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[spa] El desarrollo de biosensores para la determinación de biomarcadores de interés en el ámbito clínico es uno de los retos más importantes en el análisis de determinadas enfermedades, como las cardiovasculares. Por tanto hay una necesidad por parte del ámbito clínico de desarrollar herramientas que permitan realizar un diagnóstico y pronóstico de estas enfermedades de una manera rápida y eficaz. Además, teniendo en cuenta la portabilidad que pueden tener este tipo de dispositivos, podrían ser utilizados tanto a nivel de consultorio primario como en urgencias (dispositivos para el diagnóstico inmediato, PoC, point of care devices). Actualmente, los laboratorios centralizados usan instrumentos específicos para cada grupo de biomarcadores de la enfermedad a determinar, incrementando de esta forma el coste y el tiempo necesario para obtener un resultado. Existen evidencias de que es posible realizar un seguimiento del estado de salud y desarrollo de la enfermedad cardiovascular de un individuo mediante la monitorización de varios biomarcadores. En el caso de las enfermedades cardiovasculares, varios biomarcadores para el diagnóstico temprano o tardío han sido bien identificados, llegándose a conocer su cinética de liberación en aquellos que son indicadores de fallo cardíaco y necrosis miocárdica. En el transcurso de esta tesis doctoral, se han desarrollado anticuerpos específicos y diferentes herramientas de diagnóstico para la detección de un biomarcador prematuro de enfermedad coronaria, como es la Lipoproteína (a) (Lp(a)), y un biomarcador de etapas más avanzadas, la Troponina I Cardíaca (cTnI), claro indicador de infarto de miocardio y necrósis miocárdica. En el caso de ambas proteínas, se ha realizado un estudio en profundidad para conocer su estructura y todos los fenómenos relacionados con su inmunodetección. Finalmente, se ha conseguido producir anticuerpos específicos para cada uno de los biomarcadores y se han implementado en diferentes superficies sensoras. Para el caso de la cTnI se ha desarrollado un inmunosensor amperométrico que permite obtener un resultado fiable en tan solo 30 minutos, con una detectabilidad de 5 ng/mL. Del mismo modo, se ha desarrollado un inmunosensor potenciométrico combinando los anticuerpos producidos con distintos nanomateriales como partículas magnéticas y Quantum Dots. Para la Lp(a) se han desarrollado haptenos específicos y producido anticuerpos monoclonales de forma innovadora para la detección de este biomarcador. Del mismo modo, se ha demostrado la especificidad y validez de estos anticuerpos mediante técnicas tipo Western blot, indicando su viabilidad para el desarrollo de una herramienta de diagnóstico precoz para las ECVs., [eng] The development of biosensors for the determination of biomarkers of interest in the clinical setting is one of the most important challenges in the analysis of certain diseases, such as cardiovascular diseases (CVDs). Therefore there is a need on the part of the clinical setting to develop tools that allow for a diagnosis and prognosis of these diseases quickly and efficiently. There is evidence that it is possible to track the status of health and development of cardiovascular disease in an individual by monitoring several biomarkers. In the case of CVDs, several biomarkers for the early or late diagnosis have been well identified. In the course of this dissertation, specific antibodies and different diagnostic tools for the detection of a biomarker of early stages of the coronary heart disease, such as lipoprotein (a) (Lp(a)), and a biomarker of more advanced stages, the cardiac troponin I (cTnI), a clear indicator of myocardial infarction and myocardial necrosis, have been developed. In both cases, an in- depth study to learn about the structure and all the phenomena related with their immunodetection, has been done. Finally, antibodies specific to each of the biomarkers have been successfully produced and these antibodies have been implemented in different sensing platforms. In the case of cTnI, considered as a golden biomarker for cardiovascular risk stratification, an amperometric immunosensor has been developed allowing a reliable result in only 30 minutes, with a detectability of 5 ng/mL. In the same way, a novel potentiometric immunosensor has been developed, combining succesfully the antibodies produced against this biomarker with different nanomaterials as magnetic particles and Quantum Dots In the case of Lipoprotein (a), a macromolecular complex found in human plasma that combines structural elements from the lipoprotein and blood clotting systems and that is associated with premature coronary heart disease and stroke, a broad new specific haptens have been developed and a set of monoclonal antibodies have been produced for the detection of Lp(a). The specificity and validity of these antibodies was established by Western blot techniques, indicating their viability for the development of a tool to diagnose and stretify the risk associated to CVDs.

