d’une absorption de cocaine. Seul un des individus ne presente pas de norcocaine ne permettant pas d’exclure une contamination externe par la cocaine. Ces concentrations sont beaucoup plus faibles que celles observees dans d’autres momies de la region d’Areca (cocaine : 250 ± 90 pg/mg et BZE : 2100 ± 90 pg/mg) [1] . Cela peut s’expliquer par une consommation moins importante de cocaine, un mode de consommation different, mais une degradation est egalement probable. En ce qui concerne la cafeine, les concentrations presentent egalement une variabilite selon les individus et parfois au sein des differents segments d’un meme individu. Ces resultats semblent cependant indiquer une exposition chronique et relativement importante a la cafeine pour l’ensemble des individus. Des etudes concernant la presence de nicotine dans des cheveux de momies precolombiennes ont deja ete realisees mais c’est la premiere fois que la cotinine est retrouvee. La presence de cotinine, metabolite de la nicotine, permet de differencier une absorption de nicotine d’une eventuelle contamination externe, notamment lors de la manipulation des momies depuis leur decouverte. De plus, d’apres les Musees Royaux d’arts et d’histoire de Bruxelles, a l’epoque precolombienne, le tabac n’etait pas fume mais ingere par voie orale, rendant impossible toute exposition passive a la fumee du vivant des individus.

Background The aim of the present study is to describe the prevalence of NPS and conventional DOA in Paris and its suburbs over a six-year period using hair testing approach. Method Hair was sampled in patients admitted to different departments of Paris hospitals between 2012 and 2017. Two high-risk populations were mainly considered: 1) drug-dependent and 2) acutely intoxicated patients. Segmental hair analysis was performed by validated LC–MS/MS method to screen for DOA and 83 NPS. Results 480 patients (280 M/200 F, 15–70 years) were included. 141 patients tested positive for NPS (99 M/42 F; median age: 33). NPS prevalence was 29%, that of amphetamines, cocaine and opioids were 32%, 38.5% and 52%, respectively. 27 NPS were identified, 4-MEC and mephedrone (number of cases n = 24 each) were the most detected cathinones. JWH-122 (n = 1) was the only detected synthetic cannabinoid while ketamine (n = 104) was present in numerous NPS users (67%). 3-fluorofentanyl (n = 1), furanylfentanyl (n = 1), N-ethylpentylone (n = 2), pentedrone (n = 2), mexedrone (n = 1), methcathinone (n = 3), 6-APDB (n = 2), TFMPP (n = 2), 2-CE (n = 1), 3,4-MD-αPHP (n = 1) and dextromethorphan (n = 27) were identified for the first time in hair. Users were found to have more than one NPS in 53% of cases, mostly in combination with conventional DOA. The number of detected NPS rose from 5 in 2012 to 42 in 2017. A broad range of hair concentrations (0.001–318 ng/mg) was found, but the low median concentrations seem to show an occasional exposure more than chronic use. Conclusion NPS screening should be assessed in routine clinical practice, especially in high-risk populations.

