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Abordagens para o teste genético pré-implantacional não-invasivo para aneuploidias (non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies, niPGT-A, em inglês) com o objetivo de avaliar o DNA embrionário livre são promissoras, especialmente porque estas podem reverter as menores taxas de implantação causadas por inadequada biópsia de trofectoderma (TE). Nesse contexto, nosso centro é parte do maior estudo atual que avalia as taxas de concordância entre PGT-A convencional e niPGT-A, e relatamos aqui o nascimento do primeiro bebê brasileiro após niPGT-A. Os pais do bebê foram admitidos no nosso centro em 2018. Eles não apresentavam histórico de infertilidade, e estavam interessados em utilizar os tratamentos de fertilização in vitro (FIV) e PGT-A para evitar anomalias congênitas na progênie. Um total de 11 blastocistos expandidos (3 do dia-5 e 8 do dia-6) foram submetidos a biópsia, e os meios de cultivo condicionados (cultivo do dia-4 ao dia-6) de 8 blastocistos do dia-6 foram coletados para niPGT-A. No total, resultados informativos para as amostras de TE e dos meios foram obtidos para sete embriões. Entre os embriões com resultado informativo, 5 apresentaram diagnóstico concordante entre PGT-A convencional e niPGT-A, e 2 apresentaram diagnóstico discordante (1 falso positivo e 1 falso negativo). O Blastocisto 4, diagnosticado como 46, XY por ambos niPGT-A e PGT-A convencional, foi desvitrificado e transferido, o que resultou no nascimento de um menino saudável, que pesava 3,8 kg, em fevereiro de 2020. Com base em nossos resultados e literatura contemporânea, acreditamos que a aplicação atual mais segura do niPGT-A seria como método de seleção embrionária para pacientes sem indicação ao PGT-A convencional. A confiabilidade aproximada de 80% do niPGT-A para determinação da ploidia ainda é superior àquela obtida com abordagens não invasivas, como seleção morfológica ou morfocinética. Non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies (niPGT-A) aiming to assess cell-free embryonic DNA in spent culture media is promising, especially because it might overcome the diminished rates of implantation caused by the inadequate performance of trophectoderm (TE) biopsy. Our center is part of the largest study to date assessing the concordance between conventional PGT-A and niPGT-A, and we report here the delivery of the first baby born in Brazil using niPGT-A. The parents of the baby were admitted to our center in 2018. hey did not present history of infertility, and they were interested in using in vitro fertilization (IVF) and PGT-A in order to avoid congenital anomalies in the offspring. A total of 11 (3 day-5 and 8 day-6) expanded blastocysts were biopsied, and the spent culture media (culture from day-4 to day-6) from 8 day-6 blastocysts were collected for niPGT-A. Overall, 7 embryos yielded informative results for trophectoderm (TE) and media samples. Among the embryos with informative results, 5 presented concordant diagnosis between conventional PGT-A and niPGT-A, and 2 presented discordant diagnosis (1 false-positive and one false-negative). The Blastocyst 4, diagnosed as 46, XY by both niPGT-A and conventional PGT-A, was warmed up and transferred, resulting in the birth of a healthy 3.8 kg boy in February 2020. Based on our results and the recent literature, we believe that the safest current application of niPGT-A would be as a method of embryo selection for patients without an indication for conventional PGT-A. The approximate 80% of reliability of niPGT-A in the diagnosis of ploidy is superior to predictions provided by other non-invasive approaches like morphology and morphokinetics selection.