La detección de cambios en los niveles de un neurotransmisor, como la dopamina o de su cascada metabotrópica que se inicia con la activación de sus receptores tras la realización de una conducta o un tratamiento farmacológico en estructuras cerebrales concretas, puede ser realizada con técnicas inmunológicas. Los métodos inmunoquímicos en general se fundamentan en la utilización de anticuerpos específicos para el marcaje de una proteína concreta. En el caso de que se quiera localizar la proteína en áreas o neuronas concretas por inmunohistología, los anticuerpos unidos a enzimas (peroxidasa o fosfatasa) o a fluorocromos aplicados a cortes histológicos de cerebro, se unen a la proteína antigénica de interés permitiendo su marcaje mediante una reacción colorimétrica o emisión de fluorescencia, respectivamente. Esta técnica nos ofrece la oportunidad de realizar un mapeado cerebral y observar en qué regiones la proteína de interés está presente y en qué medida. Por ejemplo, se han utilizado estas técnicas para el marcaje y/o cuantificación de algunos marcadores dopaminérgicos, como el DARPP -32, en el núcleo accumbens. Además, esa proteína puede ser cuantificada mediante la técnica western blot (WB). El WB requiere de la homogeneización del tejido, desnaturalización de proteínas y su separación por peso molecular mediante electroforesis y da como resultado una reacción quimioluminiscente detectable por una película fotográfica. Ambas técnicas son complementarias, pues ofrecen información de localización y permiten cuantificar la proteína. Detecting changes in the levels of a neurotransmitter such as dopamine or changes in the metabotropic cascade initiated by the activation of its receptors in specific brain structures after performing a behavior or receiving a specific drug therapy, can be accomplished with immunological techniques. Immunochemical methods are based onthe affinity of antibodies for a particular protein. The antibodies are bound to a marker that provides color or fluorescence. In the immunohistological methods, after the antibody is applied to a specific brain section where the antigenic protein is localized, neurons containing the targeted protein show the color or fluorescence, and they can be identified and quantified by microscopy and imaging processing techniques. For example, these techniques have been used for the localization and quantification of some dopaminergic markers such as DARPP -32, in the nucleus accumbens. This protein can be quantified also by western blotting (WB). The WB requires tissue homogenization, protein denaturalization and separation of proteins by molecular weight with electrophoresis, and results in a detectable chemiluminescent reaction by an X-ray film. Both techniques complement each other providing information about localization, as well as quantity of protein present in the tissue.

Problema: solo conocemos tres informes para Colombia de la prueba diagnóstica de malaria Now ICT Malaria Pf/ Pv ® (NowICT); esos estudios tuvieron resultados de sensibilidad y especificidad muy diferentes. Objetivo: evaluar la capacidad diagnóstica de NowICT frente a la gota gruesa para el diagnóstico de infección plasmodial en sangres periférica materna, del cordón umbilical y placentaria. Metodología: diseño paralelo y enmascarado para evaluación de una prueba diagnóstica. El tamaño de la muestra se calculó con parámetros epidemiológicos y estadísticos y fue de 131 muestras de sangre periférica materna; también se examinaron sendas muestras de sangre placentaria y de cordón umbilical. Resultados: se evaluaron en total 386 muestras. La sensibilidad de NowICT para P. vivax no alcanzó 70% en ninguna de las fuentes (madre, placenta, cordón). La especificidad mínima fue de 99% . Los valores para P. falciparum no se calcularon porque los casos fueron pocos. Conclusión: Now ICT malaria Pf/ Pv® no es una herramienta diagnóstica útil en Colombia porque su sensibilidad para P. vivax es muy deficiente y en el país esta especie es la que predomina en la generación de malaria en humanos. Esta interpretación concuerda con las conclusiones generales de la OMS sobre el estado de desarrollo de las pruebas diagnósticas rápidas para malaria. Problem: To date, there are only three reports from Colombia about the malaria diagnostic test Now ICT Malaria Pf / Pv ® (NowICT). The results from these studies showed major differences in sensitivity and specificity Objective: To evaluate the diagnostic performance of NowICT compared to thick smear for the diagnosis of Plasmodium infection in matched blood samples from mothers (maternal peripheral blood), umbilical cord and placenta. Methods: We used a closed (blinded/ masked) and parallel design for the evaluation of a diagnostic test. The sample size was calculated with statistical and epidemiological parameters; this consisted of 131 thick smears from maternal peripheral blood. Blood samples from placenta and umbilical cord were also studied (386 samples tested in total). Results: The sensitivity of Now ICT for detection of P. vivax was below 70% in any of the samples (maternal blood, placental blood or cord blood). The specificity was greater than 99% . Values for P. falciparum infection were not calculated since too few cases were detected. Conclusions: Now ICT Malaria Pf / Pv ® is not a useful diagnostic tool in Colombia since the sensitivity for the most frequent species in the country, P. vivax, is poor. This interpretation is consistent with the WHO's general conclusions about the state of development of rapid diagnostic tests for malaria.

