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Objective Steroid measurement is a challenge in pediatric endocrinology. Currently, liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) is considered a gold standard for this purpose. The aim of this study was to compare both LC-MS/MS and immunoassay (IA) for androgens before and after human recombinant chorionic gonadotropin (rhCG) stimulus in children with 46,XY disorders of sex development (DSD). Methods Nineteen patients with 46,XY DSD were evaluated; all of them were prepubertal and non-gonadectomized. Testosterone, dihydrotestosterone (DHT), DHEA and androstenedione were measured by IA and LC-MS/MS before and 7 days after rhCG injection. The correlation between IA and LC-MS/MS was analyzed by the intraclass correlation coefficient (ICC) and Spearman’s rank correlation coefficient (SCC). For concordance analysis the Passing and Bablok (PB) regression and the Bland and Altman (BA) method were used. Results Testosterone showed excellent correlation (ICC = 0.960 and SCC = 0.964); DHT showed insignificant and moderate correlations as indicated by ICC (0.222) and SCC (0.631), respectively; DHEA showed moderate correlation (ICC = 0.585 and SCC = 0.716); and androstenedione had poor and moderate correlations in ICC (0.363) and SCC (0.735), respectively. Using the PB method, all hormones showed a linear correlation, but proportional and systematic concordance errors were detected for androstenedione, systematic errors for testosterone and no errors for DHEA and DHT. By the BA method, there was a trend of IA to overestimate testosterone and androstenedione and underestimate DHEA and DHT when compared to LC-MS/MS. Conclusion Traditional IA should be replaced by LC-MS/MS for the androgens measurement in prepubertal children whenever is possible.

During the last 4 decades, registration of patients with primary immunodeficiencies (PID) has played an essential role in different aspects of these diseases worldwide including epidemiological indexes, policymaking, quality controls of care/life, facilitation of genetic studies and clinical trials as well as improving our understanding about the natural history of the disease and the immune system function. However, due to the limitation of sustainable resources supporting these registries, inconsistency in diagnostic criteria and lack of molecular diagnosis as well as difficulties in the documentation and designing any universal platform, the global perspective of these diseases remains unclear.Published and unpublished studies from January 1981 to June 2020 were systematically reviewed on PubMed, Web of Science and Scopus. Additionally, the reference list of all studies was hand-searched for additional studies. This effort identified a total of 104614 registered patients and suggests identification of at least 10590 additional PID patients, mainly from countries located in Asia and Africa. Molecular defects in genes known to cause PID were identified and reported in 13852 (13.2% of all registered) patients.Although these data suggest some progress in the identification and documentation of PID patients worldwide, achieving the basic requirement for the global PID burden estimation and registration of undiagnosed patients will require more reinforcement of the progress, involving both improved diagnostic facilities and neonatal screening.

Orientadores: Maria Helena Andrade Santana, Ricardo de Lima Zollner Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia Quimica Resumo: A pesquisa no campo de doenças auto-imunes vem despertando grande interesse, pelas dificuldades de diagnóstico preciso e necessidade de melhor conhecimento das suas causas e mecanismos. O ensaio ELlSA (Enzyme-linked immunosorbent assay) é o mais utilizado para a detecção de auto-anticorpos. Nesse método, os problemas apresentados estão baseados na variabilidade dos kits disponíveis e na natureza multi-etapas envolvida na detecção dos auto-anticorpos. Visando contornar esses problemas, neste trabalho, foi desenvolvido um método de detecção de auto-anticorpos, quantitativo e qualitativo, em única etapa, baseado no reconhecimento molecular e desenvolvimento do sinal colorimétrico, usando lipossomas polimerizados. Na preparação dos lipossomas monoméricos foi usada cardiolipina como ligante