The increase of the world population generates the need to raise the production of food of vegetal and animal origin. In Brazil, livestock farming has evolved, demonstrating the important role of the country in the production of food. In this way, researchers of this productive chain have been looking for technologies related to production and reproduction, above all, to the use of reproduction biotechnologies, seeking to increase the production of different bovine breeds. Thus, the objective of this research was to investigate the efficacy of ovarian FSH super stimulation in bovine Wagyu oocyte donor females on follicular dynamics and in vitro embryo production. Twelve Wagyu animals, aged 12 to 24 months, randomly distributed in a crossover design were used in two groups: Group 1= animals not stimulated with FSH and Group 2= animals stimulated with FSH. The follicular, oocyte and embryonic variables were evaluated. It was observed that ovarian overstimulation in Wagyu oocyte donor cows with FSH improved the mean and large follicles but reduced the rate of oocyte recovery and, despite the best percentage of viable oocytes, there was no improvement in the amount of embryos produced in vitro. El aumento de la población mundial crea la necesidad de incrementar la producción de alimentos de origen vegetal y animal. En Brasil, la ganadería ha evolucionado, lo que demuestra el importante papel del país en la producción de alimentos. Así, los investigadores de esta cadena productiva han estado buscando tecnologías relacionadas con la producción y la reproducción, sobre todo, el uso de biotecnologías de reproducción, buscando incrementar la producción de diferentes razas bovinas. Por lo tanto, el objetivo de esta investigación fue investigar la eficacia de la superestimulación de la FSH en hembras bovinas donantes de ovocitos Wagyu sobre la dinámica folicular y la producción de embriones in vitro. Se utilizaron doce animales Wagyu, de edades comprendidas entre 12 y 24 meses, distribuidos aleatoriamente en un diseño cruzado en dos grupos: Grupo 1 = animales no estimulados con FSH y Grupo 2 = animales estimulados con FSH. Se evaluaron variables foliculares, ovocitarias y embrionarias. Se observó que la superestimulación ovárica con FSH en vacas Wagyu donantes de ovocitos aumentó el número de folículos medianos y grandes, pero redujo la tasa de recuperación de ovocitos y, a pesar del mejor porcentaje de ovocitos viables, no hubo mejoría en el número de embriones producidos in vitro. O aumento da população mundial gera a necessidade de elevar a produção de alimentos de origem vegetal e animal. No Brasil, a pecuária tem evoluído, demonstrando o importante papel do país na produção de alimentos. Dessa forma, pesquisadores dessa cadeia produtiva têm buscado tecnologias relacionadas à produção e reprodução, sobretudo, ao uso de biotecnologias de reprodução, buscando aumentar a produção de diferentes raças bovinas. Assim, o objetivo desta pesquisa foi investigar a eficácia da superestimulação com FSH em fêmeas bovinas doadoras de ovócitos da raça Wagyu sobre a dinâmica folicular e a produção de embriões in vitro. Doze animais Wagyu, com idades entre 12 e 24 meses, distribuídos aleatoriamente em delineamento crossover foram utilizados em dois grupos: Grupo 1= animais não estimulados com FSH e Grupo 2= animais estimulados com FSH. Foram avaliadas as variáveis foliculares, oocitárias e embrionárias. Observou-se que a superestimulação ovariana com FSH em vacas Wagyu doadoras de oócitos aumentou o número de folículos médios e grandes, mas reduziu a taxa de recuperação de oócitos e, apesar da melhor porcentagem de oócitos viáveis, não houve melhora na quantidade de embriões produzidos in vitro.

Durante el estrés hipotérmico los espermatozoides de cuy conservan sus patrones de capacitación espermática, hiperactivación, reacción del acrosoma y fecundación in vitro El piruvato, componente del medio de cultivo San Marcos (SM), sería la fuente energética preferencial para mantener la supervivencia espermática en estrés hipotérmico prolongado, a lo mejor, regulando el metabolismo oxidativo en el espermatozoide. De la misma manera se constituiría en el sustrato ideal de la piruvato deshidrogenasa para iniciar la capacitación e hiperactivación cuando los espermatozoides son incubados a 37°C. El imidazol provoca reacción acrosómica espontánea en los espermatozoides hiperactivos y permite que estos puedan interaccionar con ovocitos maduros, fecundarlos e iniciar el desarrollo embrionario temprano hasta blastocisto. La madurez ovocitaria se consiguió cultivando Complejos Ovocito-Cumulo (COCs) en el medio North Carolina State University 23 (NCSU-23), usado por primera vez para cuy En este trabajo se demuestra que la hipotermia prolongada a 5°C en un medio químicamente definido, SM, no afecta los procesos espermáticos fundamentales para la adquisición de la capacidad fértil del espermatozoide de cuy.