CONTENIDO Editorial. Ramírez I., Lílido N. Fauna Silvestre / Wild Life Estudio de infección sistémica por Herpesvirus complicada con Cryptosporidium spp., en un delfín manchado del Atlántico (Stenella frontalis. Cuvier, 1829). Study of systemic infection by Herpesvirus complicated with Cryptosporidium spp. in a gulf stream spotted dolphin (Stenella frontalis. Cuvier, 1829). Arias León, Gabriela; Mariani di Lena, Miguel A.; Cornejo Uzcategui, Luis; Bermúdez García, Victor y Ramírez Medina, Oneyda J. Medicina Veterinaria / Veterinary Medicine Estudio estructural del huso meiótico de ovocitos bovinos vitrificados. Structural study of Meiotic spundle of vitrified bovine oocytes. Báez Contreras, Francisco J.; Hernández, Ludwing y Villamediana Montreal, Patricia C. Detección de receptores de estrógeno, progesterona y de proteína ligadora de corticosteroides en el tracto genital de hembras caninas (Cannis Familiaris). Estudio inmunohistoquímico. Detection of estrogen, progesterone receptors and corticosteroid binding globulin in the canine (Cannis Familiaris) reproductive female tract. Immunohitochemistry study. Vasconcellos Costa, Adriana; Sepúlveda Becker, Néstor; Pacheco Córdova, Carolina y Miska, Werner Garrapatas (Acari: Ixodidae) recolectadas en caninos bajo asistencia veterinaria en Maracaibo, Venezuela. Tricks (Acari: Ixodidae) collected from canines under veterinary care in Maracaibo, Venezuela. Ramírez Barrios, Roger A.; Chacín, Everts; Barboza, Glen; Fernández, Gibson; Valera, Zulayne; Villalobos, Alberto y Angulo Cubillán, Francisco Producción Animal / Animal Production Estudios de procesos digestivos en conejos de engorde alimentados con dietas basadas en follajes tropicales. Digestibilidad fecal. Studies on digestive processes in fattening rabbitts given tropical foliage based diets. Faecal digestibility. Nieves, Duilio; Schargel, Isabel; Terán, Omar; González, Carlos; Silva, Leonel y Ly, Julio La inseminación artificial y su efecto sobre los índices de productividad parcial en fincas ganaderas de doble propósito. The artificial insemination and its effect on partial productivity index of dual-purpose cattle farms. Velasco Fuenmayor, Julia y Ortega Soto, Leonardo Pedigree analysis in Criollo Limonero. Análisis de pedigrí en Criollo Limonero. Villasmil-Ontiveros, Yenen; Aranguren Méndez, José Atilio; Román, Rafael; Isea, William; Contreras, Gloria; Zambrano, Sunny y Jordana, Jordi Caracterización de las curva de lactancia y componentes lácteos del genotipo siboney de Cuba en una granja ganadera de la provincia de La Habana. Characterization of lactation and milk components curves of siboney de Cuba genotype from a dairy basin of Havana province. Hernández, Robier y Ponce, Pastor Evaluación del modelo CNCPS-S para predecir el crecimiento del borrego pelibuey. Evaluation of the CNCPS-S model to predict the pelibuey sheep growth. Duarte Vera, Fernando; Sandoval Castro, Carlos Alfredo y Sarmiento Franco, Luis Asociación entre la concentración sérica de testosterona y la actividad de la enzima Glutation Peroxidasa en testículos de ratones de diferentes edades. Association between seric testosterone concentration and the glutathione peroxidase activity in testicles of mice of different ages. Matheus Cortéz, Nyurky y López Ortega, Aura Salud Pública / Public Healt Prevalencia de enteroparásitos en perros domiciliarios de la ciudad de La Vela, Estado Falcón, Venezuela. Prevalennce of enteric parasites in domiciliary dogs from La Vela city, Falcon State, Venezuela. Tortolero Low, Leonardo José; Cazorla Perfetti, Dalmiro José; Morales