Search

Danışman: Prof. Dr. Tülay İrez - Doç. Dr. Yasemin Müşteri Oltulu, Yumurtanın ve sperm hücresinin birleşimi, spermin sadece mekaniksel süreçlerle yumurtaya sızdığı bir süreç değildir. Bu süreçte, alışılmışın dışında yakın ve özel biyokimyasal bir tepkime başrol oynamaktadır. Sperm koku reseptörleri kalsiyum kanallarında meydana gelen değişiklikler ile kemotaktik davranışın düzenlenmesinde önemli bir faktördür. Ca2+ akışı, sperm intraselüler kalsiyum konsantrasyonunda yükselişe yol açarak spermlerin daha hızlı hareket etmesini sağlar. Ayrıca, Ca2+ kanallarının doğurganlık için gerekli olduğu gösterilmiştir. Odorantlar; kemoatraktan olarak görev yaparak, insan sperminde bulunan hor17-4 koku reseptörü ile etkileşerek kemotaksise neden olmaktadır. Yapılan çalışmalarda odorant olarak kullanılan Burjonal, koku reseptörleri için güçlü bir agonist ve kemoatraktandır. Bu kemoatraktan kullanılarak spermde bulunan koku reseptörlerinin etkileşimi hakkında bize önemli bilgiler kazandırmıştır. Bazı araştırmacılar ise tavşanda ki oosit kumulus hücrelerinde bulunan progesteronun burjonal gibi kemotaksis hareketi üzerinde etkili olduğuna dair çalışmalar yapmışlardır fakat sperm odorant reseptörleri ve kalsiyum katyon kanallarının spermlerin yumurtaya ulaşabilmesi ve normal fizyolojisini gerçekleştirmesi konusunda insan çalışmaları eksik bulunmuştur. Çalışma, odorant progesteron uygulanmış kültür ortamlarında, sperm koku reseptörlerinin etkilenmesiyle birlikte kalsiyum kanallarında meydana gelen değişimi, sperm kuyruk hareketine etkisini ele alıp hiperaktivasyonun değerlendirilmesini fertil ve infertil olgularda incelenmesini içermektedir. Çalışma ‘Biruni Üniversitesi Girişimsel Olmayan Etik Kurul’una sunuldu ve 2018/13-6 sayı ve 26.02.2018 tarihli etik kurul onayı alındı. Çalışma Ocak 2019-Haziran 2019 tarihleri arasında Biruni Üniversite Hastanesi’ne spermiyogram analizi için başvuran hastalarda uygulandı. Bu çalışmada; Biruni Üniversite Hastanesi Üroloji polikliniğine başvuran hastalardan normospermi(n:28) ve oligoastenoteratospermi(n:28) WHO kriterlerine uygun standart semen analizi uygulanarak ardından swim up yöntemi ve progesteron ile sperm motilitesi ve immünfloresan yöntemi ile sperm kalsiyum kanalında meydana gelmiş değişiklikler değerlendirilmiştir. Swim-up yöntemi kullanılarak yapılan sperm ayrıştırma sonrası progesteron uygulanarak 37° C ‘de 45 dakika inkübasyon yapılmış olup inkübasyon sonrası motilite değerlendirilerek öncesi ve sonrası değerler karşılaştırılmıştır. Örnekler hastanede dondurulmuş olup sonrasında kalsiyum kanallarının incelenmesi için Catsper antikoru kullanılarak İmmünfloresan tekniği ile incelenip değerler yorumlanmıştır. Bu tez çalışmasına göre sperm hazırlama yöntemi olarak kullanılan swim-up ve odorant olarak kullanılan progesteron arasında motil sperm açısından anlamlı farklılık bulunmuş olup motilite parametreleri gözönüne alınarak progesteron uygulanmış spermlerin kalsiyum kanallarında meydana gelen değişiklik hiperaktivasyonu sağlamıştır. Elde edilen bulgular bize sperm odorant reseptörleri ve kalsiyum kanallarının infertil ve fertil olgularda karşılaştırılmasını ve açıklanamayan infertilite grubunda da bu konuda elde edilen bulgular güncel literatüre bir katkı yapması hedeflenmiştir., The combination of the egg and the sperm cell is not a process which sperm can only leak into the egg by mechanical processes. In this process, an unusual and special biochemical reaction plays a leading role. Sperm