We developed and validated a method to detect and quantify 12 anabolic steroids in blood (androstenedione, dihydrotestosterone, boldenone, epitestosterone, mesterolone, methandienone, nandrolone, stanozolol, norandrostenedione, tamoxifene, testosterone, trenbolone) and eight more in hair samples (nandrolone phenylpropionate, nandrolone decanoate, testosterone propionate, testosterone benzoate, testosterone cypionate, testosterone decanoate, testosterone phenylpropionate, testosterone undecanoate) using liquid chromatography coupled to high-resolution mass spectrometry. This method used a benchtop Orbitrap mass spectrometer operating with an APCI probe under positive ionization mode. Analysis was realized in full scan experiment with a nominal resolving power of 140,000. After addition of the internal standard (testosterone-D3) and incubation in phosphate buffer pH = 5 for hair, 200 μL of blood and 30 mg of hair samples were extracted with heptane. LOQ and LOD were determined at 5 and 1 ng mL−1 in whole blood and 10 to 100 pg mg−1 and 2 to 20 pg mg−1 in hair according to the compounds, respectively. The method was linear in the 5–1000 ng mL−1 range in whole blood and between 10 or 100 pg mg−1 and 1000 pg mg−1 in hair with correlation coefficients >0.99, and intra- and inter-day accuracy and precision were

4-Methylethcathinone (4-MEC) and 3,4-methylenedioxypyrovalerone (MDPV) are synthetic cathinones. The objective of this study was to develop a method in order to measure these compounds in hair of a patient. After decontamination, 20mg of hair were grinded and incubated in phosphate buffer pH 5.0 in presence of 100ng of MDMA-d5 used as internal standard. Double basic liquid-liquid extraction was performed. Samples were separated on a 1.9μm Hypersil GOLD PFP column (100×2.1mm) using gradient elution. Compounds were detected by a LCQ TSQ Vantage XP triple-quadrupole mass spectrometer. SRM transitions m/z 192.1→146.1 and 174.2, m/z 276.1→175.0 and 205.1 and m/z 199.1→165.1 were used for 4-MEC, MDPV and IS, respectively. The assay was accurate and precise over the range 0.001 (lower limit of quantification) to 1ng/mg in hair. No matrix effect was observed. The method has been applied to a 30-year-old man who usually consumed cathinones for 6 months administered intravenously and was admitted to a general hospital for delirious and tachycardia after absorption of 10g of a powder sold as 4-MEC and 5g of MDPV. Both 4-MEC (30ng/mg) and MDPV (1ng/mg) were identified in the hair at high concentrations showing a regular consumption of these drugs. Many others compounds were also identified (mephedrone, MDMA, MDA, cocaine and metabolites, tramadol, hydroxyzine, aripiprazole, haloperidol). Few data are available on concentration of these new designer drugs in hair however important in order to determine the acute or chronic consumption of these drugs.

Objectif L’emergence des nouveaux produits de synthese (NPS) a pris ces dernieres annees une ampleur inquietante, influencee par l’apparition de l’achat totalement incontrole sur le reseau Internet parallele (« deepweb » ou « darkweb »). Le developpement de ces molecules, generalement derivees de substances deja reglementees, telles que l’amphetamine ou la ketamine, est suscite par l’envie d’echapper a la legislation en matiere de controle de stupefiants et la recherche de nouveaux effets pharmacologiques. Cette manipulation chimique n’est pas sans danger, car plusieurs de ces substances ont un potentiel toxique plus important que les molecules dont elles derivent. L’objet de cette etude est d’evaluer la prevalence des NPS consommes en region parisienne entre 2012 et 2016, et identifies par analyse capillaire dans une population de patients suivis en addictologie ou hospitalises en reanimation pour intoxication a des drogues d’abus. Methode Trois cent vingt-huit echantillons de cheveux provenant de patients admis dans differents hopitaux de Paris (APHP) et sa region sont analyses. Une analyse segmentaire est realisee dans 79 % des cas. Au total, 200 molecules, incluant des substances psychoactives dont 31 NPS (hors cannabinoides de synthese), sont recherchees sur 20 mg de cheveux apres une etape de double extraction liquide-liquide et une analyse par LC-MS/MS Triple Quad en mode MRM sur un TSQ Vantage (ThermoFisher®). Resultats La methode validee selon les recommandations de l’Agence Europeenne du Medicament (EMA) a permis l’identification de 96 cas positifs a 18 NPS differents. La consommation de ces NPS est plus frequente chez les hommes (77 %). L’âge moyen est relativement eleve, a savoir 37 ans. La prevalence des NPS est de 29 %, comparable a celles des amphetamines (25 %), des opiaces (33 %), et de la cocaine (36 %) identifies sur les memes echantillons. Ces NPS appartiennent principalement aux cathinones (36 %). La 4-methylethcathinone (4-MEC) est la molecule la plus repandue (17 cas), suivie par la mephedrone (15), la methylone (11) et la MDPV (7), et d’une