Search

Zearalenon (ZEA), çeşitli Fusarium türleri tarafından üretilen steroid olmayan östrojenik bir mikotoksindir. Mısır, buğday, yulaf ve soya fasülyesi gibi tahıl ürünlerini ve suları kontamine ederek insan sağlığı üzerine olumsuz etkilerde bulunur. Doktora tez çalışmasında bir endokrin bozucu olan ZEA ve metaboliti α-ZOL'ün epigenetik modifikasyonlar ve metabolik yolaklar üzerine etkisi HepG2 hücrelerinde incelenerek metabolik fonksiyon bozukluklarıyla muhtemel ilişkisi aydınlatılmaya çalışılmıştır. HepG2 hücrelerinde MTT ve NRU testlerine göre IC50 değerleri sırasıyla ZEA için 143,35 ve 60,45 µM; α-ZOL için ise 111,42 ve 35,73 µM olarak belirlendi. BrdU testi ile hücre proliferasyonunda 1-50 µM konsantrasyonlarda 24 saat ZEA maruziyeti sonrasında %7,2-41,71 oranında; 24 saat α-ZOL maruziyeti sonrasında ise %11,78-44,33 oranında kontrole kıyasla anlamlı artış tespit edildi. ROS oluşumunda 50 µM ZEA ve 50 µM α-ZOL maruziyeti sonucunda %48,1 ve %49,6 oranında kontrole kıyasla anlamlı artış gözlendi. Global DNA metilasyonu seviyelerinde 10 ve 50 µM ZEA maruziyeti 1,46 ve 2,54 kat; 1-50 µM konsantrasyonlarda α-ZOL maruziyeti ise 1,53-1,58 kat anlamlı artışa neden oldu. 1-50 µM konsantrasyonlarda ZEA ve α-ZOL maruziyeti PPARɣ ekspresyonu ve promotör DNA metilasyon seviyelerinde anlamlı düzeylerde değişikliklere neden olmuştur. Aynı zamanda, 1-50 µM konsantrasyonlarda ZEA ve α-ZOL maruziyetinin nükleer reseptör genleri (AhR, LXRα, PPARα, PPARγ), karbonhidrat ve lipit metabolizmasında rol oynayan genler (L-fabp, LDLR, GAPDH, Glut2, Igf-1, Akt1, HK2) ve oksidatif hasar ile ilişkili genlerin (HO1, Hsp70, Nrf2) ekspresyon seviyelerini önemli derecede değiştirdiği gösterildi. Ayrıca, 1-50 µM konsantrasyonlarda ZEA ve α-ZOL maruziyetinin western blot tekniği ile global histon modifikasyonları (H3K27me, H3K9me3, H3K9ac) üzerinde anlamlı değişikliklere neden olduğu görüldü. Tez çalışmasından elde edilen sonuçların, endokrin bozucu kimyasalların toksisitesinde ortaya çıkan anahtar moleküler mekanizmaların daha iyi anlaşılmasına katkı sağlaması beklenmektedir.Anahtar Kelimeler: Zearalenon; α-zearalenol; epigenetik mekanizmalar; nükleerreseptör genleri; karbonhidrat ve lipit metabolizması; oksidatif hasar. Zearalenone (ZEA), produced by various Fusarium species, is a non-steroidal estrogenic mycotoxin. It contaminates cereals such as corn, wheat, oat and soybean and water, therefore it has negative effects on human health. In doctorate thesis, the effects of ZEA and its metabolite α-ZOL on epigenetic modifications and metabolic pathways have been investigated in HepG2 cells in order to elucidate the possible relationship between metabolic dysfunctions. According to the MTT and NRU tests, the IC50 values were determined as 143.35 and 60.45 for ZEA and 111.42 and 35.73 µM for α-ZOL, respectively. At the concentrations of 1-50 µM of ZEA and α-ZOL exposures for 24 h were significantly increased cell proliferation by BrdU assay in the rates of 7.2-41.71% for ZEA, 11.78-44.33% for α-ZOL, respectively, compared to the control. 50 µM of ZEA and α-ZOL exposure significantly increased levels of ROS generation in the rates of 48.1% and 49.6%, respectively, compared to the control. ZEA caused an increase in global DNA methylation levels at 1.46 and 2.54 fold after 10 and 50 µM of ZEA exposure and at 1.53-1.58 fold after 1-50 µM α-ZOL exposure. 1-50 µM of ZEA and α-ZOL exposure caused alterations in PPARɣ expressiom and promoter DNA methylation significantly. Besides, 1-50 µM of ZEA and α-ZOL exposure showed significant alterations in the expression levels of nuclear receptor genes (AhR, LXRα, PPARα, PPARγ), carbohydrate-lipid metabolism related genes (L-fabp, LDLR, GAPDH, Glut2, Igf-1, Akt1, HK2), and oxidative stress genes (HO1, Hsp70, Nrf2). In addition, 1-50 µM of ZEA and α-ZOL exposure resulted in significant changes in global histone modifications (H3K27me, H3K9me3, H3K9ac) by western blot technique. It is expected that results from this thesis will contribute to better understanding of key molecular events in the toxicity of endocrine disrupting chemicals for risk assessment process.Key Words: Zearalenone; α-zearalenol; epigenetic mechanisms; nuclear receptor genes;carbohydrate and lipid metabolism; oxidative damage. 191