El presente trabajo de tesis consistió en evaluar el efecto del zinc (Zn) durante la maduración de los ovocitos de bovino sobre la capacidad de desarrollo embrionario posterior. Para tal fin, se han establecido los siguientes objetivos: 1) estudiar el efecto de distintas concentraciones de Zn sobre la maduración del ovocito bovino; 2) evaluar el efecto de distintas concentraciones de Zn durante la maduración in vitro (MIV) sobre la capacidad de desarrollo posterior hasta el estadio de blastocisto y 3) determinar el rol de las células del cúmulus como puente metabólico entre el medio externo y el ovocito. Para ello, se utilizó como modelo experimental, la técnica de Producción in vitro (PIV) de embriones bovinos que comprende tres etapas: MIV, Fertilización in vitro y Cultivo in vitro de embriones hasta el estadio de blastocisto. La PIV se realizó con ovocitos obtenidos a partir de ovarios bovinos de frigorífico. Los resultados mostraron que: 1) la suplementación con Zn no modificó la concentración intracelular de GSH/GSSG en ovocitos y células del cúmulus excepto cuando se utilizó una concentración de 0,7 μg/ml Zn, 2) disminuye la tasa de apoptosis y el daño en el ADN en dichas células y 3) aumenta la actividad SOD en los complejos ovocito-cúmulus. Además, 4) el agregado de Zn incrementó la tasa de blastocistos y 5) mejoró la calidad de los embriones. La tasa de blastocistos aumentó independientemente de la presencia de CC durante la MIV. En consecuencia, todas las evidencias obtenidas sugerirían que el Zn actuaría como un factor importante durante la maduración del ovocito bovino favoreciendo el desarrollo embrionario temprano. Estas evidencias sugerirían además, la posible existencia de transportadores de Zn en el ovocito bovino., This study evaluated the effect of zinc (Zn) during bovine oocyte maturation on preimplantational embryo development. For this purpose, we have established the following objectives: 1) Effect of different Zn concentrations on in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes; 2) Effect of different Zn concentrations during IVM of bovine oocytes on subsequent embryo development to the blastocyst stage, and 3) Role of cumulus cells (CC) as metabolic bridge between the external medium and the oocyte. For this end, bovine in vitro embryo production (IVP) was used as experimental model. The IVP technique consists of three steps: IVM, in vitro fertilization and in vitro culture of embryos until blastocyst stage. The IVP was performed using bovine oocytes obtained from slaughterhouse ovaries. The results obtained here showed that: 1) The addition of Zn to IVM medium did not affect intracellular GSH-GSSG content in oocytes and CC with the exception of 0,7 μg/ml Zn; 2) The rates of apoptosis and DNA damage, in both oocytes and CC, were reduced when Zn was added to IVM medium; 3) SOD activity was higher in cumulus-oocyte complexes matured with the addition of Zn to IVM medium; 4) the addition of Zn in IVM medium improved the blastocyst rate and embryo quality; 5) the percentage of blastocysts was enhanced regardless of the presence of CC during IVM. Consequently, all evidences obtained suggest that Zn acts as an important factor during bovine oocyte maturation promoting early embryo development. Besides, these evidences suggest that Zn transporters might exist in the oocytes., Facultad de Ciencias Veterinarias

La congelación de espermatozoides es una técnica que supuso un importante paso para el desarrollo de la reproducción asistida. Esta es una técnica habitual y fundamental en las clínicas de reproducción que ha permitido lograr mejores resultados en las técnicas de reproducción asistida. A pesar de sus ventajas, durante la congelación, el espermatozoide sufre un gran número de alteraciones que dan lugar a la pérdida de función en el espermatozoide debido principalmente a: las bajas temperaturas a las que son sometidos, la cristalización de agua intracelular y los cambios osmóticos como consecuencia de la entrada y salida de crioprotector. Debido a los daños que se han observado, se está comenzando a desarrollar otro tipo de congelación ultrarápida llamada vitrificación, en la que los efectos que produce la entrada y salida de crioprotectores y los cambios de osmolaridad se ven disminuidos. Esta vitrificación es una técnica que consiste en el uso de crioprotectores diferentes y en un descenso de temperaturas brusco. Los primeros ensayos que se llevaron a cabo no resultaron exitosos debido a la poca tolerancia que presentan los espermatozoides a las altas tasas de crioprotector de las que se partieron. Ensayos posteriores en los que se reducía la concentración de crioprotector, se eliminaba el crioprotector permeable y la vitrificación se hacía mediante la aplicación directa de la solución espermática dentro de nitrógeno permitieron obtener mejores resultados. Es por ello que nos propusimos hacer un estudio en tres fases: una primera fase donde se realizara una valoración general de la congelación lenta y buscar un conjunto de biomarcadores útiles para la evaluación del criodaño. Posteriormente una segunda fase, en la que se realizó un estudio comparativo entre la congelación lenta y la vitrificación espermática, testando los biomarcadores elegidos en fase primera. Y, por último, en la tercera fase, un ensayo comparativo dentro de un ciclo de reproducción asistida donde la mitad del ciclo fuera fecundado con espermatozoides congelados y la otra mitad con espermatozoides vitrificados. Los resultados generales obtenidos mostraron que tras la congelación de muestras nomozoospérmicas y de baja calidad hay un conjunto de biomarcadores que dependen del estado inicial de la muestra y otros que dependen de la técnica de congelación. Que además se recomienda incluir en el estudio básico de la muestra seminal la fragmentación del ADN, el daño en el citoesqueleto y en el acrosoma, ya que son indicadores del criodaño. Que la nueva técnica de vitrificación permite criopreservar mejor las muestras seminales que la técnica de congelación lenta. Y que es seguro aplicar la técnica de vitrificación dentro de los ciclos de TRA, ya que se obtienen fecundaciones, desarrollos y niños nacidos normales. Cátedra Human Fertility, Ivf Spain Foundation