facon moindre la butylone (3), l’ephedrone (3), la cathine (2) et la cathinone (1). D’autres NPS appartenant aux piperazines (TFMPP, α-PVP et m-CPP), aux arylalkylamines (6-APDB) ou a d’autres groupes heterogenes (methoxetamine, diphenidine et 4-fluoroamphetamine) sont aussi identifies. La ketamine, le dextromethorphane et le methylphenidate, trois anciennes molecules a visee therapeutique, sont encore tres prisees par les usagers des NPS et sont identifiees dans 71, 17 et 5 cas respectivement. Les utilisateurs consomment dans la meme periode de la cocaine, des amphetamines ou des opiaces dans 64, 55 et 28 % des cas. Deux NPS ou plus sont retrouves sur un meme segment de cheveux dans 35 % des cas. Le nombre de cas de NPS identifies est croissant au fur et a mesure des annees (excepte une legere baisse en 2015), correspondant probablement a une hausse progressive de la consommation de ces produits. D’un point de vue quantitatif, les concentrations retrouvees sont tres variables avec de plus grandes valeurs retrouvees chez les sujets pharmaco-dependants. Conclusion Cette etude evalue pour la premiere fois la prevalence des NPS en region parisienne et montre l’interet des cheveux comme matrice alternative dans ce type d’etude. Elle renseigne sur l’ampleur de ce fleau relativement meconnu et souligne la necessite pour les laboratoires specialises de developper des methodes permettant l’identification systematique de ces substances dangereuses, au meme titre que les stupefiants conventionnels.

Objectif L’objectif de ce travail a ete d’optimiser une methode de screening LC-HRMS non ciblee dans les cheveux a l’aide de la bibliotheque de spectre partagee mzcloud™. Cette methode a ensuite ete appliquee a deux cas cliniques. Methodes Les analyses ont ete realisees sur un systeme LC-HRMS de type Q-Exactive (Thermo, Etats-Unis). La lyse des cheveux etait realisee par du tampon phosphate pH = 5, les molecules etaient ensuite extraite par extraction liquide-liquide a pH basique. Afin d’obtenir la sensibilite la plus basse, les parametres suivants ont ete optimises sur 19 analytes representatifs des familles chimiques recherchees (4-fluorofentanyl, 5-MeoDALT, amphetamine, atenolol, benzoylecgonine, bromazepam, buprenorphine, meta-chlorophenylpiperazine, chlorpromazine, haloperidol, JWH-018, ketamine, MDPV, mephedrone, methiopropamine, methoxetamine, morphine, paroxetine, zopiclone) : la quantite d’echantillon necessaire, le volume d’injection, la colonne chromatographique, la duree du gradient chromatographique, la resolution du quadrupole en analyse DDMS2, le temps d’exclusion dynamique (DET), le temps maximal d’injection (MIT) dans la C-trap en full-scan et en DDMS2, l’energie de collision normalisee (NCE), l’ajout d’une liste d’exclusion et les algorithmes permettant l’identification des molecules a partir des spectres (cosine, NIST, HighChem HighRes, HighChem DP). Afin d’evaluer la possibilite d’incrementer la bibliotheque et d’analyser retrospectivement des echantillons, 20 molecules ont ete ajoutees. Les molecules sont infusees dans des conditions standardisees ; l’exactitude des spectres, des structures et des metadonnees sont evaluees manuellement et electroniquement ; les spectres sont filtres afin d’oter les ions correspondant au bruit de fond, ils sont recalibres a partir de la masse exacte theorique et ils sont compares a ceux d’autres bases de donnees (s’ils sont presents). La methode a ensuite ete evaluee sur 317 molecules puis appliquee a l’analyse des cheveux de deux patients consommateurs de NPS. Resultats Les parametres permettant d’obtenir les plus basses limites d’identification etaient les suivants : 50 mg de cheveux, un volume d’injection de 10 μL, la colonne Accucore PhenylHexyl (100 mm × 2,1 mm, 2,6 μm ; Thermo, Etats-Unis), un gradient de 20 min, une resolution de 1 m/z, un DET de 9 s, un MIT de 10 ms en full-scan et 100 ms en DDMS2, une NCE a 50, l’ajout d’une liste d’exclusion contenant les principaux contaminants de la phase mobile et l’algorithme d’identification HighChem HighRes. Au total, 284 molecules ont ete identifiees avec succes, la limite d’identification moyenne etait de 228 pg/mg (1–1000 pg/mg) et la limite de detection de 21 pg/mg (1–500 pg/mg). L’analyse retrospective d’echantillons a permis de retrouver 19/20 molecules ajoutees par le laboratoire. L’application au cas no 1 a permis de retrouver 11 molecules dont 4 NPS : ethylphenidate, 5-MAPB, mephedrone et AKB48-5F. Dans le second cas 20 molecules ont ete retrouvees dont 5 NPS : alpha-PVP, methylone, mephedrone, MDPV et 4-MEC. Conclusion La methode de screening non ciblee optimisee a permis de detecter 284/317 molecules d’interet en toxicologie dans les cheveux dont 72 NPS. L’analyse de deux echantillons a mis en evidence plusieurs NPS, dont l’AKB48-F, detecte pour la premiere fois dans les cheveux. La possibilite d’incrementer une bibliotheque de spectre en acces libre devrait permettre une detection plus precoce des NPS.

