Search

Esta tesis consiste en el estudio del ciclo celular de células madre pluripotentes (CMP) en diferenciación y los mecanismos moleculares que pueden almacenar memoria de un estímulo externo. Pretende mostrar cómo existen factores hereditarios que determinan el ciclo, y estudiar los mecanismos de herencia y memoria molecular dentro de las redes de regulación génica. Se divide en 3 capítulos. El primero aborda el estudio del ciclo celular y sus fases durante el proceso de diferenciación temprana en las CMP de embrión de ratón. Estas células fueron genéticamente modificadas para fluorescer en dos colores marcando las fases del ciclo, y ser filmadas por microscopía de time-lapse. Los análisis incluyen medidas del ciclo celular a nivel de célula única, construcción de dendrogramas de linajes celulares y el diseño y aplicación de algoritmos para probar si las relaciones familiares determinan la duración del ciclo celular. El resultado principal es que, durante la diferenciación, el ciclo se acorta y las células proliferan a mayor velocidad. Además, la duración del ciclo de una célula está determinada por las células progenitoras, probando que existen factores parentales que controlan la tasa de proliferación. Sin embargo, una de las dificultades a la hora de encontrar cuáles son estos factores, encontrar candidatos y compararlos es, por un lado, la falta de cuantificadores de memoria almacenada en las redes de regulación génica y, por otro, la falta de un catálogo de mecanismos moleculares capaces de almacenar memoria. El segundo capítulo, por su parte, consiste en el desarrollo de un cuantificador matemático de la memoria molecular en redes complejas, aplicado principalmente a vías de señalización celular y redes de regulación génica, que guardan información de estímulos transitorios. Una vez definido el cuantificador, se utilizó para buscar mecanismos o motifs de 1, 2 y 3 nodos que fueran capaces de almacenar información de estos estímulos. Los resultados principales consisten en que los ciclos de retroalimentación positiva son esenciales para dar multiestabilidad y memoria a las redes. Además, las redes capaces de oscilar de manera autónoma también pueden guardar información en la fase de la oscilación. El tercer y último capítulo consiste en una serie de experimentos en las mismas células que se utilizaron en el primer capítulo. El objetivo es detectar la existencia de mecanismos capaces de almacenar memoria. Para esto, tratamos a las células con un estímulo de diferenciación transitorio y luego aplicamos el cuantificador desarrollado en el segundo capítulo. El resultado es que, luego de solo un día expuestas al estímulo de diferenciación, las células lo recuerdan y continúan con el proceso de diferenciación. Asimismo, es probable que esta memoria se deba a la existencia de alguna retroalimentación positiva entre los factores de transcripción marcadores de la pluripotencia. This thesis is focused on the study of cell cycle in pluripotent stem cells (PSC) during differentiation and on the molecular mechanisms which can store the memory of an external stimulus. It aims to show if there are hereditary factors that determine it, and to study the mechanisms of inheritance and molecular memory within gene regulatory networks. It is organized into three chapters. The first chapter deals with the study of the cell cycle and its phases during the early differentiation process in mouse embryo PSCs. These cells were genetically modified to fluoresce in two colors marking the phases of the cycle, and to be filmed by time-lapse microscopy. Analyzes include cell cycle measurements at the single cell level, construction of cell lineage dendrograms, and the design and application of algorithms to test whether familial bonds determine cell cycle length. The main result is that, during differentiation, the cycle is shortened, and cells proliferate at a faster rate. Furthermore, the length of a cell cycle is determined by the progenitor cells, proving that there are hereditary factors that control the rate of proliferation. However, one of the needs in finding out what these factors are, obtain candidates and compare them is, on one hand, the lack of memory quantifiers stored in gene regulation networks and, on the other hand, some catalog of the molecular mechanisms capable of storing memory. This issue is addressed in the next chapter. The second chapter deals with the development of mathematical quantifier to account for molecular memory in complex networks, applied mainly to signaling and gene regulatory networks which store information of transient stimuli. Once defined, we use the quantifier to look for 1,2 & 3 nodes mechanisms or motifs capable of stimuli information storage. The main results consist of positive feedbacks being essential to provide multistability and memory to networks. Furthermore, oscillating networks can also store information in their phase. The third and last chapter is a description of experiments performed on the same cells used in the first chapter. The aim of these experiments is to detect mechanisms capable of storing memory. To accomplish this, we give a differentiation stimulus and apply the memory quantifier developed in the second chapter. The main result is that, after only one day exposed to a differentiation stimulus, cells remember it and continue its progression through the differentiation process. In addition, this memory is probably due to the existence of a positive feedback between pluripotency transcription factors. Fil: Sevlever, Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

To evaluate the cytotoxic activity of the chloroform fraction of the Piper aduncum methanolic extract (PAMoCl) and its effect on the cell cycle in two gastric cancer cell lines: AGS and KATO III.The cytotoxic effect of PAMoCl was evaluated in cell lines AGS and KATO III. The following PAMoCl concentrations were tested, 1.25, 2.5, 5, 10, 20, 40, 80 and 160 μg/mL. Resazurine was used to evaluate cell viability. In the cell cycle assay, the cells were treated with 19.62 μg/mL and 39.23 μg/mL of PAMoCl for AGS as well as 87.49 μg/mL and 160 μg/mL for KATO III. After 24 hours both cell lines were analyzed by flow cytometry.PAMoCl showed cytotoxic activity, inhibiting cell growth by 50%. It presented a (IC50) of 39.23 μg/mL and 87.49 μg/mL at 24 hours and a (IC50) of 49.47 μg/mL and 64.68 μg/mL at 48 hours against AGS and KATO III cell lines, respectively. In addition, it was observed that PAMoCl has an effect on the cell cycle, it causes an accumulation of cells in the G2/M phase.PAMoCl contains secondary metabolites with cytotoxic activity that have an effect on the G2/M phase of the cell cycle, in two gastric cancer cell lines, both primary and metastatic. The results of this study will allow us to deepen the search for more effective active ingredients found in PAMoCl for eliminating gastric cancer cells, but with less toxicity for healthy cells.Evaluar la actividad citotóxica de la fracción clorofórmica del extracto metanólico de Piper aduncum (PAMoCl) y su efecto en el ciclo celular en dos líneas celulares de cáncer gástrico: AGS y KATO III.El efecto citotóxico de PAMoCl se evaluó en las líneas celulares: AGS y KATO III. Se probaron concentraciones de PAMoCl: 1,25; 2,5; 5; 10; 20; 40; 80 y 160 µg/mL. Para evaluar la viabilidad celular se usó el reactivo resazurina. En el ensayo de ciclo celular las células fueron tratadas con 19,62 µg/mL y 39,23 µg/mL de PAMoCl para AGS, así como 87,49 µg/mL y 160 µg/mL para KATO III. Después de 24 horas ambas líneas celulares fueron analizadas por citometría de flujo.PAMoCl mostró actividad citotóxica con una inhibición del crecimiento celular en un 50% (IC50) de 39,23 µg/mL y 87,49 µg/mL a las 24 horas y un IC50 de 49,47 µg/mL y 64,68 µg/mL a las 48 horas frente a las líneas celulares AGS y KATO III, respectivamente. Además, se observó que PAMoCl tiene efecto a nivel del ciclo celular: provoca una acumulación de células en la fase G2/M.PAMoCl contiene metabolitos secundarios con actividad citotóxica que tienen efecto en la fase G2/M del ciclo celular, en dos líneas celulares de cáncer gástrico tanto primario como metastásico. Los resultados de este estudio permitirán profundizar en la búsqueda de principios activos presentes en PAMoCl que tengan mayor eficacia en la eliminación de células de cáncer gástrico, pero con menor toxicidad en células sanas.