odor receptors are an important factor in the regulation of chemotactic behavior with changes in calcium channels. Ca2 + flow leads to an increase in intracellular calcium concentration and allows sperm to move faster. In addition, Ca2 + channels have been shown to be essential for fertility. Odorant; acting as a chemoattractant, it interacts with the hor17-4 odorant receptor that found in human sperm and causes chemotaxis. Burjonal used as odorant in studies, a strong agonist for odorant receptors and chemoattractants. By using this chemoattractant, we provided important information about the interaction of odor receptors in the sperm. Some researchers found that progesterone in the rabbit oocyte causes chemotaxis such as bourgeonal, however, human studies were lacking in the ability of sperm odorant receptors and calcium cation channels to reach the egg and perform normal physiology. The aim of this study is investigate the effects of sperm odor receptors on sperm tail movement and to evaluate hyperactivity in fertile and infertile cases in odorant progesterone treated culture media. The study was submitted to the Biruni University Ethics Committee and was approved in 2018/13-6 and dated 26.02.2018. The study was applied to the Biruni University Hospital between January 2019 and June 2019 in patients who applied for spermiogram analysis. In study; patients admitted to the Biruni University Hospital Urology outpatient clinic. Standard semen analysis was performed according to WHO criteria in normospermia (n:28) and oligoastenoteratospermia (n:28) groups, followed by swim up method and by adding progesterone sperm motility examined and with immunofluorescence method changes in sperm calcium channel were evulated. After sperm separation by swim-up method, progesterone was applied and incubation was carried out at 37 ° C for 45 minutes. After incubation, motility was evaluated and pre and post values were compared. The samples were frozen in the hospital and then examined by the immunofluorescence technique for the evaluation of calcium channels by using Catsper antibody and the pre-values were compared. According to this thesis, there was a significant difference in motile sperm between swim-up and progesterone which was used as a sperm preparation method. Motility parameters were taken into account and the changes in calcium channels of progesterone-treated sperms caused hyperactivation. The findings of this study have aimed to compare sperm odorant receptors and calcium channels in infertile and fertile cases and to make a contribution to the current literature in unexplained infertility group.

İnfertilite (kısırlık), çiftlerin çocuk sahibi olmak isteyip, korunmaksızın 1 yıl ve üzeri bir süre içerisinde cinsel ilişkide bulunmalarına rağmen gebeliğin oluşmadığı durumları tanımlar. Günümüzde çiftlerin %10-15'inde infertiliteye rastlandığı rapor edilmektedir. Çiftlerin %35'inde erkeğe, %35'inde ise kadına bağlı infertilite ortaya çıkmaktadır.Her iki eşe ait kısırlık sebepleri %18 olarak belirtilmekte, çiftlerde infertiliteye yol açacak belirgin bir patolojiye rastlanmadığı durumlar ise açıklanamayan infertilite olarak tanımlanmaktadır (%12).Erkek infertilitesinin nedenleri arasında sperm sayısı, hareketliliği ve sperm kalitesindeki bozukluluklar ön plandadır.