In cattle, embryo development is characterized by the appearance of two distinct cell layers, the trophectoderm and the inner cell mass. The latter will undergo differentiation to form the embryonic disc consisting of the epiblast and hypoblast. The aim of this study was to ultrastructurally characterize the bovine embryo from different in vitro production techniques, with emphasis on trophectoderm and inner cell mass cells. Bovine embryos on day 7 (conception = D1) of pregnancy, derived via in vitro production techniques, were fixed for light and transmission electron microscopy processing. Results suggested that embryos produced by nuclear transfer of somatic cells and parthenogenesis showed significant changes in macroscopic and microscopic structure. Size was reduced, and the inner cell mass had no defined shape. Furthermore, organelles responsible for the absorption processes, communication, growth, and cellular metabolism were fewer and had changes in shape, when compared to results in embryos produced by in vitrofertilization. We concluded that embryos produced by parthenogenesis and SCNT exhibit morphological differences when compared with IVF embryos, such as undeveloped blastocoel, poorly defined distribution of ICM, and morphological differences in organelles. RESUMO Em bovinos, o desenvolvimento embrionário é caracterizado pelo surgimento de duas camadas distintas, o trofectoderma e a massa celular interna. Este último irá sofrer diferenciação para formar o disco embrionário, o qual consiste em epiblasto e hipoblasto. O objetivo deste estudo foi caracterizar ultraestruturalmente o embrião bovino proveniente de diferentes técnicas de produção in vitro, com ênfase no trofectoderma e na massa celular interna. Embriões bovinos com sete dias de gestação (fecundação = D1), derivados de técnicas de produção in vitro, foram fixados para processamento de microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Os resultados sugerem que os embriões produzidos por transferência nuclear de células somáticas e partenogênese apresentaram alterações significativas em suas estruturas macro e microscópica. O tamanho foi reduzido, e a massa celular interna não tinha uma forma definida. Além disso, organelas responsáveis por processos de absorção, comunicação, crescimento e metabolismo celular estavam em menor número e tinham alterações na forma quando comparadas aos resultados em embriões produzidos por fertilização in vitro. Conclui-se que os embriões produzidos por SCNT e partenogênese apresentam diferenças morfológicas quando comparados aos embriões de fertilização in vitro, tais como blastocele pouco desenvolvida, massa celular interna pouco definida e diferenças morfológicas nas organelas.

Objetivo: Describir los eventos morfocinéticos asociados con la formación de blastocistos e implantación, de los embriones cultivados a D5 utilizando un sistema time-lapse. Estudio observacional, retrospectivo, unicéntrico. Un total de 7,483 cigotos obtenidos de 990 pacientes en su primer ciclo de inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), de los cuales 627 ciclos fueron de donante de ovocitos y 363 ciclos fueron de ovocitos autólogos. Se transfirieron un total de 832 blastocistos.MATERIALES Y MÉTODOS: Los embriones se cultivaron en un sistema de monitorización time-lapse, y fueron transferidos en día 5 de desarrollo. La selección de los embriones a transferir se basó en el modelo multivariable desarrollado previamente y en la morfología del blastocisto.Las imágenes de los embriones se adquirieron cada 15 minutos durante 120 horas. Los momentos desde la primera división celular de los embriones hasta el estadio de 9 células (t2-t9), así como la etapa de morula (TM) y la formación de blastocisto (tB) se registraron en horas después de ICSI. Además, se definió la duración de los ciclos celulares y la sincronía del segundo y tercer ciclo celular. Como resultado, hemos monitoreado el desarrollo embrionario de un total de 3.215 blastocistos, de los cuales 832 fueron transferidos. Finalmente, se analizaron las características del desarrollo embrionario de blastocistos (fase 1) y de embriones implantados y no implantados (fase 2), validados en un conjunto de datos independientes (fase 3). La fase 4 se refiere a la exploración de nuevas variables del segundo y tercer ciclo celular.RESULTADOS: Se analizaron 17 parámetros y se encontraron algunos de ellas significativamente correlacionados con el posterior desarrollo a blastocisto e implantación. Los parámetros más predictivos para la formación de blastocistos fueron el tiempo de formación de mórula, tM (81,28-96,0 horas después de ICSI) y t8-t5 (≤ 8,78 horas) o el tiempo de transición de embriones de 5 células a embriones de 8 células con una Área Bajo la Curva (AUC) = 0,849 (intervalo de confianza [IC] del 95%, 0,835 - 0,854, fase 1). Estos parámetros fueron menos predictivos para la implantación, con un valor de AUC = 0,546(IC del 95%, 0,507-0,585). También observamos que el tiempo para la expansión del blastocisto, tEB (107,9-112,9 horas después de ICSI) y t8-t5 (≤5,67 horas después de ICSI) predice la implantación en este estadio, con un valor de AUC = 0,591 (IC del 95%, 0,552-0,630; 2). El modelo fue validado en un conjunto de datos independientes y dio un AUC de 0,596 (0,526-0,666; fase 3). Las nuevas variables del segundo ciclo celular se asociaron con la formación de blastocisto, y las del tercer ciclo celular, con implantación (fase 4). CONCLUSIÓN La inclusión de parámetros cinéticos en la evaluación embrionaria permite predecir la formación de blastocisto con una alta precisión y además clasificarlos de acuerdo a sus probabilidades de alcanzar este estadio e implantar.