Digital, La herramienta de realidad aumentada división mitótica 3D como estrategia que fortalece el proceso de enseñanza-aprendizaje de la temática división mitótica en estudiantes de octavo grado. La biología posee un gran contenido de temáticas que tornan densas las clases, aunado a la metodología tradicionalista hacen que los estudiantes no se interesen y se vea reflejado en las pruebas realizadas. En la primera etapa se llevó a cabo la revisión bibliográfica y un diagnóstico para conocer el estado, tanto académico como actitudinal, de los estudiantes, basado en este se estructuró la propuesta para ser llevada a cabo. Posterior a la puesta en marcha del proyecto y como parte final, se aplicó una prueba que recopiló la información necesaria para realizar el análisis estadístico, en el cual se compararon los aciertos obtenidos inicialmente, contra los aciertos producto de la prueba final, esto arrojó que; la implementación de esta herramienta innovadora en clase fortaleció el proceso pedagógico, despertando el interés de los estudiantes, al hacerlos partícipes de su saber. Fueron evidentes los adelantos mostrados en los resultados, estadísticamente significativos y soportados por el análisis e interpretación de los mismos. Este proyecto deja un precedente, al marcar un inicio para que con el apoyo indicado y correcta orientación se puedan incluir más herramientas de este tipo en diversas áreas del saber, como parte estructurante de la dinámica de clase., The 3D mitotic division augmented reality tool as a strategy that strengthens the teaching-learning process of the mitotic division theme in eighth grade students. Biology has a great content of topics that make classes dense, coupled with the traditionalist methodology they make students not interested and it is reflected in the tests carried out. In the first stage, a bibliographic review and a diagnosis were carried out to know the state, both academic and attitudinal, of the students, based on this, the proposal was structured to be carried out. After the start-up of the project and as a final part, a test was applied that collected the necessary information to perform the statistical analysis, in which the initially obtained hits were compared against the hits product of the final test, this showed that ; The implementation of this innovative tool in class strengthened the pedagogical process, awakening the interest of students, by making them participants in their knowledge. The advances shown in the results, statistically significant and supported by their analysis and interpretation, were evident. This project leaves a precedent, by marking a beginning so that with the indicated support and correct orientation, more tools of this type can be included in various areas of knowledge, as a structuring part of the class dynamics., Maestría, Magíster en Tecnologías Digitales Aplicadas a la Educación, 1° ed., INTRODUCCIÓN ................................................................................................... 16 1. PRESENTACIÓN DEL TRABAJO DE GRADO ............................................... 17 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................. 17 1.2 ALCANCE ........................................................................................... 19 1.3 JUSTIFICACIÓN ................................................................................. 19 1.4 OBJETIVOS ........................................................................................ 19 1.4.1 Objetivo general ................................................................................. 19 1.4.2 Objetivos específicos ......................................................................... 20 2 BASES TEÓRICAS ......................................................................................... 21 2.1 ESTADO DEL ARTE ........................................................................... 21 2.2 MARCO REFERENCIAL..................................................................... 23 2.2.1 Marco Teórico .................................................................................... 23 2.2.2 Marco Conceptual .............................................................................. 24 2.2.3 Marco Tecnológico ............................................................................. 26 3 DISEÑO METODOLÓGICO ............................................................................ 29 3.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN................................................................. 29 3.2 HIPÓTESIS ......................................................................................... 30 3.3 VARIABLES O CATEGORÍAS ............................................................ 30 3.4 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES O DESCRIPCIÓN DE CATEGORÍAS ................................................................................................. 31 3.5 POBLACIÓN Y MUESTRA ................................................................. 32 3.6 PROCEDIMIENTO .............................................................................. 33 3.7 INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE INFORMACIÓN .............. 35 3.8 TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE DATOS................................................ 35 4 CONSIDERACIONES ÉTICAS ........................................................................ 36 5 DIAGNÓSTICO INICIAL .................................................................................. 37 6 ESTRUCTURA DE LA PROPUESTA DE INTERVENCIÓN ............................ 40 6.1 PROPUESTA PEDAGÓGICA ............................................................. 40 6.2 COMPONENTE TECNOLÓGICO ....................................................... 45 6.3 IMPLEMENTACIÓN ............................................................................ 48 7 ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE DATOS ................................................. 51 7.1 RESULTADOS DE LA PRUEBA FINAL.............................................. 51 7.2 VERIFICACIÓN DE LA HIPÓTESIS ................................................... 56 7.2.1 Planteamiento, evaluación de la hipótesis y análisis aplicando el test CHI 2 a nivel general y pregunta por pregunta. ................................................ 56 7.2.2 Planteamiento, evaluación de la hipótesis y análisis aplicando el t student de muestras relacionadas. .................................................................. 61 8 CONCLUSIONES ............................................................................................ 65 9 LIMITACIONES ............................................................................................... 67 10 IMPACTO / recomendaciones / TRABAJOS FUTUROS ............................. 68 BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................... 69 Anexos ................................................................................................................... 72

[spa] El citoesqueleto de actina es un componente esencial de las células eucariotas que tiene un importante papel en muchas funciones biológicas básicas como el mantenimiento de la morfología, la migración, el tráfico intracelular, la adhesión, la división celular y la migración nuclear intercinética (INM) entre otros. Durante todos estos procesos, la actividad del citoesqueleto de actina está regulada por muchas proteínas conocidas como proteínas unidoras de actina (ABPs). En el tubo neural en desarrollo, los progenitores neurales presentan una polaridad apicobasal y una morfología alargada. El citoesqueleto de actina de estas células se ancla a la membrana apical, a través de las uniones adherentes mediadas por las N-cadherina y a la membrana basal, a través de las adhesiones focales mediadas por integrinas. Los núcleos de estos progenitores neurales adquieren diferentes posiciones a lo largo del eje apicobasal en función de la fase del ciclo en la que se encuentran gracias a un proceso conocido como migración nuclear intercinética (INM), que proporciona al tejido su apariencia pseudoestratificada. En la presente tesis hemos identificado proteínas unidoras de actina (ABPs) como la α-actinina4, la α-E-catenina, la α-N-catenina, la cortactina, la Dbnl y la vinculina, que se unen a la N-cadherina a través de su dominio de unión a la β-Catenina en el tubo neural de pollo. Nuestro trabajo se centra en la función de la vinculina durante el desarrollo de este neuroepitelio donde hemos observado que esta ABP se localiza mayoritariamente en las membranas apical y basal del tubo neural. La vinculina es una proteína esencial para la correcta distribución de actina a lo largo del eje apicobasal y para el mantenimiento de la morfología tisular del tubo neural. Además, en nuestro trabajo demostramos que el citoesqueleto de actina y la vinculina participan en la regulación de la INM, especialmente en la migración apical, y en la correcta progresión del ciclo celular de los progenitores neurales del tubo neural de pollo a través de su unión a las moléculas de adhesión.

There are few fluorescent staining techniques used in studies of the bacterial cell cycle, so that the staining characteristics of Neisseria gonorrhoeae were analyzed by the modified differential fluorescent staining method and the association with the presence of DNA and RNA. The purpose of this study was to provide evidence on the reaction mechanism of modified differential fluorescent staining method, as well as offering the technique as a complementary tool in studies of the cell cycle. The cell cycle was evaluated in isolates of N. gonorrhoeae transferring a culture in optimal growth to BHI broth with 5% human blood. Aliquots were taken to prepare slide spreads for staining, before and after treatment with DNase and RNase at 5 to 120 min intervals, and the McNemar test was applied to verify the association of the staining reactivity before and after enzyme treatment. In the cell cycle, the bacteria staining was predominantly slightly fluorescent orange and the color sequence in the cycle was yellow, orange and green. Cells which stained orange or yellow, after the enzyme treatment, changed to slightly fluorescent green or almost imperceptible green, with statistically significant association ( p < 0,05) between the yellow and orange slightly fluorescent or fluorescent with the presence of DNA and RNA. We conclude that DNA and RNA are involved in the yellow and orange dye by modified differential fluorescent staining method in the cell cycle of N. gonorrhoea