İdiyopatik (açıklanamayan)infertilite stres, çevresel faktörler, genetik anomaliler, kanal tıkanıklıklarını içermektedir.Kadına bağlı infertilite nedenleri arasında anatomik bozukluklar, tuba uterinadaki obstrüksiyonlar, hormonal bozukluklar görülmektedir. Spermatozoon membran ve flagellum (kuyruk) üzerinde bulunan proteinler spermin oosit membranına tutunmasına ve ekstrasellüler matriks alanına girmesine yardımcı olmaktadır.CatSper proteininin yapısı 4 alt birimden oluşmuş heterotetramerik bir yapıya sahiptir.CatSper kanalı sperm flagellasının kamçı kısmında bulunur.CatSper katyon kanalları sperm parametrelerinden hareketliliği doğrudan etkilemekte, ayrıca akrozom reaksiyonu, hücre içi pH'sı ve kuyruk kamçı hareketini de kontrol etmektedir.CatSper sadece sperme özgü bir kanaldır ve erkek fertilitesini önemli derecede etkilemektedir. Sperm kalitesi ve sağlıklı fertilizasyon için gereklidirBu çalışma da 50 normozoospermik olgudan alınan sperm örnekleri ile standart semen analizi sonrası CatSper ekspresyon değerlerinin incelenmesi ve sperm parametreleri ile ilişkisinin incelenmesi hedeflenmiştir. Çalışmamızda CatSper ekspresi eden hücrelerin gebelik şansını arttırması yönündeki çalışmalarda yararlı olacağı düşünülmektedir.Bu nedenle parametreleri değerlendirecek ilk çalışma olması bakımından literatüre önemli katkılar sağlayacağını amaçlamaktayız.Anahtar Kelimeler: CatSper, Konsantrasyon, Sperm Infertility; describes the situations in which pregnancy does not occur although couples they want to have children and have sex in a period of 1 year or more without being protected. Nowadays, 10-15% of couples are reported to have infertility. In 35% of the couples, infertility caused by women and in 35% of the couples caused by men. In 18% of the couples infertility caused by both spouses and the cases where there is no significant pathology leading to infertility in spouses, defined as unexplained infertility (12%). Among the causes of male infertility; sperm counts, mobility and sperm quality are in the forefront. Idiopathic (unexplained) infertility includes stress, environmental factors, genetic anomalies, and duct obstruction. The causes of infertility caused by women are anatomical disorders, tubal uterine obstruction and hormonal disorders. Proteins located on the spermatozoon membrane and flagellum (tail) provides the help for sperm to adhere to the oocyte membrane and into the extracellular matrix area.The structure of the CatSper protein has a heterotetrameric structure consisting of 4 subunits. The CatSper channel is located in the bullwhip of the sperm flagellate. CatSper is a semen-specific duct and has a significant impact on male fertility. It is necessary for sperm quality and healthy fertilization. In this study, it was aimed to examine the CatSper expression values after standard semen analysis with sperm samples from 50 normozoospermic cases and to examine the relationship between sperm parameters. In our study, it is thought that CatSper expressed cells will be useful in studies to increase the chances of pregnancy. Therefore, we aim to make significant contributions to the literature in terms of being the first study to evaluate the parameters.Keywords: CatSper, Concentration, Sperm 65