ResumoIntroduçãoa biópsia embrionária tem como objetivo selecionar embriões geneticamente normais. Essa seleção ocorre por meio de testes genéticos pré‐implantacionais. Espera‐se, com isso, uma diminuição dos riscos de doenças genéticas e um aumento das taxas de implantação em fertilização in vitro.Objetivoverificar, por meio de revisão bibliográfica, qual técnica de biópsia embrionária é considerada mais apropriada para feitura de testes genéticos pré‐implantacionais.Métodopesquisa bibliográfica, na forma de revisão de publicações científicas, por meio das redes US National Library of Medicine (Pubmed), Literatura Latino‐Americana e do Caribe em Ciências da Saúde (Lilacs), Google Acadêmico e Biblioteca Virtual em Saúde (BVS).Resultados e conclusãoexistem três maneiras de efetuar a biópsia para reprodução humana assistida. A primeira consiste em retirar o primeiro e/ou o segundo corpúsculo polar estruído pelo oócito. Também se pode fazer a biópsia a partir de um blastômero do embrião em estágio de clivagem ou usar cinco a dez células do trofoectoderma de blastocisto. Normalmente as técnicas usadas para o diagnóstico são PCR, Fish, CGH array e SNP array, entre outras. Acredita‐se que a biópsia de blastocistos é a melhor técnica para manter o potencial de implantação embrionária. Essa tendência se justifica por causa da maior quantidade de material genético disponível em fase avançada de desenvolvimento embrionário. Admite‐se que nessa fase a incidência de mosaicismo seja menor em relação à biópsia de blastômeros, com consequente aumento na eficácia dos testes genéticos. Outra questão importante é que na biópsia de blastocistos as células são retiradas do trofoectoderma, enquanto que na biópsia em estágio de clivagem a remoção de um blastômero pode prejudicar o desenvolvimento embrionário.AbstractIntroductionthe embryo biopsy aims to select genetically normal embryos. This selection occurs through pre‐ implantation genetic testing. It is expected the reduction of risk of genetic disorders and increase implantation rates in IVF.Objectiveto verify, through bibliographical revision, which embryo biopsy technique is considered more suitable for pre‐implantation genetic diagnosis.Methodbibliographical research, in the form of literary review of scientific publications via networks, US National Library of Medicine (Pubmed), Latin‐American Literature and Caribbean Health Sciences (Lilacs), Google Scholar and Virtual Health Library.Results and conclusionthere are three ways to perform the biopsy on assisted human reproduction. The first one consists in removing the 1st and/or 2nd polar body (if there was fertilization). You can also perform the biopsy from the one blastomere of embryo cleavage stage or use 5‐10 trophoectoderm cells blastocyst. Usually the techniques used for diagnostic purpose are PCR, Fish, CGH array, SNP array and others. Nowadays it is believed that blastocyst biopsy is the best technique in order to maintain the embryonic implantation. This tendency is justified by the larger amount of genetic material available in an advanced stage of embryonic development. It is assumed that in this stage the incidence of mosaicism is reduced with the consequent increase in the effectiveness of genetic testing. Another important question is that the blastocyst biopsy cells are removed from the trophoectoderm while inbiopsy incleavage stage, the removal of oneblastomerecan impairembryonic development.