Background: Remifentanil and propofol are often used in combination for general anesthesia. We developed a method using LC–MS for their simultaneous measurement in human plasma. Methodology & results: After addition of remifentanil-13C6 and propofol-d18 (IS), 500 µl of plasma were extracted with ethylacetate/hexane. Analysis conditions included gradient elution (water/acetonitrile), electrospray ionization and detection with a triple quadripole mass spectrometer. Remifentanil and propofol were ionized in the positive and negative mode, respectively. The method was validated according to the European Medicines Agency guideline for the validation of bioanalytical methods, then successfully applied to clinical samples from three patients who had undergone liver transplantation. Conclusion: This method is suitable for the simultaneous quantification of remifentanil and propofol in clinical studies.

Trois cent cinquante-huit prelevements post-mortem, representant 30 mois d'expertises toxicologiques, ont ete analyses afin de determiner l'interet des resultats dans le cadre des recherches de causes de deces. Nous avons pour cela compare les resultats d'analyses aux conclusions etablies lors de l'autopsie lorsque celle-ci etaitpratiquee (n = 292). Dans 66 cas, l'autopsie n'a pas ete effectuee, les prelevements ayant ete realises lors de "levee de corps". La presence d'au moins un xenobiotique est retrouvee dans 272 cas (76%) sur les 358 deces. Sur les 80 deces pour lesquels la conclusion de l'autopsie etait une origine toxique probable, 68 (85%) ont ete confirmes par l'analyse, 12 cas (15%) ne revelantpas de toxiques. Sur les 181 deces pour lesquels la cause etait evidente a l'autopsie et a priori d'origine non toxique, parexemple par noyade, homicide ou pendaison, 112 (61,8%) ont revele l'absence de tout toxique et 69 (34,2%) montraient la presence de toxiques pouvant avoir joue un role dans les circonstances du deces. Sept de ces deces pouvaient meme etre directement expliques par la seule presence des toxiques. Enfin, sur les 31 deces d'origine naturelle probable, 27 (87%) ont montre l'absence de tout toxique et 4 (13%) ont revele un deces d'origine toxique. Les medicaments sont les substances les plus souvent rencontrees (168 deces, soit 61, 7%), essentiellement representes par les benzodiazepines (27%) et les antidepresseurs (16,2%). L'alcool est retrouve dans 158 cas (58%). Les stupefiants sont retrou ves dans 62 cas (22,7%), le cannabis etant le plus souvent rencontre (n = 50), devant la morphine (n-21), dont 15 imputables a une prise d'heroine (presence de 6-MAM et codeine).

