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Digital, Según su origen los aceites usados pueden clasificarse en dos grandes fuentes: aceites industriales de desecho y aceites de origen vegetal o animal. Los agentes vegetales son oriundos de plantas y procesados por la industria oleaginosa para su consumo doméstico o industrial, estos luego de ser usados se convierten en aceite de desecho. El tratamiento biológico de efluentes grasos ha cobrado tanta importancia que se ha hecho imprescindible en los planes de tratamientos; sin embargo, requiere de la búsqueda de microorganismos con potencial lipolítico para el tratamiento. Las lipasas forman parte de una de las familias de enzimas más utilizadas en la industria por su gran versatilidad. Estas enzimas hidrolizan triglicéridos en condiciones acuosas, pero también pueden participar en reacciones de esterificación y transesterificación en presencia de solventes orgánicos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad de lipólisis de Geotrichum candidum y Yarrowia lipolytica en aceites de origen vegetal y efluentes grasos de origen animal. Se realizó un estudio de tipo experimental, las variables (concentración, tiempo, sustrato e hidrólisis) y los resultados se analizaron por medio de los programas estadísticos MATLAB y Excel 2016. Se obtuvo el extracto enzimático crudo (EEC) Mediante la fermentación en medio líquido. Se realizó la evaluación cualitativa de la capacidad de hidrólisis de G. candidum y Y. lipolytica mediante el método de ensayo en placa para la hidrólisis de la actividad lipasa. La determinación de la velocidad de degradación mediante la técnica de extracción soxhlet. Los porcentajes de degradación donde para efluente graso fueron de un 7.88% por parte de Y. lipolytica y 0.17% para G. candidum y en el aceite vegetal se obtuvo 1.93% y 0.09%, respectivamente. Deduciendo de esto que la mayor degradación se presentó en el efluente graso de origen animal por parte de ambos microorganismos., Depending on their origin, used oils can be classified into two main soucers: industrial waste oils and of vegetable or animal origin. The plant agents are native to plants and processed by the oil industry for domestic or industrial consumption, these after being used become waste oil. The biological treatment of fatty effluents has become so important that it has become essential in treatments plans; however, it requires the search for microorganims with lipolytic potential for treatment. Lipases are part of one of the most used enzyme families in the industry for their great versatility. These enzymes hydrolyze tryglicerides under aqueous conditions, but they can also participate in esterification and transesterification reaction in the presence of organic solvents. The objective of this work was to evaluate the activity of lipolysis of Geotrichum candidum and Yarrowia lipolytica in oils of vegetable origin and fatty effluents of animal origin. An experimental study was carried out, the variables (Concentration, time, substrate and hydrolysis) and the results were analyzed through the statistical programs MATLAB and Excel 2016. The crude enzyme extract (CEE) was obtained by fermentation in liquid medium. The qualitative evaluation of the hydrolysis capacity of G. candidum and Y. Lipolytica was carried out by the plaque test method for the hydrolysis o flipase activity. The determination of degradation rate by means of the soxhlet extraction technique. The degradation percentages where for fatty effluents were 7.88% by Y. lipolytica and 0.17% for G. candidum and in vegetable oil it was obtained 1.93% and 0.09%, respectively. Deducing from this that the greatest degradation occurred in the fatty effluent of animal origin by both microorganisms., Pregrado, Bacteriólogo(a) y Laboratorista Clínico, 1 ed., INTRODUCCIÓN 16 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 17 1.1 DESCRIPCIÓN DEL PROBLEMA.................……………………………..18 1.1.1.FORMULACIÓN DEL PROBLEMA 18 1.2. JUSTIFICACIÓN 18 2. OBJETIVOS 20 2.1. OBJETIVO GENERAL 20 2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 20 3. MARCO TEÓRICO 21 3.1. ANTECEDENTES 21 3.2. BASES TEÓRICAS 22 3.2.1. Aceites y grasas 22 3.2.2. Aceite vegetal 22 3.2.3. Aceite vegetal de palma. 22 3.2.4. Grasas animales 23 3.2.5. Efluente graso. 23 3.2.6. Ácidos grasos 23 3.2.7. Hidrólisis 23 3.2.8. Microorganismos lipolíticos. 23 3.2.9 Género Geotrichum. 23 3.2.10. Género Yarrowia. 24 3.2.11. Lipasas. 24 3.2.12. Lipasas de Yarrowia lipolytica 25 3.2.13 YLLIP2 25 3.2.14.YLLIP7 y YLLIP8 25 3.2.15. Lipasas de Geotrichum candidum 25 3.2.16. Método de ensayo en placa para la hidrólisis de la actividad lipasa 25 3.2.17. Técnica de extracción Soxhlet…………………………………………..26 3.3. BASES LEGALES 27 4. HIPÓTESIS 28 4.1. Hipótesis Investigativa 28 4.2. Hipótesis Nula 28 5. MATERIALES Y MÉTODOS 29 5.1. CLASIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN 29 5.2. POBLACIÓN DE ESTUDIO Y MUESTRA 29 5.2.1. Criterios de inclusión y exclusión 29 5.3. SISTEMA DE VARIABLES 30 5.4. DISEÑO METODOLÓGICO 31 6. RESULTADOS 35 7. DISCUSIÓN 43 8. CONCLUSIONES 45 9. RECOMENDACIONES 46 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 47 ANEXOS 50

