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[Resumen]: El hierro es un elemento esencial para casi todos los microorganismos, plantas y animales, debido a sus propiedades únicas. Es un metal de transición que puede presentar estados de oxidación (II) y (III), siendo esa valencia variable la que hace que tenga un papel fundamental en las reacciones de oxidación-reducción, reacciones celulares necesarias para el proceso vital. Presenta una biodisponibilidad muy baja, y debido a su importancia para los microorganismos, muchos de ellos biosintetizan unos compuestos denominados sideróforos, los cuales tienen alta afinidad por el Fe (III). Al secretarlos al medio, los sideróforos forman complejos con Fe (III) que son reconocidos por receptores de membrana del microorganismo y los introducen en las células mediante un mecanismo de transporte adecuado. El primer objetivo de este trabajo fue sintetizar la ferrioxamina como modelo de sideróforo de tipo hidroxámico, a partir de la quelatación con hierro del mesilato de deferoxamina. Una vez sintetizado, se han estudiado diferentes técnicas cromatográficas para evaluar el aislamiento de este sideróforo realizando una comparativa entre diferentes soportes. Se han empleado resinas lipofílicas del tipo XAD (XAD-2, XAD-4, XAD-7 y XAD-16), además de cartuchos cromatográficos del tipo C18 y HLB. Los estudios de recuperación se han realizado mediante espectroscopía de UV-VIS, y finalmente la comparativa de dichos porcentajes de recuperación ha permitido concluir que el uso de cartuchos cromatográficos aporta una recuperación muy baja, mientras que al emplear resinas lipofílicas XAD el porcentaje de recuperación es mucho más elevado, y por tanto más apropiado para el aislamiento de los sideróforos de tipo hidroxámico. [Abstract]: Iron is an essential element for almost all microorganisms, plants and animals, due to its unique properties. It is a transition metal that can present oxidation states (II) and (III), being this variable valence what justifies its fundamental role in oxidation-reduction reactions, a key cellular reactions necessary for the vital process. Iron has a very low bioavailability, and due to its importance for microorganisms, many of them are able to biosynthesise compounds called siderophores, which have a high affinity for Fe(III). When they are secreted into the medium, the siderophores feature complexes with Fe(III) that are recognised by microorganism membrane receptors of the microorganism and introduce them into the cells by an appropriate transport mechanism. The first goal of this work was to synthesise ferrioxamine as a model hydroxamic type siderophore, from an iron chelation of deferoxamine mesylate. Once this compound was synthesised, different techniques have been studied to evaluate the isolation of this siderophore by making a comparison between different chromatographic supports. Lipophilic resins of the XAD type (XAD-2, XAD-4, XAD-7 and XAD-16) have been used, as well C18 and HLB chromatographic cartridges. The recovery studies were carried out using the UV-VIS spectroscopy, and finally the comparison of these recovery percentages led to the conclusion that the use of chromatographic cartridges provides a very low recovery, while the use of XAD lipophilic resins gives a much higher recovery percentage, therefore it is more appropriate for the isolation of hydroxamic type siderophores. [Resumo]: O ferro é un elemento esencial para case todos os microorganismos, plantas e animais, polas súas propiedades únicas. É un metal de transición que pode presentar estados de oxidación (II) e (III), sendo esta valencia variable a que o fai desempeñar un papel fundamental nas reaccións de oxidación-redución, reaccións celulares necesarias para o proceso vital. Ten unha biodisponibilidade moi baixa, e pola súa importancia para os microorganismos, moitos deles biosintetizan compostos chamados sideróforos, que teñen unha gran afinidade polo Fe (III). Ao segretalos no medio, os sideróforos forman complexos con Fe (III) que son recoñecidos polos receptores de membrana do microorganismo e introdúceos nas células mediante un mecanismo de transporte axeitado. O primeiro obxectivo deste traballo foi sintetizar ferrioxamina como modelo de sideróforo de tipo hidroxámico, a partir da quelación de ferro do mesilato de desferrioxamina. Unha vez sintetizado, estudáronse diferentes técnicas cromatográficas para avaliar o illamento deste sideróforo, facendo unha comparación entre diferentes soportes. Utilizáronse resinas lipofílicas tipo XAD (XAD-2, XAD-4, XAD-7 e XAD-16), ademais de cartuchos cromatográficos tipo C18 e HLB. Os estudos de recuperación realizáronse mediante a técnica UV-VIS, e finalmente a comparación de ditas porcentaxes de recuperación permitiu concluír que o uso de cartuchos cromatográficos proporciona unha recuperación moi baixa, mentres que ao utilizar resinas lipofílicas XAD a porcentaxe de recuperación é moito maior, e polo tanto máis apropiado para o illamento de sideróforos de tipo hidroxámico. Traballo fin de grao (UDC.CIE). Química. Curso 2021/2022

[Resumen] Con el objetivo de diseñar una nueva familia de agentes de contraste para imagen por resonancia magnética, en este trabajo de fin de máster se ha llevado a cabo la síntesis de derivados de óxido de grafeno equipados con iones paramagnéticos de Fe+3. Concretamente, se han sintetizado dos tipos de nanomateriales basado en óxido de grafeno ultrapequeño (usGO). El primero de estos nanomateriales se preparó mediante la incubación del usGO con la sal de Fe3+. De esta forma el ión metálico se una directamente al GO mediante una interacción directa con los grupos oxigenados del usGO. En el segundo tipo, la unión del metal al usGO se logró a través de un sideróforo orgánico selectivo al ión Fe3+ (deferoxamina B). Para la síntesis de este segundo nanomaterial se llevaron a cabo dos estrategias. En la primera de ellas, el sideróforo DFO se complejó con el hierro en una primera etapa y luego el complejo fue anclado covalentemente al usGO. En la última estrategia, el usGO se trató con el sideróforo DFO para anclarlo covalentemente. A continuación, se trató el nanomaterial modificado con una sal de Fe3+ para unir el metal. Los nanomateriales sintetizados en este TFM fueron caracterizados mediante: espectroscopía UV-vis, ICP-MS, TEM, AFM, IR, Raman; TGA y potencial z. [Resumo] Co obxectivo de deseñar unha nova familia de axentes de contraste para a imaxen por resonancia magnética, neste traballo de fin de máster realizouse a síntese de derivados de óxido de grafeno equipados con ións paramagnéticos Fe3+. En concreto, sintetizáronse dous tipos de nanomateriais baseados en óxido de grafeno ultrapequeno (usGO). O primeiro destes nanomateriais preparouse incubando usGO coa sal Fe3+. Deste xeito, o ión metálico únese directamente ao GO mediante unha interacción directa cos grupos osixenados de usGO. No segundo tipo, a unión do metal a usGO conseguiuse mediante un sideróforo orgánico selectivo para o ión Fe3+ (deferoxamina B). Para a síntese deste segundo nanomaterial leváronse a cabo dúas estratexias. No primeiro, o sideróforo DFO foi complexado con ferro nunha primeira etapa e despois o complexo uniuse covalentemente a usGO. No último enfoque, usGO foi tratado co sideróforo DFO para ancoralo covalentemente. Despois, o nanomaterial modificado foi tratado cunha sal Fe3+ para unir o metal. Os nanomateriais sintetizados neste TFM caracterizáronse por espectroscopia UV-vis, ICP-MS, TEM, AFM, IR, Raman; TGA e potencial z. [Abstract] With the aim of designing a new family of contrast agents for magnetic resonance imaging, the synthesis of graphene oxide derivatives equipped with paramagnetic Fe3+ ions were carried out in this master's thesis. Specifically, two types of ultra-small graphene oxide (usGO) based nanomaterials have been synthesized. The first of these nanomaterials was prepared by incubating usGO with a Fe3+ salt. In this way, the metal ion binds directly to the GO through a direct interaction with the oxygenated groups of the usGO. In the second type, the binding of the metal to the usGO was achieved through an organic siderophore selective to the Fe3+ ion (deferoxamine B). For the synthesis of the second nanomaterial, two strategies were carried out. First, the DFO siderophore was complexed with Fe3+ in a first step and then the complex was covalently bonded to usGO. In the latter approach, usGO was treated with DFO siderophore to covalently anchor it. Then, the modified nanomaterial was treated with an Fe+3 salt to bind the metal. The nanomaterials synthesized in this TFM were characterized by: UV-vis, ICP-MS, TEM, AFM, IR, Raman, TGA and Z-potential spectroscopy. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Investigación química y química industrial. Curso 2021/2022

This literature review describes from the agronomic point of view, the problems associated with Fe accumulation in banana agroecosystems. The objective of this research was to analyze the factors involved in the accumulation of large amounts of Fe in banana plantations, through the analysis of literature published on this subject in different databases, and the information was compared with foliar and soil analysis of a banana plantation located around Milagro, Ecuador. Results show several factors influencing the accumulation of Fe, which can be transported to the foliage, for which the type of soil is a determining factor together with the cultural practices that preserve the soil microbiome, being the drivers of siderophore metabolites that retain or metabolize heavy metals such as Fe. The results of foliar and soil analysis show nutritional imbalances caused by anthropogenic factors and a high bioaccumulation of Fe in the banana crop in the studied area. In conclusion, we can presently understand better the role of Fe in the banana plantation; however, more research on this element related to anthropogenic pressure and the type of plantation soil needs to be developed. In addition, it is important to explore the biotechnological opportunities that can be offered by siderophore microorganisms present in banana agroecosystems. La presente revisión bibliográfica describe desde el punto de vista agronómico las problemáticas asociadas a la acumulación de hierro (Fe) en agroecosistemas bananeros. El objetivo de esta investigación fue analizar los factores que intervienen en la acumulación de grandes cantidades de Fe en plantaciones bananeras, a través de análisis de literatura publicados sobre este tema en distintas bases de datos, la información fue comparada con análisis foliares y suelos de una plantación bananera ubicada en la zona de Milagro, Ecuador. Los resultados muestran diversos factores que influyen en la acumulación de Fe y que el mismo puede ser transportado al follaje, para lo que el tipo de suelo es un factor determinante junto a las labores culturales que preservan el microbioma del suelo, siendo los impulsores de metabolitos sideróforos que retienen o metabolizan los metales pesados como el Fe. Los resultados de análisis foliares y de suelos muestran desequilibrios nutricionales ocasionados por factores antropogénicos y una alta bioacumulación de Fe en el cultivo de banano de la zona estudiada. En conclusión, al momento podemos comprender mejor el papel que desempeña el Fe en la plantación bananera; no obstante, se tienen que desarrollar más investigaciones de este elemento relacionado a la presión antropogénica y el tipo de suelo de la plantación. Además, es importante explorar las oportunidades biotecnológicas que pueden ofrecer los microorganismos sideróforos presentes en los agroecosistemas bananeros.

[Resumen]: Aeromonas salmonicida subsp salmonicida es una bacteria Gram negativa de interés para la industria de la acuicultura, por su papel como agente etiológico de la forunculosis. Esta enfermedad afecta a los peces y provoca una alta mortalidad, lo que se refleja en una disminución de la producción y grandes pérdidas económicas. El mecanismo por el que la bacteria patógena causa esta enfermedad está relacionado con sus sistemas de captación de hierro, concretamente con la producción y liberación del sideróforo amonabactina al medio extracelular. Los sideróforos actúan como quelantes de Fe (III), un elemento esencial para el metabolismo, y son internalizados de nuevo a través de receptores de membrana externa, como FstC, y otros presentes en la membrana interna. El objetivo de este trabajo es la producción y purificación de la proteína FstC para emplearla como componente activo en la formulación de una vacuna contra la forunculosis, mediante su encapsulación en liposomas. El desarrollo de esta vacuna permitiría luchar contra la enfermedad de forma preventiva, asegurando un mayor bienestar animal y aumentando el rendimiento del proceso de producción piscícola. [Resumo]: Aeromonas salmonicida subsp salmonicida é unha bacteria Gram negativa de interés para a industria da acuicultura, polo seu papel como axente etiolóxico da forunculose. Esta enfermidade afecta aos peixes e provoca una elevada mortalidade, o que se reflicte nunha disminución da producción e grandes perdas económicas. O mecanismo polo que a bacteria patóxena causa esta enfermidade está relacionado cos seus sistemas de captación de ferro, concretamente coa producción e liberación do sideróforo amonabactina ao medio extracelular. Os sideróforos actúan como quelantes de Fe (III), un elemento esencial para o metabolismo, e entran de novo na célula mediante receptores da membrana externa, como FstC, e outros da membrana interna. O obxectivo deste traballo é a producción e purificación da proteína FstC para empregala como componente activo na formulación dunha vacina contra a forunculose, mediante a súa encapsulación en liposomas. O desenvolvemento desta vacina permitiría loitar contra a enfermidade de forma preventiva, garantizando un maior benestar animal e aumentando o rendemento do proceso da producción piscícola. [Abstract]: Aeromonas salmonicida subsp salmonicida is a Gram negative bacterium of interest to the aquaculture industry, due to its role as an etiological agent of furunculosis. This disease affects fish and causes high mortality, which is reflected in a decrease in production and large economic losses. The mechanism by which the pathogenic bacteria cause this disease is related to their iron uptake systems, specifically with the production and release of the amonabactin siderophore to the extracellular environment. Siderophores act as chelators of Fe (III), an essential element for metabolism, and are internalized again through outer membrane receptors, such as FstC, and others inners membrane receptors. The aim of this work is the production and purification of the FstC protein, in order to use it as an active component in the formulation of a furunculosis vaccine, by means of its encapsulation in liposomes. The development of this vaccine would make possible to fight against the disease in a preventive way, ensuring greater animal welfare and increasing the performance of the fish production process. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Biotecnoloxía avanzada. Curso 2020/2021

[Resumen]: La creciente importancia adquirida por la industria acuícola se ve reflejada en el espectacular incremento de un 29% en su producción durante el período 2011-2016. Sin embargo, su notable expansión asociada con los efectos del cambio climático lleva pareja la dispersión de patógenos responsables de unas pérdidas anuales para el sector acuícola estimadas en más 6000 millones de dólares por la FAO. Uno de los patógenos más relevantes es Vibrio anguillarum responsable de la vibriosis, una septicemia hemorrágica capaz de afectar a más de 50 especies de peces y moluscos entre los que se encuentran algunos de interés piscícola a nivel mundial. Dentro de sus principales factores de virulencia encontramos a los sistemas de captación de Fe (III) mediados por sideróforos. Estos sistemas han sufrido adaptaciones desde su función ancestral de captación de hierro en condiciones de baja solubilidad en el medio externo, hacia la captación de hierro en el medio interno de los organismos, un medio en donde la disponibilidad de hierro en estado libre alcanza concentraciones attomolares. Recientemente se ha descubierto un nuevo sistema de sideróforos en V. anguillarum. Este sistema es responsable de la síntesis de la piscibactina, sideróforo caracterizado previamente en otro importante patógeno acuícola; Photobacterium damselae subespecie piscicida. El nuevo sistema se une a otros descubiertos previamente en V. anguillarum como son los de la vancrobactina y la anguibactina. La importancia de este nuevo elemento se ha hecho patente tras la secuenciación de un gran número de cepas de V. anguillarum. En este análisis se ha comprobado que el sistema de la piscibactina está presente en buena parte de las cepas con mayor mortalidad asociada (RV22, HI610, DSM 21597, 90-11-286). Esta evidencia ha sido puesta a prueba en ensayos de virulencia con la cepa RV22. En ellos se ha apuntado hacia el sistema de la piscibactina como un importante factor de virulencia, lo que supone una nueva posibilidad de cara a la generación de estrategias frente a V. anguillarum. Por todo ello, en el presente trabajo se propone el clonaje del supuesto receptor de la piscibactina, el gen frpAang, su producción en E. coli y su purificación de cara a un futuro ensayo de vacunación. [Abstract]: The growing importance acquired by the aquaculture industry is reflected in its recent production increase of 29% over the period of 2011-2016. However, its remarkable expansion in association with climate change effects drives to the dispersion of several associated pathogens responsible for annual losses to the industry estimated at 6000 million dollars according to the FAO. One of the most relevant pathogens is Vibrio anguillarum responsible for the vibriosis, an hemorrhagic septicemia capable of affecting more than 50 species of fish and molluscs among which are some of the fish interest worldwide. One of its main virulence factors are Fe (III) uptake systems mediated by siderophores. These systems have been adapted from their ancestral role of iron uptake in the environment, towards the uptake of iron in the internal environment of the hosts, where the availability of iron in a free state is found in attomolar concentrations. Recently a new siderophore system has been found out in V. anguillarum. This system is responsible for the synthesis of piscibactin, siderophore related with another important aquaculture pathogen; Photobacterium damselae subspecies piscicida. The new system is added to other systems already known in V. anguillarum such as vancrobactin and anguibactin systems. The importance of this new discovery seems to be noted after the recent sequencing of several V. Anguillarum strains. It has been observed that the system is present in much of the strains with higher associated mortality (RV22, HI610, DSM 21597, 90-11-286). This observation has been tested in virulence tests with the strain RV22. These studies point out that the piscibactin system is an important virulence factor, which implies a new possibility for the generation of new strategies against V. anguillarum. With all this knowledge about V. Anguillarum, the present Master Dissertation proposes the cloning of the putative receptor of piscibactin, the coding gene frpAang, its production and purification in E. coli for the development of a future vaccination assay. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Biotecnoloxía avanzada. Curso 2018/2019

"Las interacciones microorganismo-planta son muy importantes para las plantas ya que algunas bacterias conocidas como promotoras del crecimiento vegetal (PGPB, por sus siglas en inglés) tienen la capacidad de promover su crecimiento a través de la fijación de N2, la solubilización de fósforo, la producción de fitohormonas, compuestos orgánicos volátiles (COVs), por sideróforos, entre otros mecanismos, que pueden ocurrir tanto en la endósfera como en la rizósfera de la planta. Se ha encontrado que las PGPB son muy importantes para el establecimiento de algunas cactáceas en zonas áridas y semiáridas de México, sin embargo, aún son escasos este tipo de estudios para especies de esta familia, en específico para Opuntia. Por lo tanto, se plantearon dos objetivos: 1) aplicar ácido giberélico (GA3) y ácido indolacético (AIA) a las semillas de Opuntia streptacantha, O. leucotricha y O. robusta para probar si era posible romper su latencia fisiológica, además, se experimentó con semillas desinfectadas y no desinfectadas superficialmente para comprobar el efecto de la microbiota de la testa en su germinación; 2) aislar y caracterizar PGPB de la endósfera de semillas y rizósfera de las tres especies de Opuntia con capacidad para producir AIA, COVs y sideróforos, y probar su efecto en la germinación y el crecimiento de la planta modelo Arabidopsis thaliana L. Las fitohormonas no promovieron la germinación de las tres especies de Opuntia, pero si se observó un efecto negativo de la desinfección de las semillas en su germinación, lo que sugiere que su microbiota juega un papel muy importante en la germinación de las mismas. Se aislaron 108 cepas bacterianas de la rizósfera y 14 cepas de la endósfera de las semillas, de las cuales se identificaron siete cepas como las mayores productoras de AIA (de entre 23 y 175 μg/ mL de cultivo O.D. 0.4560nm) pertenecientes a los géneros: Micrococcus, Ensifer (Sinorhizobium), Variovorax, Endobacter (Gluconacetobacter) y Kocuria, las cuales se inocularon junto con A. thaliana L. para evaluar su crecimiento. Endobacter (Gluconacetobacter) promovió 80% más el crecimiento de la longitud total de A. thaliana comparado con el testigo, posiblemente por el efecto de COVs, y Ensifer (Sinorhizobium sp.) promovió 30% más el crecimiento de la longitud total de A. thaliana, posiblemente por el efecto del AIA, proponiéndose estas dos cepas como PGPB de A. thaliana y probablemente de Opuntia spp. En conclusión, se aislaron géneros bacterianos, anteriormente no reportados para cactáceas, con la capacidad de producir AIA, COVs y sideróforos, y se comprobó su efecto en la promoción del crecimiento de A. thaliana L." "The microorganism-plant interactions are very important for plants, some bacteria known as plant growth promoters (PGPB) have the ability to promote their growth through the fixation of N2, the phosphorus solubilization , phytohormones, volatile organic compounds (VOCs) and siderophores production, among other mechanisms, which can occur both in the endosphere and in the rhizosphere of the plant. It has been found that PGPB are very important for the establishment of some cacti in arid and semiarid zones of Mexico, however, this type of studies is still scarce for species of this family, specifically for Opuntia. Therefore, two objectives were proposed: 1) apply gibberellic acid (GA3) and indoleacetic acid (IAA) to the seeds of Opuntia streptacantha, O. leucotricha and O. robusta to test if it was possible to break their physiological latency, also, experimented with seeds disinfected and not disinfected superficially to check the effect of the microbiota of the seed coat on its germination; 2) isolate and characterize PGPB from the seed endosphere and rhizosphere of the three Opuntia species with the capacity to produce IAA, VOCs and siderophores, and test their effect on the germination and growth of the model plant Arabidopsis thaliana L. Phytohormones did not promote the germination of the three Opuntia species, but a negative effect of the disinfection of the seeds was observed in their germination, which suggests that their microbiota plays a very important role in their germination. We isolated 108 bacterial strains from the rhizosphere and 14 strains of the seed endosphere, of which seven strains were identified as the major producers of AIA (between 23 and 175 μg/ mL of culture OD 0.4560nm) belonging to the genera: Micrococcus, Ensifer (Sinorhizobium), Variovorax, Endobacter (Gluconacetobacter) and Kocuria, which were inoculated in A. thaliana L. to evaluate their growth. Endobacter (Gluconacetobacter) promoted 80% more total length growth of A. thaliana compared to the control, possibly due to the effect of VOCs, and Ensifer (Sinorhizobium sp.) promoted 30% more the growth of the total length of A. thaliana, possibly due to the effect of AIA. These two strains are proposed as PGPB of A. thaliana and probably of Opuntia spp. In conclusion, bacterial genera, previously not reported for cacti, were isolated with the ability to produce AIA, VOCs and siderophores, and their effect on the growth promotion of A. thaliana L was tested."

[Resumen:] El hierro es un micronutriente esencial para todos los organismos vivos y está implicado en reacciones enzimáticas fundamentales. Una de las estrategias más comunes para la captación de hierro para las bacterias es la producción de sideróforos. El presente Trabajo de Fin de Grado se centra en la síntesis y caracterización de intermedios sintéticos sencillos, los cuales son clave en la preparación de los sideróforos tipo amonabactina, producidos por la bacteria patógena de peces Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. Se propuso la obtención de dos análogos A y B como se puede observar en el esquema 1. [Figura 1. Estructura de las amonabactinas y de los análogos A y B sintetizados.] En la primera parte de este trabajo se estudia la obtención del los intermedios de reacción necesarios para la preparación de los análogos A y B, así como de cualquier sideróforo de tipo catecol, estos son el ácido-2,3-diisopropoxibenzoico y el ácido 2,3-bisbenciloxibenzoico. En la segunda parte se prepara el análogo A, mediante el acoplamiento de derivados protegidos del ácido-2,3-diisopropoxibenzoico y un derivado de la L-lisina. En la última parte del trabajo se obtiene el análogo B mediante el acoplamiento de derivados protegidos del ácido 2,3-bisbenciloxibenzoico y el (5-aminopentil)carbamato de ter-butilo. La caracterización de los productos sintetizados se lleva a cabo mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protón, carbono y técnicas de espectrometría de masas. [Resumo:] O ferro é un micronutriente esencial para todos os organismos vivos e está implicado en reaccións encimáticas fundamentais. Unha das estratexias máis comúns para a captación de ferro para as bacterias é a produción de sideróforos. O presente Traballo de Fin de Grao céntrase na síntese e caracterización de intermedios sintéticos sinxelos os cales son clave na preparación dos sideróforos tipo amonabactina, producidos pola bacteria patógena de peixes Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. Propúxose a obtención de dous análogos A e B como se pode observar no esquema 1. [Figura 1. Estrutura das amonabactinas e dos análogos A e B sintetizados.] Na primeira parte deste traballo estúdase a obtención do os intermedios de reacción necesarios para a preparación dos análogos A e B, así como de calquera sideróforo de tipo catecol, estes son o ácido-2,3-diisopropoxibenzoico e o ácido 2,3-bisbenciloxibenzoico. Na segunda parte prepárase o análogo A, mediante o axuste de derivados protexidos do ácido- 2,3-diisopropoxibenzoico e o un derivado da L-lisina. Na última parte do traballo obtense o análogo B mediante o axuste de derivados protexidos do ácido 2,3-bisbenciloxibenzoico e o ter-butil(5-aminopentil)carbamato. A caracterización dos produtos sintetizados leva a cabo mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protón, carbono e técnicas de espectrometría de masas. [Abstract:] Iron is a essential element for all living organisms and is involved in fundamental enzymatic reactions. One of the most common strategies for iron acquisition for bacteria is the production of siderophores. This Final Degree Work is focused in the synthesis and characterization of simple synthetic intermediates which are essential in the preparation of the siderophore amonabactin, produced by the pathogenic bacteria of fish Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. It was proposed the synthesis of two analogs A and B as it showed in the diagram 1. Traballo fin de grao (UDC.CIE). Química. Curso 2016/2017

El ácido fusárico es un metabolito producido por diversas especies de hongos fitopatógenos del género Fusarium. Existen diversos trabajos que demuestran que este compuesto es tóxico para células vegetales y de mamíferos. P. protegens Pf-5 es una bacteria conocida por sus propiedades de supresión de diversos fitopatógenos del suelo, entre ellos Fusarium spp., sin embargo existe inconsistencia en cuanto a la eficacia de biocontrol de estos fitopatógenos. Teniendo en cuenta la toxicidad del ácido fusárico en células vegetales y de mamíferos, el objetivo de este trabajo fue evaluar la toxicidad y estudiar los efectos del ácido fusárico en distintas características relacionadas con el biocontrol en P. protegens Pf-5. Los resultados obtenidos demuestran que el ácido fusárico afecta negativamente el crecimiento, pero incrementa la formación de biopelículas. Por otro lado, cuando P. protegens Pf-5 se cultivó en presencia de ácido fusárico, se observó un notable incremento en la producción del sideróforo pioverdina, asi como un aumento en la producción de biosurfactantes y en la cantidad de especies reactivas de oxígeno. Mediante titulación espectrofotométrica se pudo determinar que el ácido fusárico es capaz de quelar hierro. De acuerdo con los datos obtenidos en este trabajo, el ácido fusárico es tóxico para P. protegens Pf-5, lo cual incidiría negativamente en la eficacia de biocontrol de enfermedades de marchitamiento causadas por Fusarium spp. productores de ácido fusárico. Entre los mecanismos de toxicidad se encontrarian el secuestro de hierro y el estrés oxidativo. Fusaric acid is a metabolite produced by several phytopathogenic fungi of the genus Fusarium. Several works have demonstrated that this compound is toxic for plant and mammalian cells. P. protegens Pf-5 is very well known because of its ability to suppress several soil-borne phytopathogens, including Fusarium spp., however biocontrol efficiency is not consistent. Taking into account the toxicity of fusaric acid for plant and mammalian cells, the main aim of this work was to evaluate the toxicity and to study the effects of fusaric acid in different physiological traits related to biocontrol in P. protegens Pf-5. The results demonstrate that fusaric acid negatively affects growth, but increases bacterial biofilm formation. When P. protegens Pf-5 was grown in the presence of fusaric acid, a notable increase in the production of the siderophore pyoverdine, as well as an increment in biosurfactant production and reactive oxygen species were observed. Spectrophotometric titrations revealed that fusaric acid chelates iron. According to the data obtained in this study, fusaric acid is toxic to P. protegens Pf-5, which would negatively affect biocontrol efficiency of wilt plant diseases caused by Fusarium spp, able to produce fusaric acid. Chelation of iron and oxidative stress would be some of the mechanisms of fusaric acid toxicity in P. protegens Pf-5. Fil: Bernar, Evangelina Marisel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Ruiz, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones en Biociencias Agrícolas y Ambientales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Instituto de Investigaciones en Biociencias Agrícolas y Ambientales; Argentina

Fil: Ferreira, María Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El género Burkholderia con más de 90 especies reportadas hasta la fecha, se encuentra dividido en dos grupos mayores filogenéticamente distantes. El primer grupo se encuentra constituido por especies patógenas donde destacan los patógenos oportunistas referidos como el complejo Burkholderia cepacia (Bcc);el otro grupo está conformado por especies no patógenas con habilidades para la promoción del crecimiento vegetal y la rizoremediación. Burkholderia tropica es unabacteria con capacidad de fijar nitrógeno; aislada de la rizósfera, rizoplano, tallo y la raíz de plantas de maíz y caña de azúcar. Además de su capacidad diazotrofa, B. tropica presenta características que permiten catalogarla como una bacteria promotora del crecimiento vegetal, por su capacidad de producir sideróforos, solubilizar fosfatos, producir exo-heteropolisacáridos, además de utilizarse como biocontrol para algunos fitoparásitos, lo que la convierte en una bacteria prometedora para su aplicación en el sector agrícola.

Seed inoculation with plant growth promoting bacteria has a positive effect against seed germination and emergence; besides its application against young plants can lead to the obtaining of plants with homogeneous size, vigorous and adequate root development for their field transplant. In this sense, the effect of isolated endophytic bacteria from Solanum pimpinellifolium against the germination and growth of Medicago sativa was determined as an alternative to optimize agronomic management. Samples of S. pimpinellifolium were collected in the locality of Pedregal - Trujillo, the endophytic bacteria of roots, leaves and stem were isolated using microbiological techniques. The isolated strains were evaluated for their ability to produce AIA, siderophores, phosphate solubilization, cellulolytic activity, proteolytic activity and antagonistic activity in vitro against Fusarium oxysporum. The strains with better properties were inoculated on Medicago sativa seeds under in vitro conditions, and the germination percentage, root growth, stem growth, cotyledonal and true leaf formation were evaluated. The taxonomic identification of the strains was performed by 16S gene of the ribosomal DNA analysis. Of the twelve endophytic strains isolated, 5 produced AIA, 12 had antagonistic effect against Fusarium oxyporum, 3 solubilized phosphates, 6 produced siderophores, 3 had cellulolytic activity, and 8 had proteolytic activity. Five strains selected were inoculated separately, and induced the highest percentage of germination, root and stem growth, cotyledonal and true leaves formation in Medicago sativa "alfalfa". According to the molecular taxonomic identification strains 24 and 35 were Bacillus subtilis; the strains 21, 29 and 26 belong to the genera Yokenella, Serratia and Paenibacillus respectively. These results show that Solanum pimpinellifolium is associated with endophytic bacteria with appropriate properties to promote growth of Medicago sativa. RESUMEN La inoculación de semillas con bacterias promotoras de crecimiento vegetal incide de forma positiva en la germinación y emergencia de las semillas; además su aplicación sobre plantas jóvenes puede llevar a la obtención de plantas de tamaño homogéneo, vigorosas y con desarrollo radicular adecuado para su trasplante a campo. En tal sentido se determinó el efecto de las bacterias endofíticas aisladas de Solanum pimpinellifolium sobre la germinación y crecimiento de Medicago sativa, como una alternativa para optimizar el manejo agronómico. Se colectaron muestras de S. pimpinellifolium en la localidad de Pedregal – Trujillo, se aislaron las bacterias endofíticas de las raíces, hojas y tallo usando técnicas microbiológicas. Las cepas aisladas fueron evaluadas en la capacidad de producir AIA, sideróforos, solubilizar fosfatos, actividad celulolítica, actividad proteolítica y actividad antagónica in vitro sobre Fusarium oxysporum. Las cepas con mejores propiedades fueron inoculadas sobre semillas de Medicago sativa en condiciones in vitro y se evaluó el porcentaje de germinación, crecimiento radicular, crecimiento del tallo, formación de hojas cotiledonales y verdaderas. La identificación taxonómica de las cepas se realizó mediante el análisis del gen 16S del ADN ribosomal. De las doce cepas endofíticas aisladas, 5 produjeron AIA, 12 tuvieron efecto antagónico sobre Fusarium oxyporum, 3 solubilizaron fosfatos, 6 produjeron sideróforos, 3 presentaron actividad celulolítica, y 8 presentaron actividad proteolítica. Se seleccionaron 5 cepas que fueron inoculadas por separado, las cuales indujeron al mayor porcentaje de germinación, crecimiento de la raíz y tallo, formación de hojas cotiledonales y verdaderas en Medicago sativa “alfalfa”. De acuerdo a la identificación taxonómica molecular las cepas 24 y 35 correspoden a Bacillus subtilis; las cepas 21, 29 y 26 pertenece a los géneros Yokenella, Serratia y Paenibacillus respectivamente. Estos resultados, indican que Solanum pimpinellifolium se encuentra asociada a bacterias endofíticas con cualidades apropiadas para promover crecimiento de Medicago sativa. Tesis

El cultivo de papa representa la actividad agrícola de alta montaña más importante en Colombia con alrededor de 165.000 Ha sembradas y la generación de alrededor de 105.000 empleos directos, sin embargo, este cultivo representa una serie de problemas fitosanitarios de origen edáfico como Rhizoctonia sotaní y Spongospora subterránea, los cuales pueden generar daños de carácter simplemente cosmético alcanzando pérdidas hasta del 80%. Desafortunadamente, el agricultor no posee opciones de control efectivas contra estos agentes fitopatógenos y se ve en la necesidad de buscar alternativas de manejo Integrado de enfermedades las cuales incluyen estrategias de control biológico que mejoren la productividad favoreciendo el buen desarrollo de los cultivos. Dado el potencial de Pseudomonas como Rizobacterlas Promotoras de Crecimiento Vegetal, en el presente trabajo se llevó a cabo la caracterización fenotípica de 61 aislamientos nativos de Pseudomonas fluorescentes pertenecientes al cepario del Instituto de Biotecnología de la Universidad Nacional de Colombia. Para tal fin se estableció su actividad antagonista frente a cinco hongos fitopatógenos: Rhizocthonia sotaní AG3, Fusaríum sotaní, Phytophthora infestans, Colletotrichum acutatum y C. gioesporoides, observando antagonismo en 62.3%, 67.2%, 100%, 91.8% y 65.6% de los aislamientos respectivamente. Adicionalmente. al determinar la producción de HCN in vitro se evidenció que únicamente tres aislamientos mostraron la capacidad de producción de dicho compuesto, sin embargo al evaluar la capacidad antagonista generada por compuestos volátiles se encontró que el82% de los aislamientos presentaron inhibición del crecimiento del hongo fitopatógeno Rhizocthonia sotaní AG3. Así mismo, al comprobar la producción de sideróforos, se evidenció que el 100% de las cepas producen algún tipo de sideróforo. Los resultados encontrados permiten la selección de aislamientos con potencial biocontrolador contra patógenos del suelo en papa. Potato crops represent the most important high mountain farming activity in Colombia. There are around 165.000 Ha cultivated that approximately employs 105.000 people. However, these crops are characterized by a series of plant health problems with an Edaphic origin, such Rhizoctonia sotaní and Spongospora subterránea, which may cause simply superficial damages accounting for 80% of losses. Unfortunately, farmers do not have effective control alternatives against these plant pathogen agents, therefore, they look for integrated disease management options that include biological control strategies that will improve the productivity contributing to the crops good development. Due to the capability of Pseudomonas such as plant growth-promoting rhizobacterias, in the following document is developed a fenotypical characterization of 61 native isolated Pseudomonas fluorescent belonging to the ceparium of the Biotechnology Institute of Nacional University of Colombia. In doing so. it was established their antagonistic activity against five plant pathogen fungus: Rhizocthonia sotaní AG3, Fusarium sotaní, Phytophthora infestans, Colletotrichum acutatum and C. gloesporoides, noticing antagonism in 62.3%, 67.2%, 100%, 91.8% and 65.6% of the isolated samples respectively. Additionally, when determining the production of HCN in vitro it was observed that only three of the isolated samples showed the capacity to produce the compound previously mentioned. However, when the antagonistic capacity produced by volatile compounds was evaluated, it was found that 82% of the isolated samples presented inhibition to the developing of the plant pathogen fungi Rhizocthonia solani AG3. Similarly, when checking the production of siderophores. it was noticed that 100% of the strains created some type of siderophore. The results found allow the selection of isolated samples with enough biocontrol potential against soil pathogens in potato crops. Magíster en Ciencias Biológicas Maestría

[Resumen] El presente Trabajo de Fin de Máster se divide en dos partes diferenciadas, la determinación de la estereoquímica relativa de dos compuestos de origen marino y la aproximación a la síntesis total del producto natural anguibactina. En la primera parte de esta memoria, se resalta la importancia de la determinación de la configuración relativa, siendo el análisis configuracional basado en las constantes de acoplamiento, JCBA (J Configurational Based Analysis), conocido como el método de Murata, una de las estrategias más importantes para la determinación de la estereoquímica relativa en macrociclos que presentan gran libertad conformacional. Este método se aplicó a la resolución de la estereoquímica relativa de dos nuevos productos naturales de origen marino. La segunda parte de este TFM, está enfocada en la aproximación a la síntesis total del producto natural anguibactina, un sideróforo aislado de la bacteria patógena Vibrio anguillarum responsable de la vibriosis, una enfermedad que causa graves pérdidas económicas en peces de acuicultura en todo el mundo. Los sideróforos, pequeñas biomoléculas sintetizadas por algunos microorganismos para captar hierro del medio, constituyen una herramienta fundamental en la lucha contra dichas bacterias. En base a esto, se propone para la síntesis del sideróforo la obtención de dos intermedios clave (Fragmentos A y B) de acuerdo con lo mostrado en el Esquema 1. [Resumo] O presente Traballo de Fin de Máster divídese en dúas partes diferenciadas, a determinación da estereoquímica relativa de dous compostos de orixe mariño e a aproximación á síntese total do producto natural anguibactina. Na primeira parte desta memoria, resáltase a importancia da determinación da configuración relativa, sendo a análise configuracional basada nas constantes de acoplamento, JCBA (J Configurational Based Analysis), coñecido como o método de Murata, unha das estratexias máis importantes para a determinación da estereoquímica relativa en macrociclos que presentan gran liberdade conformacional. Este método foi aplicado á resolución da estereoquímica relativa de dous novos productos naturais de orixe mariño. A segunda parte deste TFM, enfocouse na aproximación á síntese total do producto natural anguibactina, un sideróforo illado da bacteria patóxena Vibrio anguillarum responsable da vibriosis, unha enfermidade que causa graves pérdidas económicas en peixes de acuicultura en todo o mundo. Os sideróforos, pequenas biomoléculas sintetizadas por algúns microorganismos para captar ferro do medio, constituen unha ferramenta fundamental na loita contra ditas bacterias. En base a isto, proponse para á síntese do sideróforo a obtención de dous intermedios clave (Fragmentos A e B) de acordo co mostrado no Esquema 1. [Abstract] The present work is divided in two different parts, the relative stereochemistry determination of two marine natural products and an approximation of the total synthesis of anguibactin. The first goal payed attention the importance of the relative configuration in a natural product, being the configurational analysis based on coupling constants, also known as JCBA or also Murata methodology, one of the most important strategies to find the relative stereochemistry in acyclic compounds or in systems with a lot conformational freedom. This method was applied to the resolution of the relative stereochemistry of two natural products with a macrocyclic skeleton. As a second aim of the project, we focused our studies in the synthesis of anguibactin, a siderophore produced by Vibrio anguillarum (serotype O1), a pathogen responsible of vibriosis, a disease which causes severe economic losses worldwide. Siderophores are low molecular weighted compounds, which specifically chelate ferric ions. They are used by bacteria to grow under low iron conditions. The siderophore above mentioned could be obtained from two synthetic intermediates (Fragments A and B) as is reported in Scheme 1. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Investigación química e química industrial. Curso 2015/2016

It has been demonstrated that rhizobacteria are able to produce metabolites having agricultural interest, including salicylic acid, the siderophores and phytohormones. Indol acetic acid (IAA) is the most well-known and studied auxin, playing a governing role in culture growth. The object of this work was to characterise rhizobacteria associated with the maize crop in terms of producing IAA, siderophores and salicylic acid metabolites. Burkholderia cepacia and Pseudomonas fluorescens strains previously isolated from maize Francisco variety rhizosphere were used. Colorimetric and chromatographic techniques for detecting these metabolites were studied; multi-variable analysis of hierarchic conglomerate and complete ligament were used for selecting the best strains for producing metabolites of interest. These results demonstrated that all rhizobacteria strains studied produced IAA, siderophores and salicylic acid metabolites. Burkholderia cepacia MBf21, MBp1, MBp2, MBf22, MBp3, MBf20, MBf 15 and Pseudomonas fluorescens MPp4strains have presented the greatest production of these metabolites, showing that these strains could be used in promoting vegetal growth in economically important cultures. Key words: Pseudomonas fluorescens, Burkholderia cepacia, IAA, siderophore, salicylic acid.

It has been demonstrated that rhizobacteria are able to produce metabolites having agricultural interest, including salicylic acid, the siderophores and phytohormones. Indol acetic acid (IAA) is the most well-known and studied auxin, playing a governing role in culture growth. The object of this work was to characterise rhizobacteria associated with the maize crop in terms of producing IAA, siderophores and salicylic acid metabolites. Burkholderia cepacia and Pseudomonas fluorescens strains previously isolated from maize Francisco variety rhizosphere were used. Colorimetric and chromatographic techniques for detecting these metabolites were studied; multi-variable analysis of hierarchic conglomerate and complete ligament were used for selecting the best strains for producing metabolites of interest. These results demonstrated that all rhizobacteria strains studied produced IAA, siderophores and salicylic acid metabolites. Burkholderia cepacia MBf21, MBp1, MBp2, MBf22, MBp3, MBf20, MBf 15 and Pseudomonas fluorescens MPp4strains have presented the greatest production of these metabolites, showing that these strains could be used in promoting vegetal growth in economically important cultures. Key words: Pseudomonas fluorescens, Burkholderia cepacia, IAA, siderophore, salicylic acid.Se ha demostrado que las rizobacterias tienen la capacidad de producir metabolitos de interés agrícola, entre los que se destacan el ácido salicílico, los sideróforos y las f itohormonas; dentro de estas últimas, el ácido Indol acético (AIA) es la auxina más conocida y estudiada, la cual desempeña un papel rector en el crecimiento de los cultivos. Esta investigación se realizó con el objetivo de caracterizar rizobacterias asociadas al cultivo del maíz en cuanto a la producción de AIA, sideróforos y ácido salicílico. Para ello se empleó un conjunto de cepas de Burkholderia cepacia y Pseudomonas fluorescens previamente aisladas de la rizosfera del maíz variedad Francisco mejorado. Se utiliza­ron técnicas colorimétricas y cromatográf icas para la detección de los metabolitos estudiados, y análisis multivariado de conglomerado jerárquico y ligamiento completo para la selección de las mejores cepas con respecto a la producción de los metabolitos de interés. Los resultados demostraron que la mayoría de las cepas estudiadas produce metobolitos del tipo AIA, sideróforos y ácido salicílico, desta­cándose de forma integral las cepas de Burkholderia cepacia MBf21, MBp 1, MBp2, MBf22, MBp3, MBf20, MBf 15 y Pseudomonas fluorescens MPp4, por las mayores producciones de los metabolitos en estudio, lo que evidencia que estas cepas pueden ser utilizadas en la promo­ción del crecimiento vegetal en cultivos de importancia económica. Palabras clave: Pseudomonas fluorescens, Burkholderia cepacia, AIA, sideróforos, ácido salicílico.

“La coriza infecciosa es una enfermedad de las vías respiratorias de los pollos que se caracteriza por flujo nasal y tumefacción de la cara. Esta enfermedad es provocada por Avibacterium paragallinarum y es causa de grandes pérdidas económicas. Para controlar la coriza infecciosa se han desarrollado diversas bacterinas, aunque no han logrado tener todo el éxito deseado. Además de las bacterinas, algunas vacunas a base de proteínas extracelulares han mostrado tener altas propiedades antigénicas. Entre estas, TbpB una proteína de unión a hierro, ha resultado ser muy inmunogénica. A partir de la cepa 0083 de Avpg se extrajo ADN genómico y se amplificó el gen tbpB. Los diferentes productos de amplificación de este gen, se ligaron al vector pBluescript KS(-) y se usaron para transformar a Escherichia coli DH5α. A las células transformantes se les indujo la síntesis del péptido clonado utilizando IPTG y 2,2 dipiridil. Se hizo una extracción de proteínas totales y se separaron en geles desnaturalizantes del tipo SDS-PAGE para comparar el patrón de bandas de proteínas de las clonas transformantes con el control negativo (DH5α KS(-) sin insertos).”

[Resumen] Los sideróforos, pequeñas biomoléculas sintetizadas por algunos microorganismos para captar hierro del medio, constituyen una herramienta importante en la lucha contra bacterias patógenas. El presente Trabajo de Fin de Grado está enfocado en la síntesis y caracterización de intermedios sintéticos clave en la obtención del sideróforo acinetobactina, producido por la bacteria patógena de peces Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. En base a esto, se propone para la síntesis de dicho sideróforo la obtención de dos intermedios clave (Fragmentos A y B) de acuerdo con lo mostrado en el Esquema 1. En la primera parte de esta memoria se estudia la preparación del fragmento A a partir de histamina comercial mediante halogenación y posterior sustitución nucleófila con una amina protegida. La segunda parte del trabajo se centra en la obtención del compuesto 3, precursor del fragmento B, mediante el acoplamiento de derivados protegidos del ácido 2,3- dihidroxibenzoico y el aminoácido L-treonina. La caracterización de los productos sintetizados se lleva a cabo mediante resonancia magnética de protón y carbono y espectrometría de masas ESI positiva de alta y baja resolución. [Abstract] Siderophores, small biomolecules produced for microorganism in lack of iron, are important agents against pathogenic bacteria. The work reported herein deals with the preparation of some key advanced synthetic intermediates on the synthesis of the siderophore acinetobactin, from fish pathogen Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. The siderophore above mentioned could be obtain from two synthetic intermediates (Fragments A and B) as is reported in Scheme A. The first part of this work deals with preparation of fragment A from histamine by halogenation and subsequent nucleophilic substitution with a protected amine. The second part of this work focuses on the preparation of a precursor of fragment B, compound 3, by a coupling reaction between protected derivatives of 2,3-dihydroxybenzoic acid and L-threonine. Characterization of the synthetized compounds is carry out by magnetic resonance techniques. Also products are characterized by mass spectroscopy of high and low resolution. [Resumo] Os sideróforos, pequenas biomoléculas sintetizadas por algúns microorganismos para captar ferro do medio, constitúen una importante arma na loita contra bacterias patóxenas. O presente Traballo de Fin de Grao céntrase na sínteses e caracterización de intermedios sintéticos clave na obtención do sideróforo acinetobactina, producido pola bacteria patóxena de peces Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida. En base a isto, proponse para a sínteses do citado sideróforo a obtención de dous intermedios clave (Fragmentos A e B) según o disposto no Esquema 2. Na primeira parte de esta memoria estúdase a preparación do fragmento A partindo de histamina comercial mediante haloxenación e posterior sustitución nucleófila cunha amina protexida. A segunda parte do traballo céntrase na obtención do composto 3, precursor do fragmento B, mediante o acoplamento de derivados protexidos do ácido 2,3-dihidroxibenzoico e o aminoácido L-treonina. A caracterización dos produtos sintetizados lévase a cabo mediante resonancia magnética de protón e carbono e espectrometría de masas ESI positiva de alta e baixa resolución. Traballo fin de grao (UDC.CIE). Química. Curso 2013/2014

[Resumen] El trabajo aquí presentado se centra en la obtención de intermedios sintéticos avanzados clave en la preparación del sideróforo piscibactina (1), según lo dispuesto en el esquema retrosintético A. En particular, dichos intermedios serán precursores de los fragmentos moleculares A y C. La primera parte del trabajo se centra en la síntesis de un precursor avanzado del fragmento C (R1, Esquema B), para el cual se ha aplicado una metodología análoga a la desarrollada por T. R. Burke y col., y que implica como etapa clave la utilización de la reacción tipo Reformastky mediadas por SmI2 entre el aldehído R2 y la α- cloroacetiloxazolidinona R3, proceso que permite controlar la estereoquímica de uno de los dos centros quirales que no provienen de reactivos sintéticos comerciales. Así, partiendo de L-cisteína, el precursor R1 ha sido sintetizado en 5 etapas con un rendimiento global del 15%. La segunda parte se centra en la preparación a gran escala de la amida de Weinreb R4 como precursor del fragmento A (Esquema C). El mencionado precursor se obtuvo de forma efectiva mediante reacción del correspondiente ácido con clorhidrato de N,Odimetilhidroxilamina con un 46% de rendimiento. [Abstract] The work reported herein deals with the preparation of some key advanced synthetic intermediates on the synthesis of the siderophore piscibactine (1), analysis proposed in scheme A. In particular, the above-mentioned intermediates are the synthetic precursors of the molecular fragments A and C. The first part of this work was focused on the synthesis of an advanced precursor of fragment C (R1, scheme B), obtained by a similar methodology to that developed by T. R. Burke et al, which implies a SmI2-mediated Reformastky-type reaction between aldehyde R2 and the α-chloroacetyloxazolidinone R3. This process allowed the stereochemistry control of one of the two chiral centers of fragment C. Therefore, precursor R1 has been synthetized from L-cinteíne in 5 steps with an overall yield of 15 %. The second part of this work was focused on the gram-scale synthesis of the Weinreb’s amide R4 as precursor of fragment A (Scheme C). The compound was straightforwardly obtained by reaction of the corresponding acid with N,Odimethylhydroxilamonium hydrochloride in a 46 % yield. [Resumo] O traballo aquí presentado centrase na obtención de intermedios sintéticos avanzados clave na preparación do sideróforo piscibactina (1), segundo o disposto no esquema retrosintético A. En particular, estes intermedios serán precursores dos fragmentos moleculares A e C. A primeira parte do traballo centrase na síntese dun precursor avanzado do fragmento C (R1, Esquema B), para o cal se ten aplicado unha metodoloxía análoga á desenvolta por T. R. Burke e col., e que implica como etapa chave a utilización da reacción tipo Reformastky mediada por SmI2 entre o aldehido R2 e a α- cloroacetiloxazolidinona R3, proceso que permite controlar a estereoquímica de un dos dous centros quirais que non proveñen de reactivos sintéticos comerciais. Así, partindo de L-cisteina, o precursor R1 sintetizouse en 5 etapas con un rendemento global do 15 %. A segunda parte centrase na preparación a grande escala da amina de Weinreb R4 como precursor do fragmento A (Esquema C). Este precursor obtívose de forma axeitada mediante reacción do correspondente ácido con clorhidrato de N,Odimetilhidroxilamonio con un 46 % de rendemento. Traballo fin de grao (UDC.CIE). Química. Curso 2012/2013

En México, existen algunas variedades seleccionadas de amaranto (A. hypochondriacus) para las zonas templadas como la Línea 1, Mercado, Nepal, Azteca y Mexicano, así como algunas razas criollas como la Tulyehualco y la Mixteca, que por sus características agronómicas y potencial de rendimiento son de las más importantes. El aprovechamiento del amaranto es integral por utilizarse el grano y la planta como verdura y forraje. Las variedades de amaranto Línea 1, Mercado, Nepal, Tulyehualco, Criolla Tulyehualco y Criolla Mixteca fueron caracterizadas para diferenciar a cada una de estas variedades de las demás de acuerdo a características físicas: peso de 100 semillas y patrón de imbibición; así como características fisiológicas de la semilla: cinética y velocidad de germinación (T50) y acumulación de biomasa. También se determinó cuáles de éstos son los más seguros y a la vez confiables para tal fin, en primer término y cuáles de estos criterios son los más prácticos y sencillos para determinar. Los resultados obtenidos permitieron definir que: ninguno de los criterios fue capaz de diferenciar a plenitud a cada uno de los fenotipos de los demás. La diferenciación de 5 variedades de las 6 se logró mediante el patrón de imbibición para diferenciar Nepal, Tulyehualco, Criolla Tulyehualco y Criolla Mixteca entre sí, mientras que Línea 1 y Mercado presentaron el mismo patrón. El criterio de germinación en presencia del herbicida Doblete Super, en cambio, permitió diferenciar a Mercado, Nepal Tulyehualco y Criolla Tulyehualco entre sí, pero Línea 1 y Criolla Mixteca presentaron el mismo patrón de germinación. La diferenciación de 4 variedades de las 6 se logró mediante el criterio físico peso de 100 semillas el cual permitió diferenciar a Línea 1 y Criolla Tulyehualco entre sí, en tanto que Mercado y Tulyehualco así como Nepal y Criolla Mixteca presentaron pesos similares. El criterio de germinación en presencia de ácido sulfosalicílico permitió diferenciar a Mercado, Nepal y Criolla Tulyehualco entre sí, en cambio Línea 1, Tulyehualco y Criolla Mixteca presentaron el mismo patrón de germinación. El criterio velocidad de germinación en presencia de ácido salicílico permitió diferenciar a Línea 1 y Criolla Tulyehualco entre sí, mientras que Tulyehualco y Criolla Mixteca así como Mercado y Nepal presentaron velocidades de germinación similares. El criterio de germinación en presencia de ácido sulfosalicílico permitió diferenciar a Línea 1, Mercado y Criolla Tulyehualco entre sí, mientras que Nepal, Tulyehualco y Criolla Mixteca presentaron velocidades similares. El criterio de germinación en presencia de Ca7 (carencia de hierro) permitió diferenciar a Mercado, Nepal y Criolla Tulyehualco entre sí, pero la Línea 1, Tulyehualco y Criolla Mixteca presentaron el mismo patrón de germinación. El criterio longitud de plántulas a las 72 h permitió diferenciar a Línea 1, Criolla Tulyehualco y Criolla Mixteca entre sí, pero la Mercado, Nepal y Tulyehualco presentaron longitudes similares. La diferenciación de 3 variedades de las 6 se logró mediante el criterio de germinación en presencia del herbicida Hierbamina y 2,4-D el cual permitió diferenciar a Línea 1 y Criolla Tulyehualco entre sí, mientras que Mercado, Nepal, Tulyehualco y Criolla Mixteca presentaron el mismo patrón de germinación. El criterio de germinación en presencia de ácido salicílico permitió diferenciar a Criolla Tulyehualco, mientras que Línea 1, Tulyehualco y Criolla Mixteca así como Mercado y Nepal presentaron el mismo patrón de germinación. El criterio velocidad de germinación en presencia de ácido acetilsalicílico permitió diferenciar a Línea 1 y Criolla Tulyehualco, pero no a Mercado, Nepal, Tulyehualco y Criolla Mixteca que presentaron velocidades similares. El criterio longitud de plántulas efectuada a las 96 h permitió diferenciar a Criolla Tulyehualco, en cambio Línea 1, Mercado y Tulyehualco, así como Nepal y Criolla Mixteca presentaron longitudes similares. El criterio número de panojas y peso de raíz permitió diferenciar a Nepal y Mercado entre sí, mientras que Línea 1, Tulyehualco, Criolla Tulyehualco y Criolla Mixteca presentaron número de panojas y peso de raíces similares. El criterio peso de tallo permitió diferenciar a Nepal, Mercado y Criolla Tulyehualco entre sí, mientras que Línea 1, Tulyehualco y Criolla Mixteca presentaron peso de tallo similar. El criterio relación raíz/tallo permitió diferenciar a Nepal y Criolla Mixteca, Línea 1 y Tulyehualco y Mercado y Criolla Tulyehualco entre sí. De los 54 criterios utilizados, únicamente 20 no permitieron la diferenciación de ninguna de las variedades. Finalmente, los criterios más confiables y prácticos de determinar fueron: el peso de 100 semillas, el color, la determinación de la germinación, la longitud de las plántulas y el peso de materia seca y el criterio que requiere más tiempo y mayor manipulación de la semilla, pero también confiable, fue la velocidad de germinación (T50).________In Mexico, there are varieties selected from amaranth (A. hypochondriacus L.) which grow in the temperate zone, like Line 1, Mercado, Nepal, Aztec and Mexican, as well as some landraces Creole Tulyehualco and Creole Mixtec, which by their agronomic traits and yield potential are among the most important. The use of amaranth is integral used by the grain and plant as a vegetable and fodder. The varieties of amaranth Line 1, Mercado, Nepal, Tulyehualco, Creole Tulyehualco and Creole Mixtec were marked to distinguish each of these varieties of the other according to physical characteristics: weight of 100 seeds and pattern of imbibition, as well as physiological characteristics the seed: kinetics and speed germination (T50) and biomass accumulation. It was also determined which of these are the most secure and reliable time for that purpose in the first place and what these criteria are the most practical and simple to determine. The results have defined that: none of the criteria was fully capable of differentiating each of the phenotypes of others. Differentiation of 5 varieties of 6 was achieved by the pattern of imbibition we could differentiate Nepal, Tulyehualco, Creole Tulyehualco and Creole Mixtec among themselves, while Line 1 and Mercado submitted the same pattern. The criterion for germination in the presence of the herbicide Super doublet, however, allowed to differentiate Mercado, Nepal Tulyehualco and Creole Tulyehualco among themselves, but Line 1 and Creole Mixtec presented the same pattern of germination. Differentiation of 4 varieties of 6 was achieved through the physical test weight of 100 seeds which enabled differentiate Line 1 and Creole Tulyehualco among themselves, while Mercado and Tulyehualco well as Nepal and Creole Mixtec presented similar weights. The criterion for germination in the presence of sulphosalicylic acid allowed to differentiate Mercado, Nepal and Creole Tulyehualco among themselves, while Line 1, Tulyehualco and Creole Mixtec presented the same pattern of germination. The approach speed germination in the presence of salicylic acid allowed to differentiate Line 1 and Creole Tulyehualco among themselves, while Tulyehualco and Creole Mixtec and Mercado and Nepal had similar speeds germination. The criterion for germination in the presence of sulphosalicylic acid allowed to differentiate Line 1, Mercado and Creole Tulyehualco among themselves, while Nepal, Tulyehualco and Creole Mixtec presented similar speeds. The criterion for germination in the presence of Ca7 (iron deficiency) allowed differentiate Mercado, Nepal and Creole Tulyehualco among themselves, while Line 1, Tulyehualco and Creole Mixtec presented the same pattern of germination. The standard length of seedlings at 72 h allowed to differentiate Line 1, Creole Tulyehualco and Creole Mixtec among themselves, while Mercado, Nepal and Tulyehualco presented similar lengths. Differentiation of 3 varieties of 6 was achieved by the standard germination in the presence of the herbicide Hierbamina and 2,4-D which allowed differentiate Line 1 and Creole Tulyehualco among themselves, while Mercado, Nepal, Tulyehualco and Creole Mixteca presented the same pattern of germination. The criterion for germination in the presence of salicylic acid allowed to differentiate Creole Tulyehualco, while Line 1, Tulyehualco and Creole Mixtec and Mercado and Nepal presented the same pattern of germination. The approach speed germination in the presence of acetylsalicylic acid allowed to differentiate Line 1 and Creole Tulyehualco, while Mercado, Nepal, Tulyehualco and Creole Mixtec presented similar speeds. The standard length of seedlings made at 96 h allowed to differentiate Creole Tulyehualco, while Line 1, Mercado and Tulyehualco, as well as Nepal and Creole Mixtec presented similar lengths. The criterion panicules number and weight of root allowed to differentiate between Nepal and market it, while Line 1, Tulyehualco, Creole Mixtec and Creole Tulyehualco presented panicules number and weight of similar roots. The test weight of differentiating stem allowed to Nepal, Market and Creole Tulyehualco among themselves, while Line 1, Tulyehualco and Creole Mixtec presented weight stem similar. The criterion regarding root/stem allowed to differentiate Nepal and Creole Mixtec, Line 1 and Tulyehualco and Market and Creole Tulyehualco one another. Of the 54 criterias used, only 20 did not allow differentiation none of the varieties. Finally, the most reliable but also to identify practical procedure were: the weight of 100 seeds, color, germination determination, seedling length and the weight of dry matter and approaches that require more time and more manipulation of the seed, but also reliable, it was the speed of germination (T50

Pseudomonas fluorescens ZUM80 es una cepa que puede inhibir el crecimiento de diversos patógenos de plantas. En este trabajo se reporta que la cepa bacteriana ZUM80 logró restringir el crecimiento de Colletotrichum lindemuthianum, Colletotrichum gloesporioides y Phytophthora cinnamomi, en un 76, 72 y 70%, respectivamente. Los altos grados de inhibición fueron posibles cuando la cepa bacteriana se inoculó con 24 horas de anterioridad a los fitopatógenos. Una mutante de la cepa ZUM80 Sid¯, carente de la síntesis de sideróforos, no logró restringir el crecimiento de los tres patógenos analizados. Adicionalmente, se utilizó un concentrado de sideróforos de la cepa ZUM80 para restringir el crecimiento de los patógenos en cultivos líquidos. Al adicionar los sideróforos en cultivos de C. lindemuthianum y C. gloesporioides se observó una disminución significativa en su crecimiento respecto al control. Así, este trabajo muestra que la cepa ZUM80 de Pseudomonas fluorescens podría ser una alternativa viable en el control biológico de patógenos de plantas.

Se ha demostrado que las rizobacterias tienen la capacidad de producir metabolitos de interés agrícola, entre los que se destacan el ácido salicílico, los sideróforos y las f itohormonas; dentro de estas últimas, el ácido Indol acético (AIA) es la auxina más conocida y estudiada, la cual desempeña un papel rector en el crecimiento de los cultivos. Esta investigación se realizó con el objetivo de caracterizar rizobacterias asociadas al cultivo del maíz en cuanto a la producción de AIA, sideróforos y ácido salicílico. Para ello se empleó un conjunto de cepas de Burkholderia cepacia y Pseudomonas fluorescens previamente aisladas de la rizosfera del maíz variedad Francisco mejorado. Se utiliza­ron técnicas colorimétricas y cromatográf icas para la detección de los metabolitos estudiados, y análisis multivariado de conglomerado jerárquico y ligamiento completo para la selección de las mejores cepas con respecto a la producción de los metabolitos de interés. Los resultados demostraron que la mayoría de las cepas estudiadas produce metobolitos del tipo AIA, sideróforos y ácido salicílico, desta­cándose de forma integral las cepas de Burkholderia cepacia MBf21, MBp 1, MBp2, MBf22, MBp3, MBf20, MBf 15 y Pseudomonas fluorescens MPp4, por las mayores producciones de los metabolitos en estudio, lo que evidencia que estas cepas pueden ser utilizadas en la promo­ción del crecimiento vegetal en cultivos de importancia económica. Palabras clave: Pseudomonas fluorescens, Burkholderia cepacia, AIA, sideróforos, ácido salicílico. It has been demonstrated that rhizobacteria are able to produce metabolites having agricultural interest, including salicylic acid, the siderophores and phytohormones. Indol acetic acid (IAA) is the most well-known and studied auxin, playing a governing role in culture growth. The object of this work was to characterise rhizobacteria associated with the maize crop in terms of producing IAA, siderophores and salicylic acid metabolites. Burkholderia cepacia and Pseudomonas fluorescens strains previously isolated from maize Francisco variety rhizosphere were used. Colorimetric and chromatographic techniques for detecting these metabolites were studied; multi-variable analysis of hierarchic conglomerate and complete ligament were used for selecting the best strains for producing metabolites of interest. These results demonstrated that all rhizobacteria strains studied produced IAA, siderophores and salicylic acid metabolites. Burkholderia cepacia MBf21, MBp1, MBp2, MBf22, MBp3, MBf20, MBf 15 and Pseudomonas fluorescens MPp4strains have presented the greatest production of these metabolites, showing that these strains could be used in promoting vegetal growth in economically important cultures. Key words: Pseudomonas fluorescens, Burkholderia cepacia, IAA, siderophore, salicylic acid.

Se describe la síntesis de N,N',N"-tris-(2,3-dihidroxibenzoil)-1,1,1-tris -(aminometil)etano (11) a partir del 1,1,1-tris-(hidroximetil)etano (1), via la triazida (3). La reducción con LiAlH4 lleva a la amina 4 con 65% de rendimiento. La acilación de 3 con N-(2,3-dibenciloxibenzoiloxi)succinimida (9) seguida de hidrogenación catalítica genera N,N',N"-tris-(2,3-dihidroxibenzoil)-1,1,1-tris-(aminometil)etano (11) con un rendimiento de 57% The synthesis of N,N',N"-tris-(2,3-dihydroxybenzoyl)-1,1,1-tris-(aminomethyl)ethane (11) from 1,1,1-tris-(hydroxymethyl)ethane (1) via the tris-azide 3 is described. Reduction of 3 with lithium aluminium hydride led to the corresponding amine 4 in 65% yield. Acylation of 3 with N-(2,3-dibenzyloxybenzoyloxy)succinimide (9) followed by catalytic hydrogenation afforded N,N',N"-tris-(2,3-dihydroxybenzoyl)-1,1,1-tris-(aminomethyl)ethane (11) in 57% yield