O desenvolvimento de protocolos eficientes para a vitrificação de embriões mamíferos ainda é um desafio para os especialistas em reprodução. Soluções crioprotetoras de baixa toxicidade, associadas a técnicas seguras de envase, são fatores fundamentais para proporcionarem uma eficiente identificação e controle sanitário das amostras. Dois experimentos foram realizados para determinar a taxa de sobrevivência de embriões Mus domesticus domesticus envasados em palhetas convencionais (0,25 mL), na presença de uma haste metálica de ouro, empregando soluções crioprotetoras descritas para a vitrificação em microvolume. No experimento 1, avaliou-se a toxicidade da solução de desidratação (SD: PBSm + 10% EG + 10% PROH + 0,5 M sacarose), expondo os embriões por diferentes tempos: 1 (T1), 3 (T2) ou 10 min (T3). A toxicidade da solução de vitrificação (SV: PBSm + 20% EG + 20% PROH) foi determinada pela exposição dos embriões durante 25, 60 ou 180 seg, previamente desidratados por 1 ou 3 min. No experimento 2, avaliou-se a utilização do macrovolume (palhetas com a haste de ouro) e microvolume (micropipetas de vidro - GMP) na vitrificação dos blastocistos expostos à SV por 25 seg, previamente desidratados por 1 ou 3 min. Os dados foram analisados pelo teste Qui-Quadrado (P < 0,05). No experimento 1, não foi observada diferença estatística entre as taxas de eclosão dos embriões desidratados: T1 = 68% (38/56), T2 = 72% (36/50), T3 = 71% (39/55) e o grupo-controle, (74% - 48/65). No entanto, houve diferença significativa (P < 0,05) na taxa de eclosão em relação ao tempo de exposição dos embriões à SV. Os embriões desidratados por 1 ou 3 min, e expostos à SV por 25 seg, proporcionaram maiores taxas de reexpansão (79% vs. 84%) e de eclosão (58% vs. 72%), em relação aos tempos de exposição de 60 e 180 seg. No experimento 2, após a vitrificação dos embriões envasados nas palhetas com a haste de ouro, a taxa de eclosão dos blastocistos previamente desidratados por 1 min foi de 16% (10/64) e de 4% (2/57) quando previamente desidratados por 3 min. Por outro lado, os embriões envasados nas GMP, e previamente desidratados por 3 min, foram os que apresentaram maior taxa de eclosão (60% - 52/86). A vitrificação de embriões utilizando soluções crioprototetoras descritas para microvolume não foi eficiente na crioproteção dos blastocistos envasados em palhetas convencionais com a haste de ouro.

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:55:51Z No. of bitstreams: 1 S0102-09352007000200003.pdf: 193567 bytes, checksum: 81ddf2ffe1a5ae22718ea166ec696062 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0102-09352007000200003.pdf: 193567 bytes, checksum: 81ddf2ffe1a5ae22718ea166ec696062 (MD5) Previous issue date: 2007-04-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T19:49:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0102-09352007000200003.pdf: 193567 bytes, checksum: 81ddf2ffe1a5ae22718ea166ec696062 (MD5) S0102-09352007000200003.pdf.txt: 28697 bytes, checksum: f8e1b545f95865c214b83a8d700ff61d (MD5) Previous issue date: 2007-04-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T15:13:01Z No. of bitstreams: 2 S0102-09352007000200003.pdf: 193567 bytes, checksum: 81ddf2ffe1a5ae22718ea166ec696062 (MD5) S0102-09352007000200003.pdf.txt: 28697 bytes, checksum: f8e1b545f95865c214b83a8d700ff61d (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T15:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0102-09352007000200003.pdf: 193567 bytes, checksum: 81ddf2ffe1a5ae22718ea166ec696062 (MD5) S0102-09352007000200003.pdf.txt: 28697 bytes, checksum: f8e1b545f95865c214b83a8d700ff61d (MD5) Previous issue date: 2007-04-01 Avaliou-se o efeito do diâmetro e da fase do desenvolvimento folicular sobre a competência de oócitos para a produção in vitro de embriões bovinos. A primeira onda folicular foi sincronizada com progestógeno por nove dias e 24 horas após a sua retirada aplicou-se LH. Os ovários foram recuperados 60h (G-60), 96h (G-96) e 108h (G-108) após a ovulação induzida pelo LH. Os folículos foram dissecados ou aspirados e medidos e os oócitos recuperados e submetidos à maturação, fecundação e cultivo in vitro. Os ovários do G-60 apresentaram mais oócitos viáveis (graus I, II e III) (96,6%). A taxa de clivagem teve efeito significativo sobre o diâmetro folicular, sendo maior nos oócitos oriundos de folículos classe 3 (>7mm). Na taxa de produção de blastocisto observou-se interação diâmetro versus fase de desenvolvimento folicular. A taxa de produção de blastocisto foi maior em oócitos obtidos de folículos com diâmetros 7mm (classe 3) no G-108 (50%). Conclui-se que o diâmetro e a fase de desenvolvimento folicular influenciam a competência oocitária