Miranda Echavarría, José David, Yaacov Peña, Fernando, Avila, Luz Mabel, Vasquez, Yadira, Robledo, Sebastian, Riveros Arocha, Angela, and Valero Viancha, Lina Jeanette
La superficie ocular es una unidad funcional conformada por la conjuntiva (bulbar, tarsal y forniceal), la cornea (epitelio y estroma subyacente), limbo esclerocorneal (zona anatómica de transición entre la cornea y la conjuntiva bulbar) y la película lagrimal con sus 3 capas (mucinosa, acuosa y lipídica). Las enfermedades de la superficie ocular como el Síndrome de Sjögren, Síndrome de Steven Johnson, secuelas de trauma y quemaduras son entidades que suprimen la regeneración normal del epitelio corneal ocasionando una marcada disminución en la capacidad regenerativa del mismo y disfunción de las células limbares. Cabe resaltar el gran impacto social y laboral que produce este tipo de enfermedades, ya que la gran mayoría de pacientes afectados por este tipo de patologías se encuentran en edad de productividad laboral. Una de las terapias más innovadoras en la actualidad, es el implante de Células Madre (CM) con el fin de regenerar el tejido, recuperar la transparencia corneal y la función de la superficie ocular. La introducción de esta alternativa terapéutica busca mejorar las condiciones de vida de los pacientes con las afecciones descritas. Objetivo: Conseguir el crecimiento de células madre de limbo corneo escleral, que sean viables para el futuro trasplante en ojos con enfermedades de la superficie ocular, utilizando como suplemento lisado de plasma rico en plaquetas o suero bovino fetal. Diseño: Estudio experimental en laboratorio especializado (STEM – Medicina regenerativa), para caracterizar fenotípicamente el crecimiento de células de limbo corneo escleral, a través de la medición por inmunohistoquímica de las proteínas P-63 y KI-67, obtenidas de especímenes de banco de ojos certificado y utilizando como suplementos lisado de plasma rico en plaquetas o suero bovino fetal. Resultados: De los ojos obtenidos para extracción de muestras de limbo corneoescleral, se logró llevar a término el cultivo de 5 de ellos, con recuento mayor de un millón de células para el procesamiento final y realización de inmunohistoquímica. En un caso no hubo expresión de marcadores en ninguno de los medios de cultivo. En este estudio el LPRP demostró ser tan bueno como el SBF para el soporte y mantenimiento de células madre de limbo corneoescleral. Conclusión: En nuestro estudio las CM de limbo corneoescleral cultivadas ex vivo mostraron un patrón de crecimiento similar en el LPRP y el SBF, así mismo el perfil inmunohistoquímico fue similar. Esto aporta una alternativa para disminuir la carga antigénica proveniente de las proteínas animales de los cultivos de CM. El LPRP demostró ser tan bueno como el SBF para el soporte y mantenimiento de células madre de limbo corneoescleral. Se hace evidente la necesidad de ampliar esta investigación con un mayor número de muestras de tejido viable, con el fin de perfeccionar las técnicas de cultivo y lograr en un futuro utilizar suplementos de origen humano y eliminar la proteína animal en los medios de cultivo. Palabras clave: Células madre, limbo corneoescleral, superficie ocular, cultivos celulares, suero bovino fetal, lisado de plasma rico en plaquetas, p-63, ki-67. Hospital Militar Central Stem (Medicina Regenerativa) Objective: The aim of this study is to achieve growth of Stem Cells from corneal scleral limbus, which are viable for future transplantation in eyes with ocular surface diseases, using as a supplement platelet-rich plasma lysate and fetal bovine serum. Design: An experimental study will be done in a specialized laboratory (STEM), to phenotypically characterize corneoscleral limbus stem cells growth, through the measurement of P-63 and KI-67 proteins, obtained from certified eye bank specimens, seeded using as a supplements platelet-rich plasma lysate or fetal bovine serum. Results: from the donor eyes obtained for corneoscleral limbus tissue, we achieve culture growing in 5 of them, with cell counts greater than a million cells for final processing and performing immunohistochemistry. In one case there was no expression of markers in any of the culture media. In this study, platelet-rich plasma lysate proved to be as good as FBS for the support and maintenance of corneoscleral limbus stem cells. For this reason, based on this research, we suggest to use PRPL as an alternative supplement in cultures for growing viable stem cells for transplantation. Conclusion: In our study, platelet-rich plasma lysate supported growth and maintenance of corneoscleral limbus Stem cells. Fetal bovine serum remains as the gold standard supplement in cultured corneoscleral limbus stem cells. On the other hand, there is a clear necessity to extend this research with a larger number of viable tissue samples in order to improve culturing techniques and to achieve, in the future, the use of human derived supplements to eliminate animal protein in the cell cultures. Key words: Stem cells, corneo-escleral limbus, ocular surface, cell cultures, fetal bovine serum, platelet-rich plasma lysate.