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El complejo respiratorio porcino (PRC) es una enfermedad multifactorial y compleja en cerdos en crecimiento y finalización que causa grandes pérdidas en la industria porcina en todo el mundo. El objetivo de este estudio fue determinar los diferentes patrones neumónicos presentes por estudios morfológicos y establecer su gravedad en cerdos de engorde pertenecientes a una granja de la parte oriental de Colombia. Se colectaron muestras de pulmones y nódulos linfáticos de cerdos en la planta de beneficio. Estos pulmones fueron examinados por un profesional en patología externo para detectar lesiones craneoventrales de bronconeumonía (BN). De 1000 cerdos examinados, solo se recolectaron 153 muestras. Cincuenta y dos cerdos fueron seleccionados como controles porque no presentaban lesiones macroscópicas y ciento un cerdos fueron llamados casos porque presentaban lesiones craneoventrales neumónicas. Las lesiones histopatológicas revelaron en el grupo control la presencia de neumonía intersticial (NI) en el 59,62% de los casos, y dos patrones neumónicos combinados en el 19,23% de los casos (Neumonía Bronco-Intersticial y Neumonía Intersticial – NBI-NI). Cuando se estudió el grupo de casos, se identificaron múltiples patrones neumónicos. La combinación más frecuente de patrón microscópico fue Bronconeumonía Supurativa (BNS) y Neumonía Bronco-Intersticial (NBI) en el 57,43% de los casos estudiados (BNS-NBI), seguido de la combinación de tres patrones neumónicos Bronconeumonía Supurativa + Neumonía Broncointersticial + Neumonía Intersticial en el 26,73% de los casos (BNS-NBI-NI). Estos hallazgos sugirieron que ocurrieron múltiples interacciones entre los patógenos del Complejo Respiratorio Porcino (PRC) y con una gravedad variable entre ellos. Además, las lesiones detectadas en la planta de beneficio serían diferentes si se comparan con el examen histopatológico. Por lo tanto, los estudios histopatológicos ofrecieron una idea más precisa de las lesiones reales presentes cuando ocurre neumonía clínica. Se puede sugerir, que la Neumonía Bronco-Intersticial compatible con M. hyopneumoniae se encontró en la combinación más frecuente detectada en este estudio asociada con bacterias o agentes virales. (Texto tomado de la fuente) Porcine Respiratory Complex (PRC) is a multifactorial and complex disease in growing and finishing pigs that causes major losses in the pig industry throughout the world. The goal of this study was to determine the different pneumonic patterns present by morphological studies and to establish their severity in finishing pigs belonging to a farm from the eastern part of Colombia. Samples from lungs and lymphatic nodules were collected from pigs at the abattoir plant. These lungs were examined by a external pathological professional to detect craneoventral Bronchopneumonia (BP) lesions. Out of 1000 pigs examined, only from 153 samples were collected. Fifty-two pigs were taken as control because they do not have gross lesions and one hundred one pigs were called cases because they had pneumonic craneoventral lesions. The histopathological lesions revealed in the control group the presence of Interstitial Pneumonia (IP) in 59.62% of the cases, and two combined pneumonic patterns in 19.23% of the cases (Broncho-Interstitial Pneumonia and Interstitial Pneumonia - BIP-IP). When the group of cases was studied, multiple pneumonic patterns were identified. The most frequent combination of microscopic pattern was suppurative bronchopneumonia (BP) and Broncho-Interstitial pneumonia (BIP) in 57.43% of the studied cases (BP-BIP), followed by the combination of three pneumonic patterns suppurative bronchopneumonia + broncho-interstitial pneumonia + interstitial pneumonia in 26.73% of the cases (BP-BIP-IP). These findings suggested that multiple interactions occurred among Porcine Respiratory Complex (PRC) pathogens and the varying severity among them. In addition, the lesions detected at the slaughter plant would be different if compared to the histopathological examination. Therefore, the histopathological studies offered a more accurate idea of the real lesions present when clinical pneumonia occurs. It may suggest that broncho-interstitial pneumonia compatible with M. hyopneumoniae were found in the more frequent combination detected in this study associated with bacteria or viral agents. Especialización Especialista en Anatomopatología Veterinaria

La producción porcina es una actividad ganadera que contribuye social y económicamente, por lo cual tiene gran importancia a nivel mundial. Está constituida bajo diferentes actividades fundamentales para la crianza y el manejo de los cerdos, principalmente la nutrición y la alimentación, que finalmente determinan el éxito de los sistemas de producción. La porcicultura en Colombia representa hasta el 78% de la producción de carne de cerdo. La yuca (manihot esculenta) se puede considerar como una opción a ser implementada en la alimentación de los cerdos debido a su fácil adaptación al medio donde se cultiva. El alto costo de la producción porcina ha llevado a los productores a implementar nuevas alternativas para mejorar su productividad y economía. Por ejemplo: La yuca, al ser implementada en la alimentación porcina, aporta importantes beneficios al ser una buena fuente de proteína y energía en sus diferentes etapas. En experimentos y repositorios de investigación, se descubrió que, en sus diversas formas, el ensilaje de yuca se utiliza para preservar el valor nutricional de la yuca a través de la fermentación. Su uso puede hacerse después de seis meses sin que se deteriore; las harinas de raíces y de follaje pueden implementarse como sustituto de los cereales o concentrados convencionales, aportando energía. Las raíces frescas pueden utilizarse como fuente alternativa para sustituir al maíz, así como la cáscara de yuca y la harina de salvado de yuca. Swine production is a livestock activity that, due to its economic and social contribution, is of great importance at national and world level. It is constituted under different fundamental activities for the breeding and management of pigs, mainly nutrition and feeding, which ultimately determine the success of production systems. Pig farming in Colombia represents up to 78% of pork production. Cassava (manihot esculenta) is presented as an alternative in swine feeding due to its easy adaptation to the environment where it is grown. The high cost of production in livestock farming has led producers to implement new alternatives ways to improve their productivity and economy. For example: Yucca, when implemented in swine feed, provides important benefits as it is a good source of protein and energy in its different stages. In experiments and research repositories, it was discovered that in its many forms, cassava silage is used to preserve the nutritional value of cassava through fermentation. Its use can be done after six months without deterioration; the roots and foliage flours can be implemented as a substitute for conventional cereals or concentrates, providing energy. Fresh roots can be used as an alternative source to replace corn, as well as cassava husk and cassava bran meal.

La edición génica consiste en la modificación de la secuencia de ADN. El desarrollo de endonucleasas programables ha supuesto un importante avance en la eficiencia de la edición génica. El uso de esta tecnología se encuentra ampliamente desarrollada, presentando diversas aplicaciones como: ciencia básica, mejora en la producción ganadera y aplicaciones biomédicas. El cerdo (Sus scrofa domesticus) es uno de los animales más importantes en la industria cárnica a nivel mundial. La producción de embriones in vitro en esta especie es aún ineficiente debido a la alta poliespermia y un desarrollo embrionario subóptimo. Por esto, uno de los principales objetivos fue optimizar las condiciones para la generación de embriones de cerdo knock-out (KO) mediante diferentes metodologías para maximizar la eficiencia del sistema, en términos de desarrollo embrionario y mutación. Por otro lado, la producción de embriones editados genéticamente tiene una importante limitación, el mosaicismo, siendo así otro objetivo central de este estudio producir embriones con la menor incidencia de mosaicismo para posteriormente obtener cerdos con la mutación deseada. Todos los estudios mostrados en esta Tesis Doctoral se basaron en el uso de un sistema convencional de producción de embriones in vitro (PIV) que implica la maduración de complejos cúmulo-ovocito (COC) y la fecundación in vitro (FIV), seguida de cultivo embrionario. En este trabajo experimental, semen de verraco congelado-descongelado se usa para la FIV después de ser seleccionado mediante swim-up, que también se había optimizado previamente. La detección de mutaciones se realizó mediante PCR con cebadores fluorescentes seguida de una electroforesis capilar. Las muestras se consideraron nativas cuando el pico obtenido por electroforesis capilar fue del mismo tamaño que el pico de control. Otros picos se consideraron KO, y cuando se detectaron más de dos picos, se evaluó como mosaico. En el capítulo 2 se evaluó el tiempo de microinyección y el uso de Cas9 como ARN o ribonucleoproteína (RNP). Cuando Cas9 se administró como ARNm, la tasa de mutación fue similar en todos los grupos (30-42%), mientras que la tasa de mosaicismo fue de 0-21%. Por otro lado, con RNP, las tasas de mutación no difirieron entre los grupos, pero fueron más altas en comparación con Cas9-mARN. La tasa de mosaicismo fue menor en el grupo microinyectado antes de la inseminación (15%) en comparación con los inyectados después (33-57%). Por lo tanto, los embriones microinyectados con RNP antes de la inseminación seguida de la transferencia de embriones permitieron la producción de dos hembras y un macho con mutaciones en ambos alelos del gen TPC2. En el capítulo 3, después de la optimización de las condiciones de electroporación y en la proporción de sgRNA:Cas9, se probó la eficiencia de la electroporación frente a la microinyección para analizar diferentes estrategias para generar embriones CAPN3-KO que podrían ser modelos de LGMDR1. En cuanto a los parámetros de mutación y tasa de blastocistos, no se encontraron diferencias entre los métodos (electroporación vs. microinyección) ni la combinación de guías. En el último capítulo, el objetivo fue evaluar si la aplicación de afidicolina permite mejorar el sistema de edición de genes reduciendo el mosaicismo sin afectar la calidad-cantidad de embriones genéticamente modificados obtenidos. Para ello se utilizaron sgRNAs contra TPCN1. Como resultado, se observó un efecto positivo al evitar el mosaicismo y un efecto negativo en el desarrollo embrionario. Por lo tanto, bajo las condiciones probadas en estos experimentos, el uso de afidicolina no mostró ninguna ventaja. En conclusión, tras los estudios realizados en los diferentes capítulos de esta Tesis, se ha establecido un sistema eficiente y optimizado para generar embriones y cerdos editados genéticamente que podrían utilizarse para modelos de enfermedades humanas. Gene editing consists of the modification of the genomic sequence. The development of programmable endonucleases supposed an important advance in the efficiency of gene editing. The use of this technology is widely developed and has different applications such as basic science, improving agricultural production, or biomedicine applications. The pig (Sus scrofa domesticus) is one of the most important animals in the meat industry worldwide. The in vitro embryo production in this species is still inefficient due to the high incidence of polyspermic and suboptimal embryo development, being this an important limitation. For this reason, one of the main objectives of this Thesis was to optimize the conditions for the generation of knock-out (KO) pig embryos by different methodologies to achieve the higher efficiency of the system, in terms of blastocyst formation and mutation rates. On the other hand, the production of gene-edited embryos has an important limitation, the incidence of mosaicism, thus being another central objective of this study to produce embryos with the lowest mosaicism incidence to later obtain pigs with the desired mutation and maximum efficiency. All the studies shown in this Doctoral Thesis were based on the use of a conventional system of in vitro embryo production (IVP) involving the use of immature cumulus-oocyte complexes (COCs) and the in vitro fertilization (IVF), followed by an embryo culture procedure. In this experimental work, frozen-thawed boar semen is routinely used for IVF after being selected by a swim-up procedure that had been previously optimized too. Mutation detection was performed using the fluorescent PCR-capillary gel electrophoresis technique. Samples were considered wild type when the peak obtained by capillary electrophoresis was the same size as control peak. Other peaks were considered to be KO, and when more than two peaks were detected, this sample was evaluated as a mosaic. In chapter 2 the time of microinjection and the use of Cas9 as RNA or ribonucleoprotein (RNP) were evaluated. When Cas9 was delivered as mRNA, mutation rate was similar in all groups, being around 30-42%, whereas the mosaicism rate was between 0-21%. On the other hand, when RNP was delivered, mutation rates did not differ between groups but were higher compared with those microinjected with Cas9-mRNA. Mosaicism rate was lower in the group microinjected before insemination (15%) compared with those injected afterwards (33-57%). Therefore, in vitro-produced embryos microinjected with RNP before insemination followed by embryo transfer allowed the production of two females and one male with frame shift mutations in both alleles of the TPC2 gene. In chapter 3, after the optimization of electroporation conditions and changes to the ratio of sgRNA:Cas9, the efficiency of electroporation was tested in comparison to microinjection to analyse different strategies to generate CAPN3 KO pig embryo that could be models of LGMDR1 human disease. Regarding mutation parameters and blastocyst rate, no differences were found between either the methods (electroporation vs. microinjection) or the combination of guides. In the last chapter, the objective was to evaluate whether the application of aphidicolin makes it possible to improve the gene-editing system by reducing the mosaicism without affecting the quality and quantity of genetically modified embryos obtained. For this, sgRNAs against TPCN1 were used. As a result, a positive effect in avoiding the mosaicism and a negative effect of aphidicolin were observed in blastocyst development was observed. Therefore, under the tested conditions in these experiments, the use of aphidicolin did not show any advantage. In conclusion, after the studies carried out in the different chapters of this Thesis, an efficient and optimized system has been established to generate gene-edited embryos and pigs that could be used for human disease models.

In Spain, as well as in the rest of Europe, livestock farming represents a substantial part of economy; thus, it is necessary to ensure an optimal breeding of the main farm animals, including swine and cattle. In order to improve the reproductive performance of the aforementioned species, it is crucial to understand which physiological processes take place after ejaculation. Upon ejaculation, semen results from mixing sperm and a fluid known as seminal plasma. During their passage throughout the female reproductive tract, sperm interact with female tissues/fluids and undergo a maturational process known as sperm capacitation, which is essential for the subsequent fertilisation of the oocyte. Taken this into account, the aim of this Dissertation was to study the role of sperm and seminal plasma proteins in the regulation of sperm capacitation, as well as how they modulate the female genital tract. To this end, three studies focused on pig sperm capacitation were conducted. The first study was centred on the involvement of plasma membrane channels, which allow the movement of molecules that modulate the transduction pathways related to sperm capacitation. The second study suggested that levels of PARK7 protein could be related to a better sperm resilience to the oxidative stress generated during capacitation. Finally, the third study found that the presence of seminal plasma during liquid storage affected the subsequent ability of sperm to elicit capacitation, delaying this process. On the other hand, a fourth study was conducted to investigate the modulation of the female tract environment by seminal plasma and/or sperm in species with intravaginal ejaculation, using the bovine as a model. In summary, both seminal plasma and intrinsic sperm proteins were observed to play a key function in the regulation of sperm capacitation. Moreover, the modulation of the female environment was reported to rely upon the ejaculate deposition site. In the case of species with intravaginal ejaculation, like cattle, the role of sperm appeared to be more relevant than that of seminal plasma. Further studies, however, are needed to determine whether intrinsic sperm proteins or those acquired from seminal plasma exert such a modulatory function. Taken collectively, one can conclude that the regulation of physiological processes taking place after ejaculation in the female reproductive tract is species-specific, and depends on each reproductive strategy. Yet, further research on the regulatory role of sperm and seminal plasma proteins is needed before improvements in the field of assisted reproduction in farm animals and humans may be implemented Tant a Espanya com a la resta d’Europa, la ramaderia representa una part substancial de l’economia i, per tant, cal assegurar la cria òptima de les principals espècies d’interès productiu (porcina i bovina). Per tal de millorar el rendiment reproductiu d’aquestes espècies, és crucial entendre els processos fisiològics que tenen lloc després de l’ejaculació. En el moment de l’ejaculació, el semen es forma com a resultat de la barreja dels espermatozoides amb un fluid anomenat plasma seminal. Durant el seu pas pel tracte reproductor femení, els espermatozoides interactuen amb aquest i pateixen un procés de maduració anomenat capacitació espermàtica, el qual és imprescindible per a poder fecundar l’oòcit. Així doncs, la finalitat d’aquesta Tesi Doctoral va ser estudiar el paper de les proteïnes de l’espermatozoide i del plasma seminal sobre la regulació de la capacitació espermàtica així com en la interacció amb el tracte femení. Amb aquest objectiu, es van realitzar tres estudis focalitzats en el procés de capacitació en l’espècie porcina. El primer dels estudis va destacar la implicació dels canals que es troben a la membrana de l’espermatozoide, els quals permeten l’entrada i sortida de molècules que poden tenir un efecte sobre les vies que regulen els canvis moleculars que es produeixen durant la capacitació. El segon estudi va suggerir que els nivells de la proteïna PARK7 poden estar relacionats amb una major tolerància a la situació d’estrès oxidatiu que pateix l’espermatozoide durant el procés de capacitació. Finalment, el tercer estudi va concloure que la presència de plasma seminal durant la conservació del semen (refrigeració) afecta a la posterior capacitació espermàtica, retardant aquest procés. Per altra banda, es va realitzar un quart estudi que va investigar la modulació de l’ambient del tracte femení per part del plasma seminal i/o l’espermatozoide en espècies amb ejaculació vaginal, utilitzant el boví com espècie model. En resum, pel que fa a la regulació de la capacitació, tant les proteïnes intrínseques de l’espermatozoide com el plasma seminal tenen un paper crucial en aquest procés. En canvi, la modulació de l’ambient del tracte femení sembla dependre del lloc de deposició de l’ejaculació. En el cas de les espècies amb ejaculació vaginal, el paper de l’espermatozoide resulta ser més rellevant que el del plasma seminal. Tot i això, són necessaris més estudis per tal de determinar si son les proteïnes intrínseques de l’espermatozoide o les adquirides del plasma seminal les que realitzen aquesta funció de modulació. En conjunt, es pot concloure que la modulació dels processos fisiològics que tenen lloc després de l’ejaculació, al tracte femení, depenen de l’estratègia reproductiva de cada espècie, i que la recerca futura centrada en la seva regulació per part de les proteïnes espermàtiques i del plasma seminal és crucial a l’hora d’aplicar millores en el camp de la reproducció assistida animal y humana Programa de Doctorat en Tecnologia

En la producción ganadera actual, las granjas funcionan como núcleos estancos divididos en diferentes fases donde cada una de ellas tiene su propia importancia, pero comparten problemas comunes. El abordaje de los tres principales puntos que hemos considerado en esta tesis doctoral como claves para el funcionamiento básico de una explotación ganadera; el bajo peso al nacimiento, fallos en fertilidad y calidad seminal, nos ha permitido tener una visión global de la importancia a nivel productivo, y en su defecto económico de presentar problemas en cualquiera de estos pilares. El objetivo principal del primer estudio fue el análisis, en condiciones de campo propias del sistema de producción porcina española, del efecto del peso al nacimiento de los lechones en los resultados productivos y su repercusión a nivel económico en las diferentes fases productivas, poniendo especial atención en las bajas en lactación los primeros días de vida. Se seleccionaron un total de 353 animales que se encontraban en rangos de peso comprendidos entre 0,5 kg a 1,2 kg (agrupados en 5 categorías), sin realizar diferenciación por sexo. Se demostró, que los tres grupos de animales con peso al nacimiento entre 0,5 kg y 0,89 kg presentaban una elevada mortalidad y menores tasas de crecimiento en todas las fases de producción que animales con peso al nacimiento superior, determinando que los costes de producción de los lechones y de kg por cerdo se elevasen por encima de los valores de referencia. En lo relativo al segundo estudio, el objetivo principal de este estudio fue conocer el efecto de la aplicación de cloprostenol 24 horas postparto en los parámetros reproductivos de los animales tratados, medidos en términos del intervalo destete/ cubrición (días), la tasa de gestación (%) y la duración de ésta (días), la tasa de abortos (%), la tasa de partos (%) y el tamaño de camada en el ciclo siguiente, registrando el total de nacidos vivos (LNV), muertos (LNM) y totales (LNT). El estudio fue realizado en una explotación de 680 reproductoras, donde se seleccionaron 448 cerdas productivas de ciclos 1-7 (233 cerdas grupo Cloprostenol; 215 cerdas de grupo control). A las cerdas del grupo experimental se les aplicó una inyección intramuscular de 2 ml de cloprostenol sódico (87 μg/ml) (175 μg/animal) (Planate ®, MSD Animal Health, Salamanca, España) 24 horas postparto, mientras que las del grupo control no recibieron tratamiento alguno. Como conclusión y resultados de este capítulo, la inyección de cloprostenol tras el parto en cerdas con una lactación media de 27 días permite una mejora en los parámetros reproductivos de una explotación reduciendo los días no productivos y mejorando los índices de fertilidad en el ciclo productivo siguientes. Estos efectos positivos son más evidentes en animales con elevada paridad. Por último, en el tercer estudio el objetivo fue evaluar el posible efecto sobre los parámetros reproductivos de cerdas ibéricas inseminadas con las dosis seminales de verracos Duroc a las cuales se le había aplicado un tratamiento de foto estimulación. Se utilizaron 152 muestras seminales de 38 verracos Duroc de entre 10 y 45 meses de edad. Se realizaron dos estudios en dos granjas diferentes (A y B). Como conclusión, la aplicación de la foto estimulación con luz LED en las dosis seminales de machos Duroc usados para la inseminación artificial de cerdas ibéricas no mejora los parámetros reproductivos en las condiciones comerciales. Las posibles mejoras en el tamaño de camada en la cerda ibérica deberían ir relacionados más con la mejora genética de las cerdas que con la mejora de los parámetros seminales y las condiciones de inseminación artificial, que están optimizadas. In today's livestock production, farms work as hermetic centers divided into different stages with different levels of relevance but sharing common problems. The study of the three main points that we have considered key points in this doctoral dissertation for the basic operation of an animal husbandry: low birth weight, fertility failures and seminal quality, has allowed us to have a global vision of the importance, both at production and economic level. The main goal of the first study was the analysis, under typical field conditions of the Spanish swine production system, of the effect caused by the weight of the piglet at birth on the production results and its consequence at an economic level in the different stages of production, paying special attention to the losses in lactation during the first days of life. A total of 353 animals were selected, ranging in weight from 0.5 kg to 1.2 kg (grouped in 5 categories), without differentiation by sex. It was shown that the three groups of animals with birth weights between 0.5 kg and 0.89 kg had higher mortality rates and lower growth rates in all production phases than animals with higher birth weights. This caused that piglet production costs and kg per pig were higher than the reference values. Regarding the second study, the main objective was to know the effect of the application of cloprostenol 24 hours postpartum on the reproductive parameters of the treated animals, measured in terms of weaning/insemination interval (days), gestation rate (%) and duration of gestation (days), abortion rate (%), farrowing rate (%) and size of litter of piglets in the following cycle, recording the number of piglets born alive (PBA), piglets stillbirth (PS) and total born piglets (TBP). The study was carried out in a farm of 680 reproductive sows, where 448 productive sows of cycles 1-7 were selected (233 Cloprostenol group sows and 215 control group sows). Sows in the experimental group were given an intramuscular injection of 2 ml cloprostenol sodium (87 μg/ml) (175 μg/animal) (Planate ®, MSD Animal Health, Salamanca, Spain) 24 hours postpartum, while those in the control group received no treatment. The results and conclusion of this chapter is that the injection of cloprostenol after farrowing in sows with an average lactation of 27 days allows an improvement in the reproductive parameters of a farm by reducing non-productive days and improving fertility rate in the following production cycle. These positive effects are more evident in animals with high parity. Finally, in the third study, the objective was to evaluate the possible effect on the reproductive parameters of Iberian sows inseminated with seminal doses from Duroc boars to which a photo-stimulation treatment had been applied. A total of 152 seminal samples from 38 Duroc boars between 10 and 45 months of age were used. Two studies were conducted on two different farms (A and B). As a conclusion, the application of photo stimulation with LED light in seminal doses of Duroc boars used for artificial insemination of Iberian sows does not improve reproductive parameters under commercial conditions. Possible improvements in litter size of the Iberian sow should be related more to the genetic improvement of the sows than to the improvement of seminal parameters and artificial insemination conditions, which are optimized.