Danışman: Prof. Dr. Tülay İrez, İnfertilite (kısırlık), çiftlerin çocuk sahibi olmak isteyip, korunmaksızın 1 yıl ve üzeri bir süre içerisinde cinsel ilişkide bulunmalarına rağmen gebeliğin oluşmadığı durumları tanımlar. Günümüzde çiftlerin %10-15’inde infertiliteye rastlandığı rapor edilmektedir. Çiftlerin %35’inde erkeğe, %35’inde ise kadına bağlı infertilite ortaya çıkmaktadır.Her iki eşe ait kısırlık sebepleri %18 olarak belirtilmekte, çiftlerde infertiliteye yol açacak belirgin bir patolojiye rastlanmadığı durumlar ise açıklanamayan infertilite olarak tanımlanmaktadır (%12).Erkek infertilitesinin nedenleri arasında sperm sayısı, hareketliliği ve sperm kalitesindeki bozukluluklar ön plandadır.İdiyopatik (açıklanamayan)infertilite stres, çevresel faktörler, genetik anomaliler, kanal tıkanıklıklarını içermektedir.Kadına bağlı infertilite nedenleri arasında anatomik bozukluklar, tuba uterinadaki obstrüksiyonlar, hormonal bozukluklar görülmektedir. Spermatozoon membran ve flagellum (kuyruk) üzerinde bulunan proteinler spermin oosit membranına tutunmasına ve ekstrasellüler matriks alanına girmesine yardımcı olmaktadır. CatSper proteininin yapısı 4 alt birimden oluşmuş heterotetramerik bir yapıya sahiptir.CatSper kanalı sperm flagellasının kamçı kısmında bulunur.CatSper katyon kanalları sperm parametrelerinden hareketliliği doğrudan etkilemekte, ayrıca akrozom reaksiyonu, hücre içi pH’sı ve kuyruk kamçı hareketini de kontrol etmektedir.CatSper sadece sperme özgü bir kanaldır ve erkek fertilitesini önemli derecede etkilemektedir. Sperm kalitesi ve sağlıklı fertilizasyon için gereklidir Bu çalışma da 50 normozoospermik olgudan alınan sperm örnekleri ile standart semen analizi sonrası CatSper ekspresyon değerlerinin incelenmesi ve sperm parametreleri ile ilişkisinin incelenmesi hedeflenmiştir. Çalışmamızda CatSper ekspresi eden hücrelerin gebelik şansını arttırması yönündeki çalışmalarda yararlı olacağı düşünülmektedir.Bu nedenle parametreleri değerlendirecek ilk çalışma olması bakımından literatüre önemli katkılar sağlayacağını amaçlamaktayız., Infertility; describes the situations in which pregnancy does not occur although couples they want to have children and have sex in a period of 1 year or more without being protected. Nowadays, 10-15% of couples are reported to have infertility. In 35% of the couples, infertility caused by women and in 35% of the couples caused by men. In 18% of the couples infertility caused by both spouses and the cases where there is no significant pathology leading to infertility in spouses, defined as unexplained infertility (12%). Among the causes of male infertility; sperm counts, mobility and sperm quality are in the forefront. Idiopathic (unexplained) infertility includes stress, environmental factors, genetic anomalies, and duct obstruction. The causes of infertility caused by women are anatomical disorders, tubal uterine obstruction and hormonal disorders. Proteins located on the spermatozoon membrane and flagellum (tail) provides the help for sperm to adhere to the oocyte membrane and into the extracellular matrix area. The structure of the CatSper protein has a heterotetrameric structure consisting of 4 subunits. The CatSper channel is located in the bullwhip of the sperm flagellate. CatSper is a semen-specific duct and has a significant impact on male fertility. It is necessary for sperm quality and healthy fertilization. In this study, it was aimed to examine the CatSper expression values after standard semen analysis with sperm samples from 50 normozoospermic cases and to examine the relationship between sperm parameters. In our study, it is thought that CatSper expressed cells will be useful in studies to increase the chances of pregnancy. Therefore, we aim to make significant contributions to the literature in terms of being the first study to evaluate the parameters.