para o desenvolvimento in vitro. Nos estádios iniciais da onda folicular a produção de blastocisto foi maior em oócitos de folículos pequenos; com o avanço da onda, a produção de blastocistos foi maior em oócitos obtidos de folículos maiores. The effect of follicular phase and follicle diameter on in vitro production of bovine embryos was evaluated. Follicular wave was synchronized in Nelore heifers with a progestogen for nine days and LH was administered 24 hours after progestogen withdrawal. Ovaries were recovered 60h (G-60), 96 h (G-96), or 108 h (G-108) after LH treatment. Ovarian follicles were dissected or aspirated and measured before oocytes were recovered and submitted to in vitro maturation, fertilization, and culture. The G-60 ovaries presented more viable oocyte (degrees I, II and III) (96.6%). Cleavage rate was higher for oocytes from follicles 7mm in diameter (class 3). There was a follicular phase-by-follicle diameter interaction effect on blastocyst production rate. Blastocyst production rates were higher for oocytes from follicles 5mm in diameter (class 1) in the G-60 group (64.5%), from follicles 5-7mm (class 2) in the G-96 group (33.3%), and from follicles 7mm (class 3) in the G-108 group (50%). Both the phase of follicular development and the follicle diameter influenced oocyte competence and ability for development in vitro. At the initial stages of the follicular wave, blastocyst production was higher for oocytes from small follicles. However, as the follicular wave advances, blastocyst production increases for oocytes from larger follicles. UNESP FCAV Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias UNOESTE Faculdade de Medicina Veterinária UNESP FCAV

OBJETIVO: avaliar a toxicidade do tacrolimus sobre o desenvolvimento embrionário em ratas tratadas durante o período de trânsito tubário. MÉTODOS: sessenta ratas Wistar foram distribuídas em quatro grupos (15 animais cada), que receberam diferentes doses de tacrolimus por via intragástrica: (T1) 1,0 mg/kg/dia, (T2) 2,0 mg/kg/dia e (T3) 4,0 mg/kg/dia. O grupo controle (C) recebeu água destilada. As ratas foram observadas diariamente para detectar sinais clínicos de toxicidade. O tratamento foi realizado do primeiro ao quinto dia de gestação. As seguintes variáveis maternas foram analisadas: peso corporal, de ovários, fígados e rins, consumo de alimento, número de corpos lúteos, implantes, fetos vivos e mortos e índice de implantação. Os fetos e placentas foram pesados e os primeiros foram observados para detectar malformações externas. Estatística: análise de variância (ANOVA), uma via, seguida de teste de Dunnett (alfa=0,05). RESULTADOS: não ocorreram indícios clínicos de toxicidade materna, tais como perda de peso, redução do consumo de alimento ou do peso de órgãos (p>0,05). Também não houve diferença significativa no peso corporal dos fetos (C: 1,8±0,6; T1: 2,2±0,5; T2: 1,9±0,5 e T3: 2,0±0,5 g) e de placentas (C: 1,6±0,4; T1: 1,5±0,4; T2: 1,8±0,4 e T3: 1,6±0,4 g), com p>0,05. Nenhuma malformação externa foi detectada. CONCLUSÕES: a administração de tacrolimus a ratas prenhes durante o período de trânsito tubário não parece ter qualquer efeito tóxico e materno ou embrionário. PURPOSE: to evaluate the toxicity of tacrolimus on embryonic development in rats treated during the tubal transit period. METHODS: sixty Wistar rats were distributed into four groups (15 animals each), which received different doses of tacrolimus through intragastric administration: (T1) 1.0 mg/kg/day, (T2) 2.0 mg/kg/day and (T3) 4.0 mg/kg/day. The control group (C) received distilled water. The rats were observed daily to detect clinical signs of toxicity. The treatments were performed from the first to the fifth day of pregnancy. The following maternal variables were analyzed: body, ovary, liver, and kidney weights, food intake, number of corpora lutea, implants, alive and dead fetuses, and implantation rates. The fetuses and placentae were weighed and the former were observed in order to detect external malformation. Statistical analysis was performed by one way: analysis of variance (ANOVA), folowed by the Dunnet test (alpha=0.05). RESULTS: there were no signs of maternal toxicity, such as body weight loss, decrease in food intake or in organ weights (p>0.05). There was also no significant difference among weights of fetuses (C: 1.8±0.6; T1: 2.2±0.5; T2: 1.9±0.5 and T3: 2.0±0.5 g) and placentae (C: 1,6±0.4; T1: 1.5±0.4; T2: 1.8±0.4 e T3: 1.6±0.4 g), with p>0.05; no external malformation was detected in the fetuses. CONCLUSIONS: the administration of tacrolimus to pregnant rats during the tubal transit period does not seem to generate any toxic effect to mother or embryo.