La intensa selección genética realizada en las cerdas en las últimas décadas ha generado una cerda hiperprolífica con mayor número de lechones al nacimiento y mayor proporción de aquellos con pesos inferiores a 1 kg, denominados lechones de bajo peso al nacimiento (LBPN). Los LBPN padecen de alteraciones morfofisiológicas gastrointestinales, que les genera una menor capacidad digestiva para poder aprovechar de manera eficiente los nutrientes de la dieta, afectando su desempeño productivo y supervivencia. Esto ha desencadenado una serie de trabajos de investigación para encontrar alternativas nutricionales y alimenticias que permitan a este tipo de lechones alcanzar mejores parámetros productivos. El objetivo de este documento fue reunir información sobre las alteraciones digestivas más importantes en LBPN y las opciones nutricionales para mejorar su supervivencia y desempeño productivo., The intense genetic selection carried out in sows in the last decades has generated a hyperprolific sow with greater litter sizes and a greater proportion of piglets with weight lower than 1 kg, called low birth weight piglets (LBWP). The LWBP suffer from gastrointestinal morphophysiological alterations, which generates a lower digestive capacity in order to efficiently take advantage of the nutrients of the diet, affecting their productive performance and survival. This has triggered a series of research to find nutritional and feeding alternatives that allow this type of piglets to achieve better productive parameters. The objective of this document was to gather information about the most important digestive alterations in LBWP and the nutritional options to improve their survival and productive performance.

Se organizó una secuencia experimental para investigar la propagación de palmas reales (Roystonea regia H.B.K. Cook) como integrante del sistema de producción amigable, sostenible, biológica y económica de palmares y cerdos donde el palmiche como vínculo ha perdurado en los campos cubanos durante más de medio milenio. Se organizó una matriz DAFO para conocer y transformar el status de la propagación de las palmas. Se hizo una encuesta entre 40 campesinos porcicultores seleccionados al azar y miembros de cooperativas de las provincias Artemisa y Mayabeque, del Oeste cubano. Se inquirió sobre prácticas de cultivos de palmas y se constituyó un banco digital de datos a la vez que se organizó un segundo banco digital con documentación localizada en internet, sobre dasonomía de palmáceas. Finalmente, las encuestas indicaron que la colecta de plántulas de palmas reales fue la práctica mayoritaria de propagación (50.0–66.7% de preferencia). El banco de datos sobre propagación de palmáceas reunió 200 documentos. El estudio de la información permitió preparar un artículo reseña sobre botánica y propagación de la palma real cubana, sin antecedentes desde la era de Roig, que contempló 13 secciones y contaba con 90 referencias bibliográficas. Este meta-análisis sugirió que la propagación de las Roystoneas puede pasar de la práctica tradicional de moteo o selección de plántulas nacidas al pie de palmas madres, a técnicas contemporáneas, como cultivar tejido, permitiendo utilizar herramientas genéticas de selección e hibridación, para obtener rápidamente árboles de menor altura y frutos con más lípidos y menos pared celular., An experimental sequence was set up to investigate the propagation of the royal palms (Roystonea regia H:B:K Cook) as part of the amicable production sustainable, biological and economical of the palm grove and pigs. A matrix was organized DAFO to know and to transform the status of the propagation of palms. A survey was applied to 40 farmers at random, who raise pigs, and members of the cooperatives located in Artemisa and Mayabeque provinces in the Cuban. There was an investigation about the practices in the growing of palm and a digital bank of data was established, and a second digital bank was set up with information located in internet related to dasonomia the palmaceas. Finally, the surveys registered that the collection of seedlings of royal palms was the majority in the propagation (50-66.7% of preference). The bank of data about the palmaceas propagation gathered 200 documents. The study of the information allowed to prepare an article about Botany and the propagation of the Cuban royal palm, without antecedents since Roig‘s studies. It has 13 sections and 90 bibliographical references. This metaanalysis suggested that the propagation of the Roystoneas can pass from the traditional practice to the speck or selection of seedlings that were barn next to the mother palm to contemporary techniques as to cultivate tissue, allowing to use genetic tools of selection and hybridization, to obtain rapidly trees with less height and fruits with more lipid and less cellular wall.

El objetivo del trabajo fue establecer el comportamiento de aislamientos de Escherichia coli (E. coli) resistentes a cefotaxima (CTX) y/o colistina, obtenidos de materia fecal de cerdos de la República Argentina, frente a antimicrobianos de importancia crítica para la salud pública. En 2018, se procesaron 56 muestras de 11 granjas localizadas en las provincias de Buenos Aires, Córdoba, Santa Fe y San Luis. Se obtuvieron 31 aislamientos resistentes a cefotaxima, 21 a colistina y 23 a ambos antimicrobianos. El 69 % de los aislamientos fue resistente a ácido nalidíxico y el 37,3 % a ciprofloxacina, antimicrobianos de máxima prioridad. No se aislaron E. coli resistentes a carbapenemes. Setenta y tres aislamientos se comportaron como multirresistentes, de los cuales el 50 % mostró resistencia frente a seis o siete grupos de antimicrobianos. La resistencia a cefalosporinas de tercera generación se relacionó principalmente con el gen blaCTX-M, particularmente, blaCTX-M-8/25, mientras que la resistencia a colistina se asoció con el gen mcr-1. De los resultados se desprende que existen cerdos en la República Argentina que portan E. coli con resistencia a múltiples antimicrobianos, incluyendo los de importancia crítica para medicina humana y veterinaria. Otros estudios complementarios permitirán determinar los clones de E. coli productores de ß-lactamasas de espectro extendido circulantes en granjas porcinas y su implicancia sobre la salud pública., The goal of this study was to establish the behavior of cefotaxime (CTX)-resistant Escherichia coli (E. coli) and/or colistin-resistant E. coli, isolated from fecal samples of pigs in Argentina to other antimicrobials classified by the WHO as critically important for public health. In 2018, 56 samples from 11 farms located in Buenos Aires, Córdoba, Santa Fe, and San Luis provinces were processed. Thirty-one cefotaxime-resistant E. coli, 21 colistin-resistant E. coli, and 23 cefotaxime-colistin-resistant E. coli were obtained. Sixty-nine percent of the E. coli isolated were resistant to nalidixic acid and 37.3 % to ciprofloxacin, antimicrobials classified as the highest priority. No carbapenem-resistant E. coli were isolated. Seventy-three isolates were classified as multiresistant, of which 50 % showed resistance against 6 or 7 antimicrobial groups. Third-generation cephalosporin resistance was mainly associated with the blaCTX-M gene, particularly blaCTX-M-8/25, while colistin resistance was associated with the mcr-1 gene. the study evidence that Argentinian pigs harbor multidrug-resistant E. coli isolates, including resistance to antimicrobials of critical importance for human and veterinary medicine. Complementary analyses will be necessary to determine extended-spectrum β-lactamase-producing E. coli clones circulating in pig farms and their implications for public health., Facultad de Ciencias Veterinarias

This dissertation explores the different slaughter methods considered humane, which are used and required by law to kill pigs raised for human consumption in the European Union. The main points covered are - the methods required by current EU Regulation 1099/2009 on the protection of animals at the time of killing which include; electrical stunning (head-only and head-body) and gas stunning (carbon dioxide gas and inert gas mixtures). The advantages and disadvantages of these methods are discussed, using results found online from studies and research conducted on the topic, including a list of other methods studied which are not permitted by law but are being looked into and possibly developed as potential alternative stunning methods. The enforcement of this Regulation and the surrounding issues is also touched upon towards the end of the dissertation. In the conclusion, the question of whether any of these methods can be considered truly humane is explored, based on the true definition of the word humane and the results of the studies discussed. Este trabajo explora los diferentes métodos de sacrificio considerados humanitarios, que son usados y exigidos por la ley para matar a los cerdos criados para el consumo humano en la Unión Europea. Los principales puntos tratados son: los métodos requeridos por el actual Reglamento 1099/2009 de la UE sobre la protección de los animales en el momento de la matanza, que incluyen; aturdimiento eléctrico (cabeza-cabeza y cabeza-cuerpo) y aturdimiento por gas (dióxido de carbono y mezclas de gases inertes). Se discuten las ventajas y desventajas de estos métodos, utilizando resultados encontrados en internet de estudios e investigaciones realizados sobre el tema, incluyendo una lista de otros métodos estudiados que no están permitidos por la ley pero que están siendo estudiados y posiblemente sean desarrollados como posibles métodos alternativos de aturdimiento. La aplicación de este Reglamento y los problemas asociados también se abordan hacia el final de este trabajo. En la conclusión, se explora la cuestión de si alguno de estos métodos puede considerarse verdaderamente humanitario, basándose en la definición real de la palabra "humanitario" y los resultados de los estudios discutidos.

El plasma seminal de cerdo contiene citoquinas, cuyas mediciones podrían ser de interés para predecir la funcionalidad reproductiva de los verracos. Actualmente, poco más se conoce de las citoquinas seminales del cerdo. Esta Tesis Doctoral ha pretendido mejorar el conocimiento de las citoquinas seminales porcinas. Dicho objetivo fue abordado en cuatro estudios independientes. El primero centrado en evaluar cómo el manejo del semen y el almacenamiento del plasma seminal influyen en las mediciones de citoquinas. El segundo en evaluar si la época de recogida de los eyaculados influye en la cuantificación de las citoquinas seminales. El tercero si la cuantificación de citoquinas seminales tiene valor predictivo de la capacidad de los espermatozoides para resistir la conservación. El cuarto en evaluar cómo se distribuía en el tracto reproductivo del verraco una citoquina específica, el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF). Las citoquinas cuantificadas en los primeros tres estudios fueron interferón gamma (IFNγ), GM-CSF, interleucina (IL) -1α, IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18 y factor de necrosis tumoral alfa [TNFα]. Los factores de crecimiento transformante beta (TGF) -β1, -β2 y -β3 también se cuantificaron en el tercer estudio. El primer estudio contempló tres ensayos que exploraron cómo el retraso en la obtención del plasma seminal tras la recogida de los eyaculados (2 y 24 h, ensayo 1) y el almacenamiento del plasma seminal, ya sea por un período corto (a 5ºC, -20ºC y -80ºC durante 72 h, ensayo 2) o largo (a -20ºC y -80ºC durante dos meses, ensayo 3) influía en la cuantificación seminal de las citoquinas. Los resultados mostraron que el retraso de hasta 24 h en la obtención del plasma seminal no influyó. Sin embargo, el almacenamiento del plasma seminal, tanto a corto como a largo plazo, generó inestabilidad en muchas citoquinas. Así, si se requiere el almacenamiento del plasma seminal, las condiciones de almacenamiento deberían ajustarse a cada citoquina. En el segundo estudio, las muestras de plasma seminal se agruparon según el período del año de recogida de los eyaculados: periodo decreciente (verano y otoño) y creciente (invierno y primavera) en luz diurna. La cuantificación de las citoquinas seminales varió entre ambos períodos, con niveles más altos en el creciente. En resumen, el período de recogida de los eyaculados influye en la cuantificación de las citoquinas seminales. El tercer estudio incluyó dos experimentos, uno para semen conservado en estado líquido y otro para semen congelado-descongelado. Además de la cuantificación de las citoquinas seminales, se evaluó la calidad y funcionalidad de los espermatozoides. Los modelos de regresión lineal múltiple con un enfoque bayesiano revelaron que las citoquinas TGF-β2, TGF-β3, IL-1ra, IL-4, IL-8 e IL-18 tienen capacidad predictiva de los cambios de motilidad que experimentan los espermatozoides durante la conservación en estado líquido. Las mismas citoquinas más IFNγ tienen la capacidad de predecir los cambios funcionales de los espermatozoides durante la congelación y descongelación. En conclusión, las citoquinas seminales contribuirían a los cambios funcionales que experimentan los espermatozoides de cerdo durante la conservación. El último estudio, centrado en la GM-CSF, demostró que esta citoquina se expresaba en todos los tejidos reproductivos (testículo, epidídimo y glándulas sexuales accesorias), fluidos (epidídimo y plasma seminal) y espermatozoides maduros (de la cola del epidídimo y del eyaculado) del verraco. El Western blot reveló tres formas de GM-CSF con diferentes grados de glicosilación (15, 31 y 40 kDa) en los tejidos. Los fluidos expresaron solo la de 15 kDa mientras que las formas expresadas en los espermatozoides variaron según sea su procedencia. En resumen, la GM-CSF está presente en el tracto reproductivo del verraco, incluidos fluidos y espermatozoides maduros. Pig seminal plasma contains measurable concentrations of several cytokines, whose quantification could be of interest to predict and/or diagnose reproductive disorders, sperm functionality and fertility outcomes. Little else is known about pig seminal cytokines. Therefore, more studies are timely. The objective of this PhD Thesis was to improve the current knowledge of porcine seminal cytokines, which was addressed through four independent studies. The first focused on evaluating how semen handling and seminal plasma storage influenced cytokine measurements. The second study evaluated whether the period of the year of ejaculate collection influenced the seminal measurements of cytokines. The third study evaluated whether the measurement of seminal cytokines had predictive value of the capability of pig sperm to withstand preservation. The fourth study focused on evaluating the distribution of a specific cytokine, the granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), in the male pig reproductive tract. The cytokines measured in the first three studies were interferon gamma (IFNγ), GM-CSF, interleukin (IL)-1α, IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18 and tumor necrosis factor alpha (TNFα). Additionally, the transforming growth factor beta (TGF) -β1, -β2 and -β3 were also measured in the third study. The first study contemplated three separate trials exploring the delay (2 h and 24 h) in the harvest of seminal plasma after ejaculation collection (trial 1) and the storage of seminal plasma before cytokine measurements, either for short (5 ºC, -20 ºC and -80 ºC for 72 h, Trial 2) or prolonged period (-20 ºC and -80 ºC for two months, Trial 3). The results showed that the 24-hours delay in seminal plasma harvesting did not influence the seminal cytokine measurements. However, the storage of seminal plasma, both short- and long-term, generated instability in many cytokines. Therefore, if storage of seminal plasma is required, the storage conditions must be adjusted to each cytokine. In the second study, the seminal plasma samples were grouped according to the period of the year of ejaculate collection. Two periods were contemplated, with decreasing (summer and autumn) and increasing (winter and spring) daylight. Both periods also showed clear differences in air temperature, being highest in the decreasing period. The seminal cytokines showed differences in concentration between both periods. The highest were measured during the increasing period. In summary, the period of ejaculate collection influences seminal cytokine measurements. The third study included two separate experiments, one for semen stored in liquid state and the other for frozen-thawed semen. In addition to the measurement of seminal cytokines, semen samples were evaluated for sperm quality and functionality. The multiple linear regression models with a Bayesian approach revealed that the cytokines TGF- β2, TGF- β3, IL-1ra, IL-4, IL-8 and IL-18 have the ability to predict the motility changes experienced by sperm during liquid storage. The same cytokines plus IFNγ also have the ability to predict the functional changes experienced by sperm during freezing and thawing. In conclusion, seminal cytokines would contribute to modulate the functional changes undergoing pig sperm during preservation. The last study, focused in GM-CSF, demonstrated positive labelling of this cytokine in all the male pig reproductive tissues (testes, epididymis and accessory sex glands), fluids (epididymal and seminal plasma) and in mature sperm from both cauda epididymis and ejaculate. Western blot revealed three forms of GM-CSF with different glycosylation degrees (15, 31 and 40 kDa) in the tissues. Fluids expressed only the GM-CSF of 15 kDa while the GM-CSF forms expressed in sperm varied among sperm source. In sum, GM-CSF is widely present in the reproductive tract of male pigs, attached to the spermatozoa already in the epididymis as well as verted to seminal plasma.

El oviducto es la región anatómica del tracto genital femenino que conecta el útero y los ovarios. Este órgano juega un papel importante en el transporte de gametos y su almacenamiento, incluyendo el reservorio espermático. Además, en él tienen lugar la fecundación y las primeras fases del desarrollo embrionario. En la primera parte de este trabajo se planteó una técnica que permite la separación de subpoblaciones de espermatozoides porcinos en función de su afinidad por azúcares relacionados con el reservorio espermático y se evaluó la capacidad de unión de estos espermatozoides por la zona pelúcida (ZP), para evaluar el potencial de esta selección en técnicas de reproducción asistida. En la segunda parte de la tesis, se llevó a cabo un estudio de transcriptómica del oviducto de la coneja antes y después de la ovulación y durante el desarrollo embrionario preimplantacional para identificar factores clave en cada una de estas etapas. Se empleó la separación celular mediante citometría de flujo (sorting) para seleccionar las subpoblaciones espermáticas porcinas pre-incubadas en medio no capacitante con ovalbúmina y el trisacárido Lewisa fluorescentes. La afinidad por la ZP se evaluó mediante incubación en medio capacitante de cada subpoblación espermática y su correspondiente control con ZPs aisladas a partir de ovocitos aspirados de ovarios obtenidos en matadero. La cantidad de espermatozoides unidos a la ZP se evaluaron con ayuda de Hoescht 33342 mediante microscopía de fluorescencia. Las diferencias temporales en el transcriptoma del oviducto se evaluaron mediante análisis de micromatrices y RT-qPCR, haciéndose las correspondientes preparaciones inmunohistoquímicas y análisis de proteínas secretadas al fluido oviductal (FO) mediante western blot. Los resultados de la primera parte muestran que se puede separar subpoblaciones espermáticas en función de su afinidad por sondas glucídicas, y que estas poblaciones tienen diferente afinidad por la ZP, lo que les confiere diferente capacidad para fecundar un ovocito. Los resultados del análisis mediante micromatrices muestran un total de 602 transcritos diferencialmente expresados entre las etapas analizadas (pre-ovulatoria, post-ovulatoria, oviducto con embriones de ocho células y oviducto con mórulas). Además, se identificaron tres proteínas del (FO) con una expresión diferente durante las etapas estudiadas: la osteopontina (SPP1), cuya expresión es mayor en la etapa post-ovulatoria (en presencia de zigotos); el neuropéptido Y (NPY), secretado antes de la ovulación; la metalopeptidasa 7 (MMP7), que deja de expresarse en las últimas fases del desarrollo pre-implantacional. Como conclusiones de la primera parte de la tesis: 1) existen varias subpoblaciones espermáticas con distintas afinidades por azúcares que poseen diferente afinidad por la ZP, 2) es posible separar las subpoblaciones espermáticas en base a su afinidad por glicoconjugados mediante sorting, pero su afinidad por la zona pelúcida se compromete, 3) es necesario implementar un método de separación diferente al de sorting que no disminuya la afinidad de los espermatozoides por la zona pelúcida. En cuanto a la segunda parte de la tesis: 1) el transcriptoma del oviducto de la coneja presenta diferencias espaciales y temporales durante la ovulación y el desarrollo embrionario pre-implantacional; 2) Varias proteínas del FO varían entre la cópula y el final del desarrollo embrionario pre-implantacional, incluyendo SPP1, NPY y MMP7; 3) La respuesta a la ovulación y la cópula presenta ciertos mecanismos moleculares conservados entre diferentes especies de mamíferos, favoreciendo la expresión de SERPINE1, SPP1 y PTGS2; 4) La respuesta del oviducto de los mamíferos a la presencia de embriones involucra una modulación local del sistema inmune. Aún así, no se ha esclarecido un mecanismo de respuesta universal debido a la discrepancia de resultados entre especies. The oviduct is the anatomical region of the female genital tract which connects the utherus with the ovaries. This organ plays a relevant role in gamete transport and storage, including the sperm reservoir. Moreover, fecundation and the first stages of embryo development take place in the oviduct. In the first part of this thesis, a technique on boar spermatozoa separation was developed on the bases of affinity for sugars involved in the sperm reservoir. A study on the ability of these spermatozoa to bind the zona pellucida (ZP) was done to evaluate a possible use on assisted reproduction techniques. In the second part of the thesis, a transcriptomics study of the oviduct of the rabbit doe was performed before and after ovulation, and during the preimplantational embryo development to identify key factors of each stage. Among the experimental techniques used, there was flow cytometry cell sorting to select the sperm subpopulations pre-incubated with fluorescent ovalbumin and the sugar Lewisa. Affinity for ZP was evaluated by incubating in capacitating medium each sperm subpopulation and its correspondent control with isolated ZPs from oocytes obtained from ovaries of a local abatoir. The quantity of sperm bound to the ZP was evaluated with Hoescht 33342 by fluorescence microscopy. The temporal differences in the transcriptome of the oviduct were evaluated by microarray analysis and RT-qPCR, doing the correspondent immunohistochemistry techniques. The analysis of secreted proteins to the oviductal fluid (OF) by western blot. Results show that it is possible to separate sperm subpopulations based on their affinity for sugar probes, and these subpopulations have a different affinity for the ZP, so they have a distinct fertilization potential. Microarray analysis show 602 transcripts differentially expressed between the analysed stages (pre-ovulatory, post-ovulatory, 8-cell containing oviduct and morulae containing oviduct). Furthermore, three oviductal proteins with a differential expression during the analysed stages were identified: osteoponting (SPP1), whose expression is highest in the post-ovulatory stage; neuropeptide Y (NPY), secreted before ovulation; metallopeptidase 7 (MMP7), whose expression is repressed during the last stages of pre-implantational development. To conclude with the first part of the thesis: 1) there are several sperm subpopulations with different affinities for sugars which have different affinities for the ZP, 2) it is feasible to separate these sperm subpopulations by flow cytometry cell sorting, but its affinity for the ZP is compromised, 3) it is mandatory to implement a method of sperm selection not involving sorting in order to avoid disminishing the affinity for the ZP. About the second part of the thesis: 1) rabbit doe oviductal transcriptome shows spatial and temporal differences through ovulation and pre-implantational development; 2) Several OF protein concentrations fluctuate along copulation and the end of pre-implantational development, among those: SPP1, NPY and MMP7; 3) Response to ovulation and copulation involves certain molecular mechanisms conserved across different mammalian species, favouring the expression of SERPINE1, SPP1 and PTGS2; 4) Response to embryo presence within the oviduct involves a local regulation of the immune system. However, it has not been discovered a clear universal mechanism of response due to discrepancy of results among species.