La realidad escolar amerita que los docentes desarrollen estrategias metodológicas que generen o susciten interés en los estudiantes. Por tal motivo, el Ministerio de Educación Nacional exige que las instituciones educativas propicien unas competencias básicas necesarias para su desarrollo que, le permitan logar un conocimiento profundo de los conceptos adquiridos para lograr competencias relacionadas con su formación académica y la vida cotidiana. El objetivo principal de este trabajo es, diseñar una propuesta didáctica que contribuya a la enseñanza - aprendizaje de manera crítica del concepto de ciclo celular y sus implicaciones en cáncer, en estudiantes de grado séptimo de la Institución Educativa Manuel Uribe Ángel en la ciudad de Medellín. El modelo teórico que se aplicó en el desarrollo de esta propuesta es el aprendizaje significativo crítico de Marco Antonio Moreira. Donde se considera que los principios planteados por este teórico, sirven como facilitadores para un aprendizaje significativo, puesto que, tiene en cuenta lo que el estudiante sabe previamente y crea una interacción entre él, el material didáctico y los nuevos conocimientos propuestos por el docente. Con esta propuesta se logró cautivar y motivar a los jóvenes de la institución Manuel Uribe Ángel, frente a una nueva forma de enseñar y de aprender, además, mejorar las competencias en el área de ciencias naturales en los temas relacionados con el ciclo celular. Esta propuesta también servirá de guía para otros docentes del ámbito local, nacional o internacional a quienes les parezca pertinente su aplicación tanto para este tema desarrollado como para otros relacionados. Abstract: School reality merits that teachers develop methodological strategies to create interest in students; The Ministry of Education requires that educational institutions provide basic skills necessary for their development for allowing them to achieve a deep knowledge of the concepts acquired to achieve competences related to daily life and their academic training. The main objective of this work is to design a didactic proposal to contributes to the teaching and learning in a critical way of the concept of cell cycle and its implications in cancer, in seventh grade, students of the Manuel Uribe Angel Educational Institution in the city of Medellín. The theoretical model that was applied in the development of this proposal is the significant critical learning of Marco Antonio Moreira. It is considered that the principles proposed by this theorist serve as facilitators for meaningful learning, since it takes into account what the student previously knows and creates an interaction between him, the didactic material and the new knowledge proposed by the teacher. With this proposal, I managed to captivate and motivate the young people of the Manuel Uribe Angel institution, facing a new way of teaching and learning, as well as improving the skills in the area of natural sciences in the cellular component. This proposal will also serve as a guide for other teachers at the local, national or international level that seem relevant to their application for the proposed topic or another. Maestría

Fil: Tossolini, Ileana del Rosario. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. La producción de proteínas recombinantes terapéuticas es una de las áreas de mayor crecimiento dentro de la industria farmacéutica. Las células de ovario de hámster chino (CHO) constituyen el sistema huésped de elección. El objetivo general del presente trabajo de Tesis fue la aplicación de las nuevas tecnologías de secuenciación masiva a la línea celular CHO-K1, con el fin de desarrollar estrategias de ingeniería genética mediante el análisis bioinformático de los datos generados. Se caracterizó el ciclo celular de células CHO-K1 cultivadas en un biorreactor, evidenciando un enriquecimiento del cultivo en células sincronizadas en fase G0/G1 en las etapas tanto del crecimiento exponencial tardío como hacia los últimos días de la fase estacionaria. Mediante el análisis del transcriptoma de células CHO K1 cultivadas en alta densidad se observó que los mayores cambios regulatorios ocurrieron durante la fase estacionaria. Por otro lado, se eligieron 13 genes con elevada expresión en ambas fases de cultivo en biorreactor; y con sus regiones promotoras se construyeron nuevos vectores de expresión para la producción de proteínas recombinantes. Esto constituye una alternativa al empleo de promotores virales, aprovechando la maquinaria transcripcional regulatoria endógena disponible en las condiciones de un cultivo en alta densidad celular con un medio de cultivo definido libre de suero fetal bovino. El resultado más promisorio se obtuvo con el promotor endógeno (Gen X), el cual mostró un comportamiento equivalente al promotor CMV en células HEK y CHO-K1. The production of therapeutic recombinant proteins is one of the fastest growing areas within the pharmaceutical industry. Chinese hamster ovary (CHO) cells are the main platform commonly used for the industrial production of therapeutic proteins. The main goal of this work was to apply next-generation sequencing technologies to CHO-K1 host cell line, in order to develop genetic engineering strategies from the bioinformatic data analysis. We analyzed cell cycle behavior during a typical industrial bioprocess of suspension-adapted CHO-K1 cells and we found a cell culture state characterized by G0/G1 phase synchronization, mainly during the late exponential growth phase and towards the last days of the stationary phase. We sequenced the transcriptome of CHO-K1 cells cultured in high density and we saw that most important regulatory changes happened throughout the stationary phase. In addition, we selected 13 genes with the highest levels of expression, during both culture stages. By using the promoter sequences of those genes we created new expression vectors for the production of recombinant proteins. This constitutes a promising alternative to the use of viral promoters and leverages the endogenous transcriptional regulatory machinery available during suspension cell cultures using a defined and serum free culture medium. The most promising result was obtained with the endogenous promoter (Gen X), which showed a similar transcriptional activity to CMV promoter, in HEK and CHO-K1 cells. Universidad Nacional del Litoral Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas

[ES] En Citricultura, un factor determinante de la producción es el cuajado del fruto, ya que determina el número de frutos que finalmente formarán la cosecha. El cuajado consiste en la transición del ovario de la flor a fruto en desarrollo. Este proceso sucede a través de la reactivación de la división celular en la corteza del ovario y la formación de las vesículas de zumo. En las variedades con semillas, el paso de flor a fruto se produce de un modo eficaz tras la fecundación del óvulo. Por otra parte, en las variedades partenocárpicas, el desarrollo del ovario se produce en ausencia de la fecundación. Pero la capacidad natural para reactivar la división celular de un modo satisfactorio es variable en función de la especie y la variedad. El ciclo celular está regulado por 2 grupos de proteínas: las ciclinas (CYCs) y las quinasas dependientes de las ciclinas (CDKs). Su actividad en las diferentes fases del ciclo celular es determinante para la división celular, pero se desconoce qué papel juegan en el cuajado de las variedades partenocárpicas de cítricos. En este TFM se estudia la actividad de las CYCs y las CDKs en las variedades de mandarina clementina “Marisol” y “Clemenules”, con una alta y baja capacidad partenocárpica respectivamente. Además, se estudia el efecto de las giberelinas y las citoquininas en la activación del ciclo celular, y, por tanto, en la promoción del cuajado de la mandarina “Clemenules”. Los resultados indican que tanto GA3 como 6-BA estimulan la fase G1/S y la fase G2/M del ciclo celular. No obstante, los efectos no se observan en el tamaño del fruto hasta varias semanas después., [EN] In Citriculture, fruit set is the key factor of yield, since it determines the number of fruits that will finally be harvested. The fruit set consists of the transition from the ovary of the flower to the developing fruit. This process happens through the reactivation of cell division in the ovary walls. In the seeded varieties, the flower-to-fruit transition is produced in an effective way after ovule fertilization. On the other hand, in parthenocarpic varieties, which the development of the ovary occurs in the absence of fertilization, the natural ability to reactivate cell division in a satisfactory manner is variable depending on species and varieties. The cell cycle is regulated by 2 groups of proteins: cyclins (CYCs) and cyclindependent kinases (CDKs). Its activity in the different phases of the cell cycle is determinant for cell division, but the role they play in the fruit set of parthenocarpic varieties is unknown. This Thesis studies the activity of CYCs and CDKs in the Clementine mandarins "Marisol" and "Clemenules", with a high and low parthenocarpic ability respectively. In addition, it is studied the effect of gibberellins and cytokinins in the activation of the cell cycle, and therefore in the promotion of fruit set. Results indicate that both GA3 and 6-BA stimulate the G1/S phase and G2/M phase of the cell cycle. However, the effects are not observed in the fruit size until several weeks later., [CA] En Citricultura, un factor determinant de la producció és el quallat del fruit, ja que determina el nombre de fruits que finalment formaran la collita. El quallat consistix en la transició de l'ovari de la flor a fruit en desenvolupament. Aquest procés té lloc a través de la reactivació de la divisió cel·lular en la corfa de l'ovari i la formació de les vesícules de suc. En les varietats amb llavors, el pas de flor a fruit es produïx d'una manera eficaç després de la fecundació de l'òvul. D'altra banda, en les varietats partenocàrpiques, el desenvolupament de l'ovari es produïx en absència de la fecundació. Però la capacitat natural per a reactivar la divisió cel·lular d'una manera satisfactoria és variable en funció de l'espècie i la varietat. El cicle cel·lular està regulat per 2 grups de proteïnes: les ciclines (CYCs) i les quinases dependents de les ciclines (CDKs). La seua activitat en les diferents fases del cicle cel·lular és determinant per a la divisió cel·lular, però es desconeix quin paper juguen en el quallat de les varietats partenocàrpiques de cítrics. En este TFM s'estudia l'activitat de les CYCs i les CDKs en les varietats de mandarina clementina “Marisol” i “Clemenules”, amb una alta i baixa capacitat partenocàrpica respectivament. A més, s'estudia l'efecte de les giberelines i les citoquinines en l'activació del cicle cel·lular, i, per tant, en la promoció del quallat de la mandarina “Clemenules”. Els resultats indiquen que tant GA3 com 6-BA estimulen la fase G1/S i la fase G2/M del cicle cel·lular. No obstant això, els efectes no s'observen en la grandària del fruit fins a unes quantes setmanes després.

[ES] La levadura es un modelo celular para comprender los mecanismos moleculares que emplean las células eucariotas para adaptarse a estreses químicos. Un importante mecanismo de señalización es el reconocimiento directo del compuesto químico por factores de transcripción que lleva a la activación de la expresión génica de diversos transportadores del tipo multidroga. En levadura existe una familia de activadores transcripcionales del tipo zinc-cluster que se dedican al reconocimiento de diferentes compuestos xenobióticos. Ácidos orgánicos como el ácido acético, sórbico o benzoico activan el sistema multidroga en levadura. En este proyecto queremos cuantificar de forma dosis-dependiente la respuesta a los tres ácidos con reporteros de luciferasa desestabilizada. Además, se investigará la función de factores de transcripción particulares (como Pdr1, Pdr3 y otros) en este proceso. El empleo de mutantes para estos activadores en ensayos de supervivencia nos indicará la función fisiológica de cada factor. Por otra parte, se pretende crear nuevas herramientas basadas en luciferasas desestabilizadas para la monitorización del ciclo celular durante las respuestas a estrés. Durante la adaptación a estrés químico se para transitoriamente el ciclo celular hasta la efectiva adaptación. Por lo tanto, la cuantificación de las células que reanudan el ciclo celular después de un insulto químico nos puede proporcionar una manera de cuantificar la eficiencia de su adaptación. Se fusionarán varios promotores naturales regulados por el ciclo celular, por ejemplo, CLN1, o regulados específicamente en células hijas, por ejemplo, DSE2, con el gen de luciferasa. Se comprobarán estas construcciones plasmídicas en levadura durante la adaptación a diferentes tipos y grados de estrés., [EN] Yeast is a cellular model to understand the molecular mechanism of the adaptation of eukaryotic cells to chemical stresses. An important signalling mechanism is the direct recognition of the chemical compound by transcriptional factors that leads to the activation of the gene expressions of various multidrugs transporters. In yeast there is a family of transcriptional activator of the zinc-cluster type that are engaged in the recognition of different xenobiotic compounds. Organic acids such as acetic, sorbic or benzoic acid activate the multidrug system in yeast. In this project we want to quantify in a dose-dependent manner the response to the three acids with reporters of destabilized luciferase. In addition, the function of particular transcription factors (such as, Pdr1, Pdr3, and others) will be investigated in this process. The use of mutants for these activators in survival trials will indicate the physiological function of each factor. On the other hand, we intend to create new tools based on destabilized luciferases for the monitorization of the cell cycle upon stress exposure. During the adaptation to chemical stress, the cell cycle is temporarily stopped until the effective adaptation. Therefore, the quantification of cells that resume the cell cycle after a chemical insult can provide us with a way to quantify the efficiency of their adaptation. Several natural promoters regulated by the cell cycle, for example, CLN1, or specifically regulated in daughter cells, for example, DSE2, will be fused with the luciferase gene. These plasmid constructions will be functionally tested in yeast during the adaptation to different types and degrees of stress.

Tesis Doctoral La proteína de choque térmico 40 (Hsp40) pertenece a la familia de proteínas asociadas con el estrés, también llamada familia dnaj. La Hsp40 ayuda a otra chaperona, Hsp70, a unirse a proteínas cliente estimulando su actividad atpasa. Las proteínas Hsp40 participan en diversos procesos celulares, como el plegamiento de proteínas, la translocación de proteínas a través de membranas, la transducción de señales celulares, la replicación de ADN y la degradación de proteínas. Toxoplasma gondii posee 36 miembros predichos de la familia Hsp40. Entre ellos, T. Gondii tiene un Hsp40 tipo I del grupo DNAJA que es altamente similar a la levadura (Ydj1) citosólica o a la de humano (Hdj2). Éstas Hsp40 tienen un motivo CXXX C-terminal que puede ser farnesilado, una modificación postraduccional que permite la asociación con la membrana del retículo endoplásmico y la superficie mitocondrial. Tgj1 es citosólico en condiciones de cultivo normales, pero se traslada al núcleo durante el tratamiento de choque térmico y el estrés bajo ph 8,1. Para determinar el papel biológico de Tgj1 y su motivo CXXX, se generó una línea estable de T. Gondii que carece del motivo CXXX (Tgj1ΔCXXX), usando la estrategia CRISPR/Cas9. Esta proteína mutante se encuentra en el citosol y el núcleo en condiciones normales. Los parásitos Tgj1ΔCXXX exhiben un defecto de su capacidad física durante el ciclo lítico, mostrando una invasión y replicación defectuosas. Tgj1ΔCXXX también tiene una alta tasa de diferenciación a bradizoíto bajo estrés alcalino. Además, los parásitos Tgj1ΔCXXX muestran un aumento en el nivel de eif2-alfa fosforilado en condiciones de crecimiento normal, probablemente debido al estrés del retículo endoplásmico de las proteínas desplegadas. En ensayos con ratones BALB/c, se infectaron con 100 taquizoítos del parental (cepa RH), los cuales murieron entre 8 y 12 días después de la infección, mientras que los ratones infectados con las mismas dosis de parásitos Tgj1ΔCXXX sobrevivieron. Una reinfección a los 30 días con la cepa RH a los ratones infectados (sobrevivientes) con Tgj1ΔCXXX también sobrevivió, lo que sugiere que la inoculación de los taquizoítos Tgj1ΔCXXX generó una inmunidad completa contra T. Gondii. El análisis de Co-IP y de espectrometría de masas indicó que Tgj1 interactúa con un gran número de proteínas involucradas en diferentes procesos biológicos y localización subcelular. El mutante Tgj1 es defectuoso al interactuar con estas proteínas, especialmente con las asociadas a la localización de membranas. Estos hallazgos abren la posibilidad de desarrollar una vacuna atenuada aprovechando esta mutación. The heat shock protein 40 (Hsp40) belongs to the stress-associated family of proteins also named dnaj-family. Hsp40s help another chaperone, Hsp70, to bind to the client proteins stimulating its atpase activity. Hsp40 proteins participate in diverse cellular processes such as protein folding, protein translocation across membranes, cellular signal transduction, DNA replication, and protein degradation. Toxoplasma gondii possess 36 predicted members of Hsp40 family. Among them, T. Gondii has a type I Hsp40 of DNAJA group that is highly similar to cytosolic yeast Ydj1 or human Hdj2. In addition to integrating the Hsp90/Hsp70 cycle, these Hsp40s have a C-terminal CXXX motif which is able to be farnesylated, a post-translational modification that allows association with the endoplasmic reticulum membrane and the mitochondrial surface. In the case of Tgj1 the CXXX motif is CRQQ. Tgj1 is cytosolic in normal culture conditions but translocate to the nucleus during heat shock treatment and ph8.1 stress. Tgj1 gene is essential. In order to determine the biological role of Tgj1 and its CXXX motif, a stable T. Gondii line that lacks the CXXX motif of Tgj1 (Tgj1ΔCXXX) was generated in RH strain using a CRISPR/Cas9 strategy. This mutant protein is found in the cytosol and nucleus in normal conditions. Tgj1ΔCXXX parasites exhibit a fitness defect of the lytic cycle, showing impaired invasion and replication. Tgj1ΔCXXX also has a high rate of bradyzoite differentiation under alkaline stress. In addition, Tgj1ΔCXXX parasites show an increase in the level of phosphorylated eif2-alpha in normal growth conditions, likely due to endoplasmic reticulum stress from unfolded proteins. BALB/c mice infected with 100 tachyzoites of the parental (RH strain) died between 8-12 days post-infection whereas mice infected with same doses of Tgj1ΔCXXX parasites survive. Reinfection of mice infected with Tgj1ΔCXXX 30 days postinfection with RH strain also survived suggesting that inoculation of Tgj1ΔCXXX tachyzoites generated a complete immunity against T. Gondii. Co-IP and mass spectrometry analysis indicated that Tgj1 interacts with a large number of proteins involved in different biological processes and subcellular localization. Mutant Tgj1 is defective at interacting with these proteins, especially with those associated to membranes and rhoptry localization. These findings open the possibility to develop an attenuated vaccine taking advantage of this mutation. Fil: Múnera López, Jonathan. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - Instituto Tecnológico Chascomús (IIB-INTECH); Buenos Aires, Argentina.