İnfertilite(kısırlık) toplumun %15'ini etkileyen bir durumdur. Çiftlerin yaklaşık %15'i infertilite tanısı ile tedavi olmaktadır.Bu çiftlerde erkek infertilitesi oranı %50'leri bulmaktadır.Erkek infertilitesinde idiopatik sebepler haricinde üzerinde durulan konu sperm yüzey proteinleridir.Spermatozoon membranı oositi çevreleyen membrana yapışma özelliğinin yanısıra, spermin genetik materyali ile membran yapısı arasında belirli bir ilişkinin bulunması açısından da önemlidir. Eğer genetik materyaldeki hatalar spermatozoon morfolojisindeki bozulma ile açıklanabilirse, bilinmeyen erkek infertilite sorunlarının da açıklanabilir duruma gelebileceği düşünülmektedir. Spermatozoon membran ve flagellum (kuyruk) üzerinde bulunan proteinler spermin oosit membranına tutunmasına ve ekstrasellüler matriks alanına girmesine yardımcı olmaktadırlar.Fertilin,disintegrin protein ailesi içinde yer alan,spermatozoon yüzeyinde bulunan, heterodimerik bir proteindir. Tetraspain protein ailesi üyesi olan CD9 ile birlikte, spermatozoon-oosit plazma membranlarının füzyonuna katılmaktadır. Catsper, heterotetramerik 4 ayrı por formlu α altünitesinden oluşmuş Ca+2 kanalıdır. Sperm flagellum (kamçı) plazma zarında bulunur ve Ca iyonlarının sperm flagellar sitoplazmaya girişini sağlamada görevlidir ve hücre içi pH artışı ile tetiklenmektedir. Sox5 ise post-mayotik germ hücreleri ile round spermatidlerde yüksek seviyede bulunan, gen ekspresyonunu düzenleyen bir transkripsiyon faktörüdür. Catsper promoter bölgesi üzerinde Sox genlerinin bağlanma bölgesi bulunmaktadır ve Catsper gen ekspresyonunu kontrol eden bir konumdadır.Bu çalışmada 30 Normozoospermi ve 30 Oligoastenoteratozoospermi tanısı konmuş 60 kişi ile çalışılmıştır. Sperm motilitesi ve fonksiyonu üzerinde etkili olan fertilin, catsper ve Sox5 protein ekspresyonlarını değerlendirilmiştir. Bu bilgiler ışığında daha sonra yapacağımız çalışmalarla, tespit edilen bu proteinlere karşı antikorlar oluşturularak bu proteine bağlanmaları ve dolayısı ile proteinin aktivitesini inhibe etmeleri sonucunda erkekte doğum konrolünde (kontrasepsiyon) kullanılan bir yöntem olarak katkı sağlamayı amaçlamaktayız.Anahtar Kelimeler:Catsper, Fertilin (ADAM2), Motilite, Sperm, Sox5. Infertility is a condition that affects 15% of the population. Approximately 15% of the couples are treated with the infertility diagnosis. The rate of male infertility is 50% in couples who cannot have children. Apart from idiopathic causes, sperm surface proteins are another reason for male infertility.The proteins on spermatozoon membrane and flagellum (tail) help to attach to sperm to oocyte membrane and to enter extracellular matrix area. Specifically, spermatozoon membrane is important in terms of having a specific relationship between genetic material of spermatozoon and membrane structure, as well as adhesion properties to the membrane which surrounds oocyte. If defects in genetic material can be understood by deterioration of spermatozoon morphology, it is thought that unknown male infertility problems can be explained by studying spermatozoon membrane.Therefore, this study was conducted on 30 patients with normozoospermia and 30 patients with OAT. We evaluated expressions of Fertilin, Catsper and Sox5 proteins, which are effective on sperm motility and function.Fertilin from the disintegrin protein family is a heterodimeric protein located on surface of spermatozoon. Tetraspain is involved in fusion of spermatozoon-oocyte plasma membranes with CD9 a protein family member. Catsper is a heterotetrameric Ca+2channel composed of 4 subtypes of pore-shaped α subunits. The sperm flagellum is located in plasma membrane and is responsible for the entry of Ca ions into sperm flagellar cytoplasm and is triggered by intracellular pH increase. Sox5 is a transcription factor that regulates gene expression at high levels in post-meiotic germ cells and round spermatids. There is a binding region of the Sox genes on the Catsper promoter region and Catsper is in a position to control gene expression. Together with current and future researches, we intend to establish a method for controlling fertility in a man by binding present proteins to antibodies, and inhibiting present protein activities. Keyword: Catsper, Fertilin (ADAM2), Motility, Sperm, Sox5. 91