Se describe el resultado de la búsqueda de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (SARM) en la cavidad nasal de cerdos de cría intensiva, durante los años 2019 y 2021, con el objetivo de dar a conocer si existe circulación, en Argentina, de este patógeno relevante en la salud pública. Se procesaron 64 muestras obtenidas en 5 granjas de las provincias de Buenos Aires, Santa Fe y San Luis. Se aislaron 19 (29,7%) SARM, confirmados por la presencia del gen mecA y con resistencia múltiple (3 o más familias de antibióticos). Todos los SARM fueron sensibles a rifampicina, nitrofurantoína y linezolid y resistentes a cloranfenicol, tetraciclina y ciprofloxacina. La resistencia a eritromicina fue del 68,4% (13/19), a clindamicina del 78,9% (15/19) y la no sensibilidad a gentamicina del 57,9% (11/19). Las edades de los animales portadores fueron de 27, 80, 120 y 154 días y, en todas las granjas muestreadas, se identificó SARM. Los aislamientos del año 2019 se caracterizaron como complejo clonal 1 (SARM de la comunidad) prevalentes en la población humana. Estos hallazgos demuestran la circulación de SARM en cerdos de producción intensiva y resaltan la necesidad de implemen-tar su control para tomar medidas apropiadas que eviten su diseminación., In the present work, the presence of methicillin- resistant Staphylococcus aureus (MRSA) was evaluated in the nasal cavity of pigs from intensive farms during 2019 and 2021, with the aim to report MRSA circulation of this relevant public health pathogen in Argentina. A total of 64 samples obtained from 5 farms in Buenos Aires, Santa Fe and San Luis provinces were studied. Nineteen (29.7 %) MRSA were isolated, confirmed by the presence of the mecA gene; all isolates were multidrug resistant (3 or more families of antibiotics). All MRSA were susceptible to rifampin, nitrofurantoin, and linezolid and resistant to chloramphenicol, tetracycline, and ciprofloxacin. Resistance to erythromycin, to clindamycin and non-susceptibility to gentamicin was 68.4 % (13/19), 78.9 % (15/19), and 57,9 % (11/19), respectively. Carrier animals were 27, 80, 120 and 154 days old, and MRSA was identified in all the sampled farms. The isolates from 2019 were characterized as clonal complex 1 (community MRSA), which is prevalent in the human population. These findings show the circulation of MRSA in pigs from intensive farms and highlight the need for surveillance to take appropriate measures to prevent its spread., Facultad de Ciencias Veterinarias

Resumen: Se realizó un ensayo con el objetivo de evaluar el efecto sobre el comportamiento productivo de cerdos en engorde de sustituir el maíz por distintos tipos y formas de presentación de sorgo granífero. Se evaluaron cinco tratamientos, consistentes en dietas isoproteicas e isoenergéticas: T1: (control) en base maíz/soja; T2: grano de sorgo bajo en taninos (SBT) en sustitución del maíz; T3: ensilado grano húmedo (SGH) de SBT en sustitución del maíz; T4: SGH de sorgo con contenido medio de taninos (SMT) en sustitución del 50 % del maíz; T5: grano de SMT en sustitución del 50 % del maíz. Se utilizaron 30 cerdos, seis por tratamiento, que fueron evaluados entre los 35 y 105 kg de peso vivo. Se realizó alimentación a voluntad. Se evaluaron los parámetros ganancia diaria de peso, consumo diario de alimento e índice de conversión del alimento ajustado a 90 % de materia seca. No se observaron diferencias entre tratamientos para ninguno de los parámetros evaluados. Se concluye que el SBT, en forma de grano seco molido o SGH puede remplazar totalmente al grano de maíz en dietas para cerdos en engorde sin que se afecten los parámetros de respuesta productiva. A su vez es posible la sustitución del 50 % del maíz por SMT en forma de grano seco o SGH sin consecuencias sobre el resultado productivo. Summary: The objective of this study was to evaluate the effect on productive performance of fattening pigs to substitute maize for different types and forms of sorghum. Five treatments, consisting of isoproteic and isoenergetic diets, were evaluated: T1: (control) on maize / soybean basis; T2: grain of low tannins sorghum (SBT) in substitution of maize; T3: high moisture grain silage (SGH) of SBT in substitution of maize; T4: SGH of medium tannins content sorghum (SMT) replacing 50 % of maize; T5: SAT grain replacing 50 % of maize. Thirty pigs were used, six per treatment, which were evaluated between 35 and 105 kg of live weight. Feeding was done at will. The parameters daily weight gain, daily feed intake and feed conversion ratio adjusted to 90 % dry matter were evaluated. There were no differences between treatments for any of the parameters evaluated. It is concluded that SBT, in the form of dry milled grain or SGH, can completely replace maize grain in diets for fattening pigs without affecting the parameters of productive response. In turn, it is possible to substitute 50 % of maize by SMT in the form of dry grain or SGH without consequences on the productive result.

Este estudo procura compreender as práticas e atitudes de trabalhadores que lidam com o abate e desmancha de animais num matadouro. Para o efeito, fez-se trabalho de observação, complementado com o uso de registos fotográficos, durante o “encaminhamento”, “atordoamento”, “pendura”, “sangria” e “desmancha” dos animais na “linha de abate”; bem como o método de análise qualitativa, que requereu entrevistar oito indivíduos: duas mulheres e seis homens. Embora os trabalhadores reconheçam os animais como seres sensíveis, a operacionalização das suas tarefas na “linha de abate” está dependente de estratégias que requerem objetificação e distanciamento emocional. Foram também evidenciadas atitudes conflituosas relacionadas com determinadas espécies de animais. O contexto laboral (matadouro), o tempo despendido, as tarefas desempenhadas, a espécie dos animais, sobretudo o género e as trajetórias socioculturais dos trabalhadores destacaram-se como fatores predominantes de influência nas práticas e atitudes apuradas. This study aims to understand the practices and attitudes of workers that deal with animals in a slaughterhouse. For this purpose, it was used photographic documentation during the “routing”, “stunning”, “hanging” and “bleeding” of animals in the slaughter line; also the method of qualitative analysis that required interviewing to eight individuals: two women and six men. Although workers recognize animals as sentient beings, the operationalization of their tasks in the slaughter line is dependent on strategies that require objectification and emotional distancing. Conflicting attitudes related to certain species of animals were also evidenced. Labor context (slaughterhouse), time spent, the performed tasks, animal species, particularly gender and socio-cultural trajectories of workers stood out as predominant factors that influenced their practices and attitudes. Cette étude cherche à comprendre les pratiques et les attitudes des ouvriers chargés de l’abattage et de la découpe d’animaux dans un abattoir. Le travail d’observation a été complété par des photographies prises pendant l’acheminement, l’étourdissement, l’accrochage, la saignée et la découpe des animaux sur la ligne d’abattage, ainsi que par l’analyse qualitative à partir d’entretiens avec huit personnes: deux femmes et six hommes. Bien que les ouvriers reconnaissent les animaux comme des êtres sensibles, l’opérationnalisation de leurs tâches sur la ligne d’abattage passe par des stratégies qui requièrent une chosification et une distance émotionnelle. Le cadre de travail (abattoir), le temps passé, les tâches accomplies, l’espèce des animaux, mais surtout le sexe et les parcours socioculturels des salariés, sont autant de facteurs qui influencent fortement les pratiques et les attitudes observées. Este estudio busca comprender las actitudes de los individuos (humanos) que se ocupan de la muerte y despiece de animales en un matadero. Para ello, se ha hecho un trabajo de observación y uso de registros fotográficos durante el “encaminamiento”, “aturdimiento”, “cuelgue”, “sangría” y “despiece” de los animales en las “líneas de sacrificio”; así como un método de análisis cualitativo que requirió entrevistas a ocho individuos: dos mujeres y seis hombres. Aunque los trabajadores reconozcan a los animales como seres sensibles, la operacionalización de sus tareas en la “línea de abate” depende de estrategias que requieren objetivación y distanciamiento emocional. También se evidenciaron actitudes conflictivas relacionadas con determinadas especies de animales. El contexto laboral (matadero), el tiempo empleado, las tareas desempeñadas, la especie de los animales, y sobre todo el género y las trayectorias socioculturales de los trabajadores, destacan como los principales factores de influencia en las prácticas y actitudes constatadas.

Actualment, la majoria de sistemes convencionals d’alimentació de porcí utilitzen l’alimentació en fases a l’engreix per imitar la disminució de concentració de nutrients requerida lligada a un increment de la capacitat d’ingestió dels porcs a major edat i pes viu. Tanmateix, en una població de porcs d’engreix hi ha altres factors que modifiquen la capacitat de deposició proteica i d’ingestió voluntària de pinso (variabilitat pes viu, sexe, genètica...), i, per tant, també poden modificar els requeriments nutricionals. Conseqüentment, l’objectiu d’aquesta tesi doctoral fou descriure les respostes a variacions dels nivells nutricionals del pinso i confirmar si aquestes respostes diferien entre grups de porcs amb diferent capacitat de deposició de teixits i productivitat. Posteriorment, avaluar les implicacions econòmiques i ambientals de sistemes d’alimentació de semiprecisió basats en alimentar aquests grups de forma diferenciada. Inicialment es va analitzar la influència sobre el creixement i la composició de la canal de factors com la genètica paterna, el sexe, el pes de canal i el dia de càrrega respecte els primers porcs carregats d’un engreix (Capítol 3). La línia paterna sintètica va mostrar un major creixement i capacitat d’ingestió de pinso que la línia Pietrain, que es va traduir en unes canals més grasses. El pes de canal i el nivell d’engreixament de les canals van mostrar una relació positiva, però les femelles eren sempre més grasses que els mascles enters a igualtat de pes de canal. A més, les canals dels últims porcs carregats eren més magres que les dels primers. Posteriorment, l’efecte d’incrementar el rati entre lisina digestible ileal estandarditzada i energia neta (Lis DIS:EN) es va comparar entre grups de porcs classificats segons el seu pes viu a inici d’engreix (Capítol 4) o sexe (Capítols 5 i 6). Els porcs d’engreix (30-60 kg) classificats per pes viu inicial van mostrar una resposta diferenciada entre grups al incrementar el rati Lis DIS:EN. Els més petits van mostrar una major resposta lineal als increments de lisina al pinso que els més grossos. A més, dels 70 al 100 kg de pes viu, els mascles sencers van mostrar una major resposta lineal que les femelles al incrementar el rati Lis DIS:EN. En conseqüència, els mascles requeriren 0.5 g Lis DIS/Mcal EN més que les femelles per maximitzar el seu creixement. Reduir la concentració d’energia neta al pinso 190-250 kcal/kg respecte a una dieta de 2450-2550 kcal/kg no va reduir el creixement quan la ingestió d’energia diària no es va veure afectada considerablement (Capítol 7). Tanmateix, es va observar un menor creixement i canals més magres quan els porcs no van poder incrementar suficientment el consum de pinso per superar la reducció d’energia de la dieta. En resum, aquesta dissertació doctoral mostra el potencial de l’alimentació de semi-precisió de porcs d’engreix no castrats basada en l’alimentació diferenciada dels porcs més petits en la fase inicial (30-60 kg) i dels mascles sencers en la fase de finalització (70-100 kg). A més, en el Capítol 8 es presenten i discuteixen els beneficis econòmics d’aquestes estratègies en contraposició als sistemes d’alimentació convencionals en diferents contexts de cost de matèries primeres. Finalment, també s’hi presenta el potencial d’aquests sistemes d’alimentació per a reduir l’excreció de nitrogen quan s’alimenta diferenciadament mascles i femelles en la fase de finalització. En conclusió, els sistemes d’alimentació de semiprecisió de porcs d’engreix per pes inicial o sexe són una estratègia factible per millorar la sostenibilitat dels sistemes de producció porcina en contexts específics. En la actualidad, los sistemas convencionales de alimentación del ganado porcino utilizan mayoritariamente la alimentación en fases durante el engorde para imitar la disminución de la concentración de nutrientes requerida en el pienso cuando se incrementa la capacidad de ingestión de los cerdos a mayor edad y peso vivo. Sin embargo, en una población de cerdos de engorde hay otros factores que modifican la capacidad de deposición proteica y la ingestión voluntaria de pienso (variabilidad de peso vivo, sexo, genética…); y, por lo tanto, también pueden modular los requerimientos nutricionales. En consecuencia, el objetivo de esta tesis era describir las respuestas a variaciones de los niveles nutricionales de los piensos, y confirmar si estas respuestas diferían entre grupos de cerdos con distinta capacidad de deposición de tejidos y productividad. Subsecuentemente, evaluar las implicaciones económicas y ambientales de sistemas de alimentación de semi precisión basados en alimentar estos grupos de cerdos de forma diferenciada. Inicialmente, se analizó la influencia de factores como la genética paterna, el sexo, el peso de canal y el día de carga en comparación con los primeros cerdos cargados de un engorde sobre el crecimiento y la composición de canal (Capítulo 3). La línea paterna sintética mostró un mayor crecimiento y capacidad de ingestión de pienso que la línea Pietrain, que resultó en canales más grasas. Se mostró una relación positiva entre el peso de canal y el nivel de engrasamiento de las canales, pero las hembras fueron más grasas que los machos enteros a igualdad de peso vivo. Además, las canales de los últimos cerdos cargados fueron más magras que las de los primeros. Posteriormente, el efecto de incrementar la ratio entre lisina digestible ileal estandardizada y energía neta (Lis DIS:EN) se comparó entre grupos de cerdos clasificados según su peso a inicio de engorde (Capítulo 4) o sexo (Capítulos 5 y 6). Los cerdos de engorde (30-60 kg) clasificados por peso vivo mostraron una respuesta diferenciada según grupo al incrementar la ratio Lis DIS:EN, con los pequeños mostrando una mayor respuesta al incrementar el nivel de Lis DIS:EN que los cerdos grandes. Asimismo, de los 70 a los 100 kg de peso vivo, los machos enteros mostraron una respuesta lineal mayor que las hembras al incrementar la ratio Lis DIS:EN. Por consiguiente, los machos requirieron 0.5 g Lis DIS/Mcal EN más que las hembras para maximizar su crecimiento. Reducir la concentración de energía neta en el pienso unas 190-250 kcal/kg respecto a una dieta de referencia de 2450-2550 kcal/kg no resultó en un peor crecimiento cuando la ingestión diaria de energía no se redujo considerablemente (Capítulo 7). No obstante, cuando los cerdos no pudieron incrementar suficientemente el consumo para superar la reducción de densidad energética del pienso, se observó un menor crecimiento y canales más magras. En definitiva, esta disertación doctoral muestra el potencial de la alimentación de semi precisión en cerdos de engorde no castrados fundamentada en la alimentación diferenciada de los cerdos más pequeños en la fase inicial (30-60 kg) y de machos enteros en la fase de finalización (70-100 kg). Igualmente, en el Capítulo 8 se presentan y discuten los beneficios económicosde estas estrategias en contraposición a los sistemas de alimentación convencionales en distintos contextos de coste de materias primas. Por último, también se presenta el potencial de estos sistemas para reducir la excreción de nitrógeno al alimentar deforma diferenciada a machos y hembras. En conclusión, los sistemas de alimentación de semi precisión de cerdos de engorde por peso inicial o sexo son una estrategia factible para mejorar la sostenibilidad de los sistemas de producción porcina en contextos específicos. Conventional swine feeding systems usually aim to feed the average pig, or slightly higher nutrient levels to ensure that the overall population growth is not limited. To feed pigs in accordance with their requirements, most swine operations use phase feeding during the grow-finishing phase to match the diminishing dietary nutrient concentration for an increased feed intake at greater age and body weight. However, within a population of pigs there are factors that can modify protein deposition and feed intake potential (body weight variability, sex, sire line…), and consequently influence nutrient requirements. For instance, body weight variability constitutes a challenge in all-in all-out swine production systems not only for the issue of pigs with a low body weight at marketing, but also because it entails an inefficiency and inaccuracy of phase feeding strategies. Therefore, the purpose of this thesis was to describe the responses to varying nutrient levels and confirm whether these responses vary in pigs grouped for having different growth performance or tissue deposition rate. Afterwards, analyze the economic and environmental feasibility of semi-precision feeding systems consisting in feeding those groups differently. Initially, the influence of factors such as sire-line, sex, carcass weight and marketing day on growth performance and carcass composition was analyzed (Chapter 3). Synthetic sired pigs grew faster and had a higher feed intake compared to Pietrain sired pigs, which also resulted in fatter carcasses. Increasing carcass weight increased carcass fatness, but indistinctly, boars were leaner than gilts. Besides, increasing marketing day, as an indicator of body weight variability, reduced carcass fatness. Afterwards, the effect of increasing standardized ileal digestible lysine to net energy ratio (SID Lys:NE) was compared between pigs of different initial body weight (Chapter 4) and sex (Chapters 5 & 6). Growing pigs (30-60 kg) sorted by their initial body weight showed a different response to increasing dietary lysine. The lightest ones growth performance showed a greater linear improvement when increasing SID Lys:NE than the heavier ones. Moreover, from 70 to 100 kg body weight, increasing SID Lys:NE improved linearly growth performance and carcass composition of boars in a greater manner than in gilts. Consequently, boars required around 0.5 g SID Lys/Mcal NE more than gilts to maximize their greater potential growth performance. Reducing dietary net energy concentration 190-250 kcal/kg from a 2,450-2,550 reference diets did not impair growth performance when pigs could reach a sufficient energy intake (Chapter 7). However, if grow-finishing pigs could not overcome the reduced energy density by increasing sufficiently feed intake it resulted in impaired growth and reduced carcass fatness. Summarizing, the present PhD. dissertation provides evidence of the potential of semi-precision feeding to improve the growth performance of the lightest pigs in the growing phase (30-60 kg) whether improve boars performance in the finishing phase (70-100 kg) in a context of non-castration. In addition, in Chapter 8 the economic benefits of semi-precision feeding over conventional strategies in specific raw materials cost scenarios are shown and discussed. Finally, it shows the potential benefits to reduce nitrogen excretion by feeding gilts lower SID Lys:NE without much worsening their growth performance. In conclusion, semi-precision feeding by initial body weight or sex might be a feasible strategy to improve the sustainability of swine production in specific contexts. Universitat Autònoma de Barcelona. Programa de Doctorat en Producció Animal

La inseminación artificial (IA) ha evolucionado en las últimas décadas desde una IA cervical (CAI) hacia una inseminación más profunda, denominada IA post-cervical (PCAI). Con esta nueva técnica se ha conseguido reducir la concentración espermática en las dosis seminales, obteniendo los mismos resultados productivos que con CAI, lo que conlleva importantes ventajas económicas. Sin embargo, hasta la fecha, PCAI solo se utiliza en cerdas de más de un parto (primíparas y multíparas), pero no es así en cerdas sin ningún parto (cerdas nulíparas). Por lo tanto, el objetivo principal de este estudio fue evaluar la validez actual del método PCAI en hembras nulíparas y posibles variantes que mejoren su eficiencia, así como el estudio de otras alternativas basadas en las características anatómicas del cuello uterino de este tipo de cerdas. En el artículo 1, se observó que la eficiencia de los dispositivos actuales de PCAI aplicados en cerdas nulíparas era muy reducida (23.1%) respecto al 95% alcanzado en cerdas multíparas. Las cerdas que no pudieron ser inseminadas en un primer intento fueron sometidas a diferentes tratamientos previos al siguiente intento de aplicación PCAI (Hidrocloruro de Vetrabutina-VC; diluyente atemperado-WE a 44.9 ± 2.1 ºC) con el fin de obtener una relajación de la musculatura presente en el cérvix y facilitar el paso del dispositivo de PCAI. Los resultados mostraron una tasa de éxito para el grupo VC del 34.2% frente al 23.8% del grupo WE. En el siguiente ensayo, se diseñaron dos nuevos dispositivos de PCAI con dimensiones más reducidas adaptadas a las cerdas nulíparas. Un primer dispositivo (GpC1) formado por un catéter multianillas de menor diámetro (16 mm) que el usado en cerdas multíparas, pero con la misma cánula interna. El segundo diseño de dispositivo (GpC2) consistió en el mismo catéter multianillas del grupo GpC1, pero con una cánula interna de menor diámetro (2.5 mm). Los resultados obtenidos mostraron un mayor éxito de aplicación para el grupo GpC2 que para el GpC1 (60.3% vs. 37.0%, p

Objetivo. Cuantificar el bienestar animal en porcinos de pequeños productores en comunidades del sur de Veracruz. Materiales y métodos. Se realizó un estudio en diez unidades de producción, donde se llevó a cabo un diagnóstico y se analizaron diez variables en los rubros de alimentación, alojamiento, salud y comportamiento de los lechones, de acuerdo con el protocolo Welfare Quality® de la Unión Europea y ponderado de 0 a 1, donde 0= nulo, 0.5= regular y 1= ideal bienestar animal. Resultados. La relación humano-animal fue satisfactoria; sin embargo, existió bajo confort térmico ligado al tipo de instalaciones. Los principales indicadores de bienestar animal fueron alimentación 0.9±0.235, alojamiento 0.6±0.319, salud 0.7±0.252 y comportamiento 0.9±0.192. Conclusiones. La cuantificación del bienestar animal permite identificar de forma práctica aspectos de manejo que los productores han desarrollado de forma intrínseca como la relación humano-animal y la limpieza de las instalaciones. El bienestar animal puede ser cuantificado de forma práctica, ofreciendo alternativas de manejo a los productores, quienes desarrollan actividades adecuadas (limpieza frecuente de las instalaciones) y no adecuadas (alimentación con bajo aporte de proteína, corte de cola y castración).

Aiming to determine the ration between digestible lysine and digestible threonine (Thr/Lys) for weaned piglets at 27 days, kept in the nursery under sanitary challenge conditions, 105 hybrid piglets with initial weight of 7.2 ± 0.41 kg, were distributed in randomized block design inside of five treatments (Thr/Lys ratios of 0.56; 0.63; 0.70; 0.77 and 0.84), seven replicates and three piglets per experimental unit. The Thr/Lys ratios did not affect (P>0.05) piglet performance. There was quadratic effect (P=0.02) of the Thr/Lys ratio on the protein/fat ratio and the estimated point of the bigger protein/fat ratio occurred with the Thr/Lys ratio of 0.68. The Thr/Lys ratio did not affect (P>0.05) the carcass parameters and serum urea levels, however, the liver and kidney weights raised with the increase (P=0.01) in Thr/Lys rate. The Thr/Lys ratio had a quadratic effect (P=0.01) on rate of plasma haptoglobin, Thr/Lys ratio was estimated at 0.74. It was concluded that the ratio between digestible threonine with digestible lysine for piglets from 27 to 48 days of age raised under sanitary challenge conditions is 0.74. Con el fin de determinar la relación entre treonina digestible y lisina digestible (Tre/Lis) para lechones destetados a los 27 días, mantenidos en vivero en condiciones de desafío sanitario, se utilizaron 105 lechones híbridos con un peso pro medio de 7,2 ± 0,41 kg. Los animales fueron distribuidos en un diseño experimental completamente al azar con cinco tratamientos (razones Tre/Lis de 0,56; 0,63; 0,70; 0,77 y 0,84), siete repeticiones y tres lechones por unidad experimental. Las proporciones Tre/Lis no afectaron (P> 0,05) el rendimiento de los lechones. Hubo un efecto cuadrático (P=0,02) de la relación Tre/Lis en la relación proteína/grasa y el punto estimado de la relación proteína/grasa más alta fue con la relación Tre/Lis de 0,68. La relación Tre/Lis no afectó los parámetros de la canal y los niveles de urea sérica, sin embargo, los pesos del hígado y riñón aumentaron linealmente (P=0,01) con el aumento de la tasa Tre/Lis. La relación Tre/Lis tuvo un efecto cuadrático sobre la tasa de haptoglobina plasmática, se estimó que la relación Tre/Lis era 0,74. Se concluyó que la relación entre treonina digestible y lisina digestible para lechones de 27 a 48 días de edad criados en condiciones de desafío para la salud es de 0,74. Com o objetivo de determinar a relação entre treonina digestível com lisina digestível (Tre/Lis) para leitões desmamados aos 27 dias, mantidos na creche em condições de desafio sanitário, 105 leitões híbridos com peso inicial de 7,2 ± 0,41 kg foram distribuídos em delineamento com blocos ao acaso com cinco tratamentos (relações Tre/Lis de 0,56; 0,63; 0,70; 0,77 e 0,84), sete repetições e três leitões por unidade experimental. As relações Tre/Lis não afetaram (P>0,05) o desempenho dos leitões. Houve efeito quadrático (P=0,02) da relação Tre/Lis sobre a taxa proteína/gordura e o ponto estimado de maior taxa proteína/gordura se deu com a relação Tre/Lis de 0,68. A relação Tre/Lis não afetou os parâmetros de carcaça e teores de uréia no soro, entretanto, os pesos do fígado e do rim aumentaram linearmente (P=0,01) com o aumento da taxa de Tre/Lis. A relação Tre/Lis teve efeito quadrático sobre a taxa de haptoglobina no plasma, estimou-se a relação Tre/Lis de 0,74. Concluiu-se que a relação entre treonina digestível com lisina digestível para leitões dos 27 dias aos 48 dias de idade criados sob condições de desafio sanitário é de 0,74.

