Search

La enfermedad hemorrágica (RHD) es uno de los principales factores de mortalidad del conejo silvestre en la península ibérica. Desde su aparición a finales de los años 80 el agente etiológico predominante han sido cepas víricas pertenecientes a un único genogrupo (RHDV). Sin embargo, en 2011 se detectó, inicialmente en el tercio norte de España, una nueva variante vlrica (RHDV2) que cursó de forma atlpica, modificando la epidemiologla de la enfermedad y afectando a animales con menos de 30 días de edad. Entre los años 2009 y 2016 se ha estudiado la epidemiologia de la RHD en cuatro poblaciones experimentales de conejo silvestre mediante captura-recaptura, encontrándose en 2011 el primer aislado de RHDV2 en estas poblaciones (Calvete et al., 2014). Debido a la necesidad de llevar a cabo un diagnóstico rápido y sensible de las dos variantes y estudiar la epidemiologia de la enfermedad antes y después de la aparición del RHDV2, se presenta en este trabajo la puesta a punto de un protocolo que permite identificar los dos genotipos de la enfermedad (RHDV y RHDV2) mediante PCR dúplex a tiempo real (qPCRdúplex). RHDV2 genotypes of the rabbit haemorrhagic disease (RHD) in the sama assay. The primers and probes target sequences are conserved in all samples analysed showing 100% sensitivity and specificity, being all RHDV or RHDV2 isolates correctly genotyped by duplex-qPCR according to their sequence data. Standardisation was performed using standard curves. Efficiencies ranged from 2.01-2.04 and 1.96-1.98 for the RHDV and RHDV2 genotypes, respectively, and correlation of 0.99 for both genotypes reflecting a good linearity of the standard curve. High repeatability and reproducibility of the assay was found with very low variation, with CV lower than 1.89 and 1.21% for RHDV and RHDV2, respectively. The sensitivity of detection was higher far the duplex-qPCR assay than a direct ELISA assay. Estos resultados derivan del desarrollo de los proyectos de l+D "INMUNE 8011" e "INMUNIZADOS 1316" realizados en el marco de un convenio de colaboración entre el CITA y TRAGSATEC, así como del proyecto E-RTA2014-00009-00-00 del INIA. Published

Tesis doctoral con la Mención de "Doctor Internacional", El conejo de monte, “Oryctolagus cuniculus”, es un endemismo ibérico de incalculable valor ecológico al actuar como especie clave multifuncional del que se desconocen aspectos de la epidemiológia de la enfermedad hemorrágica vírica (RHD), que incide sobre su dinámica poblacional. Esta tesis estudia el trasiego de virus de conejos infectados a roedores, así como el tiempo de permanencia y la viabilidad de estos virus en el interior de los micromamíferos. Se ha estudiado el porcentaje de conejos seropositivos y con presencia del virus. Altas densidades de conejos están relacionadas con altas prevalencias de anticuerpos. Se analiza la interacción entre la RHD con la mixomatosis. Las titulaciones medias son más altas en el caso de la mixomatosis, hecho que podría explicarse por la mayor antigüedad de la enfermedad. También se ha observado como los tratamientos sanitarios como las vacunaciones tienen un efecto sobre los títulos positivos frente a la mixomatosis. En esta tesis se han estudiado las características morfométricas de muestras de conejos de Valladolid y de Badajoz. Se ha comprobado como los individuos norteños presentan mayor peso y longitud que los del sur pero estos muestran mayor condición corporal con respecto a los del norte. Se aportan resultados del seguimiento de una repoblación atendiendo a criterios no sólo de manejo del hábitat, sino genéticos e inmunológicos. De esta monitorización se obtuvieron unos resultados que han permitido elaborar recomendaciones de tipo técnico para otras repoblaciones. Por último, se comprobó el efecto de la hiperinmunización sobre la supervivencia de los conejos., The European wild rabbit, “Oryctolagus cuniculus”, is an Iberian endemism of immeasurable ecological value. It acts as a multifunctional keystone species. Little is known about factors that affect its population dynamics. This is the case of epidemiological issues of rabbit haemorrhagic disease (RHD). Virus transmission from infected rabbits to rodents was studied, as well as the viability and persistence of the virus inside rodents. The percentage of seropositive rabbits with the virus living in the wild was also studied. High rabbit densities are related to a high prevalence of antibodies. A study analysed the interaction between RHD and myxomatosis. Average titres are also higher in the case of myxomatosis, which could be due to the longer time this disease has existed. Health treatments such as vaccinations were similarly shown to have an effect on positive titres against myxomatosis. Morphometric characteristics of rabbit samples from Valladolid and Badajoz were analysed, confirming that northern individuals show greater weight and length than individuals in the south, although southern rabbits show better body condition than northern rabbits. The thesis provides the results of monitoring a repopulation project based not only on habitat criteria, but also on genetic and immunologic criteria. These results enable technical recommendations to be made for other repopulation projects. Highlights include elements that positively affect repopulation, such as the effect of using animals from compatible geographical areas from a genetic point of view, and using animals with high prior immunologic status. The effect of hyperimmunisation on rabbit survival is also demonstrated.