específico e ácido 10,12-tricosadiinóico como lipídio estrutural. Os lipossomas polimerizados sob irradiação UV, absorveram a luz no comprimento de onda referente ao azul635nm, púrpura540nm e rosa480nm. A adsorção de auto-anticorpos na superfície dos lipossomas e o desenvolvimento do sinal colorimétrico foram estudados com soros de referência, de indivíduo sadio e auto-imunes. Os resultados experimentais mostraram que a preparação dos lipossomas polimerizados foi reprodutível. A adsorção de auto-anticorpos na superfície. desses lipossomas produziu resposta colori métrica, com alta sensibilidade de mudança de cor do "azul" ou "púrpura" para "rosa", detectável em única etapa. A especificidade do sistema foi 7 vezes maior com soro de referência que com IgG. A utilização de soros auto­imune e sadio reduziu a especificidade do sistema, devido às interferências dos outros componentes do soro. Esses resultados mostraram a potencial idade dos lipossomas polimerizados para a detecção de auto-anticorpos, pela reprodutibilidade do sistema e desenvolvimento de sinal em única etapa Abstract: The research in the field of autoimmune diseases has been increased in the last years, due to the difficulties on the precise diagnostic, and the knowledgement of its causes and mechanisms. ELlSA (Enzyme -linked immunosorbent assay), commercially available, is the most used method for detection of autoantibodies. The problems presented in its procedure are based on the variability of the commercial kits and on the multi-steps included on the autoantibodies detection. Aiming to circumvent these problems, a alternative method for detection of autoantibodies using polymerized liposomes was developed in this work. The main advantage of this approach is the reprodutibility of the liposomes and the molecular recognition and development of colorimetric signal in only one step. Monomeric liposomes were prepared using cardiolipin a na affinity ligand and 10,12­tricosadiynoic acid as structural lipid. The polymerization was performed by UV irradiation in the blue, purple and pink phase. The adsorption of antibodies and the development of the colorimetric signal was studied using reference, normal and autoimmune sera. The experimental results showed that the polymerized were reprodutibles and stable during 5 months. The adsorption of autoantibodies on the surface of polymerized liposomes produced a colorimetric response trom the blue or purple to pink phase. The sensibility of the system was high, and the specificity was 60% compared the responses with reference serum and non specific immunoglobulin G. When real sera was used, the specificity of decreased due to interferences of the other components of the serum. The results show the potentiality of polymerized liposomes for detection of antibodies, due to reprodutibility of liposomes preparation and development of a colorimetric signal in only one ste Mestrado Desenvolvimento de Processos Biotecnológicos Mestre em Engenharia Química

Orientador: Stephen Hyslo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O envenenamento humano por lagartas de mariposas saturnídeas L. obliqua, leva a distúrbios hemostáticos, sendo o óbito, em geral, decorrente de insuficiência renal aguda ou de hemorragia maciça em órgãos nobres. Pouco se sabe sobre a composição bioquímica e imunológica do veneno destas lagartas. Esta dissertação descreve um estudo imunológico do veneno desta espécie, incluindo o desenvolvimento de um "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay" (ELISA) para detecção do veneno de L. obliqua. As imunoreatividades do extrato de cerdas, hemolinfa e saliva de L. obliqua frente ao soro anti-Lonomia foram comparadas por imunodifusão de Ouchterlony, imunoeletroforese e imunoblot após SDS-PAGE. A reatividade do antiveneno com outros venenos animais também foi investigada. Na imunodifusão, o extrato de cerdas e hemolinfa mostraram várias linhas de imunoprecipitação, algumas das quais com completa identidade. A hemolinfa de L. achelous também reagiu com o antiveneno, mas em menor extensão, e mostrou algumas linhas de identidade parcial com a hemolinfa de L. obliqua. Com exceção do extrato de cerdas e hemolinfa da lagarta da mariposa saturnidea A. rectilínea, que mostrou fracas linhas de imunoprecipitação de não-identídade com o