The aim of this study was to identify and systematize information about the knowledge and practices associated with exposure to the taeniasis/cysticercosis complex among backyard pig breeders in the endemic district of Masma, province of Jauja, Peru. An interview guide was designed, and its execution was coordinated with the local authority. Consent was requested for the recording of the interviews. In addition, information was collected on the environment of the breeder’s house and the raising of the pigs. The expressions were consigned in categories for the qualitative analysis: breeding habits, sanitary management, consumption of pork, economic importance of breeding, practices associated with exposure to the taeniasis/cysticercosis complex, hygienic practices and conditions, knowledge regarding the form of transmission and treatment of cysticercosis, and zoonotic condition and impact in the area. The quantitative analysis summarized information on the environment and the raising of pigs. The study found deficiencies in knowledge and practices that favoured exposure to T. solium eggs. The reduction in practices that favoured the transmission and spread of taeniasis/ cysticercosis was due to experiences of suffering the disease in previous years in relatives and animals. It is required to develop prevention and control programs for the taeniasis/ cysticercosis complex due to the economic importance and health of people. El objetivo del estudio fue identificar y sistematizar información acerca de los conocimientos y prácticas asociadas a la exposición al complejo teniasis/cisticercosis entre los criadores de cerdos a traspatio en el distrito endémico de Masma, provincia de Jauja, Perú. Se diseñó una guía de entrevista y se coordinó su ejecución con la autoridad local. Se solicitó el consentimiento para la grabación de las entrevistas. Además, se recolectó información sobre el entorno de la vivienda del criador y de la crianza de los cerdos. Las expresiones fueron consignadas en categorías para el análisis cualitativo: costumbres de crianza, manejo sanitario, consumo de carne de cerdo, importancia económica de la crianza, prácticas asociadas a la exposición al complejo teniasis/cisticercosis, prácticas y condiciones higiénicas, conocimiento frente a la forma de transmisión y tratamiento de la cisticercosis, y condición zoonótica e impacto en la zona. El análisis cuantitativo resumió información sobre el entorno y la crianza de cerdos. El estudio encontró deficiencias en los conocimientos y prácticas que favorecían la exposición a huevos de T. solium. La reducción de prácticas que favorecían la transmisión y diseminación de la teniasis/cisticercosis se debió a experiencias de sufrir la enfermedad años atrás en familiares y animales. Se requiere desarrollar programas de prevención y control del complejo teniasis/cisticercosis debido a la importancia económica y la salud de las personas.

Actualmente el uso de sustrato se ha incrementado en varios sectores agrícolas. Entre los materiales empleados para su formulación se encuentran los compost, y como todo componente es importante conocer sus propiedades previo a su uso. El objetivo de este trabajo fue caracterizar 15 compost de diferentes orígenes, para evaluarlos como componente de sustrato. Se analizaron los siguientes parámetros: densidad aparente, espacio poroso total, capacidad de retención de agua (CRA), porosidad de aireación (PA), granulometría, pH, conductividad eléctrica (CE), concentración de calcio, magnesio, potasio, sodio y nitratos. Hubo diferencias significativas (P < 0,05) entre los compost para todas las variables analizadas. La densidad aparente fue mayor en el compost de ave de corral. El compost de corteza de pino gruesa tuvo el mayor porcentaje de PA y el compost de residuos de poda el mayor porcentaje de CRA. Los compost de corteza de pino podrían ser componentes que aportarían aireación en una formulación de sustrato. Los valores de pH obtenidos se encontraron entre 4,7 a 8,7 y de CE entre 0,09 a 5,55 dS m-1. La mayoría de los compost superaron el rango adecuado de pH (5,5-6,3) y si bien la mayoría no tuvieron una CE elevada, hubo algunos como el compost de ave de corral, de residuos sólidos urbanos y de residuos porcinos que superaron 1 dS m-1, y podrían causar efectos nocivos en las plantas. Todos los compost son viables para su uso teniendo en cuenta sus propiedades y las condiciones del cultivo en que se va a utilizar el sustrato formulado. The use of substrates in agriculture has increased in recent years. Compost is one of the materials used in substrate formulation, and therefore, it is important to know its properties prior to its use. The objective of this study was to characterize 15 different types of compost from different sources in order to evaluate them as substrate components. The following parameters were determined: bulk density, total pore space, water retention capacity (Cra), aeration porosity (Pa), granulometry, pH, electrical conductivity (EC), and concentrations of calcium, magnesium, potassium, sodium and nitrates. There were significant differences (P < 0.0001) among the compost for all the variables analyzed. Poultry compost had the highest bulk density. Thick pine bark compost had the highest percentage of Pa, while pruning waste compost recorded the highest percentage of Cra . Pine bark compost could increase aeration in a substrate formulation. The pH values obtained ranged from 4.7 to 8.7, while CE values varied between 0.09 and 5.55 dS m-1. Most of the compost exceeded an optimal pH range (5.5-6.3). On the contrary, most compost did not reach high EC values. However, some types of compost, such as those from poultry, urban solid waste and pig waste, exceeded 1 dS m-1, and could cause harmful effects on plants. All types of compost are viable for use provided both compost properties and crop conditions are considered to decide which substrate to use. EEA Cerro Azul Fil: Barbaro, Lorena Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Cerro Azul; Argentina Fil: Karlanian, Monica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Floricultura; Argentina Fil: Rizzo, Pedro Federico. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina Fil: Riera, Nicolas Iván. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina

Este artículo se ha publicado de forma definitiva en: http://www.scielo.br/pdf/abo/v82n1/0004-2749-abo-82-01-0056.pdf Purpose: The porcine eye is frequently used as a research model. This paper analyzes the effect of different storage methods on the transparency of pig crystalline lens. Methods: A spectral transmission curve (from 220 to 780 nm) for the crystalline lens was determined experimentally after storage in different conditions: saline solution, formalin, castor oil, and freezing at -80°C. The total transmission in the visible spectrum, which was used as an index of transparency, was calculated from these curves. For comparative purposes, fresh lenses were evaluated and used as controls. Results: Storing the porcine crystalline lens in saline solution or castor oil resulted in a transparency loss of approximately 10% after 24 h and storage in formalin resulted in a loss of nearly 30%. Storage by freezing at -80°C for 4 weeks maintained the transparency of the crystalline lens; the spectral transmission measured immediately after defrosting at room temperature coincided exactly with that of the freshly extracted lens. Conclusions: The transparency of porcine crystalline lens is affected by the storage method. The visible spectrum is the most affected, evidenced by the effect on the transparency and consequently the amount of light transmitted. The results show that freezing at -80°C maintains the transparency of the crystalline lens for at least 4 weeks. Olho de porco é frequentemente usado como modelos de pesquisa. Este estudo analisa o efeito de diferentes métodos de armazenamento na preservação da transparência do cristalino de porco. Métodos: Uma curva de transmissão espectral (de 220 até 780 nm) para o cristalino foi experimentalmente determinada após armazenamento em diferentes condições: solução salina, formol, óleo de mamona e congelamento a -80°C. Transmissão total do espectro visível, que foi usada como um índice de transparência foi calculada a partir dessas curvas. Para fins comparativos, lentes frescas foram avaliadas e usadas como controles. Resultados: O armazenamento do cristalino suíno em solução salina ou óleo de mamona resultou uma perda de transparência de aproximadamente 10% após 24 h e o armazenamento em formol resultou uma perda de quase 30%. O armazenamento por congelamento a -80°C durante 4 semanas manteve a transparência do cristalino; a transmissão espectral medida imediatamente após o descongelamento à temperatura ambiente coincidiu exatamente com a da lente extraída recentemente. Conclusão: A transparência do cristalino suíno é afetada pelo método de armazenamento. O espectro visível é o mais afetado, evidenciado pelo efeito sobre a transparência e consequentemente a quantidade de luz transmitida. Os resultados mostram que o congelamento a -80°C mantém a transparência do cristalino suíno por pelo menos 4 semanas.

El Cochino Negro Canario, sobre el que se ha basado este trabajo de fin de carrera, es una raza autóctona de porcino propia del archipiélago canario reconocida por el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación del Gobierno de España, como raza autóctona en peligro de extinción. Según la documentación existente, su origen se sitúa en el norte de África. Se trata un animal poco evolucionado de capa negra con el que principalmente se trabaja en muy pocas explotaciones intensivas de pequeño tamaño y sobre el cual no hemos encontrado estudios de investigación referentes a la canal y la carne que produce. El presente trabajo pretende aportar información al respecto, contribuyendo así a un mejor conocimiento de los productos que se obtienen de una de nuestras razas locales. En este Trabajo Fin de Grado se ha realizado, directamente en el MIT (Matadero Insular de Tenerife), un estudio morfométrico de las canales y con ayuda de un colorímetro se ha estudiado el color de la carne y de la grasa. Para ello se trabajó con los animales procedentes de 4 granjas dedicadas a la cría y engorde de la raza Cochino Negro Canario (El Helecho, CB La Asomada Cochino Negro, El Gorito y Granja Castillejo). En total se valoraron 51 animales de engorde y 12 de desvieje. Previo a esta parte experimental se procedió a la elaboración de una encuesta modelo que se realizó a cada una de las granjas mencionadas, donde se recogían aspectos básicos de: estructura de ganado, manejo reproductivo, instalaciones, alimentación y bioseguridad. Estas encuestas revelan que se trata de explotaciones pequeñas con instalaciones sencillas, cuyo modelo de producción nada tiene que ver con la producción de cerdo blanco. De los resultados obtenidos podemos concluir que los animales de engorde son sacrificados a un peso muy inferior al de otras razas porcinas similares. La precocidad de sacrificio en los cerdos de engorde está justificada por la gran tendencia al engrasamiento de la raza. El peso medio de la canal para la raza es de 54,60 kg, la longitud media de la canal de 73,03 cm y la longitud pata 47,57 cm. En cuanto a los espesores medios de tocino dorsal, para la raza son de 3,31 cm a nivel de la primera costilla, 2,01 cm en la última, 2,82 cm en el extremo craneal del músculo del glúteo medio y 2,37 cm en el nivel del glúteo medio, espesores que al compararlos con estudios de otras razas reflejan ser propios de animales con mayores pesos de sacrificio. La carne mostró unos parámetros de color que corresponden a una carne rosada y muy luminosa, aspectos valorados positivamente por consumidor. Se encontraron diferencias significativas entre explotaciones en los parámetros morfométricos de: peso de canal, longitud de canal, longitud de pata, perímetro de caña e índice de compacidad. Mientras que en los espesores medios de tocino dorsal y las medidas de color en carne y grasa no se encontró diferencias significativas. Black Canary Pig, which has been the basis for this end of career work, is an autochthonous pig breed from the Canary Islands recognized by the Ministry of Agriculture, Fisheries and Food of the Spanish government in danger of extinction. According to the existing documentation, it´s origin is located in North Africa. It is a little evolved animal with a black skin that works in very few intensive farms of small size and on which we have not found research studies concerning the carcass and the meat it produces. This paper provide information for contributing to a better knowledge of the products obtained from one of our local races. In this Final Degree Project, a morphometric study of the channels has been carried out directly at the MIT (Insular Slaughterhouse of Tenerife) and with a colorimeter has been studied the color and fat of the meat. For this, were worked with animals from 4 farms dedicated to breeding and fattening of Black Canary Pig (Finca El Helecho, CB La Asomada Cochino Negro, El Gorito and Granja Castillejo). In total, 51 fattening and 12 deviation animals were assessed. Prior to this experimental part, a model survey was carried out that was carried out at each of the mentioned farms, where basic aspects of: livestock structure, reproductive management, facilities, food and biosecurity were collected. These surveys reveal that these are small farms with simple facilities, whose production model has nothing to do with white pig production. From the results obtained we can conclude that fattening animals are slaughtered at a weight much lower than that of other similar pig breeds. The precocity of slaughter in fattening pigs is justified by the great tendency to grease the breed. The average carcass weight for the breed is 54.60 kg, the average carcass length of 73.03 cm and the leg length 47.57 cm. As for the average thickness of dorsal bacon, for the breed they are 3.31 cm at the level of the first rib, 2.01 cm at the last rib, 2.82 cm at the cranial end of the gluteus medius and 2.37 cm at the level of the gluteus medius, thicknesses that when compared with studies of other breeds reflect being characteristic of animals with higher slaughter weights. The meat showed some color parameters that correspond to a pink and very bright meat, aspects valued positively by the consumer. Significant differences were found between farms in the morphometric parameters of: carcass weight, carcass length, leg length, cane perimeter and compactness index. While in the average thicknesses of dorsal bacon and color measurements in meat and fat no significant differences were found.

Este artículo se ha publicado de forma definitiva en: http://www.scielo.br/pdf/abo/v82n1/0004-2749-abo-82-01-0056.pdf Purpose: The porcine eye is frequently used as a research model. This paper analyzes the effect of different storage methods on the transparency of pig crystalline lens. Methods: A spectral transmission curve (from 220 to 780 nm) for the crystalline lens was determined experimentally after storage in different conditions: saline solution, formalin, castor oil, and freezing at -80°C. The total transmission in the visible spectrum, which was used as an index of transparency, was calculated from these curves. For comparative purposes, fresh lenses were evaluated and used as controls. Results: Storing the porcine crystalline lens in saline solution or castor oil resulted in a transparency loss of approximately 10% after 24 h and storage in formalin resulted in a loss of nearly 30%. Storage by freezing at -80°C for 4 weeks maintained the transparency of the crystalline lens; the spectral transmission measured immediately after defrosting at room temperature coincided exactly with that of the freshly extracted lens. Conclusions: The transparency of porcine crystalline lens is affected by the storage method. The visible spectrum is the most affected, evidenced by the effect on the transparency and consequently the amount of light transmitted. The results show that freezing at -80°C maintains the transparency of the crystalline lens for at least 4 weeks. Olho de porco é frequentemente usado como modelos de pesquisa. Este estudo analisa o efeito de diferentes métodos de armazenamento na preservação da transparência do cristalino de porco. Métodos: Uma curva de transmissão espectral (de 220 até 780 nm) para o cristalino foi experimentalmente determinada após armazenamento em diferentes condições: solução salina, formol, óleo de mamona e congelamento a -80°C. Transmissão total do espectro visível, que foi usada como um índice de transparência foi calculada a partir dessas curvas. Para fins comparativos, lentes frescas foram avaliadas e usadas como controles. Resultados: O armazenamento do cristalino suíno em solução salina ou óleo de mamona resultou uma perda de transparência de aproximadamente 10% após 24 h e o armazenamento em formol resultou uma perda de quase 30%. O armazenamento por congelamento a -80°C durante 4 semanas manteve a transparência do cristalino; a transmissão espectral medida imediatamente após o descongelamento à temperatura ambiente coincidiu exatamente com a da lente extraída recentemente. Conclusão: A transparência do cristalino suíno é afetada pelo método de armazenamento. O espectro visível é o mais afetado, evidenciado pelo efeito sobre a transparência e consequentemente a quantidade de luz transmitida. Os resultados mostram que o congelamento a -80°C mantém a transparência do cristalino suíno por pelo menos 4 semanas.

El objetivo principal de esta Tesis Doctoral es la aproximación de las condiciones de IVF y EC a las registradas en el tracto reproductor de la cerda para la mejora de la producción in vitro de embriones en la especie porcina. Con este fin, se realizaron cuatro experimentos. Los dos primeros consistieron en la modificación de los medios de cultivo utilizados durante la IVF y el EC mediante la adición de proteínas específicas o fluidos naturales presentes en el oviducto y el útero de la cerda. Los dos últimos experimentos consistieron en obtener in vivo los valores de referencia para parámetros físico-químicos como el oxígeno y temperatura del interior de los órganos reproductores de la cerda, y transferirlos a las condiciones in vitro. En el primer experimento, ovocitos porcinos madurados in vitro fueron incubados en un medio con heparina, ezrin, HSP-70-1A o HSP-90α a excepción del grupo control. Estos mismos grupos fueron utilizados durante la IVF. Los resultados mostraron que heparina y cada una de las proteínas por sí mismas eran capaces de endurecer la zona pelúcida de los ovocitos porcinos, es decir, aumentar los tiempos de digestión para la zona pelúcida. La combinación de heparina con cada una de las proteínas aumentó esos tiempos, excepto para HSP-90α donde disminuyó. Aunque prometedores, ya que el efecto de heparina y cada una de las proteínas añadidas al medio de IVF redujeron las tasas de polispermia, los resultados también mostraron bajas tasas de penetración cuando estas moléculas fueron añadidas a los medios, de manera que no se consiguió la mejora de la técnica de IVF con este enfoque. En el segundo experimento se compararon dos métodos de selección espermática. Uno de los métodos más utilizados para la especie porcina, centrifugación a través de un gradiente de densidad, se comparó con un nuevo procedimiento que hizo que los espermatozoides nadaran en un tubo que contenía un medio de cultivo con o sin fluido oviductal porcino (POF) con la intención de imitar los cambios sufridos por los espermatozoides en su ascenso por el tracto reproductor femenino. Por otro lado, se compararon dos sistemas de producción de embriones. Un nuevo sistema de cultivo, donde se añadió de forma secuencial POF al medio de IVF, y POF y fluido uterino porcino (PUF) a los medios de EC, frente a un sistema de producción de embriones donde no se añadió estos fluidos a los medios. Los resultados indicaron que la utilización de swim-up como método de selección espermática para la producción de embriones porcinos alcanzó el 40 % de rendimiento, indicando una mejora con respecto a los mejores resultados previos registrados en cerdos (30 -35 %). Además, ese valor incrementó un 5 % cuando los fluidos reproductivos fueron añadidos a los distintos medios de cultivo, superando incluso el valor de rendimiento dado para la especie bovina. Igualmente, la adición de los fluidos a los medios mejoró la calidad de los embriones obtenidos, alcanzando un número medio de células similar al de embriones obtenidos in vivo. En el tercer y cuarto experimento se realizaron una serie de mediciones de oxígeno y temperatura en el tracto reproductivo de cerdas adultas y cerdas pre-púberes, en distintas fases del ciclo estral, usando técnicas de cirugía y sondas mínimamente invasivas. A continuación, los valores obtenidos se transfirieron a las técnicas de IVF y EC, con el propósito de mejorar la producción de embriones porcinos in vitro. El tercer experimento reveló por primera vez la cantidad de oxígeno dentro de los órganos reproductivos de la cerda adulta (7 %), siendo este valor mayor (10 %) para cerdas pre-púberes tratadas con hormonas. Se observaron dos perfiles para las medidas de oxígeno: perfil plano, donde la variación de oxígeno fue mínima respecto al promedio, y un perfil ondulado que presentó pequeñas variaciones (±2) respecto al promedio. El perfil ondulado fue asociado al útero. El uso de condiciones de hipoxia (7 % oxígeno) durante la IVF seguido del EC mejoró la producción de embriones porcinos y la calidad de los blastocistos obtenidos. En el cuarto experimento se demostró la existencia de un gradiente de temperatura entre oviducto (37.0 ºC) y útero (38.7 ºC) por primera vez. La transferencia de ese gradiente durante las técnicas de IVF y EC mejoró la producción de embriones in vitro en la especie porcina a través de la reducción de los ratios de polispermia. El uso de una temperatura elevada (39.5 ºC) durante la IVF ejerció el efecto contrario al uso de una temperatura baja (37.0 ºC), ya que aumentó los ratios de polispermia y se pudo intuir una mayor fragmentación de los embriones producidos a esa temperatura. La obtención de la temperatura de transición para espermatozoides capacitados de verraco (37.0 ºC), así como la incubación de esos espermatozoides a distintas temperaturas (37.0 ºC, 38.5 ºC y 39.5 ºC) determinó un papel relevante de ésta en la remodelación de los lípidos de la membrana plasmática del espermatozoide y su implicación en la IVF. The objectives of this PhD Thesis are approaching the IVF and CE conditions to those recorded in the sow's reproductive tract for the improvement of the in vitro production of porcine embryos. To this end, four experiments have been carried out. The first two consisted of the modifications in the culture media used during IVF and CE by adding either specific proteins or natural fluids present in the oviduct and uterus of sows. The last two experiments consisted of obtaining in vivo, inside the reproductive organs of the female pig, the reference values for physical-chemical parameters such as oxygen and temperature, and transfer them to in vitro conditions. In the first experiment, porcine oocytes matured in vitro were incubated in a medium with heparin, ezrin, HSP-70-1A or HSP-90α. These same groups were used during IVF since heparin or proteins were added to the IVF medium with the oocytes and spermatozoa. In the control groups, gametes were incubated in a medium without heparin nor proteins. The results showed that heparin and each of the tested proteins hardened the ZP of the porcine oocytes, by increasing its resistance to enzymatic digestion. The combination of heparin with each of the proteins increased such hardening effect, except for HSP-90α, where the the ZP´s resistance was reduced. While promising, since the effect of heparin and each of the proteins added into the IVF medium drafted the polyspermy rates, IVF outcome was not improved because of the reduction in the penetration rates. In the second experiment, two sperm selection methods were compared. One of the widely used procedures in swine, the density gradient centrifugation, was compared with a new procedure, which made the sperm swam up in a tube containing culture media with or without porcine oviductal fluid (POF). On the other hand, two IVEP systems were compared. A new system containing POF and porcine uterine fluid (PUF) within the culture media during IVF and EC was compared with a system where those biofluids were not added to the culture media. The results indicated that the use of swim-up as sperm selection procedure for the production of porcine embryos reached a 40% yield, indicating an improvement with regard to the best results obtained in pigs up to date (30-35%). Furthermore, that value increased in a 5% when the reproductive fluids were added to the different culture media, even surpassing the value of the yield given for the bovine species. Likewise, the addition of the fluids to the media improved the quality of the porcine in vitro embryos produced, which achieved a mean number of cells similar to porcine embryos collected in vivo. In the third and fourth experiments, a series of measurements of oxygen and temperature were made in the reproductive tract of sows and gilts at different phases of the estrous cycle, using minimally invasive surgery techniques and new probes. The values obtained were then transferred to IVF and CE procedures, with the purpose of improving the production of porcine embryos in vitro. The third experiment revealed the amount of oxygen within the reproductive organs of sow (7%), being higher in gilts treated with hormones (10%). Two profiles for oxygen measurements were observed: a flat profile, where the oxygen variations were minimal with respect to the average, and a wavy profile, which showed small variations (± 2) with respect to the average. The wavy profile was associated with the uterus. The use of hypoxia conditions (7% oxygen) during IVF followed by EC improved porcine IVEP outcome and the quality of the porcine blastocysts obtained. In the fourth experiment was demonstrated the existence of a temperature gradient between the oviduct (37.0 ºC) and uterus (38.7 ºC) for the first time. Transferring this gradient during IVF and CE improved the production of in vitro embryos in the porcine species through the reduction of the polyspermy rates. In addition, the use of a high temperature (39.5 ºC) during IVF exerted the opposite effect to the use of a low temperature (37.0 ºC), since its use increased the polyspermy rates, and a greater fragmentation of the embryos obtained at high temperature was observed. On the other hand, obtaining the transition temperature for capacitated boar sperm (37.0 ºC), as well as the incubation of these spermatozoa at different temperatures (37.0 ºC, 38.5 ºC and 39.5 ºC), indicated an important role of temperature in the remodelling of the lipids contained in the sperm membrane and its implication in IVF.