As previously shown for imatinib, therapeutic drug monitoring (TDM) of vemurafenib should be important to measure efficacy of the treatment in melanoma patient. A micro-method based on liquid chromatography coupled to triple quadrupole spectrometry detection using only 10μL of plasma was validated. A simple protein precipitation with water/acetonitrile was used after addition of vemurafenib-(13)C6 as internal standard. The ion transitions used to monitor analytes were m/z 490.2→m/z 255.2 and m/z 383.3 for vemurafenib and m/z 496.2→m/z 261.2 and m/z 389.3 for vemurafenib-(13)C6. Calibration curves were linear in the 0.1-100μg/mL range, the limits of detection and quantification being 0.01μg/mL and 0.1μg/mL, respectively. The intra- and inter-assay precisions evaluated at 0.1, 0.3, 15, 45 and 80μg/mL were lower than 13.3% and the accuracies were in the 93.7-105.8 range. No matrix effect was observed. At steady state, the results of TDM of vemurafenib in 26 patients treated by 960mg twice daily (n=60 samples), 13 patients with 740mg twice daily (n=13) and one with 1200mg twice daily (n=3) showed a great variability of the pharmacokinetics of this compound.

Objectif Determiner pour la premiere fois l’interet du dosage de naltrexone dans les cheveux comme marqueur de l’observance d’un traitement chronique pour sevrage alcoolique. Methodes Nous avons analyse deux meches de cheveux de 6 cm provenant d’une patiente traitee par naltrexone (REVIA ® , 100 mg/j) depuis 13 ans pour une dependance a l’alcool. Les cheveux de couleur noire, preleves au niveau du vertex, n’ont subi aucun traitement particulier. Apres une etape de decontamination au dichloromethane, la premiere meche est coupee en 3 segments de 2 cm (A/B/C) ou le segment A correspond au segment le plus proche de la racine. Les differents segments sont ensuite finement broyes et 20 mg de chaque segment sont extraits par un melange d’hexane/acetate d’ethyle (1:1 v/v) puis de chloroforme/isopropanol (80:20 v/v) en presence d’hydromorphone-d3 utilisee comme etalon interne. Les deux phases organiques sont ensuite reunies, evaporees a sec et le residu repris par 80 μL d’acetonitrile–tampon formiate. Dix microlitres sont analyses par LC-MS/MS sur un systeme TSQ Vantage triple quadripole (Thermo Scientific. L’elution est realisee dans une colonne Hypersil PFP Gold 100 × 2,1 mm (3 μm) avec un gradient acetonitrile/tampon formiate 2 mM–acide formique 0,1 %. La detection est realisee en mode MRM utilisant une source d’ionisation par electrospray. Les ions suivis sont m/z 342,2, 324,2, 270,2 pour la naltrexone et m/z 289,1, 185,1 pour l’hydromorphone-d3. Un echantillon de cheveux exempt de tout analyte est surcharge afin de preparer des standards de calibration et des controles de qualite. La methode a ete validee pour les criteres de linearite, exactitude, precision, limite de detection et de quantification. La deuxieme meche de cheveux refletant la meme periode d’exposition a ete utilisee pour le dosage de l’ethyglucuronide (EtG) afin de confronter les resultats obtenus. Resultats La methode est lineaire sur l’intervalle 2,5 a 1000 pg/mg ( R 2 > 0,999). L’exactitude (biais) evaluee a trois niveaux de concentrations (20, 250, et 750 pg/mg) est de 4,1 % ( n = 6) et la precision intra- et inter-jours est inferieure a 6,3 % ( n = 18). La limite de detection retenue est de 1 pg/mg avec un rapport signal sur bruit de fond > 3 ; la limite de quantification est de 2,5 pg/mg. Les concentrations de naltrexone retrouvees dans les cheveux sont de 1500, 1450, et 810 pg/mg pour les segments A, B et C respectivement, ce qui semble en faveur d’une exposition reguliere a la naltrexone durant les 6 mois precedant le prelevement. La concentration de naltrexone sur le segment C, deux fois moins importante que sur les deux autres segments, pourrait refleter une moins bonne observance au traitement durant la periode comprise entre 4 et 6 mois precedant le prelevement. Cependant, le dosage de l’EtG realise dans deux segments proximaux de 3 cm (A/B) a permis d’obtenir des concentrations de 20 et 25 pg/mg respectivement, ce qui suggere une consommation moderee et non pas excessive d’alcool durant les 6 mois precedant le prelevement (resultat Conclusion A ce jour, aucune donnee de litterature n’a fait reference ni aux concentrations de naltrexone retrouvees dans les cheveux lors d’un traitement, ni a leur interet dans le suivi de l’efficacite de ce dernier. Il s’agit donc du premier cas de dosage de naltrexone dans les cheveux au cours d’un traitement chronique de l’alcoolodependance. Ces resultats, valides sur un plus grand nombre de patients, pourraient etre d’une grande utilite lors de futurs monitorings des patients alcooliques sous naltrexone.