extrato de cerdas e hemolinfa de L. obliqua, não houve reação entre o soro mti-Lonomia e outros venenos animais testados. A imunoeletroforese essencialmente confirmou a imunoreatividade observada na imunodifusão. O Imunoblot mostrou que o perfil do extrato de cerdas foi semelhante ao da hemolinfa, particularmente na região de 45-205 kDa. O extrato de cerdas de A. rectilínea e as hemolinfas de A. rectilínea e L. achelous mostraram várias bandas semelhantes àquelas vistas com cerdas e hemolinfa de L. obliqua. Não houve reatividade com as salivas de A. rectilínea e L. obliqua nestes ensaios. Houve uma reatividade muito fraca (não específica) com os venenos de P. nigriventer e T. serrulatus, mas não ocorreu reatividade com venenos de serpentes. Para o ELISA, placas multi-poço foram sensibilizadas com soro anti-L. Obliqua (1:1000) "ovemight", lavadas e incubadas com extrato de cerdas, hemolinfa, saliva ou outros venenos animais. Após lavagem e incubação com IgG purificada por afinidade e conjugada à peroxidase (1:800), o substrato (oenilenodiamina) foi adicionado e a absorbância lida a 492 nm, após 30 min. Em alguns experimentos, o extrato de cerdas, hemolinfa e saliva de L. obliqua foram fracionados por gel filtração em Superdex 75,equilibrada com tampão Tris-HCl 0,1 M5 pH 7,8 e a imunoreatividade das frações foi testada pelo ELISA. A detecção limite para o extrato de cerdas no ELISA foi 0,5 - 1,0 ng/poço (5-10 µg/ml) com resposta máxima com >2 µg/poço (20 µg/ml). O coeficiente de variação íntra- ensaio foi 2 µg/well (20 µg/ml). The intra-assay coefficient of variation was

A local renin-angiotensin system (RAS) has been postulated in the pineal gland. In addition to angiotensin II (Ang II), other active metabolites have been described. In this study, we aimed to investigate a role for Ang IV in melatonin synthesis and the presence of its proposed (IRAP)/AT4 receptor (insulin-regulated aminopeptidase) in the pineal gland. The effect of Ang IV on melatonin synthesis was investigated in vitro using isolated pinealocytes. IRAP protein expression and activity were evaluated by Western blot and fluorimetry using Leu-4Me-β-naphthylamide as a substrate. Melatonin was analyzed by HPLC, calcium content by confocal microscopy and cAMP by immunoassay. Ang IV significantly augmented the NE-induced melatonin synthesis to a similar degree as that achieved by Ang II. This Ang IV effect in pinealocytes appears to be mediated by an increase in the intracellular calcium content but not by cAMP. The (IRAP)/AT4 expression and activity were identified in the pineal gland, which were significantly higher in membrane fractions than in soluble fractions. Ang IV significantly reduced IRAP activity in the pineal membrane fractions. The main findings of the present study are as follows: (1) Ang IV potentiates NE-stimulated melatonin production in pinealocytes, (2) the (IRAP)/AT4 receptor is present in the rat pineal gland, and (3) Ang IV inhibits IRAP activity and increases pinealocytes [Ca2+]i. We conclude that Ang IV is an important component of RAS and modulates melatonin synthesis in the rat pineal gland.

The aim of this study was to estimate the prevalence of use of licit and illicit drugs and verify the behavioral profile among truck drivers. A total of 697 truck drivers were interviewed at a gas station on BR-153, between from February 2014 to February 2015. The questionnaire ASSIST was applied to screening the use of alcoholic beverages, tobacco and illicit drugs. Sociodemographic information and professional were also collected. Urine samples were screened for licit and illicit drugs. All of truckers were male, median age of 42 years, most of them married and low scholarity. 47% related moderate or high consumption of alcohol and tobacco and need a brief intervention. 21% use of cocaine, cannabinoids, amphetamine, hypnotics/sedatives, opioids, inhalants and need specialist treatment. From the 697 participants, 94% provided urine samples. 10,5% were positive for drugs. 