Feeding strategy is very important for farmers to improve pig productive parameters and keep its competitive advantage in the market. The computed tomography (CT) technology can evaluate the effect of feeding strategy on the body/carcass tissue and bone composition of living pigs, since it allows the evaluation of the same animal at various moments of growth to avoid serial slaughtering of animals. This thesis at hand investigates the effect of different feeding restriction treatments on productive and carcass quality parameters of gilts using CT during growth and the effect of such treatments on meat quality, sensory properties and consumer preference (experiment 1) and the effect of different feeding strategies with different dietary P and phytases levels on density and the morphological characteristics of the bones of live gilts during growth and in their carcasses via CT images and the effect of these strategies on the chemical and physical characteristics of the bones, carcass and meat quality characteristics (experiment 2) Para los productores de porcino, el uso de estrategias alimentarias es fundamental para mejorar los parámetros productivos y mantener las ventajas competitivas del mercado. La tecnología de la tomografía computarizada (CT) puede usarse para evaluar el efecto de la estrategia alimentaria en la composición tisular e ósea tanto en el animal vivo como en la canal, ya que permite la evaluación del mismo animal en diferentes momentos de su crecimiento evitando realizar sacrificios seriados de los animales. Esta tesis investiga el efecto de diferentes estrategias alimentarias sobre los parámetros productivos y de calidad de la canal de cerdos hembras usando la CT durante el crecimiento, así como el efecto de los tratamientos sobre la calidad de la carne, las propiedades sensoriales y las preferencias de los consumidores (experimento 1); también se ha estudiado el efecto de diferentes estrategias alimentarias con diferentes niveles de P de la dieta y niveles de fitasas en la densidad y las características morfológicas de los huesos y en la canal de hembras durante su crecimiento a partir de imágenes de CT y el efecto de estas estrategias en las características químicas y físicas de los huesos, y las características de calidad de la canal y de la carne (experimento 2)

Resumen: En una prueba de digestibilidad fecal aparente (DFA) y metabolismo proteico con cerdos en recría se estudiaron seis dietas isoproteicas e isoenergéticas difiriendo en sus componentes: T1 (testigo): maíz y harina de soja (HS); T2: maíz + 11 % de HS, 23 % arveja (A) + 12,5 % expeller canola (C); T3: maíz + 5 % de HS + 30 % A + 16,3 % C; T4: sorgo bajo tanino (BT) + HS; T5: sorgo BT +13 % de HS + 13,5 % A + 15 % C; T6: sorgo BT + 5 % de HS + 35 % A + 15,3 % C. Se utilizaron cuatro cerdos por tratamiento, con un peso promedio de 43,43 kg, alojados en jaulas de digestibilidad individuales. El periodo experimental comprendió siete días de acostumbramiento y cinco de recolección. El nivel de consumo se estableció para realizar un aporte de 2,4 veces el requerimiento energético para mantenimiento. Se realizó recolección total de heces y orina. Se determinó la DFA de materia seca (MS), materia orgánica (MO), proteína cruda (PC) y energía bruta (EB), así como el valor biológico aparente de la proteína (VB) y el valor proteico neto aparente (VPN) de las dietas. Las dietas con sorgo BT fueron superiores en DFA de la MS y EB. No se observaron diferencias de valor proteico entre dietas. Se concluye que es posible sustituir la totalidad del maíz por sorgo BT en dietas para cerdos, y que la combinación de arveja forrajera y expeller de canola puede remplazar hasta 83 % de la harina de soja manteniendo los niveles de lisina y aminoácidos azufrados, sin afectar su aporte nutritivo. Summary: In a test of fecal apparent digestibility (FAD) and protein metabolism in rearing pigs six isoproteic and isocaloric diets with different components were studied: T1 (control): corn and soybean meal (SM); T2: corn + 11 % of SM + 23 % peas (P) + 12,5 % canola expeller (C); T3: corn + 5 % of SM + 30 % P + 16.3 % C; T4: low tannin (LT) sorghum + SM; T5: LT sorghum + 13 % of SM + 13,5 % P + 15 % C; T6: LT sorghum + 5 % of SM + 35 % P + 15,3 % C. Four pigs per treatment, with an average weight of 43.43 kg, housed in individual digestibility cages were used. The experimental period comprised seven days of habituation and five days of collection. The consumption level was established to make a contribution of 2.4 times the energy requirement for maintenance. Total collection of feces and urine was performed. We determined the FAD of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP) and gross energy (GE) as well as the apparent biological value of the protein (VB), and the apparent net protein value (NPV) of diets. LT sorghum diets were higher in FAD of the MS and EB. There were no differences in protein value between diets. We concluded that it is possible to totally replace the corn by LT sorghum in diets for growing pigs, and that the combination of peas and canola expeller can replace up to 83 % of the soybean meal maintaining the levels of lysine and sulfur amino acids, without affecting its nutritional contribution.

Resumen La generación de residuos es causa inmediata de cualquier tipo de actividad humana, hoy en día se está ante una sociedad de consumo que genera gran cantidad y variedad de residuos sólidos biodegradables procedentes de una amplia gama de actividades. El presente estudio tuvo como objetivo la evaluación de tratamientos de estabilización de residuos sólidos biodegradables, provenientes del restaurante institucional del Tecnológico de Costa Rica, como alternativa para gestionar y valorizar dichos residuos a través de la alimentación de cerdos de engorde. La estabilización se obtuvo se obtuvo por medio de una fermentación anaeróbica con microorganismos eficaces (EM), a partir de tres tratamientos que consideraron distintas proporciones de adición de EM, semolina, y melaza de caña en polvo, dispuestos en capas en microsilos para la fermentación. Se evaluaron cualitativamente parámetros físicos, y cuantitativamente parámetros nutricionales como el porcentaje de proteína, fibra total, cenizas y extracto etéreo, así como humedad, pH, Energía Bruta, presencia de Salmonella y Coliformes Fecales. Como resultados se obtuvo un producto de tipo energético, estabilizado al ser llevado a un pH ácido y no se detectó presencia de patógenos. Finalmente, se realizó un análisis económico y ambiental del uso de los residuos estabilizados en un caso hipotético de producción porcina según parámetros nacionales, resultando en la posibilidad de obtener rentabilidad e inocuidad en los tratamientos, además de lograr evitar ciertos costos ambientales y una mejor gestión en general. Abstract Waste is an immediate cause of almost any human activity, and nowadays, due to consumers´ behavior there is a lot of waste generation, regarding amount and variety, which need to be managed. Consequently, this research focused on the evaluation of different treatments for the stabilization of biodegradable solid waste generated at the institutional restaurant from Tecnológico de Costa Rica, as an alternative to manage, use and re-value that waste through animal feed. The waste was stabilized through an anaerobic fermentation with Effective Microorganisms (EM) in three treatments that added different proportions of EM, semolina, and molasses. The ingredients were introduced in micro-silos for ten days to allow the fermentation. Then, the products were evaluated qualitatively for physical parameters, and quantitatively for nutritional composition and microbiologic parameters, such as fiber, protein, ashes and nitrogen- free extract percentage, as well as moisture, pH, Gross Energy and presence of Salmonella and fecal coliformes. The results showed that the stabilized waste was a product that qualifies as an energy source, with acid pH and absence of pathogenic microorganisms. It was also evaluated economically and environmentally in a hypothetical swine production case contextualized in Costa Rica. This evaluation resulted in a chance of managing wastes through a fermentation process and obtain revenues, comply with animal welfare and environmental legislation, and avoid certain environmental costs if not treated.

El objetivo del estudio fue determinar el efecto del manejo presacrificio porcino sobre la incidencia de carne pálida, suave y exudativa (PSE) y describir los factores de riesgo. Se recolectaron un total de 20 variables relacionadas con el transporte y las condiciones presacrificio durante un período de tres meses. Se estudiaron 134 lotes (3.156 cerdos) en una planta de beneficio comercial colombiana. Se usó una regresión logística multivariada para identificar los factores de riesgo previos al sacrificio. La calidad de la carne fue descrita como una variable de respuesta binomial (1: carne normal, 2: condición PSE). La incidencia de carne PSE fue 5,8%. Los resultados indican que el peso, el tiempo de estadía en la planta de beneficio y la presencia de contusiones cutáneas incrementan el riesgo de presentación de la condición PSE (p < 0,05). El tiempo de reposo en planta entre 12,1 y 36 h incrementó de 4,3 hasta 9,9 veces la incidencia de la condición PSE comparado con tiempos de estadía en planta entre 4 y 12 h. Además, el peso de los cerdos es un factor de riesgo que incrementó la incidencia de la condición PSE (p < 0,05). Sin embargo, el tiempo de transporte no estuvo relacionado con la presencia de valores de pH bajos. The goal of this study was to determine the effect of pigs’ pre-slaughter handling on incidence of pale soft exudative (PSE) meat and describe risk factors. A total of 20 variables related to transport and preslaughter conditions were recorded over a three months period. A total of 134 lots (3,156 pigs) from a Colombian commercial slaughterhouse were studied. A multivariate logistic regression was used to identify the risk factors prior to slaughter. The pork quality was described as a binomial response (1: normal meat, 2: PSE condition). The incidence of PSE was 5.8%. The results indicate that weight, time of stay in the slaughter house and the presence of skin bruising increase the risk of PSE condition (p < 0.05). A downtime from 12.1 to 36 hours at the slaughterhouse increased the incidence of PSE condition from 4.3 to 9.9 times compared to downtime periods between 4 and 12 hours. Besides, the weight of pigs is a risk factor which increased the incidence of PSE condition (p < 0.05). However, the transport time was not related to low pH values.

Conscientes de la importancia de las proteínas para la funcionalidad espermática, el objetivo de la Tesis Doctoral fue identificar proteínas espermáticas y del plasma seminal (PS) de porcino asociadas con la funcionalidad espermática, específicamente con la fertilidad y la congelabilidad, todo ello a partir de una detallada descripción y actualización de los proteomas del plasma seminal (PS) y de los espermatozoides de porcino. Se desarrollaron 5 experimentos, 3 basados en el proteoma del PS (estudios 1, 2 y 3) y otros 2 en el proteoma de los espermatozoides (estudios 4 y 5). Para dichos experimentos, se utilizaron muestras de PS y/o espermatozoides de 313 eyaculados, recogidos de manera fraccionada (10 primeros mL de la fracción rica [FR], resto de la FR y la fracción post-FR) o como eyaculado completo, procedentes de 89 verracos utilizados en programas de inseminación artificial. También se utilizaron muestras de espermatozoides procedentes de la cola del epidídimo (estudio 4) y de espermatozoides criopreservados mediante un procedimiento estándar para pajuelas de 0,5 mL (estudio 5). Para el análisis proteómico, las proteínas de PS y de los espermatozoides fueron digeridas con tripsina y los péptidos resultantes fueron sometidos a diferentes sistemas de fraccionamiento antes de ser analizados mediante espectrometría de masas (MS). El proteoma se analizó por cromatografía líquida acoplada a MS en tándem y las proteínas resultantes fueron cuantificadas mediante SWATH (Sequential window acquisition of all theoretical mass spectra; estudios 1, 2, 3 y 5) o iTRAQ (Isobaric tags for relative and absolute quantitation; estudio 4). La fertilidad de los verracos (estudio 3), se valoró, tras inseminar 25.069 cerdas, en términos de tasa de parto (porcentaje de cerdas que paren con respecto al número de cerdas inseminadas) y tamaño de la camada (número de lechones nacidos por parto). La calidad y funcionalidad espermática (estudio 5) se evaluó como motilidad objetiva (total y progresiva), viabilidad, fragmentación del ADN nuclear, peroxidación lipídica y apoptosis celular temprana. Se identificaron un total de 872 y 1.723 proteínas en el PS (estudios 1 y 2) y en los espermatozoides (estudio 4), respectivamente, siendo 679 y 1.602 de ellas cuantificadas. Se identificaron, tanto en el proteoma del PS (estudio 1) como en el de los espermatozoides (estudio 4), proteínas que estaban cuantitativamente diferentemente expresadas entre las fracciones del eyaculado, siendo muchas de ellas relevantes para la funcionalidad espermática. Algunas de las proteínas diferencialmente expresadas eran comunes para el PS y los espermatozoides, evidenciando que el proteoma de los espermatozoides de porcino se remodela durante la eyaculación debido a su interacción con el PS. En el estudio 3, se identificaron un total de 11 y 4 proteínas del PS diferencialmente expresadas entre verracos con diferencias en tasa de parto y tamaño de camada, respectivamente, proteínas con potencial para ser utilizadas como biomarcadores de fertilidad. Finalmente, en el estudio 5, se identificaron 26 proteínas en el proteoma de los espermatozoides criopreservados que diferían cuantitativamente entre muestras espermáticas con claras diferencias en la congelabilidad. En conclusión, la presente Tesis Doctoral aporta la descripción más extensa y actualizada de los proteomas del PS y de los espermatozoides de porcino, demostrando que el proteoma de los espermatozoides se remodela durante la eyaculación e identificando proteínas en el proteoma de los espermatozoides y del PS que estarían directamente implicadas en la congelabilidad espermática y en la fertilidad, respectivamente.Proteins are essential for sperm function, including their fertilizing capacity. Consequently, the aim of the PhD Thesis was to describe and update the proteomes of porcine seminal plasma (SP) and spermatozoa, respectively; identifying proteins related to sperm freezability and fertility after artificial insemination (AI). Five experimental studies were performed, three focused on the SP proteome (studies 1, 2 and 3) and the other two on the sperm proteome (studies 4 and 5). Sperm and SP samples were derived from 313 ejaculates (89 boars), collected either in fractions (the 10 first mL of the sperm rich fraction [SRF], the remainder of the SRF and the post-SRF) or as an entire ejaculate. In addition, epididymal (study 4) and cryopreserved spermatozoa (study 5) were also used. For proteomic analysis, the SP and sperm proteins were digested by trypsin, the resulting peptide mixtures subjected to different fractionation approaches before mass spectrometry (MS) analysis. Liquid chromatography-tandem MS was used for proteome analysis. Quantitative differences in protein composition were analyzed either by SWATH (Sequential window acquisition of all theoretical mass spectra; studies 1, 2, 3 and 5) or by iTRAQ (Isobaric tags for relative and absolute quantitation, study 4). The fertility of the boars (study 3), as farrowing rates (FR, number of farrowing sows respect to the number of inseminated sows) and litter size (LS, total number of piglets born per litter) was recorded from 25,069 sows after AI. Sperm function (study 5) was assessed in terms of total and progressive motility, viability, nuclear DNA fragmentation, membrane lipid peroxidation and early signs of apoptosis. A total of 872 proteins in SP (studies 1 and 2) and of 1,723 in spermatozoa (study 4) were identified; of which 679 respectively 1,602 were quantified. Several proteins, many of them relevant for sperm function, were identified as quantitatively differently expressed among ejaculate fractions in both SP (study 1) and sperm (study 4) proteomes. Some of these were common for SP and spermatozoa, revealing that the proteome of pig spermatozoa is remodeled during ejaculation through interaction with the surrounding SP. In study 3, a total of 11 and 4 differentially expressed proteins were identified in SP from boars with differences in farrowing rate and litter size, respectively. These proteins are revealed as potential fertility biomarkers of boar used in AI programs. Finally, study 5 identified 26 sperm proteins differentially expressed between samples showing differences in freezability. This PhD Thesis provides the most extensive and updated description of SP and pig sperm proteomes. It also evidences that the pig sperm proteome is remodeled during ejaculation and identifies proteins directly involved in sperm freezability and boar fertility in the proteome of spermatozoa and SP, respectively.

Los objetivos de esta tesis son describir el comportamiento del cerdo ibérico en extensivo, discernir qué factores lo condicionan; saber cómo se agrupan los animales a lo largo del año, si diferentes condicionantes del entorno tienen alguna influencia y, por último, probar si existen diferencias en la calidad de la carne de animales castrados, inmunocastrados o hembras enteras también criadas en extensivo. Para los dos primeros objetivos se realizaron observaciones de campo en seis explotaciones de Extremadura durante las fases de engorde y finalización en montanera. Esto es, desde la primera primavera de los animales, con unos seis meses de edad, hasta su sacrificio a finales del siguiente invierno, durante dos temporadas de 2012 a 2014. En cuanto a los patrones de actividad, se observó que dedicaban el 56% del tiempo a descansar y el 28% a explorar, viéndose afectados (P

La carne de cerdo es una de las carnes más consumidas en el mundo, cuyo valor se ve afectado por su calidad y las preferencias del consumidor. La composición de los ácidos grasos (AGs) en músculo y tejido adiposo modifica la calidad de la carne. Del mismo modo, la microbiota intestinal, a través de la producción de metabolitos como los ácidos grasos volátiles, puede también afectar su calidad. Sin embargo, la relación entre el genoma del cerdo y su microbiota intestinal no está bien estudiada. En la presente tesis se han realizado una serie de trabajos con el fin de profundizar en los mecanismos genéticos implicados en la determinación de la composición de los AGs. Además, se ha estudiado la composición de la microbiota a lo largo del intestino y su interacción con el genoma porcino. Se realizaron estudios de asociación del genoma completo (GWAS) entre 38.424 Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) y 60 caracteres fenotípicos relacionados con la composición de los AGs en músculo y grasa dorsal de 441 cerdos pertenecientes a tres retrocruces de la población experimental IBMAP: BC1_LD (25% Ibérico y 75% Landrace), BC1_PI (25% Ibérico y 75% Pietrain), y BC1_DU (25% Ibérico y 75% Duroc). El GWAS reveló nueve regiones del genoma porcino asociadas con doce caracteres de la grasa dorsal y seis regiones asociadas con seis medidas de la grasa intramuscular. Dentro de estas regiones, se identificaron 50 genes como candidatos funcionales a explicar la variación de estos caracteres. Los genes más relevantes fueron ELOVL3, ELOVL6, ELOVL7, FADS2, FASN y SCD. Además, el polimorfismo ELOVL6:c.‑394G>A fue el más asociado con los porcentajes de C14:0, C16:0, y C16:1(n-7) en grasa dorsal. Para estudiar otras variantes genéticas aparte de los SNPs, se detectaron 1.928.746 indels con tres programas (Dindel, SAMtools mpileup, y GATK) mediante los datos de secuenciación del genoma completo de siete fundadores (dos machos Ibéricos y cinco hembras Landrace) del material IBMAP. Se genotiparon diez indels localizados en genes relacionados con el metabolismo lipídico en los 441 cerdos de los tres retrocruces, encontrándose a distintas frecuencias alélicas. En la grasa intramuscular, el indel C1QTNF12:c.557_559delCCG presentó una asociación significativa con el porcentaje de ácido eicosadienoico (C20:2(n-6)). Para describir la composición de la microbiota a lo largo del intestino, se recogió el contenido luminal de cinco regiones (duodeno, yeyuno, íleo, colon proximal y distal) de trece cerdos Ibéricos. Posteriormente, mediante el método de amplificación y secuenciación del gen 16S rRNA, se identificaron 1.669 operational taxonomic units (OTUs) agrupados en 179 géneros, siendo los más abundantes Lactobacillus, Clostridium y Prevotella. Las muestras de colon eran más ricas en especies y se parecían más entre cerdos que las muestras del intestino delgado. Además, las predicciones funcionales del metagenoma a lo largo del intestino mostraron que sus rutas energéticas eran distintas. Finalmente, se estudió la asociación entre el genoma del cerdo y su microbiota intestinal. Se obtuvo la composición de la microbiota del recto de 285 cerdos Ibérico × Duroc mediante la amplificación y secuenciación del gen del 16S rRNA, identificándose un total de 1.257 OTUs agrupados en 101 géneros y 18 filos, siendo los filos más abundantes Firmicutes y Bacteroidetes. El GWAS reveló 17 regiones del genoma porcino asociadas con la abundancia relativa de los géneros Akkermansia, CF231, Phascolarctobacterium, Prevotella, SMB53 y Streptococcus. Dentro de estas regiones, se identificaron 38 genes como candidatos a modular la composición de la microbiota intestinal por su relación con el sistema inmunitario y el metabolismo de los mucopolisacáridos y los ácidos biliares. Pork is one of the most consumed meats worldwide and it is subjected to consumer’s preferences. Meat quality is affected by fatty acid (FA) composition in muscle and adipose tissues. Gut microbiota composition can also affect meat quality through the production of metabolites such as short-chain fatty acids. However, the relationship between pig genome and gut microbiota is not fully understood. In the current thesis, several studies have been performed to improve our knowledge about the genetic determinism of FA composition. In addition, the composition of the microbiota along the pig gut and its interaction with the host genome has been also analysed. Genome-wide association studies (GWAS) were performed among 38,424 single nucleotide polymorphisms (SNPs) and 60 phenotypic traits related to FA composition in backfat and muscle. This analysis was performed in 441 pigs from three different backcrosses: BC1_LD (25% Iberian and 75% Landrace), BC1_PI (25% Iberian and 75% Pietrain), and BC1_DU (25% Iberian and 75% Duroc) belonging to the IBMAP experimental population. Nine regions of the pig genome were associated with twelve backfat traits, while six regions were associated with six intramuscular fat (IMF) traits. A total of 50 candidate genes were proposed to explain the variation in these traits. The most promising candidate genes were ELOVL3, ELOVL6, ELOVL7, FADS2, FASN and SCD. Furthermore, ELOVL6:c.‑394G>A was the most associated SNP with the percentages of C14:0, C16:0, and C16:1(n-7) in backfat. With the aim of detecting other variants apart from SNPs, we performed an indel detection with the whole genome sequencing data from seven founders (two Iberian boars and five Landrace sows) of the IBMAP pigs. A total of 1,928,746 indels were found in common among the three programs used (Dindel, SAMtools mpileup, and GATK). Ten indels inside genes related with lipid metabolism (ASPH, C1QTNF12, CAPN9, CCR7, CRP, GZMA, JMJD1C, LYST, PEX19 and SAMD4B) were genotyped in pigs belonging to the three IBMAP backcrosses, obtaining different allelic frequencies. The C1QTNF12:c.557_559delCCG indel was associated with the percentage of eicosadienoic acid (C20:2(n-6)) in IMF. To describe the microbiota composition along the pig gut, luminal contents of five gut sections (duodenum, jejunum, ileum, and proximal and distal colon) were collected in thirteen Iberian pigs. A total of 1,669 operational taxonomic units (OTUs) grouped in 179 genera were found using the 16S rRNA gene sequencing method. Lactobacillus, Clostridium and Prevotella were the three most abundant genera. Colon samples were more similar among pigs and richer in species than small intestine samples were. The metagenome predictions showed that the energy pathways were different along gut sections. Finally, to reveal the association between host genome and gut microbiota in pigs, the microbiota composition of the rectum of 285 Iberian × Duroc pigs was obtained using the 16S rRNA gene sequencing method, finding 1,257 OTUs distributed in 101 genera and 18 phyla. Firmicutes and Bacteroidetes were the most abundant phyla. GWAS identified 17 genomic regions of the pig genome associated with the relative abundance of six genera (Akkermansia, CF231, Phascolarctobacterium, Prevotella, SMB53 and Streptococcus). A total of 38 candidate genes, related with the host defence system and the metabolism of mucopolysaccharides and bile acids, were suggested to be modulators of the gut microbiota composition.