Objectif Une large epidemie de dystonie tronco-fasciculaire sevit en Republique Democratique du Congo depuis decembre 2014, avec 1021 hospitalisations en 8 mois. MSF et l’OMS sont contactes par le Ministere de la Sante pour suspicion d’epidemie de meningite. Mais la symptomatologie, avec contracture musculaire du cou, du bras et/ou du tronc, deformation de la face, revulsion oculaire, protrusion ou retraction de la langue, raideur de la nuque sans fievre, semble peu evocatrice d’une meningite, confirmee par ailleurs par la negativite des ponctions lombaires. Une origine toxique est suspectee. Methode Neuf urines de patients parviennent a notre laboratoire pour recherche toxicologique large, accompagnes de 2 comprimes (cp) que semblent prendre certains de ces patients. Dans un second temps, 37 cp collectes localement et un certain nombre d’aliments (grains de cafe, sel, arachides) et de plantes utilisees comme medecine traditionnelle nous parviennent. Une etude epidemiologique cas/temoin est lancee avec analyse des urines de 36 patients et 20 temoins, et analyse de 40 medicaments prescrits ou pris en automedication par ces 56 sujets. Un criblage toxicologique reposant sur de la CL-BD, CG-SM et CL-SM/SM Haute Resolution type Q-Exactive (ThermoFisher) est effectue. Les dosages specifiques sont realises en CL-SM/SM (TSQ Quantiva, ThermoFischer) avec methode specifique validee. Resultats Les 9 premieres urines analysees presentent entre 3 et 6 principes actifs medicamenteux chacune, mais elles ont toutes la particularite de contenir de l’haloperidol a des concentrations de 1 ng/mL a 49 ng/mL, alors qu’a priori ces patients n’en prennent pas. Les 2 cp analyses contiennent du paracetamol pour l’un et de la chlorpheniramine pour l’autre, comme indique sur leur boite. Sur les 37 cp analyses ensuite dans le but de determiner l’origine de l’haloperidol, 28 contiennent le principe actif annonce dans leur composition, mais 9 contiennent de l’haloperidol alors qu’ils sont annonces contenir du diazepam. L’etude epidemiologique confirme la presence d’haloperidol dans les urines des 36 cas avec des concentrations comprises entre 0,1 ng/mL (LOQ) et 116 ng/mL, alors que 16 temoins n’ont pas d’haloperidol (LDD = 0,01 ng/mL) et que les 4 qui en presentent ont des concentrations en relation avec une prise ancienne ( Conclusion L’epidemie de dystonie responsable de tres nombreuses hospitalisations au Congo etait due a une contrefacon de cp de diazepam, par ailleurs tres utilise en Afrique, qui contiennent en fait de l’haloperidol. La symptomatologie observee provient des effets indesirables de doses importantes d’haloperidol administrees, notamment chez les enfants. L’origine de cette contrefacon est toujours sous investigation, les cp falsifies ne provenant pas necessairement du laboratoire pharmaceutique indien AGOG. Cette etude montre l’interet des collaborations pluridisciplinaires, et le risque sanitaire des contrefacons de medicaments.