El virus de la enfermedad hemorrágica del conejo (RHDV) suele causar elevadas mortalidades tanto en conejos domésticos como en silvestres. Hasta el momento actual, todas las variantes víricas detectadas en la Península Ibérica proceden de un único ancestro común estrechamente emparentado con las primeras cepas patógenas aisladas en esta área. Con objeto de estudiar la epidemiología de esta enfermedad, durante los años 2010 y 2011 se monitorizó una población experimental de conejos silvestres con el fin de detectar los cadáveres de conejos muertos por esta enfermedad. La presencia de ARN viral en el tejido hepático de los cadáveres fue determinada mediante RT-PCR, y en el caso de resultar positiva se procedió a su secuenciación. Durante 2010 se diagnosticaron un total de 12 conejos muertos por RHD, mientras que en 2011 se diagnosticó un total de 9 cadáveres. En todos los conejos muertos por RHD en 2010 y en tres de 2011 la cepa identificada fue la original de la población, sin embargo, en cinco de los restantes seis cadáveres se identificó una cepa diferente. Filogenéticamente, esta cepa es relativamente distante de los grupos de lagovirus, tanto patógenos como apatógenos, descritos hasta la actualidad y, por similitud, esta cepa podría asimilarse a la nueva variante descrita en Francia en 2010 implicada en episodios de elevada mortalidad por RHD en granjas cunícolas de aquel país. Nuestro hallazgo coincidió en el tiempo con la ocurrencia de brotes atípicos de RHD en granjas cunícolas españolas durante 2011, similares a los ocurridos en Francia, por lo que los resultados del presente trabajo confirmarían la presencia de esta nueva variante en España y sugerirían su más que probable implicación en los brotes atípicos detectados Rabbit haemorrhagic disease virus (RHDV) is a virulent calicivirus that causes high mortality both in domestic and wild rabbits. It appears to be a mutant form of a benign virus that existed in Europe long before the first outbreak. To date, however, phylogenetic data indicate that all the field strains of RHDV found in the Iberian Peninsula have a common ancestor closely related to pathogenic strains isolated during the first RHD outbreaks in this area. In order to study RHD epidemiology, an experimental wild rabbit population was monitorized twice at week during 2010 and 2011 years in order to find rabbits dead by the disease. Detection of viral RNA in liver tissue of carcasses was conducted by RT-PCR reaction and, when positive, PCR products were purified and sequenced. Across 2010, 12 rabbits were found dead by RHD, whereas nine rabbits were found dead in 2011. The original RHDV field strain was identified in all dead rabbits found in 2010 and in three of 2011. However, a new strain was identified in five of remaining six carcasses found in this year. Phylogenetic analysis showed that this new viral strain would be a member of the new variant of RHDV recently detected in France in 2010. This variant is relatively distant from already described pathogenic and non-pathogenic lagoviruses, and it has been reported to cause increased mortalities in French rabbitries. In Spain, several atypical RHD outbreaks have been described affecting rabbitries during 2011 and this variant has been proposed as the putative aetiological agent. This survey confirms that this new RHDV variant would be already present in Spain.