The goal of the current experiment was to assess the clinical efficacy of oxfendazole (OFZ) administered as a single oral dose (30 mg/kg) to pigs naturally parasitized with Ascaris suum, Oesophagostomum spp., Metastrongylus spp. and Trichuris suis. Thirty-six local ecotype piglets were divided into three independent experiments, named I, II and III (n = 12 each), respectively. Each experiment involved two different groups (n = 6): Untreated Control and OFZ treated. Animals were naturally parasitized with A. suum (Experiments I, II and III), Oesophagostomum spp. (Experiments I and II), T. suis (Experiments II and III) and Metastrongylus spp. (Experiment I). Pigs in the treated group received OFZ (Synanthic®, Merial Ltd., 9.06% suspension) orally at 30 mg/kg dose. At five (5) days post-treatment, animals were sacrificed and the clinical efficacy of the OFZ treatment was established following the currently available WAAVP guidelines for a controlled efficacy test. None of the animals involved in this experiment showed any adverse events during the study. OFZ treatment given as a single 30 mg/kg oral dose showed a 100% efficacy against all the nematode parasites present in the three experiments. In conclusion, under the current experimental conditions, OFZ orally administered to naturally parasitized piglets at a single dose of 30 mg/kg was safe and highly efficacious (100%) against adult stages of A. suum, Oesophagostomum spp., T. suis and Metastrongylus spp. Fil: Alvarez, Luis Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Saumell, Carlos Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Fusé, Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Moreno, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Ceballos, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Domingue, Guilbert. GALVmed. Global Alliance for Livestock Veterinary Medicines; Reino Unido; Fil: Donadeu, Meritxell. GALVmed. Global Alliance for Livestock Veterinary Medicines; Reino Unido; Fil: Dungu, Baptiste. GALVmed. Global Alliance for Livestock Veterinary Medicines; Reino Unido; Fil: Lanusse, Carlos Edmundo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina

La fecundación es un proceso biológico complejo en el que innumerables factores están directa o indirectamente implicados. Aunque la eficiencia de la fecundación in vitro (IVF) es, en animales sanos, menor que in vivo, en algunas especies de mamíferos como la bovina o la murina se ha alcanzado un alto rendimiento, sin embargo en la especie porcina el rendimiento de la IVF es aún subóptimo. Actualmente, la penetración polispérmica de los ovocitos permanece como uno de los principales obstáculos en la IVF porcina y la simulación de las condiciones in vivo de capacitación espermática y fecundación se postula como la mejor estrategia para mejorar los resultados de IVF. La concentración de bicarbonato (HCO3-), uno de los efectores de la capacitación espermática a través de la activación de la vía de la adenilato ciclasa soluble (sAC)/AMP cíclico (cAMP)/proteína kinasa A (PKA), varía enormemente en los diferentes ambientes que los espermatozoides maduros atraviesan desde la cola del epidídimo (~3-4 mM) al oviducto (de 10 mM en el istmo hasta entre 25 y 90 mM en el lugar de fecundación, dependiendo de la fase del ciclo estral). En el oviducto, la baja concentración de HCO3- en la porción caudal del istmo permite a los espermatozoides permanecer unidos a las células del epitelio oviductal en un estado quiescente y formando el reservorio espermático (SR). Durante la ovulación, acontece un incremento de la concentración de HCO3- que desencadena la hiperactivación del espermatozoide y permite su liberación desde el SR. La secreción de HCO3- provoca un gran incremento del pH en la fase periovulatoria desde aproximadamente 6,5 en el istmo a incluso 8,0 en la ampolla oviductal. El flujo creciente de HCO3- y pH permite el transporte del espermatozoide al lugar de fecundación en la unión ampular-ístmica (AIJ), el desarrollo de la reacción acrosómica (AR) para atravesar las envolturas del ovocito y la penetración. El ambiente oviductal periovulatorio en el que estos fenómenos tienen lugar es bastante diferente de las características in vitro de los medios habitualmente utilizados para la capacitación espermática y IVF, que contienen una concentración de HCO3- estándar de 25 mM y un pH de 7,4. Estos procesos biológicos in vivo tienen lugar en fluidos específicos del tracto genital de la hembra, los fluidos uterino (UF) y oviductal (OF). Sin embargo, la capacitación in vitro y la IVF se producen actualmente en sistemas estáticos en medios químicamente definidos, con diversos grados de complejidad pero con composición y características físicas limitadas (probablemente distantes de las que se encuentran en las secreciones reproductivas), y en tubos o placas de plástico en las que los gametos contactan aleatoriamente, más que por selección y/o competición espermática. Y ninguno de ellos ha sido extendido ampliamente en los laboratorios de reproducción ni han conseguido eliminar el problema de la polispermia. Este trabajo se centra en el efecto que sobre el rendimiento de la IVF tienen factores como la concentración de HCO3- y el pH del medio (pH extracelular, pHe), las secreciones oviductales periovulatorias y un dispositivo en el que los gametos se disponen físicamente separados y los espermatozoides han de nadar para contactar con los ovocitos. En el Capítulo 1, se estudió el efecto de diferentes concentraciones de HCO3- (0, 5, 15 and 25 mM) en la capacitación de espermatozoides maduros y se evaluaron diferentes parámetros de funcionalidad espermática, incluida la fertilidad in vitro. El pHi se incrementó tras la absorción de HCO3-, pero solo concentraciones extracelulares de 15 mM o superiores activaron la cascada de capacitación de cAMP/PKA en el espermatozoide. El tiempo requerido para producir una alta fosforilación de los sustratos de PKA (PKAs-P) fue dependiente de la concentración de HCO3-, dado que con 15 mM fue más tardía que con la concentración habitual de 25 mM. 15 mM de HCO3- también estimuló una motilidad lineal en los espermatozoides y la fosforilación de tirosina (Tyr-P). Para evaluar la capacidad fecundante de los espermatozoides dependiendo de la concentración de HCO3- del medio, se analizaron dos sistemas: i) un sistema de IVF en una fase (IVF monofásica) en la que los espermatozoides se inseminaron directamente sin ningún tratamiento previo y co-cultivados con los ovocitos en un medio de IVF con las diferentes concentraciones de HCO3-, y ii) un sistema de IVF en dos fases (IVF bifásica) en la que los espermatozoides primero se incubaron durante 60 min en un medio capacitante con diferentes concentraciones de HCO3- y después inseminados en un medio de IVF con los ovocitos y la misma concentración de HCO3- que en la preincubación o superior. Los resultados de la IVF monofásica mostraron que 15 mM produjo una eficiencia más alta (26,2%). En la IVF bifásica, la preincubación y IVF a 15 mM alcanzó un 33,9% de zigotos viables (ovocitos penetrados por solo un espermatozoide), lo que resultó en un incremento significativo del 25,3%. El Capítulo 2 combinó un medio con el pH del oviducto durante la fase periovulatoria (pHe 8,0), una mezcla de componentes oviductales periovulatorios formada por secreciones de los COCs, FF y FO periovulatorio (OFCM) y un dispositivo que interpone una barrera física entre los gametos (un tapón de rosca de tubo Falcon® invertido, S) en el que los espermatozoides han de nadar al encuentro con los ovocitos. Los resultados mostraron que el uso combinado de los tres factores estudiados (pHe 8,0, adición de OFCM y el dispositivo S) redujo la polispermia e incrementó la eficiencia final de obtención de zigotos viables a un 48,7% comparado con el sistema clásico a pHe 7,4, carente de OFCM y con el dispositivo W (18,9%). El estudio de la funcionalidad espermática en las condiciones de IVF descritas mostró que tanto pHe como OFCM modulan la capacitación espermática. Los parámetros de motilidad y el estatus de capacitación a través de Tyr-P fue menor a pHe 8,0 y con OFCM. PKAs-P y AR fueron menores en presencia de OFCM, independientemente del pHe. Pudimos concluir que la mayor eficiencia en la IVF con pHe 8,0, presencia de OFCM y el dispositivo S podría ser una consecuencia directa de la acción de los componentes de OFCM sobre los gametos. Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que las actuales condiciones subóptimas de la IVF en la especie porcina pueden ser mejoradas simulando el ambiente oviductal periovulatorio in vivo. Ajustando la concentración de HCO3- y el equilibrio ácido-base de los sistemas de IVF porcina, añadiendo fluidos oviductales periovulatorios y utilizando un dispositivo en el que los gametos son ubicados físicamente separados pero con posibilidad de contactar, incrementa la eficiencia de la IVF, reduce la polispermia y se obtiene una alta proporción de zigotos potencialmente viables. A pesar de los innumerables factores, conocidos y no conocidos, que influyen en los procesos de capacitación y fecundación, con este trabajo se muestran nuevas vías hacia la mejora de la IVF en la especie porcina y, probablemente, un nuevo modelo de ART para todas las especies., Fertilization is a complex biological process in which innumerable factors are directly and/or indirectly involved. Although the efficiency of in vitro fertilization (IVF) is, for healthy animals, lower than in vivo, in some mammalian species such as bovine or murine a high yield has been achieved. However, in porcine species the IVF is still suboptimal. Currently, the polyspermic penetration of oocytes remains the main obstacle in porcine IVF, and the in vitro simulation of in vivo conditions of sperm capacitation and fertilization is postulated as the best strategy to improve the IVF output. The concentration of bicarbonate (HCO3-), one of the spermatozoa capacitating effectors which acts through activating the soluble adenylyl cyclase (sAC)/cyclic AMP (cAMP)/protein kinase A (PKA) pathway, varies greatly in the different environments that mature spermatozoa go through from the cauda epididymis (~3-4 mM) to the oviduct (from 10 mM in the isthmus to between 25 and 90 mM in the fertilization site, depending on the stage of the estrous cycle). In the oviduct, the low HCO3- concentration in the caudal portion of the isthmus allows the spermatozoa to remain in a quiescent state, attached to the oviductal epithelial cells and forming the sperm reservoir (SR). At ovulation, there is an increase in HCO3- concentration, which triggers the hyperactivation of spermatozoa that allows their release from the SR. The HCO3- secretion provokes a great increase in pH in the periovulatory phase from around 6.5 in the isthmus and to around 8.0 in the oviductal ampulla. The increasing flow of HCO3- and pH enable the spermatozoa transport to the fertilization site at the ampullary-isthmic junction (AIJ), the development of the acrosome reaction (AR) to penetrate the egg vestments and oocyte fertilization. The periovulatory oviductal environment in which these phenomena take place is quite different from the in vitro characteristics of the medium usually used for sperm capacitation and IVF which contains a standard concentration of HCO3- of 25 mM and pH 7.4. These biological processes in vivo take place in specific fluids of the female genital tract, the uterine fluid (UF) and oviductal fluid (OF). However, in vitro sperm capacitation and IVF are presently produced in static systems in chemically defined media, with diverse grades of complexity but of limited composition and physical characteristics (probably distant from those encountered in the reproductive secretions), and plastic tubes or dishes in which gametes make contact randomly, rather than by selection and/or sperm competition. And none has been widely used in reproduction laboratories or eliminated the great problem of polyspermy in pigs. This work focuses on the effect on IVF of factors such as HCO3- concentration and pH of the medium (extracellular pH, pHe), the effect of periovulatory oviductal secretions and a device in which gametes are located physically separated and spermatozoa must swim to contact the oocytes. In chapter 1, the effects of different HCO3- concentrations (0, 5, 15 and 25 mM) were studied on the capacitation of mature spermatozoa and different functionality parameters were determined, including in vitro fertility. The pHi increased in spermatozoa after HCO3- uptake but only extracellular concentrations of 15 mM and above activated the cAMP/PKA capacitation cascade in the spermatozoa. The time required for the high phosphorylation of PKA substrates (PKAs-P) was HCO3- concentration-dependent, since at 15 mM it took PKAs-P significantly longer than with the usual concentration of 25 mM. 15 mM of HCO3- also stimulated sperm linear motility and tyrosine phosphorylation (Tyr-P). To evaluate spermatozoa fertility according to the HCO3- concentration of the medium, two different IVF systems were contemplated: i) a one-phase IVF system (monophasic IVF), in which spermatozoa were directly inseminated without any previous treatment and co-cultured with the oocytes in an IVF medium with the different HCO3- concentrations, and ii) a two-phases IVF system (biphasic IVF) in which spermatozoa were first pre-incubated for 60 min in a capacitating medium with different HCO3- concentrations and then inseminated in an IVF medium with the oocytes that contained the same or higher HCO3- concentration than in pre-incubation. The results of monophasic IVF showed that 15 mM led to higher efficiency (26.2%) than the rest of concentrations. In the biphasic IVF, both pre-incubation and IVF at 15 mM achieved 33.9% of viable zygotes (oocytes penetrated by only one spermatozoa), which represented in a significant increase of 25.3%. Chapter 2 combined a medium with the pH found in the oviduct during the periovulatory stage (pHe 8.0), a mixture of oviductal periovulatory components formed by COC secretions, follicular fluid and oviductal periovulatory fluid (OFCM) and a device that interposes a physical barrier between gametes (an inverted screw cap of a Falcon® tube, S) in which spermatozoa must to swim towards the encounter with the oocytes. The results showed that the combined use of the three factors studied (pHe 8.0, OFCM addition and S device) reduced polyspermy and increased the final efficiency of viable zygotes obtained to 48.7% compared with the classical system at pHe 7.4, lacking OFCM and a W device (18.9%). The spermatozoa functionality study under these IVF conditions showed that both pHe and OFCM modulate sperm capacitation. The motility parameters and capacitation status through Tyr-P was lower at pHe 8.0 and with OFCM. PKAs-P and AR were lower in the presence of OFCM, independently of the pHe. We concluded that the higher efficiency of IVF with pHe 8.0, in the presence of OFCM and using an S device could be a direct consequence of the action of OFCM components on gametes. The results obtained in this work suggest that the current suboptimal IVF conditions in porcine species can be improved by simulating the in vivo periovulatory milieu in the oviduct. Adjusting the HCO3- concentration and acid-base equilibrium of the porcine IVF systems, adding periovulatory oviductal fluids and using a device in which gametes are located physically separated but with a means of contact, increased the efficiency of IVF by reducing polyspermy and obtaining higher proportion of potentially viable zygotes. Despite the innumerable known and unknown factors that influence the capacitation and fertilization processes we identify new paths towards improving IVF in porcine and probably a new model for ARTs in all species

La hipertensión intraabdominal (HIA) es una urgencia clínica que requiere de un diagnóstico precoz que impida el desarrollo de complicaciones orgánicas posteriores. Entre las alteraciones más relevantes se encuentra la disfunción intestinal, resultado de la hipoperfusión generada tras el aumento de presión intraabdominal (PIA), y que se manifiesta clínicamente mediante cambios en los parámetros de perfusión esplácnica como la presión de perfusión abdominal (PPA), el pH intramucoso gástrico (pHi) y el ácido láctico (Lc). Una de las causas de HIA es la obstrucción intestinal mecánica (OIM) con válvula ileocecal competente, ya que el incremento de la presión intraluminal del colon favorece el aumento de la PIA. Sin embargo, a nivel experimental no existe ningún modelo de OIM que refleje de forma real lo sucedido en humanos, ni tampoco se ha establecido una relación entre las posibles lesiones intestinales y los cambios en los parámetros de perfusión durante HIA. De igual modo, se desconocen estos aspectos relacionados con la integridad intestinal en otros modelos animales de HIA experimental más empleados como el neumoperitoneo. Por tanto, sobre dichos precedentes planteamos los siguientes objetivos: definir un modelo porcino de HIA por OIM que simule la patología descrita en humanos, estudiar la integridad estructural del intestino durante la HIA (por OIM y neumoperitoneo) para determinar cuándo se inician las alteraciones intestinales y su evolución, y relacionar dichos cambios con los parámetros clínicos para establecer unos niveles de seguridad que eviten la lesión entérica. METODOLOGÍA Se desarrolló un modelo porcino de OIM donde se generaba una HIA de 20 mmHg durante 5 horas. Una vez validado el modelo, éste fue empleado para evaluar la secuencia histopatológica del intestino a 20 y 30 mmHg de PIA durante 2,5 y 5 horas siguiendo el criterio histopatológico de Park P.O. Complementariamente a este modelo, se evaluaron histopatológicamente biopsias secuenciadas de íleon durante la HIA en un modelo porcino de neumoperitoneo con CO2 a diferentes PIAs (20, 30 y 40 mmHg) durante 5 horas. En ambos modelos, también se registraron los parámetros de perfusión esplácnica (PPA, pHi y Lc) para relacionarlos con las lesiones halladas. RESULTADOS Y CONCLUSIONES En el capítulo 1 fue validado el modelo de HIA por OIM, ya que todos los datos clínicos obtenidos (cardiorrespiratorios, bioquímicos y de perfusión) fueron similares a los descritos en otros modelos de HIA y, además, simuló aceptablemente la fisiopatología de la OIM humana. En el capítulo 2 se halló que la HIA por OIM producía lesiones intestinales a los 30 minutos en el 42,9% de los animales, independientemente del nivel y duración de la PIA. Los valores de PPA y pHi fueron ligeramente inferiores en los animales lesionados (I+), siendo el aumento del Lc el mejor parámetro clínico relacionado con el daño intestinal. En el capítulo 3 se observó que con un neumoperitoneo de 20 mmHg el 33,3% de los animales fueron I+ hasta las 3 horas, pero después algunos mantuvieron la integridad intestinal y sólo el 10% se resultó I+ hasta las 5 horas. Por el contrario, con 30 mmHg el 33,3% de los animales tuvieron lesiones intestinales durante el primer período y, posteriormente, el porcentaje aumentó hasta el 80% de I+ a las 5 horas. Con 40 mmHg el porcentaje de I+ fue del 93,3% a lo largo de todo el estudio. La PPA y el pHi fueron significativamente inferiores en los I+ (PPA< 20 mmHg y pHi < 7), mientras que el Lc aumentó rápidamente (> 4 mmol/L) en presencia de lesión intestinal. Estos límites podrían ser considerados umbrales clínicos para evitar el daño entérico, siendo el Lc el mejor parámetro relacionado con la lesión., INTRODUCTION Intraabdominal hypertension (IAH) is a clinical emergency that requires an early diagnosis to prevent the subsequent organ failures. Intestinal dysfunction is one of the most relevant alterations due to the hypoperfusion after the increased intra-abdominal pressure (IAP). This aspects are manifested clinically by changes in splanchnic perfusion parameters such as abdominal perfusion pressure (APP), gastric intramucosal pH (pHi) and lactic acid (Lc). One of the causes of IAH is the mechanical intestinal obstruction (MIO) with competent ileocecal valve, since the increase of the colonic intraluminal pressure favors the increase of the IAP. However, there is no experimental model of MIO that reflects what happened in humans, and the relationship between possible intestinal lesions and changes in perfusion parameters during IAH is unknown. Similarly, these aspects related to intestinal integrity in other animal models of experimental IAH such as pneumoperitoneum, are not well known. Therefore, we propose the following objectives based on these precedents: to define a porcine model of IAH by MIO that simulates the human pathology, to study the structural integrity of the intestine during IAH (by MIO and pneumoperitoneum) to determine the onset and the evolution of intestinal alterations, and relate these changes to clinical parameters to establish safety thresholds that prevent enteric injury. METHODOLOGY A porcine model of MIO was developed with an IAH of 20 mmHg maintained during 5 hours. Once the model was validated, it was used to evaluate the histopathological sequence of the intestine at 20 and 30 mmHg of IAP for 2.5 and 5 hours according to histopathological criteria of Park P.O. Complementarily to this model, biopsies of ileum were taken during IAH and were evaluated histopathologically in a porcine model of pneumoperitoneum with CO2 at different IAPs (20, 30 and 40 mmHg) during 5 hours. In both models, splanchnic perfusion parameters (APP, pHi and Lc) were also recorded to relate them to the injuries found. RESULTS AND CONCLUSIONS In the chapter 1 the IAH model by MIO was validated, since all the clinical data obtained (cardiorespiratory, biochemical and perfusion) were similar to those described in other IAH models and, also, it simulated the pathophysiology of human MIO acceptably. In the chapter 2 was found that the IAH by MIO caused intestinal lesions in 42.9% of the animals at 30 minutes of IAH, regardless of the level and duration of the IAP. The APP and pHi values were slightly lower in the injured animals (I+) and the increase of the Lc was the best clinical parameter related to intestinal damage. In the chapter 3 was observed that, with a pneumoperitoneum of 20 mmHg, 33.3% of the animals were I+ up to 3 hours but later some maintained the intestinal integrity, and only 10% was I+ at 5 hours. In contrast, at 30 mmHg, 33.3% of the animals showed intestinal lesions during the first period and, subsequently, the percentage increased to 80% of I+ at 5 hours. At 40 mmHg, the percentage of I+ was 93.3% throughout the study. APP and pHi were significantly lower in I+ (APP < 20 mmHg and pHi < 7), whereas the Lc increased rapidly (> 4 mmol / L) in the presence of intestinal damage. These limits could be considered clinical thresholds to avoid intestinal injury, which the Lc was the best parameter related to the lesion.

La salmonelosis es una enfermedad gastrointestinal causada por S. Typhimurium, la cual es transmitida mediante ingesta de comida de origen animal contaminada. Se considera un problema grave de salud pública, y la carne de cerdo es uno de los reservorios más importantes de la enfermedad. Como el cerdo es considerado un buen modelo animal para estudiar enfermedades humanas, la investigación sobre mecanismos moleculares involucrados en la respuesta a la infección en cerdos es necesaria para la salud humana. Los microRNAs (miRNAs) son un tipo de RNA no codificante que interfiere con la estabilidad y traducción de la proteína. Los miRNAs regulan post-transcripcionalmente procesos biológicos como aquellos causados por bacterias. Aunque la respuesta porcina a la infección por S. Typhimurium ha sido estudiada previamente, se sabe poco del papel que juegan los miRNAs en la regulación génica y expresión de proteínas durante la infección. Por tanto, el objetivo de este estudio fue la identificación los miRNAs que regulan la respuesta a la infección por S. Typhimurium en el tracto gastrointestinal y nódulo linfático mesentérico porcino, usando herramientas “ómicas” de nueva generación.

Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-27T11:24:43Z No. of bitstreams: 0 Made available in DSpace on 2014-05-27T11:24:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-01 The influence of the type of rotary cutting instrument on bone repair after osteotomy in swine jaw, was evaluated using digital and densitometric radiographic examinations, at controlled times. Two cross-sectional dissections were made through the base of the right jaw, one using a high speed rotary instrument and the other using low speed, both with liquid cooling. After established periods the animals were sacrificed and their jaws removed for direct and indirect digital radiographic and densitometric studies using the CROMOX, DIGORA and ODR systems. In the initial periods (7 and 28 days) the bone density was higher in osteotomy areas performed with high rotation speeds, and in the final periods (60 and 90 days) the bone density was higher in the osteotomies performed with low rotation, indicating a better final bone repair with the use of low rotation. The qualitative analysis of the repair process was made by the ODR system which obtained three-dimensional and coloured digital images, which enable the bone thickness to be measured using an aluminium wedge. This showed that by twenty-eight days the bone repair was already apparently complete. © 2010 SECOM. Departamento de Odontología y Patología y Propedéutica Clínica Facultad de Odontología UNESP, Araçatuba Departamento de Patología y Propedéutica Clínica Facultad de Odontología UNESP, Araçatuba Departamento de Apoyo, Producción y Sanidad Animal Facultad de Medicina Veterinaria de Araçatuba UNESP Departamento de Patología y Propedéutica Clínica Facultad de Odontología de Araçatuba UNESP Departamento de Odontología y Patología y Propedéutica Clínica Facultad de Odontología UNESP, Araçatuba Departamento de Patología y Propedéutica Clínica Facultad de Odontología UNESP, Araçatuba Departamento de Apoyo, Producción y Sanidad Animal Facultad de Medicina Veterinaria de Araçatuba UNESP Departamento de Patología y Propedéutica Clínica Facultad de Odontología de Araçatuba UNESP

Se ha considerado el oviducto como un mero conducto para gametos y embriones durante muchos años, pero numerosos estudios realizados en las últimas décadas han demostrado que está involucrado en importantes procesos que son necesarios para la correcta fisiología de gametos y embriones. Además, el oviducto es el lugar donde tiene lugar la fecundación y el desarrollo embrionario temprano. Gametos y embriones están en contacto con el fluido oviductal (FO) durante su paso a través del oviducto. El FO es un fluido complejo que contiene numerosos compuestos metabólicos y una gran variedad de proteínas. Podemos destacar la proteína oviductal dependiente de estrógenos (OVGP1), también llamada oviductina o mucina-9, como la glicoproteína mayoritaria del FO. Análisis de la secuencia de OVGP1 han mostrado que existe un alto grado de identidad y similitud en el extremo N-terminal de OVGP1 entre las diferentes especies de mamíferos, mientras que el grado de identidad y similitud es bajo en el extremo C-terminal de la misma. La comparación de las secuencias de aminoácidos de OVGP1 entre especies revela la existencia de cinco regiones diferentes (A-E). Todas las proteínas OVGP1 de mamíferos contienen la región A, pero difieren en la presencia/ausencia de otras regiones en el extremo C-terminal. A pesar de la existencia de datos sobre la contribución de OVGP1 en la fisiología reproductiva, todavía no se conoce el mecanismo molecular mediante el que actúa. Por esta razón, en este estudio se realiza una valoración acerca del papel de OVGP1 y su extremo C-terminal en fecundación. Para investigar la función de OVGP1 y su extremo C-terminal, se realizó la clonación de varias proteínas: OVGP1 porcina nativa, OVGP1 de coneja y OVGP1 porcina truncada en la región D y cada una de las regiones A, D y BD de manera individual. Después de la expresión y purificación de las proteínas, fueron utilizadas para realizar ensayos moleculares y fisiológicos. En este trabajo observamos que OVGP1 se unía a la zona pelúcida (ZP) de ovocitos porcinos madurados in vitro (MIV) a través de la región A de su extremo N-terminal y se mostró que su extremo C-terminal modula esta unión, modificando la morfología externa del ovocito. También observamos que la región A no estaba involucrada en la unión especie-específica entre OVGP1 y la ZP. Se detectó OVGP1 en el interior de cuerpos multivesiculares del citoplasma de ovocitos porcinos MIV, sugiriendo la posible endocitosis de la proteína. Por el contrario, la eliminación de la región D del extremo C-terminal impedía la endocitosis. Por otro lado, se ha descrito OVGP1 como el componente del FO responsable del endurecimiento frente a la digestión proteolítica de la ZP. En este trabajo, se mostró que el extremo C-terminal de la proteína es responsable de modular este endurecimiento. Además, se utilizó OVGP1 como suplemento durante la fecundación in vitro (FIV), produciéndose un incremento significativo en el porcentaje de monospermia y en la eficiencia de fecundación, que dependía de la presencia de la región D del extremo C-terminal. De igual manera, se observó un efecto positivo al utilizar OVGP1 como suplemento durante la FIV o el cultivo in vitro (CIV), mientras que al suplementar ambos procesos, el efecto en el rendimiento del sistema bovino era negativo. Por el contrario, esta suplementación en ambos procesos mejoró la calidad de los embriones obtenidos, ya que se detectó un incremento en la expresión de algunos genes relacionados con el desarrollo embrionario temprano. Por todo ello, OVGP1 podría ser un componente idóneo a ser utilizado en los medios sintéticos para mejorar las técnicas de reproducción asistida., Oviducts have long been considered mere conduits for gametes and embryos, but numerous studies performed in recent years have demonstrated that the oviduct is involved in several important processes that are necessary for the correct gamete and embryo physiology. Moreover, the oviduct is the site of fertilization and early cleavage of the zygote. During their trip through the oviductal tube, gametes and early embryos are bathed in oviductal fluid (OF). This complex fluid contains many metabolic compounds and a great variety of proteins. The major non-serum glycoprotein present in the OF is the estrogen-dependent oviductal protein (OVGP1), also named oviductin or mucin-9. Analysis of the sequence shows that the N-terminal region of the mature polypeptide OVGP1 has a high degree of identity and similarity among the species. However, C-terminal regions show a low degree of identity and similarity, with several insertions/deletions in their sequence. Comparison of the amino acid sequences of several mammalian OVGP1 reveals the existence of five different regions (A-E). All mammalian OVGP1 proteins possess region A but differ in the length of the core proteins and therefore the presence/absence of the other regions in C-terminal position. Despite the robust data obtained concerning the contribution of OVGP1 in reproductive physiology in different species, the molecular mechanism that would explain its role remains to be established. For this reason, this study makes a molecular and physiological assessment of the role of OVGP1 and its C-terminal region in fertilization. To investigate the role of OVGP1 and its C-terminal region, several proteins were cloned: full length porcine OVGP1 including regions A, B and D; rabbit OVGP1 including regions A, B and D, wich was almost absent, and porcine OVGP1 which was truncated in the D region. In order to analyze the molecular implications of the different OVGP1 regions, each region of the porcine protein was also cloned. The presence of recombinant protein was confirmed by immunoblot after expression and purification and these proteins were used to carry out molecular and physiological experiments. We showed that OVGP1 were able to bind to the zona pellucid (ZP) of in vitro maturated (IVM) porcine oocytes trought the N-terminal A region of the protein. This study has shown that the A region is not involved in the species-specific binding property when the OVGP1 cross-reactivity between species was analysed. Besides, we showed that C-terminal of OVGP1 modulates the binding to the ZP and the surface morphology of oocyte. OVGP1 was detected within multivesicular-like bodies located inside of the IVM porcine oocytes, suggesting that pOVGP1 was endocytosed by the oocyte. By contrast, deletion of the c-terminal D region prevented OVGP1 endocytosis. Moreover, OVGP1 has been referred to the OF component involved in enzymatic ZP hardening. Here, we proved that OVGP1 C-terminal is responsible for modulating this hardening. Besides, using OVGP1 as a supplementary component in in vitro fertilization (IVF) of the porcine system we noticed a significant increase in the percentage of monospermy and in the fertilization efficiency, whose final output depended on the presence of the carboxy-terminal D region of OVGP1. We also showed that incubation with OVGP1 during IVF or in vitro culture (IVC) had a positive effect in the bovine system, while supplementation in both processes had a negative effect on the final blastocyst output. Nevertheless, such incubation in both IVF and IVC improved embryo quality, because OVGP1 increased the expression of some genes involved in early embryo development. Consequently, OVGP1 would seem to be suitable for incorporation into the synthetic medium to improve assisted reproductive technologies.