"Purification of the extracellular protease produced by Yarrowia lipolytica was realized in four steps: ammonium sulfate precipitation, anionic exchange (2X) and gel filtration. The enzyme showed molecular weight of 61.5 kDa (SDS-PAGE) and optimum activity at 52.4oC at pH 10-11. The thermal stability was modified in presence of Ca2+ (10 mM) providing an increase of 73, 6 and 11% at 40, 50 and 60oC respectively. The thermodynamic parameters (enthalpy and entropy) indicate that the stability of the enzyme is not provided by non-covalent linkages. Furthermore the ion Ca2+ is important for thermodynamic stabilization of the enzymatic structure. The proteolytic activity was inhibited by PMSF; suggesting that the enzyme can be classify in the serine protease family. The results of thermodynamic stability allow classifying the protease studied as thermostable. The importance of the Ca2+ on the thermostability was corroborated; this is the first report on thermal stability and thermodynamic properties of proteases produced by Y. lipolytica."

"Varias especies de hongos se caracterizan por exhibir un comportamiento dimórfico, manifestado como la capacidad para crecer en forma de levadura o de micelio dependiendo de las condiciones ambientales. El dimorfismo, se ha propuesto como un mecanismo de respuesta a factores externos y representa un atributo importante para el desarrollo de virulencia de varias especies patógenas. Yarrowia lipolytica es un hongo dimórfico no patógeno, el cual en los últimos años ha sido utilizado como un modelo excelente para el estudio de dimorfismo. Diversos estudios han demostrado que factores ambientales como el pH y la fuente de carbono, participan en la regulación de la transición dimórfica en este hongo. En este sentido, se realizó la construcción de una Genoteca Substractiva (SSH) de Yarrowia lipolytica durante la etapa inicial de la transición levaduramicelio in vitro (3 h), empleando el cDNA obtenido de células crecidas en un medio Glu-pH3 como control, y el cDNA de las células crecidas en GlcNAc-pH6 como condición problema. Se aislaron y secuenciaron 133 clonas, y se agruparon en 91 contigs que corresponden a 77 unigenes. En el grupo de genes seleccionados, se identificaron secuencias involucrados en biosíntesis de proteínas, producción de energía, señalización, metabolismo, entre otros. Como ejemplos podemos mencionar una deshidrogenasa, una hexoquinasa, una proteína HSP10, una ATP4 sintasa, una metiltransferasa y Rac. El analísis de RT-PCR confirmó la expresión diferencial de 19 transcritos, los cuales se expresan durante la etapa inicial de la transición levadura-micelio. La participación de algunos de estos genes ha sido reportada durante el proceso de germinación de teliosporas en el hongo fitopatógeno Ustilago maydis, sugiriendo su participación en los procesos de diferenciación celular en hongos. Adicionalmente, identificamos que algunos de los genes obtenidos en la SSH, son inducidos por el cambio de pH o de la fuente de carbono." "Several fungal species exhibit a dimorphic transition, expressed as the capacity to grow in a yeast like form or in a micelial form depending on the environmental conditions. Dimorphism, has been proposed as a response mechanism to external factors, and represents an important attribute for the development of virulence by a number of pathogenic fungal species. Yarrowia lipolytica is a dimorphic non pathogenic fungi, which has been used as an excellent model for the study of fungal dimorphism. It has been demonstrated that environmental factors such as pH of the media and carbon source are inductors of the yeast to hypha transition of Y. lipolytica. We constructed a substractive library (SSH) of Y. lipolytica during the initial stage (3 h) of the in vitro yeast to hypha transition, using the cDNA of cells grown un a media with Glu-pH3 as control, and the cDNA of cells grown in GlcNAc-pH6 as the problem condition. We isolated and sequenced 133 clones, which were grouped into 91 contigs corresponding to 77 unigenes. The isolated sequences encode genes involved in protein biosynthesis, energy production, signaling, metabolism, binned others, including a dehydrogenase, an hexoquinase, a heat shock protein HSP10, an ATP4 synthase, a methyltransferase and a Rac protein. Our analysis confirmed the differential expression of 19 of these genes during the initial stage of the yeast to hypha transition. Some of these genes have been reported to participate during teliospore germination in the pathogenic fungus Ustilago maydis, suggesting a role for these genes in processes of cellular differentiation in fungi. In addition, we observed that some of the genes isolated by SSH were induced by changes in pH or carbon source."