Enoksolon (18-ß Glisirretinik asit), meyan bitkisinden (Glycyrrhiza glabra L.) elde edilen pentasiklik triterpenlerden biridir. Meyan yüzyıllardır terapötik özellikleri sayesinde özellikle Asya?da geleneksel tıpta kullanılmıştır. Enoksolonun pek çok farmakolojik özelliği vardır. Antiinflamatuvar, antitumoral, antihepatotoksik aktivite gösterir. Kozmetiklerde akne preparatlarında, güneş sonrası losyonlarında, leke giderici ürünlerde ve selülit kremlerinde diğer maddeler ile kombine halde piyasaya sürülmektedir. Bu çalışmada, yaraların iyileştirilmesinde kullanılmak üzere farklı taşıyıcılar içinde enoksolonun topikal preparatları (jel, yağlı krem ve Y/S emülsiyon) hazırlanmıştır. Bu amaçla, öncelikle enoksolonun fizikokimyasal özellikleri tayin edilerek, miktar tayini yöntemi belirlenmiş ve çözünme ortamındaki çözünürlüğü tayin edilmiştir. Hazırlanan topikal preparatlar 12 ay süresince oda sıcaklığı, 4oC ve 40oC?de karanlıkta bekletilerek fiziksel kararlılık çalışmasına tabi tutulmuştur. Yapılan in vitro salım çalışmaları ile formülasyonların enoksolonu salım özellikleri araştırılmıştır. Sonuç olarak, penetrasyon arttırıcılardan oleik asit (OA), limonen (L) ve izopropil miristatın (IPM) ksantan jeli ile geçimsiz olduğu ve beraber kullanılamayacağı sonucuna varılmıştır. Aynı durumun yağlı krem için, L ve IPM ile söz konusu olduğu görülmüştür. PG?ün ise jel formülasyonunun salım hızını azalttığı dikkat çekmiştir. PG ve OA?in ise, yağlı kremin enoksolonun salım hızını arttırdığı tespit edilmiştir. IPM?ın Y/S emülsiyonu içindeki konsantrasyonu arttıkça salım özelliklerini düzelttiği, PG, OA ve L?in yine salım hızında artışa neden olduğu görülmüştür. Enoxolone (18-ß Glycyrrhetinic acid) is one of the pentacyclic triterpenes which is obtained from licorice (Glycyrrhiza glabra L.). Licorice has been used for traditional medicine particularly in Asia for centuries. Enoxolone has a lot of pharmacological properties. It displays antiinflammatory, antitumoral and antihepatotoxic activities. It is available in acne preparations, after-sun lotions, skin whitenning products and cellulite creams in the commerce.In this study, topical preparations of enoxolone in different vehicles (gel, oleageneous cream and O/W emulsion) were formulated to be used for wound healing. For this purpose, physico-chemical properties of enoxolone were determined, its analytical quantification method was defined and its solubility in the release medium was assayed. Physical stability study was employed storing topical preparations at the room temperature, 4oC ve 40oC in the dark for 12 months. Release properties of formulations were investigated with in vitro release studies. As a result, oleic acid (OA), limonene (L) and isopropyl myristate (IPM) as penetration enhancers were found incompatible with the gel of xanthan gum and that they could not be used together. It was seen that the same situation is available with L and PM in the case of oleageneous cream. PG was seen that it increased release rate of gel formulation. In the case of oleageneous cream, PG and OA were detected to increase release rate of enoxolone. It was found that increase in the rate of IPM in O/W emulsion was improved release properties of the formulation when PG, OA and L caused increase in the release rate. 112