5,2% were positive for cocaine, 2,6% for cannabinoids, 2,0% for amphetamine, 0,4% for benzodiazepines, 0,3% positive for methamphetamines and 1,4% for combined use of two drugs. Young and single truckers use tobacco, cannabis and amphetamines and need to receive brief intervention for these drugs. Truck drivers in the northern region of low education, require specialized treatment for tobacco. Truck drivers make high use of tobacco, alcohol, cocaine and other ilicit drugs. Measures are needed to improve quality of life to the drivers, as well as to prevent and treat individuals who use licit and illicit drugs in order to reduce engagement with traffic accidents. Se estimó la prevalencia del uso de drogas lícitas e ilícitas y verificar el perfil de comportamiento de los camioneros. Se entrevistó a 697 camioneros en una gasolinera de la BR-153, de febrero 2014 a febrero 2015. Se aplicó el cuestionario ASSIST para rastrear el consumo de bebidas alcohólicas, tabaco y drogas ilícitas. También se recogió información sociodemográfica y profesional. Se analizaron muestras de orina para detectar drogas lícitas e ilícitas. Los conductores de camiones eran hombres, con una edad media de 42 años, la mayoría de los cuales estaban casados y tenían un nivel educativo bajo. El 47% informó un consumo moderado o alto de alcohol y tabaco y necesitaría una breve intervención y 21% consumía cocaína, cannabinoides, anfetaminas, hipnóticos/sedantes, opioides, inhalantes y necesitan tratamiento especializado. De los 697 participantes, el 94% proporcionó muestras de orina. El 10,5% fueron positivos a fármacos; 5,2% fueron positivos para cocaína, 2,6% para cannabinoides, 2,0% para anfetaminas, 0,4% para benzodiazepinas, 0,3% para metanfetaminas y 1,4% para el uso combinado de drogas. Los conductores de camiones jóvenes y solteros consumían tabaco, marihuana y anfetaminas y necesitaban recibir una breve intervención. Para los camioneros de la región Norte, con bajo nivel educativo, era necesario un tratamiento especializado para el tabaquismo. Los camioneros consumen mucho tabaco, alcohol, cocaína y otras drogas. Se necesitan medidas para mejorar la calidad de vida de los conductores, así como para prevenir y tratar a los usuarios de drogas, con el fin de reducir la participación en accidentes de tráfico. O objetivo deste estudo foi estimar a prevalência do uso de drogas lícitas e ilícitas e verificar o perfil comportamental de caminhoneiros. Foram entrevistados 697 motoristas de caminhões em um posto de gasolina da BR-153, de fevereiro de 2014 a fevereiro de 2015. O questionário ASSIST foi aplicado para rastreamento do uso de bebidas alcoólicas, tabaco e drogas ilícitas. Informações sociodemográficas e profissionais também foram coletadas. Amostras de urina foram testadas para drogas lícitas e ilícitas. Todos os caminhoneiros eram do sexo masculino, idade mediana de 42 anos, a maioria casados e com baixa escolaridade. 47% relataram consumo moderado ou alto de álcool e tabaco e precisariam de uma intervenção breve. 21% consumiam cocaína, canabinoides, anfetaminas, hipnóticos/sedativos, opioides, inalantes e necessitam de tratamento especializado. Dos 697 participantes, 94% forneceram amostras de urina. 10,5% foram positivos para drogas. 5,2% foram positivos para cocaína, 2,6% para canabinoides, 2,0% para anfetaminas, 0,4% para benzodiazepínicos, 0,3% para metanfetaminas e 1,4% para uso combinado de duas drogas. Caminhoneiros jovens e solteiros usavam tabaco, maconha e anfetaminas e precisavam receber intervenção breve para essas drogas. Aos caminhoneiros da região Norte, com baixa escolaridade, o tratamento especializado para o tabagismo era necessário. Os caminhoneiros fazem alto uso de tabaco, álcool, cocaína e outras drogas ilícitas. São necessárias medidas para melhorar a qualidade de vida dos motoristas, bem como prevenir e tratar os usuários de drogas lícitas e ilícitas, a fim de reduzir o envolvimento em acidentes de trânsito.

Ao longo dos últimos 35 anos, grandes progressos foram alcançados em termos de prevenção, diagnóstico e tratamento de infeção VIH, com redução da incidência de infeção em Portugal, na última década. Ainda assim, continua a existir uma taxa elevada de doentes com diagnóstico tardio, com consequências individuais e populacionais. Este artigo tem como objetivos: apresentar um ponto de situação da infeção VIH em Portugal, rever brevemente a evolução natural da infeção e explicitar o mais recente algoritmo de diagnóstico de infeção VIH, revisto em 2014, reforçando a necessidade de manter um elevado nível de suspeição clínica para o diagnóstico precoce de infeção.