Objectives Drug Facilitated Sexual Assault (DFSA) is defined by the covert administration of psychotropic substances to a victim in order to sexually abuse her or him. Most frequently used molecules are benzodiazepines, antihistamines, some neuroleptics and GHB. When delay between facts and sampling is too important for blood and urine analysis, hair can be an interesting alternative matrix to establish the involvement of drugs in the crime. However, the analysis and the interpretation may be tricky. The aim of this study is to present specific DFSA challenges through some case reports. Method In the pharmacology department of Garches Hospital, 3 locks of hair are used for a DFSA research. One strand is used to research 78 molecules in single LC-MS/MS technique (cocaine, amphetamines, designer drugs, opiates, benzodiazepines, some antihistamines and some neuroleptics). Another strand is used to search for cannabinoids by GC/MS. These two methods are fulfilled on 2 cm-length hair segments. The last strand is used to search for GHB by GC/MS on 5mm-length hair segments. Clinical case n° 1: A 15-year-old woman lodged a complaint against a friend of her and the boyfriend of the latter, for have been drugged and sexually abused 6 months before. 3 strands measuring approximately 32 cm each were collected from the victim. A significant increase of GHB was observed on three segments corresponding to the time of the facts. Clinical case n° 2 : A 10-year-old girl was admitted into intensive care unit for a moderate coma. The father admitted he drugged her daughter with GBL (GHB precursor). At her admission, GHB has been quantified in blood at 71 mg/L. The GBL bottle was also analyzed and was pure GBL. The father confessed that he tested the effects of the GBL to his wife a few days earlier. 4 weeks later, 4 strands were collected from the mother and her daughter. On the mother's hair, a significant increase of GHB was observed on the second segment, corresponding to the time of the facts. On the contrary, the undoubted take of GHB could not be highlighted in the daughter's hair. Clinical case n° 3: A 35-year-old woman who lived with a friend had a drink with him an evening. Afterward she felt dizzy, cold and lost consciousness. She lodged a complaint one month later. 4 strands of hair were collected. Several molecules were found on multiple segments of her hair : cocaine and metabolites, codeine, amphetamine, MDMA, MDA, pseudoephedrine, Hydroxyzine, cetirizine, doxylamine, diazepam, nordiazepam, temazepam, oxazepam, zolpidem, ketamine, cyamemazine, alimemazine, promethazine. Moreover, bromazepam was found only on the segment corresponding to the period of the facts at a concentration of 12 pg/mg, which could correspond to DFSA. But the question of the pharmacology effects of a single intake of benzodiazepine in a poly-addict person remains. Conclusion Hair is now an essential and unavoidable matrix in DFSA cases, but every analytical step can be delicate, especially the interpretation of findings. Though GHB research in hair has frequently been contested, these cases attest it can provide good results in such contexts. However, results may depend on the nature of the hair (hair color, age of the victim, texture,…) and negatives results must be interpreted very carefully, especially for children.

A novel method based upon liquid chromatography coupled to ion trap mass spectrometry (MS) detection with electrospray ionization interface has been developed for the identification and quantification of colchicine in plasma or whole blood. Colchicine was isolated from plasma using a liquid-liquid extraction with dichloromethane at pH 8.0 and embutramide as an internal standard, with satisfactory extraction recoveries. Solutes were separated on a 3-microm C18 Uptisphere (Interchim) column (150 x 2.0-mm i.d.) using acetonitrile/2 mM NH4COOH pH 3.8 buffer (50:50, v/v) as the mobile phase with a flow-rate of 200 microL/min. Data were collected either in full-scan MS mode at m/z 100-450 or in full-scan MS-MS mode, selecting the ion m/z 400.1 for colchicine and m/z 294.1 for embutramide. The most intense daughter ion of colchicine (m/z 358.1) and embutramide (m/z 207.9) were used for quantification. Retention times were 2.40 and 4.25 min for colchicine and embutramide, respectively. Calibration curves were linear in the 0.50-50 ng/mL range. The limits of detection and quantification were 0.05 ng/mL and 0.50 ng/mL, respectively. The intra- and interassay precisions were < 14%, and the intra- and interassay accuracies were in the 97-105.8% range at either 2 or 20 ng/mL. A fatal case of colchicine self-poisoning with a lethal blood concentration of 60 ng/mL and nonfatal case with a plasma sample collected very late (at least 36 h after the ingestion) are presented. The described method enables the unambiguous identification and quantification of colchicine with a very good sensitivity, using only 1 mL of sample.