En las investigaciones previas sobre la vascularización de la trompa uterina de la especie porcina apenas se ha caracterizado detalladamente el aporte arterial y venoso a sus diferentes porciones, a lo que se suma la inexistencia de trabajos donde se analicen posibles cambios en función del estado reproductivo de la cerda. La demostración de tales cambios permitiría una mejor comprensión de aspectos funcionales de la trompa uterina de la cerda hasta ahora poco definidos. Entre ellos, la caracterización del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) al regular los procesos de angiogénesis asociada al ciclo sexual podría ser relevante para valorar la relación entre el aporte sanguíneo a la trompa uterina, su capacidad secretora de fluido y la motilidad. En el capítulo 1 se ha descrito el patrón de distribución arterial y venoso, así como posibles variaciones asociadas al estado reproductivo de las hembras (prepúber, nulípara, multípara y gestante). Se utilizaron técnicas de inyección, corrosión y disección en tractos reproductores obtenidos del matadero. De forma general, se observó que el infundíbulo y la ampolla proximal reciben ramas arteriales procedentes principalmente de la rama tubárica de la arteria ovárica. La sangre venosa de esta zona desembocó en la vena ovárica mediante una rama tubárica proximal. En relación a la parte distal de la trompa uterina destacó una importante red de anastomosis en el mesosalpinx formada principalmente a partir de la rama tubárica de la arteria uterina, excepto en hembras gestantes donde la rama predominante fue la rama uterina de la arteria ovárica. El retorno venoso de esta parte se concretó en una rama tubárica distal, que excepto en cerdas gestantes terminó en la vena ovárica. En conclusión, fue posible reconocer un patrón arteriovenoso general en la trompa uterina porcina, así como identificar variaciones, principalmente arteriales, relacionadas con el estado reproductivo de las hembras. El capítulo 2 tuvo como objetivo la caracterización de la vascularización regional de la trompa uterina de la cerda para determinar si el número de arteriolas terminales que suplen al istmo y la ampolla están influenciadas por la madurez reproductiva y el estado del ciclo estral. El número total de arteriolas terminales apenas se modificó entre cerdas prepúberes y maduras, así como entre las diferentes etapas reproductivas. Por el contrario, tanto en cerdas prepúberes como maduras hubo mayor densidad de arteriolas en el istmo que en la ampolla. Se concluyó que el patrón arterial terminal que suple el oviducto porcino está establecido desde antes de iniciarse la pubertad y apenas se modifica durante la edad reproductiva de la cerda. En el capítulo 3 se ha caracterizado la inmunolocalización de VEGFA y sus receptores Flt-1 y KDR en la trompa uterina de cerdas adultas en fase folicular temprana (FTem), folicular tardía (Ftar), luteal temprana (LTem) y luteal tardía (LTar). Tanto VEFGA como Flt-1 y KDR presentaron una presencia continua en el tejido tubárico a lo largo del ciclo estral, aunque con cambios significativos en el nivel de expresión según la región de la trompa, la fase del ciclo estral y la túnica histológica. VEGFA mostró una mayor presencia global en la ampolla que en el istmo. Las fases Ltem y Ltar determinaron una disminución progresiva de la presencia de VEGFA y Flt-1 en el istmo, mientras que KDR aumentó justo antes de la ovulación. El sistema VEGF mostró máxima presencia en el epitelio, tanto en las células secretoras como ciliadas. Nuestros resultados son compatibles con una participación del sistema VEGF en la regulación de la secreción de fluido oviductal y de la motilidad. Of the previous works focused on the vascularization of the porcine oviduct very few have thoroughly described its arterial and venous supply, while no previous literature has investigated potential vascular changes with regards to different reproductive stages. This topic is of great interest to better understand still poorly understood functional characteristics of the porcine oviduct such as the secretion of fluid and the motility. The characterization of the expression of the vascular endothelial growth factor (VEGF), which is involved in the regulation of the angiogenesis described in the female reproductive organs, might be relevant to understand those oviductal characteristics. In chapter 1 the arterial and venous patterns of the uterine tube were thoroughly evaluated in vascular casts from pre-pubertal, nulliparous multiparous and pregnant reproductive apparatus obtained from local slaughterhouses. A tubal branch arising from the ovarian artery supplied both the infundibulum and proximal ampulla. Their venous blood was drained by a proximal tubal branch that terminated in the ovarian vein. A conspicuous net of anastomosis of the mesosalpinx supplied the distal part of the uterine tube. The main artery supplying that net was the tubal branch of the uterine artery, except in pregnant sows where it was the uterine branch of the ovarian artery. The blood from the distal part of the oviduct was drained by a distal tubal branch which ended in the ovarian vein, except in pregnant sows that ended in the uterine vein. Summing up, the arterial and venous patterns of the different portions of the porcine oviduct as well as some variations associated to the reproductive status were characterized. In chapter 2 the terminal vascularization supplying the uterine tube was quantified so as to evaluate potential changes due to the reproductive maturity of the females or the phase of the estrous cycle. The total number of terminal arterioles (NTA) hardly changed in pre-pubertal and mature sows, as well as along the estrous cycle. Contrastingly, the density of arterioles was always higher in the isthmus than in the ampulla. It was concluded that the pattern of terminal arterioles supplying the oviduct is established earlier than the puberty and hardly changes throughout the reproductive life. In chapter 3 the immunohistochemical expression of VEGFA and its receptors Flt-1 and KDR was characterized in oviducts from sows at different phases of the estrous cycle. The three components of the VEGF system showed a continuous presence in the oviduct tissue, although significant changes depending on the oviduct portion, the estrous cycle and the histological layer were observed. VEGFA showed maximum presence in the ampulla. During the postovulatory luteal phases of the cycle VEGFA and Flt-1 decreased significantly in the isthmus, while KDR peaked just before ovulation. The VEGF system was mainly located in both the secretory and ciliated cells of the oviduct epithelium. Our results were consistent with a participation of VEFG in the regulation of the secretion of oviductal fluid and the motility.

El objetivo principal de esta tesis fue evaluar si existe asociación entre el consumo de antimicrobianos en granjas convencionales de porcino, y la presencia de enterobacterias resistentes a cefalosporinas (RC), como Escherichia coli y Salmonella spp. A la vez, se evaluó si la granja era un reservorio de genes de RC, si éstos estaban asociados a plásmidos transferibles y si dichos plásmidos eran similares a los que están presentes en cepas humanas. Para ello se realizaron tres estudios. En el Estudio 1 se evalúo si los tratamientos con ceftiofur y posteriormente con amoxicilina eran factores de riesgo en la emergencia de E. coli RC en una granja de cerdos de engorde. Para ello se seleccionaron 100 lechones de 7 días de edad y se dividieron en dos grupos, un grupo control (n=50) y otro grupo tratado parenteralmente con ceftiofur en dosis única (n=50). Durante el período de engorde, ambos grupos fueron subdivididos en dos grupos. A dos de ellos se les administró un segundo tratamiento con amoxicilina en pienso. Los grupos formados fueron: grupo sin tratar, grupo tratado con amoxicilina, grupo tratado con ceftiofur y grupo tratado con ceftiofur y amoxicilina. Durante eltratamiento con ceftiofur se recolectaron muestras fecales antes del tratamiento (día 0), día 2, 7, 14, 21 y 42 después del tratamiento, mientras que durante el tratamiento con amoxicilina, el muestreo se extendió a 73 días después tratamiento. Se seleccionaron E. coli RC y los aislados fueron analizados por electroforesis de campo pulsado (PFGE) y concentraciónmínima inhibitoria (MIC) a 14 antimicrobianos. Además se detectó la presencia de genes de RC y se tipificaron los replicones de los plásmidos. Ambos tratamientos generaron un incremento en la prevalencia de E. coli RC, el cual fue estadísticamente significativo en los grupos tratados, disminuyendo la RC después del tratamiento. Un total de 47 aislados de E. coli RC fueron recolectados durante el estudio; en ellos se encontraron los siguientes genes de resistencia; CTX-M-1 (15), CTX-M-14 (10), CTX-M-9 (4), CTX-M-15 (2) y SHV-12 (5), mayormente asociados a plásmidos conjugativos de los grupos de incompatibilidad IncI1 e IncN. El tratamiento con ceftiofur y amoxicilina fue asociado con la emergencia de E. coli RC durante el curso del tratamiento. Sin embargo, al final del ciclo productivo, antes de que los animales partieran a matadero, no se aislaron cepas de E. coli RC. Los estudios 2 y 3 se llevaron a cabo en ocho granjas de cerdos de engorde convencionales en las que se aplicaban programas de medicina preventiva basados en el uso de antimicrobianos. En ellas se estudió la emergencia de E. coli RC (Estudio 2) y Salmonella RC (Estudio 3) depues del tratamiento con ceftiofur y tulatromicina durante la lactación. Cuatro granjas se trataron con ceftiofur y otras cuatro con tulatromicina. En cada granja, 70 lechones de 7 días de edad fueron divididos en dos grupos; grupo control (n =30) y grupo tratado (n = 40). Se recolectaron muestras fecales a día 0 (antes del tratamiento), día 2,7 y 180 después del tratamiento. Las madres también fueron muestreadas a día 0. Además, se evaluó si los recuentos de E. coli RC con respecto a la población total de E. coli, aumentaban con el uso del tratamiento. En cinco de las ochos granjas, los lechones de 7 días de edad excretaban E. coli RC antes de ser tratados. La prevalencia de animales positivos a E. coli RC fue disminuyendo a medida que aumentaba la edad de los animales. Las tres granjas restantes fueron negativas durante todo elestudio independientemente del tratamiento aplicado. Los resultados mostraron gran variabilidad en la frecuencia de animales positivos en las diferentes granjas. Un aumento transitorio de E. coli RC se observó en los recuentos 48 horas después de haber aplicado el tratamiento con ceftiofur. Sin embargo, otros factores de riesgo, como la presencia de madres positivas y la edad de los animales parecen tener una mayor relevancia en la persistencia de E. coli RC, que el tratamiento aplicado. El Estudio 3, además de evaluar el efecto del tratamiento con ceftiofur o tulatromicina en la emergencia de Salmonella RC investigó la presencia de cepas de Salmonella multirresistentes. Se caracterizaron genotípica y fenotípicamente los aislados obtenidos y se determinó la presencia de diferentes genes de resistencia, así como los plásmidos que portaban dichos genes de RC. Se aislaron 66 cepas de Salmonella en 5 de las ocho granjas. De estas, 49 fueron multirresistentes y 4 de ellas contenían genes blaCTX-M albergados en plásmidos conjugativos de la familia IncI1. Estas cepas RC fueron aisladas en una misma granja antes que los animales fueran tratados con ceftiofur, ydesaparecieron durante el curso del tratamiento. Los genes tet(A) (77%), sul1 (27%), y tet(B) (23%) fueron los más prevalentes, y 10 aislados contenían qnrB que confiere baja susceptibilidad a fluoroquinolonas. En este estudio no se pudo establecer una relación directa entre el uso de ceftiofur y laemergencia de Salmonella RC. Sin embargo la mayoría de los aislados fueron multirresistetes conjuntamente a ampicilina, estreptomicina, sulfamidas y tetraciclinas. Estos antimicrobianos son frecuentemente usados en los programas de medicina preventiva veterinaria. En conjunto, hemos observado un aumento transitorio de cepas de E. coli RC durante el tratamiento con ceftiofur, cosa que no observamos con Salmonella. Sin embargo, cepas RC, tanto de E. coli como de Salmonella, fueron aisladas de animales de siete días antes de someterlos a tratamiento, sugiriendo la circulación de estas cepas en la granja. Hubo animales que partieron a matadero excretando E. coli RC y Salmonella multirresistentes con genes y plásmidos similares a los encontrados en cepas de origen humano. Por lo tanto, nuestros estudios indican que la granja es un reservorio de cepas multirresistentes que pueden llegar al consumidor si entran en la cadena alimentaria. Para minimizar la emergencia de bacterias resistentes, es importante hacer un uso más racional de los antimicrobianos, así como definir estrategias para reducir la circulación de cepas resistentes, tanto dentro de las granjas, como en sistemas integrados de producción., The main objective of this thesis was to evaluate the association between management practices in relation with antimicrobial consumption in pig farms and the emergence of cephalosporin resistant (CR) E. coli and Salmonella. Moreover, the studies intended to elucidate if the farm was a reservoir of resistance genes harboured in transferable plasmids similar to those found in the community. For this purpose, three studies have been conducted. Study 1 evaluated if the treatments with ceftiofur and amoxicillin are risk factors for the emergence of CR E. coli in a convencional pig farm during the rearing cycle. One-hundred seven-day-old piglets were divided into two groups, control (n=50) and parenterally treated with ceftiofur (n=50). During the fattening period, both groups were subdivided in two. Asecond treatment with amoxicillin was administered in-feed to two of the groups; untreated group, group treated with amoxicillin, group treated withceftiofur and group treated with ceftiofur and amoxicillin. During treatment with ceftiofur, faecal samples were collected before treatment (day 0) and at days 2, 7, 14, 21 and 42 post-treatment, whereas with amoxicillin, the sampling was extended 73 days post-treatment. CR E. coli isolates were genotypically and phenotypically characterised by PFGE, and MIC. The presence of CR genes was assessed and plasmids analysed by replicon typing. Both treatments generated an increase in the prevalence of CR E. coli, which was statistically significant in the treated groups. Resistance diminished after treatment. A total of 47 CR E. coli were recovered during the study period, 15 contained blaCTX-M-1, 10 blaCTX-M-14, four blaCTX-M-9, two blaCTX-M-15 and five blaSHV-12. The treatment with ceftiofur and amoxicillin was associated to the emergence of CR E. coli during the course of the treatment. However, by the finishing time CR E. coli were not recovered from the animals. Study 2 and 3 were conducted in eight conventional pig farms that applied preventive veterinary programmes based on antimicrobial use. In four of these farms, 7-day-old piglets were treated with ceftiofur and in the remaining four with tulathromycin. At each farm, 70 7-day-old piglets weredivided into two groups; a control group (n = 30) and a treated group (n = 40). Faecal samples were taken at day 0 (before medication), 2, 7 and 180 days post-treatment (time of slaughter). Sows were also sampled at day 0. Study 2 also assessed the dynamics of CR E. coli populations during the life cycle. In five of the eight farms, 7-day-old piglets excreted CR E. coli before treatment. The occurrence of CR E. coli positive animals decreased with increasing piglets’ age. The remaining three farms were negative for CR E. coli during the study period. Results demonstrated great variability in the frequency of positive animals between farms, independently of treatment. The treatment with ceftiofur resulted in a transitory increase in the counts of CR E. coli after 48 hours. However, other risk factors, such as the presence of CR E. coli in sows, and the age of the animals had a more relevant role in shedding of CR E. coli than the treatment. Study 3 assessed the effect of the treatments with ceftiofur or tulathromycin in the emergence of CR Salmonella and multiresistant Salmonella. Phenotypic and genotypic characterization of the Salmonella isolates were performed. A total of 66 Salmonella isolates were recovered from five of the eight farms. Of them, 49 were multiresistant and four contained blaCTX-M genes harboured in conjugative plasmids of the IncI1 family. They were recovered from the same farms before treatment with ceftiofur. tet(A) (77%), sul1 (27%), and tet(B) (23%) genes were the most prevalent, and 10 isolates also presented qnrB. A direct relation was not established between the use of ceftiofur and the occurrence of CR Salmonella. However, multidrug resistant was common, especially for ampicillin, streptomycin, sulphonamides and tetracycline.These antimicrobials are the most frequently used in preventive veterinary programmes in Spain. Overall, the treatment with ceftiofur resulted in atransitory increase in both, the proportion of animals shedding CR E. coli and the counts. We did not observed the same increase in prevalence for CR Salmonella. However, CR E. coli and CR Salmonella were detected in 7-day¬old piglets before administration of any treatment, suggesting the presence of resistant strains circulating in the farm. Some of the animals departed to the abattoir excreting CR E. coli and Salmonella with a multiresistant phenotype. CR genes were associated to transferrable plasmids with similar replicons to those found in isolates of human origin. These results indicatedthat the farm is a reservoir of resistant genes and plasmid that can reach the consumer via the food chain. To minimize the emergence of resistant bacteria and protect the consumer health, a more rational use of antimicrobials should be implemented in intensive farming. Intervention strategies should be develop to reduce the re-circulation of resistant isolates within pig farms, as well as within integrated production systems.

Se ha descrito que los cerdos ferales machos (Sus scrofa) son usualmente solitarios pero durante la época de apareamiento compiten por el acceso a las hembras y éstas pueden sesgar su elección y copular con alguno de ellos. A esto se le conoce como elección precopulatoria femenina. Con la finalidad de determinar si en condiciones de cautiverio ocurre esta elección, se aparearon 18 hembras multíparas yorklandrace Y/N con tres machos con experiencia pertenecientes a tres razas yorkshire Y/Y, yorklandrace Y/N, y landrace N/N, y se registraron las conductas precopulatorias y copulatorias de ambos sexos. También se registraron las interacciones entre hembras. Durante la fase precopulatoria el macho Y/N desplegó con mayor frecuencia mordiscos (60%) y recibió de las hembras mas atención en términos de tiempo (53.7%), que los otros machos. En cambio, el macho Y/Y desplegó con mayor frecuencia conductas como "castañeteo de dientes" (83.33%), "vocalización" (56.52%) y "trompeo" (64%). El macho N/N desplegó con mayor frecuencia el "olfateo de vagina" (48%). Durante la cópula el macho Y/N desplegó con mayor frecuencia el contacto naso-vaginal (41%) y el macho N/N, vocalización (46.9%). Cuatro de las hembras después de la cópula fueron montadas por otras hembras en estro, las primeras expulsaron el tapón vaginal del macho. Los resultados demuestran una fuerte competencia conductual entre los tres machos y sesgo en la elección precopulatoria femenina hacia el macho heterocigotico Y/N. Una posible explicación a este hecho es que tanto los mordiscos como las secreciones salivales y prepuciales del macho Y/N fueron percibidas por las hembras como pertenecientes a un macho de buena calidad genética. La expulsión del tapón vaginal de las hembras montadas por otras hembras posiblemente indica una forma de competencia intrasexual, que reduciría las probabilidades de fertilización de las hembras recién copuladas.