Tesis (Maestría en Ciencias en Biología Molecular) "Es característico de los organismos eucariotes que el DNA nuclear se encuentre asociado con histonas y otras proteínas cromosomales formando complejos nucleoprotéicos que se denominan genéricamente como “cromatina”. Se sabe que las modificaciones postraduccionales sobre las histonas, que afectan la estructura de la cromatina son importantes en la expresión diferencial de genes. Dentro de dichas modificaciones se pueden citar a la N-acetilación, la cual ocurre en los residuos de lisina de los extremos N-terminales de las histonas. La acetilación de las histonas del nucleosoma da origen a un descompactamiento de la cromatina, lo cual da acceso a toda la maquinaria transcripcional basal y por consiguiente permite la expresión de genes. Yarrowia lipolytica es un hongo dimórfico no patógeno que pertenece a la familia de los ascomicetos, que se ha utilizado tanto como modelo de estudio en la investigación básica, como microorganismo productor de proteínas recombinantes en la biotecnología moderna. En el presente estudio caracterizamos molecularmente al gen YlGcn5 que codifica a una acetiltransferasa de histonas en Yarrowia lipolytica. El gen YlGcn5 de Y.lipolytica fue aislado y clonado por González-Prieto (2003). La secuenciación de la clona reveló un marco de lectura de 1395pb que codifica una proteína de 465 aminoácidos con un peso molecular de 54.1 KDa y un punto isoeléctrico de 4.72. Durante el análisis de la secuencia de aminoácidos se identificaron los dominios que confieren la actividad de histona acetiltransferasa ya caracterizados en GCN5 de Saccharomyces cerevisiae. Además, se realizó un experimento RACE-3´(Rapid Amplication of cDNA Ends) para identificar el sitio de poliadenilación del mensajero. Se obtuvieron mutantes nulas (Δgcn5) mediante la técnica de inserción/escisión. Estas mutantes presentaron una reducción del 55% aproximadamente de su crecimiento en medio mínimo la cual fue reestablecida al adicionar al medio histidina, triptofano o treonina." "In eukaryotes, nuclear DNA is associated with proteins named histones and other non-histones proteins conforming a complex known as chromatin. Posttranslational modifications of histones affect the structure and organization chromatin, such modifications generate in differential expression of genes. The most studied modification is the acetylation, that change in lysine residues on the amino-terminal tails. The acetylation of histones alter the structure of chromatin, allowing the access to the basal transcriptional machinery facilitating the expression of genes. Yarrowia lipolytica is an ascomycete no-pathogenic fungus used model of study in basic research and also a recombinant protein-producing microorganism in the biotechnology. In the current study we have characterized the YlGcn5 gene of this fungus, which encodes an histone acetyltransferase. Aminoacid sequence analysis showed an histone acetytransferase domain, whose characterization has been done in the GCN5 protein from Saccharomyces cerevisiae. The RACE 3’ (Rapid Amplication of cDNA3 Ends) was performed in order to identify the polyadenilation site in YlGcn5 transcript. The Pop in Pop out technique, was used for partial replacement of the YlGcn5 wild type gene. Null mutants showed a growth reduction of 55% approximately in minimum medium (MM, it was reestablished at normal levels when added histidine, tryptophane and threonine in MM medium. These results suggest that the Yarrowia lipolytica YlGcn5 gene could be involved in growth and the development in this organism."