O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o desenvolvimento in vitro de embriões bovinos co-cultivados em células da granulosa, do oviduto, BRL e VERO, suplementados com 5% ou 10% de Soro Fetal Bovino (SFB). Os complexos cummulus oócitos foram aspirados, maturados e fecundados in vitro. As estruturas embrionárias foram divididas em oito tratamentos: co-cultivo em TCM 199 contendo células da granulosa, do oviduto, BRL ou VERO adicionadas com 5% ou 10% de SFB. As condições de cultivo foram 38.5 ºC, 5% CO2 em ar e alta humidade por dez dias consecutivos. Os índices de clivagem, blastocisto e eclosão não diferiram (p > 0,05) no co-cultivo com células primárias (granulosa e oviduto) quando a concentração de SFB aumentou de 5 para 10%. Entretanto, no co-cultivo com células de linhagens contínuas (BRL e VERO), quando a concentração de SFB aumentou de 5% para 10%, os índices de blastocistos diminuíram significativamente (p < 0,05) de 33,6 para 16,3 % e de 40 para 16,5% nos embriões bovinos co-cultivados com células VERO e BRL, respectivamente.

The efficacy of transferred fresh embryos was evaluated. Donors were superovulated on day 10 of the estrous cycle with 8, 7, 5 e 4 mg (48 mg) or 7, 6,4 e 3 mg (40 mg) of follicle stimulating hormonepituitary (FSH-P) twice a day, during four days. Analogue prostaglandin (cloprostenol) was injected on day 12 of the cycle and inseminations with frozen semen two or three times were performed, each 12 hours. Nonsurgical recovery of the embryos was performed with "Neustad a.d. Aisch" catheter, introducing the medium into the uterine horns with syringes. The uterine horns were flushed with modified Dulbecco's phosphate buffered saline (PBS) enriched with 1% of foetal calf serum at 36 °C. After the recovery, the embryos were morphologically evaluated under a stereomicroscope at 16x and 70x magnifications. The embryos transfers were surgically conducted through flank incision and pregnancy diagnosis made through rectal palpation on day 45-60after transfer. Two hundred twenty one embryos from Holstein cows and thirty seven from Simmental were transferred to two hundred fifty eight cross bred heifers. Pregnancy rates for fresh embryo transfer from Holstein and Simmental cows were 73.3% and 83.3%the values were not statistically different.

Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-27T11:26:18Z No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-05-27T14:42:03Z : No. of bitstreams: 1 2-s2.0-84555178424.pdf: 115930 bytes, checksum: 9316302c305a71fa7a992df48b33dada (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-27T11:26:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-01 To better understand the differences related to HS resistance between Bos indicus and Bos taurus, we aim to verify if the HS tolerance is due mostly to the genetic contribution from the oocyte, spermatozoa or both. Oocytes from Nelore and crossbreed Holstein cows (cHST) were collected, matured and fertilized with semen from Nelore (N), Angus (An), Brahman (Bra) and Gir (Gir) bulls. Nine six hours post insemination (hpi), ≥ 16 cells embryos were separated in two groups: control and HS. In control group, embryos were cultured at 39°C, whereas in the HS group, embryos were subjected to 41°C for 12 h, and then returned to 39°C. There was no effect of HS on blastocyst and hatched blastocyst rates in all breeds analyzed. The percentage of oocytes that cleaved and reached morula stage was significantly lower (p < 0.05) in cHST x Gir as compared to the other breeds. Additionally, blastocyst rates was higher in cHST x N than in cHST x An and cHST x Gir (p < 0.05). It was concluded that the oocyte is more important than the spermatozoa for the development of thermotolerance, since the breed of the bull did not influence embryo development after HS. Departamento de Farmacologia do Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP Departamento de Bioestatistica do Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP Departamento de Farmacologia do Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP Departamento de Bioestatistica do Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP