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RESUMEN La extracción de ARN de calidad constituye el primer paso para el análisis de la expresión génica. Sin embargo, su obtención no es sencilla debido a la susceptibilidad de esta molécula a la presencia de contaminantes como ARNasas, proteínas y polisacáridos. Adicionalmente, debido a la diversa composición de la pared celular de los hongos se requiere optimizar los procesos de extracción de ARN para organismos específicos. Este estudio evalúo el uso de diferentes metodologías de homogeneización de tejido (nitrógeno líquido y liofilización) y extracción de ARN (Trizol, CTAB y RNeasy mini kit) a partir del hongo nativo ascomiceto Xylaria sp. Se determinó la pureza, concentración e integridad del ARN obtenido por medio de espectrofotometría y electroforesis. Adicionalmente, se diseñaron cebadores de referencia para el gen β-Tubulina a partir del alineamiento de secuencias de este gen obtenidas de diferentes ascomicetes. Estos cebadores fueron utilizados para evaluar si el ARN extraído es amplificable mediante RT-PCR. Se determinó que la homogeneización de tejido por medio de liofilización generó mayores rendimientos de extracción independientemente del protocolo de extracción utilizado; sin embargo, éstos alteraron la integridad del ARN. Se obtuvo un ARN con mayor pureza con el protocolo CTAB y un mayor rendimiento con el RNeasy mini kit. Los resultados indican que el ARN extraído, independientemente de la metodología de homogeneización y extracción utilizada, es amplificable mediante RT-PCR. No obstante, se recomienda homogeneizar el tejido con nitrógeno líquido y extraer con RNeasy mini kit por la brevedad del protocolo de extracción y calidad obtenida. ABSTRACT Obtaining high quality RNA is the first step for gene expression analysis. However, the low stability of this molecule and high presence of contaminants such as RNases, proteins and polysaccharides may trouble extractions. Fungi cell wall composition is highly diverse; therefore optimizing RNA extraction procedures is necessary when studying specific organisms. In this study, different methods of tissue homogenization (liquid nitrogen and lyophilization) and RNA extraction (Trizol, CTAB and RNeasy mini kit) were assessed with a native ascomycete, Xylaria sp. RNA purity, concentration and integrity were determined by spectrophotometry and electrophoresis. In addition, a set of housekeeping gene primers was designed targeting the β-tubulin gene. The primers were used to determine if the RNA extracted allowed RT-PCR amplification. It was demonstrated that homogenization of tissue by lyophilization allowed higher yields of RNA regardless of the extraction protocol used, however, the RNA integrity was affected. The higher RNA purity was obtained using CTAB and the higher yields using the RNeasy mini kit. The extracted RNA is amplifiable by RT-PCR regardless of the homogenization and extraction methodology used. However, it is recommended to homogenize the tissue with liquid nitrogen and to extract RNA with the RNeasy mini kit due the shortness and efficiency of these protocols.

La extracción de ARN de calidad constituye el primer paso para el análisis de la expresión génica. Sin embargo, su obtención no es sencilla debido a la susceptibilidad de esta molécula a la presencia de contaminantes como ARNasas, proteínas y polisacáridos. Adicionalmente, debido a la diversa composición de la pared celular de los hongos se requiere optimizar los procesos de extracción de ARN para organismos específicos. Este estudio evalúo el uso de diferentes metodologías de homogeneización de tejido (nitrógeno líquido y liofilización) y extracción de ARN (Trizol, CTAB y RNeasy mini kit) a partir del hongo nativo ascomiceto Xylaria sp. Se determinó la pureza, concentración e integridad del ARN obtenido por medio de espectrofotometría y electroforesis. Adicionalmente, se diseñaron cebadores de referencia para el gen β-Tubulina a partir del alineamiento de secuencias de este gen obtenidas de diferentes ascomicetes. Estos cebadores fueron utilizados para evaluar si el ARN extraído es amplificable mediante RT-PCR. Se determinó que la homogeneización de tejido por medio de liofilización generó mayores rendimientos de extracción independientemente del protocolo de extracción utilizado; sin embargo, éstos alteraron la integridad del ARN. Se obtuvo un ARN con mayor pureza con el protocolo CTABy un mayor rendimiento con el RNeasy mini kit. Los resultados indican que el ARN extraído, independientemente de la metodología de homogeneización y extracción utilizada, es amplificable mediante RT-PCR. No obstante, se recomienda homogeneizar el tejido con nitrógeno líquido y extraer con RNeasy mini kit por la brevedad del protocolo de extracción y calidad obtenida. Obtaining high quality RNA is the first step for gene expression analysis. However, the low stability of this molecule and high presence of contaminants such as RNases, proteins and polysaccharides may trouble extractions. Fungi cell wall composition is highly diverse; therefore optimizing RNA extraction procedures is necessary when studying specific organisms. In this study, different methods of tissue homogenization (liquid nitrogen and lyophilization) and RNA extraction (Trizol, CTAB and RNeasy mini kit) were assessed with a native ascomycete, Xylaria sp. RNA purity, concentration and integrity were determined by spectrophotometry and electrophoresis. In addition, a set of housekeeping gene primers was designed targeting the β-tubulin gene. The primers were used to determine if the RNA extracted allowed RT-PCR amplification. It was demonstrated that homogenization of tissue by lyophilization allowed higher yields of RNA regardless of the extraction protocol used, however, the RNA integrity was affected. The higher RNA purity was obtained using CTAB and the higher yields using the RNeasy mini kit. The extracted RNA is amplifiable by RT-PCR regardless of the homogenization and extraction methodology used. However, it is recommended to homogenize the tissue with liquid nitrogen and to extract RNA with the RNeasy mini kit due the shortness and efficiency of these protocols.

[ES] La vitrificación es una técnica de conservación de embriones, que hace posible la evaluación del efecto de la selección genética en la ganancia media diaria de peso, comparando poblaciones de la misma línea que se encuentran separadas en el tiempo, mediante la reconstitución de poblaciones. El objetivo de este estudio es reconstituir dos poblaciones de la línea Rosa de la Granja de Mejora Genética de la UPV, seleccionada por velocidad de crecimiento: una población control, de la cual se vitrificaron embriones de 72 horas en el año 1999 cuando se encontraba en la generación 25 y una población actual con embriones vitrificados también a 72 horas en 2014 encontrándose en la generación 36. Para ello se transferirán los embriones de cada una de las dos generaciones a 25 hembras de la línea Amarilla por tener estas mejores aptitudes maternales. Con esto se pretende obtener al menos quince orígenes vía macho de cada población para garantizar una baja consanguinidad en los posteriores cruces. A partir de los diez días de gestación, se realizarán ecografías cada dos días para llevar un seguimiento del crecimiento intrauterino de los fetos. A los catorce días se realizará una endoscopia para ver el número de implantados y posibles regresiones. Finalmente, los gazapos nacidos serán identificados con chips electrónicos para el seguimiento semanal de ganancia de peso individual., [EN] From a long time ago, selection has been a tool used by the humanity to obtain offspring with interesting features from a productive point of view, including both animal and vegetable species. Currently, there are breeding programs of many species that use different selection methods to preserve the best individuals, in order to reproduce them and to be able to improve the lines. Due to the high genetic value that individuals achieve after years of selection and the possibility of its loss which could suppose a delay, banks of genetic material were established. In these banks, embryos are vitrified and stored in liquid nitrogen to -196OC. Therefore, this work has been carried out in order to evaluate the current vitrified embryos and those vitrified and stored 15 years ago from a rabbit line selected by daily average gain in the fattening period, of the Genetic Progress Unit in the UPV. In this work a total of 534 embryos were used, from two different generations of R line (18 and 36). From these 534, 301 were used as control (generation 36) and the 233 remaining as problem (generation 18). The results obtained showed that there were no significant differences in the post native growth up to the weaning, since both generations showed parallel and practically superposed growth curves. Nevertheless, there were significant differences in the prenatal growth, being the fetuses from the generation 36 longer than the generation 18. There were also differences in the time of storage of the embryos, since those from 18 generation, vitrified in 1999 showed less availability than those from generation 36, vitrified in 2014 and therefore a less cryopreservation efficiency. The above mentioned was favored by the loss of two straws that exploded during the warming procedure.

La dinámica del mercado en los últimos años ha llevado a Cryogas a optimizar sus costos de producción y evitar agotados, maximizando el servicio al cliente y la rentabilidad de sus productos -- La realización este proyecto es con el objetivo de identificar la metodología propuesta genera un pronóstico acertado frente a los métodos y resultados utilizados actualmente y mejorar los costos productivos mediante una producción con una mejor eficiencia energética -- La investigación parte de la identificación de variables que afecta la demanda de los productos con mayor irregularidad, para cuantificar y generar entradas para los diferentes modelos de redes neuronales -- Se realizaron varios pronósticos con diferentes modelos cuyos resultados se comparan con datos de control para seleccionar el de mejor desempeño y mayor exactitud -- Los resultados obtenidos con el modelo de pronóstico de mejor desempeño se comparan con realidad y el método usado actualmente por Cryogas para identificar el mejor -- Los resultados obtenidos permiten una mejora en los procedimientos de Cryogas que impactaran positivamente la rentabilidad de la compañía, se tendrán parámetros de generación de pronósticos basados en criterios sólidos y se buscara eliminar la subjetividad en esta actividad

Teak (Tectona grandis L.f) is a tropical tree of commercial value due to the high demand of its high-quality wood and rapid growth. Genetic improvement programs for this species have resulted in seeds of better quality and, at the same time, improvement in the quality of plantations. To preserve genetic diversity and guarantee the raw material for improvement programs and for future reproduction, seeds are kept under conventional seed banks conditions with temperature ranging between 4 and –20oC. However, there are other means to conserve this valuable germplasm. Cryopreservation is the storage of plant material in liquid nitrogen (NL, -196oC) and its major advantage is the conservation for indefinite periods of time, under high genetic stability conditions. Survival and regeneration of plants after seed freezing in liquid nitrogen (LN) were evaluated in this work, using the dessiccation and rapid freezing technique. The methodology was tested both, in seeds isolated from endocarps (seeds) asin seeds inside endocarps (seeds with endocarps), with germination rates, after thawing and 28 days in culture, of 84% and 70% respectively. La teca (Tectona grandis L.f) es un árbol tropical con gran demanda por la alta calidad de su madera y rápido crecimiento. Los programas de mejoramiento genético para esta especie han dado como resultado semillas de mejor calidad y, al mismo tiempo, el incremento en la calidad de las plantaciones. Con el objetivo de conservar la diversidad genética y garantizar la materia prima para los programas de mejoramiento y reproducción futura, las semillas de teca son mantenidas en bancos de semillas convencionales bajo condiciones de temperatura que oscilan entre 4o y –20oC. Sin embargo, hay otras modalidades que pueden emplearse para complementar la conser- vación de este valioso germoplasma. La criocon-servación o almacenamiento en nitrógeno liquido (NL, -196oC) presenta importantes ventajas sobre otras técnicas de conservación, como la posibilidad de almacenamiento por tiempo indefinido y en condiciones de alta estabilidad genética. En este estudio se evaluó la sobrevivencia y regeneración de plantas después del congelamiento de las semilas en nitrógeno líquido (NL), con el uso de la técnica de desecación y congelamiento rápido. La metodología fue evaluada tanto en semillas aisladas del endocarpo (semillas) como en semillas rodeadas por el endocarpo (semillas con endocarpo), que permite observar tasas de germinación de 84% y 70% respectivamente, a los 28 días en cultivo, después de la descongelación.

In order to protect the forest resources of Cedrela odorata L., currently threatened, it was considered necessary to establish a protocol for its cryopreservation. Research was conducted using shoots and seeds. Vitrification techniques were evaluated with shoots, using various solutions and rapid freezing in liquid nitrogen (LN). Initially the best results were obtained using incubation for 5 min in PVS3 solution before freezing, survival being 61% after 3 weeks of culture on Murashige and Skoog (MS) medium with 1.0 mg.l-1 BAP and 0.1 mg.l-1 GA3. Moreover, by incubating the apices in 0.3 M sucrose solution for 5 min prior to freezing, the survival rate reached 86% after 2 weeks of culture on MS medium with 1.0 mg.l-1 BAP, 0.1 mg.l-1 GA3 and 0.01 mg.l-1 IAA. When incubation in the solution of 0.3 M sucrose was used and recovery MS medium with 1 mg.l-1 KIN, 0.5 mg.l-1 GA3 and 100 mg.l-1 activated charcoal, the appearance of the surviving shoots improved significantly. For cryopreservation of cedar seeds, the methodology of dehydration and rapid freezing in liquid nitrogen (LN) was evaluated. Seeds with moisture content between 7.9% and 5.5% were placed in 5 ml polypropylene vials and these were directly immersed in NL. The effect of the storage period in NL (1 h, 24 h, 7 days, 1 month, 3 months and 6 months) on seed germination was evaluated. There were no statistical differences in ability of seeds to germinate after storage during different periods. En busca de proteger el recurso forestal de Cedrela odorata L., actualmente amenazado, se planteó la necesidad de establecer un proto- colo para su crioconservación; la investigación se realizó con ápices y semillas. Con los ápices se evaluó la técnica de vitrificación a través de varias soluciones vitrificadoras y congelamiento rápido en nitrógeno líquido (NL). Inicialmente los mejores resultados se obtuvieron al evaluar la incubación en la solución PVS3 por 5 min antes del congelamiento, con una sobrevivencia del 61% después de 3 semanas de cultivo en el medio Murashige y Skoog (MS) con 1,0 mg.l-1 BAP y 0,1 mg.l-1 AG3. Por otra parte, al incubar los ápices en una solución 0,3 M de sacarosa por 5 min previo al congelamiento, el porcentaje de sobrevivencia alcanzó 86% después de 2 semanas de cultivo en un medio MS con 1,0 mg.l-1 BAP, 0,1 mg.l-1 AG3 y 0,01 mg.l-1 AIA. Cuando se utili- zó la incubación en la solución de 0,3 M sacarosa y el medio de recuperación MS con 1 mg.l-1 KIN, 0,5 mg.l-1 AG3 y 100 mg.l-1 carbón activado, la apariencia de los ápices sobrevivientes mejoró considerablemente. Para la criopreservación de semillas de cedro, se evaluó el método de des- hidratación y congelamiento rápido en nitrógeno líquido (NL). Semillas con un contenido de humedad entre 7,9% y 5,5% fueron colocadas en criotubos de polipropileno de 5 ml y los criotubos sumergidos directamente en NL. Se evaluó el efecto del periodo de almacenamiento en NL (1 h, 24 h, 7 días, 1 mes, 3 meses y 6 meses) sobre la germinación de las semillas. No se presentaron diferencias significativas en su capacidad de ger- minación después de permanecer en los diferen- tes periodos de almacenamiento.

La teca (Tectona grandis L.f) es un árbol tropical con gran demanda por la alta calidad de su madera y rápido crecimiento. Los programas de mejoramiento genético para esta especie han dado como resultado semillas de mejor calidad y, al mismo tiempo, el incremento en la calidad de las plantaciones. Con el objetivo de conservar la diversidad genética y garantizar la materia prima para los programas de mejoramiento y reproducción futura, las semillas de teca son mantenidas en bancos de semillas convencionales bajo condiciones de temperatura que oscilan entre 4º y -20ºC. Sin embargo, hay otras modalidades que pueden emplearse para complementar la conservación de este valioso germoplasma. La crioconservación o almacenamiento en nitrógeno liquido (NL, -196ºC) presenta importantes ventajas sobre otras técnicas de conservación, como la posibilidad de almacenamiento por tiempo indefinido y en condiciones de alta estabilidad genética. En este estudio se evaluó la sobrevivencia y regeneración de plantas después del congelamiento de las semilas en nitrógeno líquido (NL), con el uso de la técnica de desecación y congelamiento rápido. La metodología fue evaluada tanto en semillas aisladas del endocarpo (semillas) como en semillas rodeadas por el endocarpo (semillas con endocarpo), que permite observar tasas de germinación de 84% y 70% respectivamente, a los 28 días en cultivo, después de la descongelación. Teak (Tectona grandis L.f) is a tropical tree of commercial value due to the high demand of its high-quality wood and rapid growth. Genetic improvement programs for this species have resulted in seeds of better quality and, at the same time, improvement in the quality of plantations. To preserve genetic diversity and guarantee the raw material for improvement programs and for future reproduction, seeds are kept under conventional seed banks conditions with temperature ranging between 4 and -20ºC. However, there are other means to conserve this valuable germplasm. Cryopreservation is the storage of plant material in liquid nitrogen (NL, -196ºC) and its major advantage is the conservation for indefinite periods of time, under high genetic stability conditions. Survival and regeneration of plants after seed freezing in liquid nitrogen (LN) were evaluated in this work, using the dessiccation and rapid freezing technique. The methodology was tested both, in seeds isolated from endocarps (seeds) asin seeds inside endocarps (seeds with endocarps), with germination rates, after thawing and 28 days in culture, of 84% and 70% respectively.

Slush nitrogen (SN₂) is a mixture of solid nitrogen and liquid nitrogen, with an average temperature of −207 °C. To investigate whether plunging a French plastic straw (commonly used for sperm cryopreservation) in SN₂ substantially increases cooling rates with respect to liquid nitrogen (LN₂), a numerical simulation of the heat conduction equation with convective boundary condition was used to predict cooling rates. Calculations performed using heat transfer coefficients in the range of film boiling confirmed the main benefit of plunging a straw in slush over LN2 did not arise from their temperature difference (−207 vs. −196 °C), but rather from an increase in the external heat transfer coefficient. Numerical simulations using high heat transfer (h) coefficients (assumed to prevail in SN₂) suggested that plunging in SN₂ would increase cooling rates of French straw. This increase of cooling rates was attributed to a less or null film boiling responsible for low heat transfer coefficients in liquid nitrogen when the straw is placed in the solid–liquid mixture or slush. In addition, predicted cooling rates of French straws in SN₂ tended to level-off for high h values, suggesting heat transfer was dictated by heat conduction within the liquid filled plastic straw., Facultad de Ingeniería, Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos

En el laboratorio de Fisiología de la Universidad Nacional de Colombia y en los tanques para la crioconservación del Instituto Humboldt del Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT), ubicados en el municipio de Palmira, en diseños completamente al azar en arreglos factoriales con cuatro repeticiones para la prueba de germinación y dos para la prueba de emergencia, se evaluaron los efectos en la calidad fisiológica de las semillas de tomate Solanum lycopersicum L. var Unapal-Maravilla y pimentón Capsicum annuum L. var Unapal -Serrano, de cuatro rangos de contenido de humedad (10-12, 8-10, 6-8 y 2-4 %) sobre la respuesta a la crioconservación en nitrógeno líquido. Los resultados demostraron la alta calidad fisiológica inicial de las semillas y una reducción drástica del contenido de humedad en los primeros 120 minutos del secado; contenidos de humedad inferiores al 5% se obtuvieron después de 5 horas de exposición a sílica gel. En niveles de humedad inferiores al 9,9 % las semillas de tomate presentaron una reducción significativa en viabilidad y germinación. Las semillas de pimentón con un contenido de humedad de 2,6 % redujeron significativamente la germinación y la viabilidad. Con un congelamiento ultrarrápido de las semillas, a través de inmersión en nitrógeno líquido (NL) sin el uso de agentes crioprotectantes no se presentaron efectos sobre la germinación y la viabilidad. To evaluate the effect of four levels of moisture content (10-12, 8-10, 6-8 and 2-4 %) and cryopreservation in liquid nitrogen (LN) on the physiological seed quality of tomato (Solanum lycopersicum L.) var Unapal-Maravilla and pepper, Capsicum annuum L., var Unapal-Serrano an experiment at the physiology lab and the cryopreservation lab of the Humboldt Institute of the International Center for Tropical Agricultural (CIAT) was carried out. A complete ramdom design with four replications for seed germination seed test and 2 replications for the seed emergence test was used. The results showed an initial high quality of seed and a drastic humidity content reduction during the first 120 minutes. Seed humidity content lower than 5%, were obtained after 5 hours to be exposed to silica gel. At humidity lower than 9.9 %, tomato seeds had a drastic reduction in viability and germination. On the other hand, capsicum seeds showed a significant reduction in germination and viability when humidity content was 2.6%. With a fast freezing treatment of seeds by immersion on LN without cryoprotectants during 30 days, there was no negatives effects on germination and viability of seeds of the two studied species.

En este artículo se presentan las propiedades de los materiales superconductores de alta temperatura (SAT) en la construcción de máquinas eléctricas. Se describe un generador sincrónico con configuración en disco con una elevada potencia específica, para futuras aplicaciones de energía. El generador es excitado por medio de bloques de materiales cerámicos SAT y se explica el mecanismo para atrapar el flujo magnético en ellos. El sistema criogénico está formado por un contenedor de nitrógeno líquido localizado en el suelo de forma a reducir el peso sobre la torre. Se presenta el grafico del flujo magnético por dos polos de la maquina, calculado por medio del método de los elementos finitos, así como la distribución de la densidad de flujo en el entrehierro del generador superconductor en disco. Se propone un parque eólico de elevado rendimiento con este tipo de generadores. This paper presents the properties of high temperature superconductor (HTS) materials in the construction of electrical machines. A disc type configuration synchronous generator with high specific power for future wind power applications is described. The generator is excited by means blocks of HTS ceramic materials. The mechanism to trap the magnetic flux in HTS blocks is explained. To decrease the weight of the generator on the top of the tower, the cryogenic system used consists of a liquid nitrogen storage container located on the ground to reduce weight on the tower. A flux plot per two poles of the machine calculated using the finite element method is presented and the flux density distribution in the air gap of the superconducting disc generator is also displayed. A high efficiency wind park with this type of generators is proposed.