Se determinaron los niveles de aflatoxinas en alimentos balanceados para cerdos en etapa de finalización, en granjas de los estados Aragua y Carabobo, Venezuela, durante el periodo mayo-agosto, 2010. Se tomaron 23 muestras de alimento balanceado (11 pertenecientes a granjas del Edo. Aragua y 12 del Edo. Carabobo), directamente de los comederos ubicados en los corrales de los galpones de cerdos. La detección de aflatoxinas totales se realizó mediante el método de cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa, acoplado a un detector de fluorescencia (HPLC-FLD), para lo cual las muestras de alimento fueron previamente purificadas con columnas de inmunoafinidad. El contenido de aflatoxinas en el alimento obtenido en el Edo. Aragua presentó un promedio de 2,005 µg/kg ± 2,53 y un valor máximo de 6,84 µg/kg, mientras que en el Edo. Carabobo se obtuvo un promedio de 1,18 µg/kg ± 1,98, y un valor máximo de 6,71 µg/kg. Los niveles detectados de aflatoxinas no excedieron los límites establecidos por instituciones nacionales (20 µg/kg) e internacionales (0,05) entre los promedios de aflatoxinas detectados en alimentos balanceados para cerdos en etapa de finalización durante el periodo estudiado. A research was conducted to determine aflatoxin levels in balanced feed for finishing pig in farms from of Aragua and Carabobo States, Venezuela, from May to August 2010. A total of 23 samples of balanced feed (11 from Aragua and 12 from Carabobo) were collected directly from feeders located in pig shed pens. The detection of total aflatoxins was made by high performance liquid chromatography in reversed phase, coupled to a fluorescence detector (HPLC-FLD), for this purpose, samples of feed were previously purified using immunoaffinity columns. The results of the present study show that average aflatoxin contents obtained in samples from Aragua State was 2.005 µg/kg ± 2.53, with a maximum value of 6.84 µg/kg, while the average value for samples from Carabobo State was 1.18 µg/kg ± 1.98, with a maximum value of 6.71 µg/kg. Aflatoxin levels detected did not exceed the limits established by national (20 µg/kg) and international (0.05) were found in average aflatoxin levels in balanced feed for finishing pigs during the studied period. 200-207 janeth.colina@ucv.ve gemamaniglia@hotmail.com darwuin@yahoo.com

El virus de la gripe porcina (VGP) es un patógeno importante en el sector veterinario con un gran potencial zoonótico, y por lo tanto se considera también una amenaza potencial para la salud pública. La vigilancia y el control de este patógeno en cerdos es por lo tanto crucial. Los métodos actuales de control se basan en la profilaxis, en particular, en vacunas que suscitan una respuesta de tipo humoral. La capacidad de escape y la alta variabilidad de VGP hacen que la eficacia de estas vacunas pueda verse comprometida; por tanto, deben ser actualizadas periódicamente. El mismo problema se plantea en la salud humana donde se están desarrollando vacunas diseñadas racionalmente con tal de solventarlo. Estas vacunas están siendo diseñadas para potenciar la respuesta de células T contra el virus de la gripe A (VGA). La respuesta de células T esta relacionada con la protección contra la infección por el VGA, centrándose en las proteínas internas y altamente conservadas del virus. Esto permitiría resolver los problemas anteriormente citados. Los epítopos de células T de VGP conocidos en cerdos son sólo unos pocos y están relacionados con el Complejo Mayor de Histocompatibilidad porcino de clase I (CMHpo-I). La vacunología inversa se utiliza en sanidad humana para identificar los epítopos de células T; sin embargo, en cerdos este concepto se ha sido introducido recientemente y por lo tanto se dispone de pocas herramientas. El objetivo principal de este trabajo era identificar epítopos de células T para diseñar racionalmente vacunas contra VGP. Para este propósito, se abordaron las siguientes estrategias. La vigilancia de VGP es fundamental para un control adecuado. La situación epidemiológica de VGP en España debía ser actualizada y se necesitaban más datos genéticos para permitir el uso de la vacunología inversa. El estudio realizado mostró que la situación epidemiológica de España era similar a la de otros países europeos; las cepas circulantes estaban estrechamente relacionadas y evolucionaron de la misma manera. Sin embargo, también se encontraron exepciones; una cepa evolucionó de forma divergente en España. Se sugiere que el cambio genético pueda ser un evento reciente en la evolución de esas cepas. Los ensayos in vitro para determinar la afinidad de unión de epítopos a CMHpo-I disponibles actualmente son pocos y están basados en moléculas recombinantes. Por lo tanto, en primera instancia se intentó generar una herramienta in vitro basada en la forma nativa del CMHpo-I. Para ello se diseñó y desarrolló casi por completo un ensayo de reconstitución de MHC aplicado a CMHpo-I, para el cual se generaron células C1R que expresaran el alelo SLA-1*es11 de los cerdos singénicos Babraham. Por último se puso a punto el ensayo de desnaturalización. A continuación, se aplicó la vacunología inversa para identificar epítopos de células T. Se predijeron epítopos del VGP in silico mediante NetMHCpan para los alelos CMHpo-I de los cerdos singénicos Babraham (SLA-1*es11 y SLA-2*es22); estos epítopos se probaron mediante ensayos funcionales ex vivo (IFNγ y respuesta de proliferación) usando células de cerdos Babraham inmunizados. Desafortunadamente, este enfoque no dio ningun epítopo positivo. Los epitopos de células T fueron también identificados empíricamente. Las proteínas M1 y NP de un VGA humano fueron seleccionadas como diana, se estudiaron mediante el uso de péptidos solapantes y métodos funcionales (IFNγ y respuestas de proliferación) hasta encontrar epítopos de células T. Los epítopos fueron analizados con células procedentes de cerdos Babraham inmunizados con VGA. Se encontraron dos epítopos CMHpo de clase II solapados, NP405-416 y NP407-420. En otro intento, se utilizó una estrategia más compleja de vacunología inversa. Esta había sido utilizada anteriormente por otros autores y comprende una combinación de métodos: predicción de epitopos in silico mediante NetMHCpan y validación de los resultados utilizando las preferencias de unión del alelo CMHpo determinadas in vitro, analisis in vitro mediante un ensayo de unión y analisis in vivo mediante tetrámeros. Los péptidos fueron identificados en animales infectados y expuestos a dos VGP heterólogos. Esta estrategia demostró ser muy precisa y así se identificó un epítopo inmunodominante (NA171-180). En general, estos datos allanan el camino para el diseño racional de una vacuna contra la SwIV a parte de proporcionar una nueva visión de la respuesta de los cerdos a la infección o inmunización con VGA., Swine Influenza Virus (SwIV) is an important pathogen in veterinary field with a great zoonotic potential and thus it is considered also a potential threat for public health. Surveillance and control of this pathogen in pigs is therefore crucial. Current methods of control are based on prophylaxis; in particular they are based on vaccines eliciting humoral response. Escaping capacity and high variability of SwIV make that the efficacy of those can be compromised; thus vaccines need to be periodically updated. This problem is shared in human health and thus rationally designed vaccines are being developed. Those are being designed to enhance T cell response against Influenza A Virus (IAV). T cell responses showed to be related with protection against IAV infection, targeting the highly conserved internal protein of the virus. This would solve the problems above cited. T cell epitopes of SwIV in pigs are just few and related to class I Swine Leucocytes Antigens (SLA). Reverse vaccinology is used in human health to identify T cells epitope; however, in pigs this has just recently been introduced and thus just few tools were available. The main aim of this work was to identify T cells epitopes in SwIV to be used in rationally designed vaccines. For this purpose, the following studies were performed. Surveillance of SwIV is fundamental to design a proper control. The epidemiological situation of SwIV in Spain needed to be updated and more genetic data were required to allow the use of reverse vaccinology. The study showed that the epidemiological situation of Spain was similar to other European countries in which circulating strains were closed related and evolving in the same way. However, some exceptions were found; one strain evolved divergently in Spain. Genetic shift has been suggested as a recent event in the evolution of those strains. In vitro assays to determinate binding affinities of epitopes to class I SLA (SLA-I) available were few and based on recombinant molecules. Therefore, in a first instance an in vitro tool based on native forms of SLA-I was attempted. MHC reconstitution assay for SLA-I was designed and almost entirely developed. C1R cells expressing the Babraham pigs allele SLA-1*es11 were generated. Finally, the denaturalization step of the assay was set-up. Reverse vaccinology was then applied to identify T cells epitopes. Epitopes of the virus selected as target were predicted in silico by NetMHCpan on Babraham SLA-I alleles (SLA-1*es11 and SLA-2*es22) and tested by ex vivo functional assays (IFNγ and proliferation responses) using cells from immunised Babraham inbred pigs. Unfortunately, this approach did not give any positive epitope. Additionally, T cells epitopes were empirically identified. Proteins M1 and NP of a human IAV were selected as target and thus dissected by using overlapping peptides and functional methods (IFNγ and proliferation responses) until finding T cells epitopes. The tests were performed using cells from IAV immunised Babraham inbred pigs. Two overlapping SLA-II epitope were found, NP405-416 and NP407-420. In another attempt, a more complex strategy of reverse vaccinology was used. This was previously used by other authors and it is based on a combination of methods: in silico prediction of epitopes by NetMHCpan and validation of results by using in vitro binding preferences of the selected SLA-I allele , an in vitro test binding assay and in vivo test by tetramers. Peptides were identified in animals infected and challenged with two heterologous SwIV. This strategy showed to be highly accurate and thus one immunodominant epitope (NA171-180) was identified. Overall, these data pave the way for rational design of vaccine against SwIV as well as providing new insight into pig responses to infection or immunization with IAV.

El objetivo principal de esta Tesis Doctoral es evaluar la inclusión de la glicerina bruta procedente de la elaboración de biodiesel en la alimentación de la especie porcina. Con el fin de alcanzar este objetivo se diseñaron tres capítulos experimentales. En el capítulo uno se estudió el efecto de la adición de glicerina en la fabricación del pienso, así como su influencia sobre el rendimiento productivo y digestibilidad de los nutrientes en cerdos de crecimiento-cebo. Se formularon tres piensos con 0, 2.5 y 5% de glicerina bruta. El estudio de los efectos de la glicerina sobre el rendimiento productivo se realizó con 240 machos castrados, usando un programa de alimentación en dos fases (crecimiento y cebo). También se recogieron muestras de sangre para determinar las concentraciones de glucosa, fructosamina e IGF-1. Además, nueve cerdos machos fueron alojados en jaulas metabólicas para determinar los coeficientes de digestibilidad fecal, así como los balances de nitrógeno y minerales. En conclusión, la inclusión de glicerina antes de la granulación mejoró la eficiencia en la fabricación del pienso. La inclusión de hasta un 5% de glicerina bruta en el pienso de cerdos de crecimiento-cebo no tuvo efectos sobre el rendimiento productivo, metabolitos sanguíneos, digestibilidad de nutrientes y balance de nitrógeno. En el capítulo dos se determinó el efecto de la inclusión de glicerina sobre el rendimiento productivo, digestibilidad de los nutrientes y nivel de hormonas sanguíneas en cerdos de cruce de ibérico criados en régimen de explotación intensivo. Se usaron 80 cerdos cruzados (hembras ibéricas x machos Duroc) de ambos sexos durante un periodo de 101 días. Los niveles de inclusión de glicerina en el pienso fueron 0 y 10%. Los cerdos alimentados con glicerina tuvieron mayor ganancia media diaria y consumo medio diario que los del grupo control. La digestibilidad de los nutrientes no se vio afectada por la inclusión de glicerina. Sin embargo, se observó una tendencia para la grelina acilada, siendo mayor en los cerdos alimentados con glicerina. En conclusión, 100 g/kg de glicerina bruta pueden reemplazar parcialmente al trigo en el pienso de cerdos de cruce de ibérico sin afectar a la eficiencia del pienso ni a la digestibilidad de los nutrientes. En el capítulo tres, se evaluó el efecto de la adición de glicerina sobre los parámetros productivos de cerdas y camadas, y se determinaron las concentraciones plasmáticas de hormonas relacionadas con el metabolismo y la ingestión de pienso, en cerdas durante la gestación y la lactación. Sesenta y tres cerdas fueron asignadas aleatoriamente a uno de los tres tratamientos, que contenían 0, 3 o 6% de glicerina. Durante la gestación, no hubo efecto sobre ninguna variable de rendimiento, mientras que en lactación, las cerdas alimentadas con glicerina consumieron menos pienso. En la gestación, las cerdas alimentadas con glicerina mostraron menor nivel de grelina acilada y mayor nivel de leptina. En lactación, la adición de glicerina en el pienso no tuvo efecto sobre los niveles de ninguna de las hormonas medidas. Antes de la distribución del alimento, la concentración de grelina acilada estuvo positivamente correlacionada con el cortisol, tanto en gestación como en lactación. En conclusión, la inclusión de hasta un 6% de glicerina bruta en el pienso puede reemplazar parcialmente al maíz sin afectar el rendimiento de las cerdas en gestación, pero no en lactación. Nuestros resultados también sugieren la existencia de una relación entre la inclusión de glicerina en el pienso y los niveles sanguíneos de algunas hormonas reguladoras del apetito., The general aim of this PhD thesis was to evaluate the inclusion of crude glycerin from biodiesel production in pig diets. To achieve this objective, three experimental chapters were designed. In chapter one, we studied the effects of crude glycerin on pellet production efficiency and growth performance and digestibility in growing-finishing pigs. Three dietary treatments were created by addition of 0, 2.5 or 5% glycerin to diets. A performance trial was conducted with 240 barrows using a 2-phase feeding program. Also blood samples were collected to determine circulating glucose, fructosamine and IGF-1 concentrations. Additionally, nine male pigs were housed in metabolic cages to determine the coefficients of apparent fecal digestibility and nitrogen and mineral balances. In conclusion, adding crude glycerin to the diet before pelleting improved feed mill production efficiency. Up to 5% crude glycerin can be fed to growing-finishing pigs without affecting growth performance, blood metabolites, nutrient digestibility and nitrogen balance. In chapter two, we determined the effect of crude glycerin addition on the growth performance, nutrient digestibility, and blood hormone levels of Iberian crossbred pigs kept under intensive conditions. Eighty crossbred pigs (Iberian gilts  Duroc boars) of both sexes were used over a period of 101. Treatments were arranged in a 2 × 2 factorial design, the factors being dietary treatment (control or 10% glycerin) and gender (barrow or gilt). Glycerin-fed pigs had higher average daily gain and average daily feed intake than pigs fed the control diet. Nutrient digestibility was not affected by dietary treatment. However, there was a tendency for acyl-ghrelin levels to be higher in glycerin-fed pigs. In conclusion, 100 g/kg of glycerin can partially replace wheat without affecting feed efficiency or nutrient digestibility in Iberian crossbred pigs. In chapter three, an experiment was conducted to evaluate the effect of dietary addition of crude glycerin on sow and litter performance, and to determine the plasmatic levels of hormones related to energy metabolism and feed intake in sows during gestation and lactation. Sixty three sows were assigned randomly to one of three dietary treatments, containing 0, 3 and 6% glycerin. During gestation, there was no effect of dietary treatment on any performance variable, while during lactation glycerin-fed sows consumed less feed than those fed the control diet. In gestation, sows fed glycerin showed lower and higher levels of acyl-ghrelin and leptin, respectively. In lactating sows, there were no differences between dietary treatments for any of the hormones measured. Before feeding, the acyl-ghrelin concentration was positively correlated with the cortisol during gestation and lactation. In conclusion, the inclusion of up to 6% crude glycerin in the diet can partially replace corn without affecting the performance of pregnant sows, but not during lactation. Our results also suggest a relationship between glycerin inclusion in the diet and the serum levels of some feed intake regulating hormones.

El PRRSV es el causante del síndrome reproductivo y respiratorio porcino; una enfermedad que, a pesar de los esfuerzos realizados por controlarla y disminuir su impacto económico, sigue siendo considerada como una de las enfermedades más importantes que afectan al sector porcino. Los dos genotipos del PRRSV, el genotipo Europeo o tipo 1 (PRRSV-1), representado por la cepa Lelystad (LV), y el genotipo Norteamericano o tipo 2 (PRRSV-2), cuyo prototipo es el aislado ATCC-VR-2332, presentan entre sí una elevada variabilidad genética y biológica. Inicialmente, se creía que todas las cepas del genotipo Europeo eran genéticamente homólogas. Sin embargo, el análisis de la secuencia de la ORF5 y OFR7 han justificado la división del genotipo Europeo en cuatro subtipos genéticos bien diferenciados: el subtipo 1 o Pan-europeo, y los subtipos 2, 3 y 4 de Europa del Este. La amplia variabilidad biológica, genética e incluso antigénica de los diferentes aislados del PRRSV-1, así como las elevadas pérdidas económicas que esta enfermedad ocasiona en el sector porcino, justifican la realización de estudios que tengan como objetivo aclarar los mecanismos patogénicos desencadenados por las diferentes cepas de este virus. En esta tesis doctoral hemos evaluado la expresión del antígeno viral, el cuadro lesional y la expresión de diferentes citoquinas proinflamatorias e inmunomoduladoras en el pulmón y en los órganos linfoides primarios (timo y médula ósea) tras la infección con una cepa... Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) is the causative agent of a disease of pigs, named porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS). Despite efforts in controlling it and reducing its economic impact, PRRS is still considered one of the most important diseases affecting the swine industry. PRRSV is divided into two distinct genotypes, European PRRSV or Type 1 (PRRSV-1) with the prototype Lelystad strain (LV), and North American or Type 2 (PRRSV-2), whose prototype is the ATCCVR- 2332 strain, with high genetic and biological diversity among both genotypes. Initially, PRRSV-1 was thought to be genetically homogenous. However, deep analysis of PRRSV-1 ORF5 and OFR7 sequences defined four distinct genetic subtypes: subtype 1 or Pan- European, and subtypes 2, 3 and 4 in Eastern Europe. The wide biological, genetic and antigenic diversity of the different PRRSV-1 strains, as well as the high economic losses to the pork industry associated with this disease justify studies that aim to clarify the pathogenic mechanisms triggered by different virus strains. In the present thesis we evaluated the expression of viral antigen, the morphologic lesion and the expression of several proinflammatory and immunomodulatory cytokines in lungs and primary lymphoid organs (thymus and bone marrow) after the infection with a prototype PRRSV-1 Lelystad (LV), two field strains (SU1-bel, of high virulence, and 215-06,...

Durante años se ha tratado de simular in vitro el proceso de selección y capacitación espermática que lleva a cabo el tracto genital de la hembra en condiciones fisiológicas, pero los resultados mucho de la selección que ocurre en el oviducto in vivo. El objetivo principal de esta tesis fue: el estudio de las subpoblaciones espermáticas previamente seleccionadas a través de métodos in vitro (por gradientes de Percoll, Capítulo 1; en cultivo de células oviductales, Capítulo 2; y la combinación de ambos sistemas, Capítulo 3), ex vivo (en explantes oviductales, Capítulo 2) e in vivo (en el oviducto de la cerda tras una inseminación artificial, Capítulo 2), y su relación con la funcionalidad y el estado de capacitación, así como su capacidad fecundante. En el Capítulo 1 se analizó la centrifugación mediante gradientes de Percoll como método de selección y capacitación espermática y se evaluó la eficacia en la selección de espermatozoides en función del gradiente utilizado (45/60, 60/75 y 45/90%). En el experimento 1, se analizaron diferentes parámetros espermáticos de las poblaciones obtenidas a través de los 3 grupos experimentales. Los resultados demostraron que al aumentar la diferencia en la densidad del gradiente de Percoll se reduce el número de espermatozoides morfológicamente anormales o con fragmentación del ADN, recuperando principalmente, espermatozoides que han iniciado el proceso de capacitación (95% presentan fosforilación de tirosina en alguna zona). Podemos decir que la separación de espermatozoides mediante gradientes de Percoll se fundamenta en sus diferencias funcionales. En el experimento 2, se emplearon las poblaciones espermáticas en fecundación in vitro para evaluar su capacidad de penetración, y determinar qué gradiente selecciona los espermatozoides más aptos para fecundar y su posible relación con los parámetros estudiados en el experimento 1. Se evaluó el porcentaje de penetración y el número medio de espermatozoides que presentaba cada ovocito. Los resultados mostraron que aquellos espermatozoides obtenidos a partir del gradiente de Percoll más restrictivo (45/90%) dieron lugar a unos mayores niveles de penetración del ovocito. En el Capítulo 2 se estudió el efecto de las células epiteliales del oviducto sobre la capacitación espermática. Se evaluó el estado de capacitación (mediante la distribución de la fosforilación de la tirosina) de los espermatozoides seleccionados mediante células oviductales bajo tres condiciones experimentales: in vitro, ex vivo e in vivo. Los resultados mostraron que existen diferencias entre los espermatozoides unidos o no unidos a las células oviductales, lo que demuestra que este tipo de células seleccionan espermatozoides con bajo grado de fosforilación en tirosina en cualquiera de las condiciones estudiadas. En el Capítulo 3 se estudiaron qué características presentan los espermatozoides para ser seleccionados por las células oviductales y la capacidad de fecundación in vitro de estos espermatozoides doblemente seleccionados [a través de gradientes de Percoll (45/90%) y posteriormente incubados sobre cultivos in vitro de células epiteliales del oviducto]. En el experimento 1 se evaluó la capacidad para fecundar de las dos poblaciones de espermatozoides obtenidas mediante el análisis de diferentes parámetros de fecundación. Los resultados demostraron que los espermatozoides doblemente seleccionados dan mejores resultados de fecundación in vitro, mejorando las tasas de penetración del gameto femenino. En el experimento 2 se analizaron las características funcionales de los espermatozoides. Los resultados indicaron que las células oviductales unen espermatozoides de mayor calidad y realizan su propia selección incluso partiendo de espermatozoides previamente seleccionados. En resumen, los resultados de esta tesis doctoral muestran que las células epiteliales del oviducto son capaces de distinguir aquellos espermatozoides con una capacidad de fecundación superior, lo que en un futuro podría representar un incremento en la eficiencia de los sistemas de reproducción asistida evitando, de este modo, la selección parcialmente subjetiva que existe actualmente en las técnicas convencionales de selección espermática., For many years, attempts have been made to control sperm selection and capacitation in order to simulate under in vitro conditions, but the results are highly variable and are far from in vivo ones. The aim of this thesis was the study of sperm subpopulations that have been previously selected by different methods: in vitro (Percoll gradients in Chapter 1, oviductal cells culture in Chapter 2 and by combining both in Chapter 3), ex vivo (in oviductal explants, Chapter 2) and in vivo (in the oviduct of the sow after insemination, Chapter 2), and their relationship with functionality, sperm capacitation status and fertilizing capacity. In Chapter 1 centrifugation by Percoll gradients was analysed as a sperm selection and capacitation method, and its efficiency for selecting sperm was evaluated. Three different Percoll gradient combinations (45/60, 60/75 and 45/90%) were used. In experiment 1, several parameters related to sperm function were analysed in the different sperm populations obtained through the three experimental techniques. The results of this experiment showed that as the Percoll gradient increased, the number of morphologically abnormal sperm or sperm with DNA fragmentation is reduced, recovering especially those sperm that have begun the process of sperm capacitation (since 95% of spermatozoa present tyrosine phosphorylation in any of the studied areas). So, we can say that the separation of sperm by Percoll gradients is primarily based on their functional differences. In experiment 2, the different sperm populations were used in an in vitro fertilization system to evaluate the penetration rate and checking which Percoll gradient selects the best sperm for fertilization purposes. The penetration rate and the mean number of spermatozoa found in each oocyte were evaluated. The results showed that spermatozoa obtained from the most restrictive Percoll gradient (45/90%) had higher levels of penetration. In Chapter 2 the capacitation status of sperm selected by the oviductal epithelial cells was evaluated (by measuring levels of tyrosine phosphorylation) under three conditions: in vitro, ex vivo and in vivo. The results showed that the phosphorylation pattern changes when sperm are incubated with the epithelial cells of the oviduct, with differences between sperm bound or unbound to the cells. It was concluded that the epithelial cells of the oviduct are able to select spermatozoa with a low level of tyrosine phosphorylation in any of the studied conditions. In Chapter 3 sperm selected by Percoll gradients (45/90%) were incubated with in vitro cultured oviductal epithelial cells. This incubation resulted in two distinct sperm populations: sperm bound to cells and sperm unbound. The study was divided into two experiments. In experiment 1 the ability of the two populations to fertilize was evaluated using different parameters. The results showed that the doubly selected sperm led to better results in the in vitro fertilization systems, significantly improving penetration rates. In experiment 2 the functional characteristics of sperm from the two populations were analysed. The results indicated that the oviductal epithelial cells bind higher quality sperm according to different functional parameters and perform their own sperm selection. In summary, the results of this thesis show that the oviductal epithelial cells are able to distinguish those sperm with a higher fertilization capacity. In the future this could provide an increase in the efficiency of assisted reproduction systems thereby preventing the partially subjective selection that currently exists in conventional sperm selection techniques.

Erysipelothrix rhusiopathiae es el agente causal de la erisipela porcina, enfermedad que ocasiona pérdidas económicas importantes en las explotaciones porcinas. En México se desconoce la presencia de la infección, principalmente porque el cuadro clínico se presenta acompañado por otros patógenos, además el aislamiento es difícil por los requerimientos de la bacteria. En un rancho porcícola de Guadalajara se dieron a conocer casos de endocarditis, disminución en la producción y observación de manchas rojizas en la piel de animales jóvenes y las hembras de pie de cría, por lo que se buscó la presencia del microorganismo en la explotación. Para realizar el aislamiento de la bacteria se recolectaron 8 muestras de sangre, 11 de corazón, 6 de amígdalas y 3 de líquido sinovial de cerdos de siete meses de edad y de hembras de pie de cría. Las muestras se sembraron en caldo selectivo para Erysipelothrix, los órganos se sembraron en gelosa sangre, medio de Packer modificado y agar soya tripticaseina suplementado con suero de caballo. A partir de líquido sinovial, corazón y amígdalas se logró el aislamiento de cinco cepas identificadas como E. rhusiopathiae, lo que fue confirmado por medio del sistema API-Coryne. Estos hallazgos determinan la presencia de E. rhusiopathiae como causante de endocarditis en cerdos de Guadalajara, Jalisco, así como la necesidad de determinar su presencia en granjas porcícolas del país para conocer su importancia epidemiológica.