Moreno, Pedro y Acosta Quintero, María Eugenia Tecnología de Alimentos / Food Science and Technology Optimización de la deshidratación osmótica con pulso de vacío de láminas de sardina. Optimization of vacuum pulse osmotic dehydration of sardine sheets. Reyes M., Genara; Corzo, Otoniel; Bracho, Nelson y Rodríguez, Yusbelis Evaluación física y química de filetes de lebranche (Migil liza) en almacenamiento congelado A-18ºC. Physical and chemical evaluation of lebranche fillets (Mugil liza) in frozen storage at -18ºC. Valls, Jaime E.; Xiques, Anirys T. y Escalona, Andrés 262-266 bimestral Nivel analítico

Los receptores esteroidales sexuales del tracto genital de la hembra tienen importancia dado que, a través de ellos, actúan las hormonas responsables de su desarrollo y de sus cambios morfofuncionales. En su mecanismo, uno de los factores a considerar son las posibles diferencias entre las distintas especies. El objetivo del presente estudio fue evaluar, en la especie canina (N=8), la presencia de receptores de estrógenos (RE), progesterona (RP) y la presencia de proteína ligadora de corticosteroides (CBG) en ovario, oviducto y útero de 3 hembras prepúberes (N=3) y 5 hembras adultas (N=5). La evaluación morfológica se realizó con tinción de hematoxilina-eosina (H-E) e inmunocitoquímica, según la técnica de Sternberger (1979). Los resultados revelaron en animales ciclando, inmunorreactividad (IR) positiva, RE en útero, oviducto y ovario siendo marcada en oviducto. La IR para RP fue leve y variá según el estadio del ciclo. En hembras prepúberes, los RE y RP no fueron evidenciados. La CBG mostró positividad en el tracto durante el ciclo y fue negativa en prepúberes. Se concluye que la presencia de RE y RP es detectable en útero, oviducto y ovario de la hembra canina adulta habiendo variaciones de concentración según el estadio del ciclo estral, siendo su presencia en las preúberes no evidenciable, a diferencia de otras especies (oveja), donde son detectables en este estadio del desarrollo. La presencia de CBG constante durante el ciclo estral y variable en los otros estadios indica su posible participación en los procesos reproductivos. The sexual steroid receptors of the genital tract of the female have significant importance since though them the hormones responsible acting. In their mechanism one of the factors to be kept in mind is the possible differences among the diverse species, the objective of this study was to evaluate in canine (N= 8) the presence of receptors of estrogens (ER), progesterone (PR) and the presence of corticosteroid binding globuline (CBG) in ovaries, oviduct and uterus of prepuberal female (N=.3) and matures: (N=5) It was used H-E and immunohistochemical study according to the technique of Stenberger (1979). The results during the oestrus showed: Immune reactivity (IR) positive, ER in uterus and ovary being much stronger in oviduct. The PR varied according the stage of oestrus cycle. In puberal female dog ER and PR were undetectable. The CBG revealed positive in reproductive tract of cycling females but negative in prepubertal. It was concluded that the presence of ER and PR are detectable in uterus, oviduct and ovary of mature female dogs varying their concentration according to the cycle. In prepuberal, its presences come undetectable differing from other species (ovine), in which they are detected at this stage of development. The constant of CBG presence during oeustrus cycle and such variation in other stages of the cycle, it might suggest its participation in the several reproductive activities.

Introducción: Las líneas celulares y los cultivos primarios son una excelente herramienta para el estudio de la biología, desarrollo y respuesta a la terapia en tumores cerebrales. Objetivo: Establecer y caracterizar una línea celular derivada de un glioblastoma multiforme como un modelo de estudio in vitro para la extrapolación y aplicación futura en terapia génica. Material y métodos: Se obtuvo una muestra de un paciente con diagnóstico clínico e histopatológico de glioblastoma multiforme, se caracterizó mediante inmunohistoquímica en cortes de tejido y por inmunocitoquímica sobre células cultivadas a partir del tumor desde el inicio del cultivo y durante los seis primeros pases, con dos tipos de marcadores específicos para glía: GFAP (glial fibrillary acidic protein) y S-100 (proteína de unión a calcio). Además, se evaluó la expresión de p53 y Bcl-2, como moduladores de apoptosis. Por último se hizo la caracterización citogenética. Resultados: Histopatológicamente, se confirmó el diagnóstico de glioblastoma multiforme. En los cultivos primarios se encontraron características citomorfológicas propias de un glioblastoma: células fibroblastoides planas, células con escaso citoplasma con 3 ó más procesos y por último bipolares o unipolares. Se encontró una expresión diferencial con los cuatro marcadores, con un patrón de marcaciones a nivel citoplasmático y nuclear a través de los pases estudiados. La línea celular se caracterizó por ser en su mayoría aneuploide con un número modal cromosómico entre 43 y 45, con un gran número de poliploidías (55-102 , XXYY) y endo-reduplicaciones (end 45, X, -Y). Conclusión: Se estableció una línea celular derivada de un glioblastoma multiforme con un fenotipo estable, con un notable mantenimiento del perfil glial y citogenético. Introduction: Cell lines and primary cultures are a useful tool for studying basic biology, development and therapy responses in cancer and nervous system tumors. Aim: To establish and characterize a human glioblastoma multiforme (GBM) derived cell line as an in vitro biological model to study nervous system cancer chemotherapy and gene therapy. Materials and methods: A resected tumor piece was obtained from a patient with clinical and histopathological diagnosis of GBM. It was processed to obtain viable cells to culture and histological sections, which were immunostained to glial fibrillary acid protein (GFAP) and S-100 protein (calcium binding protein) and to evaluate expression of apoptosis related proteins p53 and Bcl-2. Finally a cytogenetic evaluation was carried out. Results: Histopathological examination confirmed classic findings of GBM. Typical cytomorphological features of GBM were found in cells of the primary cultures: bipolar or unipolar cells, flat fibroblastoid cells, process-bearing cells with scant cytoplasm and 3 or more processes. It was found a differential expression of the four markers, which had a nuclear and cytoplasmatic staining pattern throughout studied subcultures. Cell line exhibited a high level of aneuploidy with modal chromosomal number between 43-45, with presence of poliploidy (55-102 , XXYY) and endoreduplication (end 45, X, -Y). Conclusion: It was established a GBM derived cell line with a stable phenotype, maintaining morphological cell and cytogenetic characteristics.

A detailed study was made in this doctoral thesis on the development and differentiation of the vertebrate pituitary gland, with the aim to establish a fate map in Rathke's pouch of the origin of different hormone producing cells present in the adult pituitary gland, that explain if the differences observed in the distribution pattern of different hormone producing cells in the adult is the consecuence of differences in their development. For this reason, the study was made in two vertebrate groups, Mammals and Avian, that present notable differences in their hormone producing cell distribution patterns. The results allowed us to conclude that the origin of different hormone producing cells in Rathke’s pouch determine their definitive distribution in the adult gland. At the same time, the relationship between proliferation and differentiation was studied, showing us that after differentiation, hormone producing cells continue proliferating with a low rate, contributing to the establishment of differentiated populations. Using immunochemicals and in situ hidridization techniques, the expression of different molecules such as hypothalamic releasing factors; different peptides, whose role as modulators in different pituitary axis have been proposed in the adult animal; different calcium binding proteins and transcription factors in relation to the differentiation of different hormone producing cells, was also studied in this work, allowing us to establish different relationships between some of these factors and specific aspects of the development and differentiatin of the pituitary gland.