El presente trabajo tiene como objetivo elaborar un proyecto de aula con estrategias metodológicas, que permitan generar un aprendizaje significativo de los aspectos relacionados con la célula, el ciclo celular y su relación con la información genética en los estudiantes del grado 7° de la Institución Educativa Federico Carrasquilla. La propuesta inicia con la exploración de los conocimientos previos y un análisis de estos resultados para determinar las causas del bajo rendimiento académico y la falta de motivación por parte de los estudiantes, el trabajo se enfocó principalmente en el aprendizaje cooperativo como estrategia de enseñanza ya que ésta potencia las capacidades de los estudiantes con momentos o trabajos en grupo para que adquieran un aprendizaje significativo. Partiendo de este enfoque se proponen diferentes actividades relacionadas con el ciclo celular, teniendo en cuenta su relación con la información genética y las capacidades cognitivas de los estudiantes, su espíritu investigativo y las necesidades del entorno para que estos se apropien del tema, lo desarrollen y generen unos aprendizajes que les permitan ser competentes a la hora de resolver cualquier situación de la vida cotidiana. Con el presente proyecto de aula se espera proporcionarle a los estudiantes de la Institución Educativa Federico Carrasquilla las herramientas necesarias para que ellos puedan indagar sobre la realidad natural (relacionada con el medio ambiente y todas sus implicaciones), para adquirir nuevos conocimientos en ciencias naturales, de igual forma implementar actividades lúdicas aplicadas a la vida cotidiana que despierten la curiosidad, el interés y la motivación por los temas propuestos. The present work aims to elaborate a classroom project with methodological strategies that allow a significant learning of aspects related to the cell, the cell cycle and its relation with genetic information in 7th grade students of the Educational Institution Federico Carrasquilla. The proposal begins with the exploration of the previous knowledge and an analysis of these results to determine the causes of the low academic performance and the lack of motivation from the students, the work focused mainly on the cooperative learning as a teaching strategy since it strengthens the students' abilities with moments or group work to acquire meaningful learning. Based on this approach, different activities related to the cell cycle are proposed, taking into account their relationship with the genetic information and cognitive abilities of the students, their investigative spirit and the needs of the environment so that they take ownership of the topic, develop it and generate learning that allows them to be competent when it comes to solving any situation of everyday life. With the present classroom project it is expected to provide the students of the Federico Carrasquilla Educational Institution with the necessary tools so that they can inquire about the natural reality (related to the environment and all its implications), to acquire new knowledge in natural sciences, likewise implement play activities applied to everyday life that arouse curiosity, interest and motivation for the proposed topics.

Estudios epidemiológicos y experimentales demostraron que el estrés puede influenciar el crecimiento tumoral. Sin embargo, los mecanismos implicados son poco conocidos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la correlación existente entre la desregulación de mediadores neuroinmunoendocrinos inducidos por la exposición a estrés crónico y la evolución y comportamiento biológico del linfoma T EL4 creciendo in vivo. Los animales estresados, cuyo eje neuroinmunoendocrino se encontró desregulado, mostraron una mayor velocidad de crecimiento tumoral y mayor número de metástasis espontáneas. Adicionalmente, los tumores provenientes de ratones estresados mostraron aumentada expresión de ARNm de proteínas que promueven el ciclo celular y de marcadores de invasión tumoral. Por otra parte, los ratones estresados presentaron una disminución en la respuesta inmune antitumoral, evidenciada por una menor actividad de células NK y citotóxica específica. Experimentos de transferencia adoptiva de linfocitos indicaron un rol crucial del sistema inmune en la progresión tumoral inducida por estrés. Los antidepresivos son fármacos que se utilizan en pacientes con cáncer para aliviar los desórdenes del ánimo asociados a este tipo de patología. Por ello, en este trabajo se estudió el efecto de dos inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina sobre la influencia del estrés en la evolución tumoral. Nuestros resultados evidenciaron un importante efecto beneficioso del tratamiento con fluoxetina o sertralina contrarestando los efectos del estrés sobre la progresión del linfoma EL4. En su conjunto, estos resultados sugieren que el estrés crónico altera mediadores neuroinmunoendocrinos que promueven el crecimiento tumoral. En este efecto estarían involucrados la regulación de proteínas relacionadas con la progresión y/o arresto del ciclo celular y la migración e invasión celular, y la respuesta inmune antitumoral. Además, la prevención de estos mecanismos con el tratamiento con fluoxetina o sertralina señala el posible beneficio del tratamiento farmacológico del estrés como co-adyuvante de la terapia antitumoral. Epidemiologic and experimental studies have demonstrated that stress can influence tumor growth. However, the implicated mechanisms are poorly known. The aim of the present study was to investigate the correlation between neuroimmune-endocrine mediators deregulation induced by chronic stress exposure and the evolution and biological behavior of the T cells lymphoma EL4 in vivo. Stressed mice, whose neuroimmune-endocrine axis was found to be deregulated, showed a higher tumor growth rate and number of spontaneous metastases. Moreover, tumors from stressed mice showed an enhanced ARNm expression of proteins that promote cell cycle and tumor invasion markers. Otherwise, stressed animals showed an impaired antitumor immune response as a decrease in NK cells and cytotoxic activity was found. Adoptive lymphoid cells transfer experiments indicated that the reduced immune response in stressed animals influenced the metastatic capacity of tumor cells. Adoptive lymphoid cells transfer experiments indicated a crucial role of the immune system in tumor progression under stress situations. Antidepressants are used in cancer patients to alleviate mood disorders associated to this pathology. Thus, we studied the effect of two selective serotonin reuptake inhibitors on stress induced tumor progression. Our results indicated an important beneficial effect of fluoxetine and sertraline treatment counteracting stress effects on EL4 lymphoma progression. Altogether, these results suggest that chronic stress alters neuroimmune-endocrine mediators that promote tumor growth. Regulation of proteins related to cell cycle progression and/or arrest, tumor migration and invasion, and antitumor immune response would be involved in this effect. Furthermore, the prevention of these mechanisms with fluoxetine or sertraline signals the possible benefit of pharmacological treatment of stress as a co-adjuvant of antitumor therapy. Fil: Di Rosso, María Emilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

[ES] El cáncer es una enfermedad poligénica, altamente heretogénea y de causas diversas. A partir del año 2000 se propusieron diferentes características distintivas (“cancer hallmarks”) que son comunes a los distintos tipos de cáncer. Entre ellas el valor de pH intra- y extracelular, más alcalino en el citosol y más ácido en el exterior que en células normales. El pH intracelular alto está relacionado con la regulación del crecimiento celular y la proliferación. Uno de los elementos involucrados en la regulación del pH intracelular es el sistema de expulsión de protones del citoplasma, que en caso de la levadura es la bomba de protones, o H + -ATPasa de la membrana plasmática Pma1, mientras que en células animales es NHE1, un antiportador de H + /Na+ menos potente que Pma1. Se ha demostrado que la expresión ectópica de Pma1 en fibroblastos de ratón aumenta el pH intracelular y causa transformación tumorogénica. TORC1, un complejo regulador del crecimiento en todos los eucariotas, está activado por pH intracelular alto, explicando el efecto de este parámetro sobre el crecimiento celular. En este trabajo se propone un modelo en Saccharomyces cerevisiae para estudiar el conjunto de funciones reguladoras de la homeostasis del pH, teniendo en cuenta los elementos descritos anteriormente. Para estudiar la relación entre el pH intracelular y el crecimiento se estudiaron los diferentes perfiles de crecimiento en la cepa silvestre y en mutantes con pérdida de función, en los cuales se compararon los valores obtenidos para la velocidad de crecimiento, el rendimiento y la duración de la fase Lag de las levaduras al suministrarles ácidos débiles. También se determinó el valor de pH intracelular de las cepas de interés y su variación al tratarlas con ácidos débiles como el acético. Por otro lado, para estudiar el papel de la fosfatasa Sit4 como posible regulador de la bomba de protones Pma1, se analizaron a través de la técnica Western Blot los niveles de fosforilación de los residuos Ser507 y Ser899 de Pma1 en la cepa silvestre y en la cepa mutante sit4Δ con presencia y ausencia de glucosa. Sit4 es regulada directamente por el complejo TOR y se estima que pueda tener un papel importante en la regulación de la homeostasis de pH intracelular. Por último se estudió el papel del gen SSD1 como estabilizador de los mensajeros de las ciclinas de la fase G1 del ciclo celular, como posible diana de la regulación de la proliferación., [EN] Cancer is a polygenic and highly heterogeneous disease with diverse causes. Since 2000, different cancer hallmarks that are common to different types of cancer have been proposed. Among them is the intracellular and extracellular pH value, more alkaline in the cytosol and more acid in the exterior than normal cells. High values of intracellular pH are related to the regulation of cell growth and proliferation. One of the main elements involved in the pHi regulation is the proton expulsion system, which in the case of yeast is the proton pump, or H + - ATPase of the plasma membrane Pma1, whereas in animal cells it is NHE1, a H + /Na+ antiportrier less potent than Pma1. Ectopic expressión of Pma1 in mouse fibroblasts has been shown to increase intracellular pH and cause tumorogenic transofrmation. TORC1, a growth regulator complex in all eukaryotes is activated by high intracellular pH, explaining the effect of this parameter in cell growth. In this study, we propose a model in Saccharomyces cerevisiae, to study the set of regulatory functions of pH homeostasis, taking into account the elements described above. In order to study the relationship between intracellular pH and growth, different growth profiles were studied in the wild strain and mutants with loss of function, in which the values obtained for growth rate, yield and lag phase were compared between yeasts by supplying them with weak acids. The intracellular pH value of the strains of interest and their variation were also determined by treating them with weak acids, such as acetic acid. On the other hand, to study the role of the phosphatase Sit4 as a possible regulator of the proton pump, the phosphorylation levels of residues Ser507 and Ser899 of Pma1 were analyzed through Western Blot technique in the wild strains and sit4Δ with presence and absence. Sit4 is directly regulated by the TOR complex and is estimated to have an important role in the regulation of pHi homeostasis. Finally, the role of the SSD1 gene as a stabilizer of cyclin messengers of the G1 phase of the cells cycle was studied as a possible target for the regulation of proliferation.

Las células madre embrionarias (CME) son células derivadas del macizo celular interno del blastocisto de mamíferos. Poseen la capacidad de auto-renovarse indefinidamente en cultivo mientras que, ante estímulos adecuados, pueden dar origen a todos los tipos celulares del organismo adulto, propiedad conocida como pluripotencia. En esta tesis, estudiamos la relación de las propiedades fundamentales de CME de ratón con diversos aspectos del ciclo celular. En primer lugar, caracterizamos en detalle la dinámica poblacional de proliferación celular, tanto en estado indiferenciado naïve como durante la salida del mismo. Demostramos que la duración de la fase G1 del ciclo celular está pre-determinada en gran medida por la célula parental. Asimismo, determinamos que durante la salida del estado indiferenciado naïve la duración total del ciclo celular, de la fase G1 y de las fases S/G2/M disminuye, en contraposición con lo que ocurre en tipos celulares más diferenciados. Por otra parte, estudiamos la relación entre los cambios transcripcionales que ocurren durante la diferenciación celular con dos procesos en los que ocurre una reconfiguración de la estructura epigenética: la replicación del ADN y la división celular. Mediante la generación de cultivos sincrónicos y un protocolo de diferenciación dirigida, mostramos que las células comienzan a modificar sus patrones de expresión génica en la misma generación que recibe la señal de diferenciación, demostrando que la división celular no es un proceso indispensable para el inicio de los cambios transcripcionales requeridos para la salida del estado indiferenciado naïve. Por otra parte, determinamos que la inhibición de la replicación del ADN reprime severamente el cambio transcripcional durante la diferenciación. Dicho bloqueo en el cambio del perfil de expresión génica fue independiente de la activación de las vías de daño al ADN, evaluado mediante la generación de una línea knock out para p53 con la tecnología de CRISPR/Cas9. Nuestros resultados sugieren que la replicación del ADN podría ser necesaria para que ocurra el cambio en los programas transcripcionales durante la salida del estado indiferenciado, indicando que la síntesis de ADN podría estar acoplada a la modificación de los patrones epigenéticos durante la diferenciación celular. Este resultado podría contribuir a una explicación mecanística para la reciente observación de que las CME sólo responden a señales de diferenciación durante la fase G1 del ciclo celular, es decir, antes de la replicación del ADN. Creemos que los resultados de este trabajo pueden contribuir al entendimiento de los procesos moleculares que controlan las propiedades fundamentales de CME, lo cual no sólo es importante dentro del área de la biología del desarrollo, sino además para su futura aplicación en el área de terapias regenerativas. Embryonic stem cells (ESCs) are cells derived from the inner cell mass of the mammalian blastocyst. They can indefinitely self-renew in vitro while, upon certain stimuli, they can originate all the cell types of the adult organism, property known as pluripotency. In this thesis, we studied the relation between the fundamental properties of mouse ESCs (mESCs) and different aspects of the cell cycle. First, we characterized in depth the population dynamics of cell proliferation, both while maintaining the pluripotent state and during the transition to a more developmentally advanced state. We show that the G1 phase length is largely pre-determined by its parental cell. Also, we determined that the length of the total cell cycle and of the G1 and S/G2/M phases decreases as cells exit the naïve pluripotent state, contrary to what happens in more developmentally advanced cell types. On the other hand, we analyzed the relation between the changes of transcriptional profiles as cells exit naïve pluripotency with two processes in which there is a major reorganization of the structure of chromatin: DNA replication and cell division. By generating synchronized cultures of mESCs as they exit naïve pluripotency, we show that cells begin to modify their levels of gene expression within the same cell generation that received the differentiation signal. Thus, we demonstrate that cell division is not a fundamental process in order to allow new transcriptional programs as cells differentiate. Next, we determined that inhibition of DNA replication severely impairs the change of transcriptional profiles during cell differentiation. This impairment was independent of the activation of the DNA damage response pathway, as evaluated by a p53 knockout cell line obtained by the CRISPR/Cas9 technology. Our results indicate that DNA replication could be necessary for the switch in transcriptional programs during naïve pluripotency exit, suggesting that this process could be coupled to the epigenetic transformation that takes place during cell differentiation. These results could contribute to a mechanistic explanation to the observation that pluripotent stem cells only respond to differentiation signals within the G1 phase, that is, before DNA replication. We believe that the results obtained in this work contribute to the understanding of the molecular processes that control the fundamental properties of pluripotent stem cells, which not only is important in the field of developmental biology, but it is also relevant for their future application in regenerative medicine. Fil: Waisman, Ariel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Introducción: la esponja Leucetta aff. floridana produce compuestos con actividad antiproliferativa diferencial en células tumorales de pulmón y mama, la cual no ha sido explorada en otras líneas tumorales y se desconoce si su potencial antiproliferativo está relacionado con la progresión de células a través del ciclo celular. Objetivo: evaluar el potencial antiproliferativo, anticlonogénico y el efecto sobre el ciclo celular de los extractos hexánico y metanólico de la esponja Leucetta aff. floridana del Caribe colombiano en las líneas celulares leucemoides Jurkat y K562. Métodos: la viabilidad y proliferación celular se determinaron mediante el ensayo de azul de tripano a 0, 24, 48, 72 y 96 h. La eficiencia de clonación y el efecto sobre el ciclo celular se evaluaron a 10 y 100 µg/mL. Los datos se analizaron usando ANOVA multifactorial y la prueba Tukey. Resultados: el extracto hexánico presentó actividad antiproliferativa en ambas líneas celulares siendo Jurkat más sensible que K562, lo cual se corroboró con los ensayos de clonogenicidad. Este extracto también mostró un efecto de acumulación de células Sub-G1 dependiente de la dosis, el cual fue diferencial entre las dos líneas celulares. La duración del tratamiento con el extracto hexánico no fue significativa para las células K562 pero sí para la línea celular Jurkat. Además, el porcentaje de acumulación de las células Sub-G1 fue mayor para células K562 comparado con Jurkat. El extracto metanólico presentó un efecto antiproliferativo similar al hexánico, pero fue más potente con la menor concentración (10 µg/mL) en la clonogenicidad de K562. El efecto sobre el ciclo celular, también fue similar al hexánico, pero la duración del tratamiento no fue significativa en la acumulación de células en Sub-G1. Conclusiones: los resultados muestran el potencial diferencial de los extractos sobre el ciclo celular de las líneas leucemoides evaluadas.Introduction: Leucetta aff. floridana sponge produces compounds with differential antiproliferative activity on lung and breast cancer. Nevertheless, this activity in other tumour cell lines has not yet been tested and it remains unknown whether its antiproliferative potential is correlated with the cell progression through cell cycle or not. Objective: To evaluate the antiproliferative and anticlonogenic potential and the effect of methanolic and hexanic extracts of sponge L. aff. floridana from the Colombian Caribbean region on the cell cycle of Jurkat and K562 leukemoid cell lines. Methods: The viability and antiproliferative effect were determined using trypan blue assay at 0, 24, 48, 72 and 96 hours. Clongenicity and effect on cell cycle were assayed at 10 and 100 µg/mL Data obtained were analyzed using multifactorial ANOVA and Tukey's test. Results: The hexanic extract presented antiproliferative activity in both Jurkat and K652 cell lines; Jurkat being more sensitive than K652. These results were confirmed by clongenicity assays. The hexanic extract also showed its effect on the dose-dependent accumulation of Sub-G1 cells, although it was different in the two cell lines. The duration of the treatment with the hexanic extract was not significant for K562 cell line, but it was for Jurkat cells. Additionally, the percentage of cell accumulation in Sub-G1 was higher in K562 than in Jurkat cells. The methanolic extract showed antiproliferative effect similar to that of the hexanic extract, but more potent at the lowest concentration (10 µg/mL) in K652 cell line clonegenicity. The effect on cell cycle was also similar to that of the hexanic extract, but in this case the duration of treatment was not significant in the cell accumulation in Sub-G1. Conclusions: Altogether these results show the differential potential of the extracts on the cell cycle of the evaluated leukemoid cell lines.

[ES] El cáncer de mama es uno de los tumores más frecuentes entre las mujeres de todo el mundo.Avances recientes tanto en diagnóstico como en tratamiento están dando resultados prometedores con un aumento notable de la supervivencia. Sin embargo, la recurrencia de esta enfermedad es un obstáculo para su curación. Actualmente entorno a un 40% de todos los pacientes con cáncer de mama recaen y entre ellos, un 60-70% sufren metástasis. El cáncer de mama triple negativo es un tipo de cáncer muy agresivo, con alto grado de metástasis y un pobre pronóstico. Estudios anteriores han analizado los mecanismos de respuesta a los tratamientos actuales como la Doxorrubicina, a través del análisis de la expresión de genes y miRNAs en líneas celulares MDA-MB-231 y MDA-MB-468. Basándonos en estos estudios, el siguiente Trabajo de fin de grado evaluará algunos de estos resultados a través de líneas celulares MDA-MB-231 resistentes a la Doxorrubicina generadas a partir de líneas sensibles. Para ello, se analizará la expresión diferencial de determinados miRNAs y/o genes entre líneas celulares sensibles y resistentes tratadas con Doxorrubicina con el objetivo de caracterizar y comprender los mecanismos de resistencia presentes en estos tipos celulares y su diferente comportamiento en cuanto a viabilidad, invasión y características cancerígenas se refiere., [EN] Breast cancer is the most common cancer in women worldwide. Recent advances in both diagnosis and treatment are giving results with a significant improvement in the survival of patients. Nevertheless, cancer recurrence is an obstacle to healing. Nowadays, around 40% of patients with this disease relapse and amongst them 60-70% metastasize. Triple-negative breast cancer is a very aggressive type with high rate of metastasis and low prognosis. At the present time, this kind of cancer is treated only with chemotherapy. However, there are patients who are treatment resistant. The aim ofthis work was to analyse the miRNAs (hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-27b-5p, hsa-miR- 29b-1-5p, hsa-miR-424-3p, hsa-miR-1972, hsa-miR-23a-5p, hsa-miR-1275) and the genes (CDC25A, SIRT1, CCNE2, E2F1, CDK2, GMNN, BCL2, E2F3) as possible mechanisms implicated in the resistance of the doxorubicine. In addition, miRNA hsa-miR-200c-3p expression was evaluated as a possible modulator of CCNE2 and CDK2. To carry out these studies, the cells lines MDA-MB-231 and in the same line with doxorubicin resistance were used. Both lines were cultured with 5µM of doxorubicine during 24 hours. Finally, the expression profiles of the miRNAs and genes were measured by RT-PCR. The obtained results did not show a possible relationship between the miRNAs and doxorubicin resistance. However a differential expression of the genes CDK2 and CCNE2 was observed between resistant and sensitive cell lines. These results suggest the possible involvement of these genes in the mechanism of resistance. Nevertheless, the analysis of the miRNA has-miR- 200c-3p did not show a regulation of CCNE2 and CDK2 by our cellular conditions performed.

The likely antineoplastic effect of extract of Annona cherimola Mill "chirimoya", is controversial. Therefore, such as neoplasia involves an alteration of the cell cycle (CC) of the affected tissue; an approach to evaluate the antineoplastic effect of extract would be exposing it to a cell population with the altered CC. The aim of this study was to evaluate the effect of alcoholic extract from the pulp of the fruit of A. cherimola Mill on the CC of the biosensor Vicia faba L. "bean" exposed to the food coloring tartrazine 0.1%, 0.3% and 0.5%. An experimental design was random, with six treatments. The cell population studied was of V. faba L. (2n = 12), initially submitted to tartrazine to induce the alteration of CC and then exposed to the extract of the fruit of A. cherimola Mill to assess the likely regulation of the CC. The indicator of alteration and cellular regulation was the mitotic index (MI) of V. faba L. To determine the MI, cells were subjected to the protocol Tjio and Levan (1968), then it was observed an average of 1500 cells by treatment, in a light, field microscope light, 400 x and 1000 X. The data were submitted to Anova and Tukey tests (α = 0.05). It was found that the alcoholic extract of the pulp of the fruit of A. cherimola Mill if it regulates the cell cycle of V. faba L., altered by tartrazine, by generating an MI of 19.2 ± 2.0 finding significant difference. Therefore the summary would provide components that contribute in cell recovery mechanisms. El probable efecto antineoplásico del extracto de Annona cherimola Mill "chirimoya", es controversial. Por tanto, como la neoplasia implica una alteración del ciclo celular (CC) del tejido afectado; una aproximación para evaluar el efecto antineoplásico del extracto sería exponiéndolo ante una población celular con el CC alterado. El objetivo del estudio fue valuar el efecto del extracto alcohólico de la pulpa del fruto de A. cherimola Mill en el CC del biosensor Vicia faba L. "haba" expuesto al colorante alimentario tartrazina al 0,1%, 0,3% y 0,5%. Se usó un diseño experimental al azar, con seis tratamientos. La población celular estudiada fue de V. faba L. (2n = 12), sometida inicialmente a la tartrazina para inducir la alteración del CC y luego expuesta al extracto del fruto de A. cherimola Mill para evaluar la probable regulación del CC. El indicador de la alteración y regulación celular fue el índice mitótico (IM) de V. faba L. Para determinar el IM, las células se sometieron al protocolo de Tjio y Levan (1968), luego se observó un promedio de 1500 células por tratamiento, en un microscopio de luz, de campo claro, a 400X y 1000X. Los datos se sometieron a las pruebas de Anova y Tukey (α = 0,05). Se halló que el extracto alcohólico de la pulpa del fruto de A. cherimola Mill si regula el ciclo celular de V. faba L., alterado por tartrazina, al generar un IM de 19,2 ± 2,0 hallándose diferencia significativa. Así, el extracto presentaría componentes que coadyuvan en mecanismos de recuperación celular.

El cáncer es una de las principales causas de morbilidad y muerte a nivel mundial. Entre estas neoplasias el Cáncer de Colón (CC) ocupa el cuarto lugar en incidencia y mortalidad. Debido a que su etiología muestra una correlación directa con hábitos dietarios no saludables, se ha ampliado la búsqueda de constituyentes alimenticios puedan contribuir a la prevención y tratamiento de esta enfermedad. Algunos estudios de extractos y fitoquímicos de especies del género Passiflora L. han mostrado actividad biológica promisoria. Sin embargo, es poca la investigación sobre la compleja mezcla de fitoquímicos de especies como Passiflora edulis que podrían interactuar y presentar actividad anticancerígena. El objetivo de este trabajo fue evaluar propiedades biológicas del extracto acuoso del fruto y el extracto etanólico de hojas de maracuyá en células de adenocarcinoma de colon Caco-2, SW480 y su derivada metastásica SW620, y sobre la línea celular no tumoral CHO-K1. Se realizó la marcha fitoquímica preliminar de ambos y se evaluó el efecto sobre la viabilidad celular mediante MTT y exclusión del colorante azul de tripano, el efecto antiproliferativo por sulforodamina B y eficiencia de clonación, el efecto inductor de muerte celular y sobre el ciclo celular por citometría de flujo, la actividad de caspasa 3 y la proporción de glutatión oxidado como medida del estrés oxidativo. Se encontró un mejor efecto del extracto etanólico con una Dosis letal media (DL50) de 167,62μg/ml a las 24 horas y una concentración umbral en proporciones superiores a 229μg/ml, una inhibición de la proliferación de hasta 50% a las 24 de horas de tratamiento con la DL50 y una reducción en la eficiencia de clonación relativa de hasta 76.6% para una concentración de 160.3μg/ml. Se observó un incremento en el número de células necróticas en cultivos tratados durante 48 horas y un incremento en las poblaciones SubG1 y G2/M. Además se aumentó la actividad de Caspasa3 y se probó una acumulación del glutatión oxidado y una selectividad celular con un mayor efecto en células SW620 y menor en células CHO-K1. En su conjunto, esta investigación sugiere que P. edulis es una fuente potencial de compuestos fitoquímicos con propiedad antiproliferativa y se constituye como una aproximación a la aplicación biotecnológica para el uso de esta especie. Abstract: Cancer is a major cause of morbidity and death worldwide. Among these neoplasms colon cancer (CC) is ranks fourth in incidence and mortality. Because its etiology shows a direct correlation with unhealthy dietary habits, it has expanded the search for food constituents can contribute to the prevention and treatment of this disease. Some studies of extracts and phytochemicals species of P. edulis have shown promising biological activity. However, there is little research on the complex mixture of phytochemicals Passiflora edulis species as they could interact and present anticancer activity. The aim of this study was to evaluate biological properties of aqueous extract of the fruit and the ethanol extract of leaves in the adenocarcinoma of colon cell lines Caco-2, SW480 and its metastatic derived SW620, and the non-tumor cell line CHO-K1. A preliminary phytochemical analysis was performed and the effect on cell viability was evaluated by MTT and exclusion of trypan blue dye methods. Sulforhodamine B and clonogenic assay were employed using the LD50 to determinate the antiproliferative effect. Inducing cell death effect and the cell cycle was assessed by flow cytometry , caspase 3 activity was performed to. Finally, the proportion of oxidized glutathione was used like a measure of oxidative stress. A better effect of the ethanol extract was found with a LD50 of 167,62 μg/ml at 24 hours of treatment and there was a threshold concentration in excess of 229 μg/ml proportions, inhibition of proliferation up to 50% at 24 hours of treatment was found with LD50 and a reduction in relative cloning efficiency 76.6% up to a concentration of 160.3 μg/ml. An increase in the number of necrotic cells in cultures treated for 48 hours and an increase in subG1 and G2/M populations were observed. In addition Caspasa3 activity was increased and an accumulation of oxidized glutathione and cell selectivity was tested with a greater effect on SW620 and smaller cells in CHO-K1 cells. Taken together, this research suggests that P. edulis is a potential source of phytochemical compounds with antiproliferative source property and establishes itself as an approach to biotechnological application for the use of this species. Maestría

Las vías de señalización celulares son las encargadas de transmitir la información sobreel estado del ambiente intra e extracelular. Con esta información, las células "tomandecisiones" que afectan su destino, tales como dividirse, arrestarse, diferenciarse, o morir. A su vez, es común que células genéticamente idénticas, expuestas al mismo ambientetomen decisiones diferentes. Así, el objetivo general de mi tesis doctoral es, mediante unenfoque de Biología de Sistemas, estudiar los mecanismos moleculares que median estastomas de decisión de destino celular y el origen de la variabilidad observada en esa tomade decisión. Para esto, utilizamos a la respuestas a la feromona sexual de la levadura S.cerevisiae como sistema modelo. Los destinos celulares pueden ser clasificados en distintos fenotipos morfológicos, quedependen de la dosis del estímulo. Sin embargo, encontramos que dichos fenotipos coexistenen concentraciones de feromona intermedia, mostrando así una gran variabilidaden la población. Las causas de esta variabilidad son múltiples y actúan simultáneamente:influye la posición del ciclo celular, el tipo celular (madre o hija), la capacidad de lascélulas de sintetizar más o menos proteínas en general, y su "historia". Seguidamente, nosenfocamos en un fenotipo complejo observado a concentraciones intermedias de feromona:primero se arresta el ciclo celular y se desarrolla una proyección de apareamiento, paraluego reentrar en el ciclo celular. Descubrimos que esta desensibilización está mediadapor una rama estimulatoria del ciclo celular (paralela a la clásica inhibitoria) que se activatardíamente y depende del factor de transcripción Kar4. Asimismo estudiamos lasconsecuencias que el desarrollo de este fenotipo tiene sobre la progenie. Utilizamos paraesto experimentos genéticos combinando con microscopía de epifluorescencia y confocal,modelado matemático. Signal transduction pathways register and transmit information about the intra- andextracellular environment. Using this information, cells "make decisions" that affect theirfate, leading to division, cell cycle arrest, differentiation or death. At the same time, it iscommonly found that genetically identical cells, exposed to the same conditions, behavedifferently. Therefore, the general goal of my thesis is to study the molecular mechanismsthat govern a cell-fate decision system, and the origin of the observed cell-to-cell variability. For this studies, we used the pheromone response pathway in yeast S. cerevisiae as a modelsystem. Cell fates may be classified in different morphological phenotypes, which depend on theconcentration of the stimulus. However, we found that at intermediate doses of pheromone,some of the phenotypes coexist, generating a large population variability. We found severalcauses of this variability, which act simultaneously: cell cycle position, cell type (mother ordaughter cell), the ability of cells to express genes into proteins, and the cell history. Subsequently,we focused our efforts in exploring a particular phenotype/behavior that occursat intermediate doses of pheromone: first, cells arrest the cell cycle and grow a matingprojection, and then, cells reenter into the cell cycle. We found that this desensitization ismediated by a pathway branch that stimulates the cell cycle (opperating in parallel withthe classic inhibitory branch) and that it requires the transcription factor Kar4. We thenstudied the consequences of this behavior on the progeny. We used genetic experimentscombining fluorescence and confocal microscopy with mathematical modeling. Fil: Grande, Alicia Viviana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Este es el post-print que se ha publicado de forma definitiva en: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0006295216301423 A series of compounds containing the sulfonamide scaffold were synthesized and screened for their in vitro anticancer activity against a representative panel of human cancer cell lines, leading to the identification of N-(2-methyl-1H-indol-5-yl)-1-naphthalenesulfonamide (8e) as a compound showing a remarkable activity across the panel, with IC50 values in the nanomolar-to-low micromolar range. Cell cycle distribution analysis revealed that 8e promoted a severe G2/M arrest, which was followed by cellular senescence as indicated by the detection of senescence-associated b-galactosidase (SA-b-gal) in 8e-treated cells. Prolonged 8e treatment also led to the onset of apoptosis, in correlation with the detection of increased Caspase 3/7 activities. Despite increasing c-H2A.X levels, a well-established readout for DNA double-strand breaks, in vitro DNA binding studies with 8e did not support interaction with DNA. In agreement with this, 8e failed to activate the cellular DNA damage checkpoint. Importantly, tubulin staining showed that 8e promoted a severe disorganization of microtubules and mitotic spindle formation was not detected in 8e-treated cells. Accordingly, 8e inhibited tubulin polymerization in vitro in a dose-dependent manner and was also able to robustly inhibit cancer cell motility. Docking analysis revealed a compatible interaction with the colchicine-binding site of tubulin. Remarkably, these cellular effects were reversible since disruption of treatment resulted in the reorganization of microtubules, cell cycle re-entry and loss of senescent markers. Collectively, our data suggest that this compound may be a promising new anticancer agent capable of both reducing cancer cell growth and motility. This is the peer reviewed version of the following article: Aceves-Luquero, C., Galiana-Roselló, C., Ramis, G., Villalonga-Planells, R., García-España, E., Fernández de Mattos, S. et al. (2016). N-(2-methyl-indol-1H-5-yl)-1-naphthalenesulfonamide : a novel reversible antimitotic agent inhibiting cancer cell motility. Biochemical Pharmacology, vol. 115, pp. 28-42, which has been published in final form at https://doi.org/10.1016/j.bcp.2016.06.016 Este es el post-print del siguiente artículo: Aceves-Luquero, C., Galiana-Roselló, C., Ramis, G., Villalonga-Planells, R., García-España, E., Fernández de Mattos, S. et al. (2016). N-(2-methyl-indol-1H-5-yl)-1-naphthalenesulfonamide : a novel reversible antimitotic agent inhibiting cancer cell motility. Biochemical Pharmacology, vol. 115, pp. 28-42, que se ha publicado de forma definitiva en https://doi.org/10.1016/j.bcp.2016.06.016

El objetivo de esta revisión es actualizar la situación actual del cáncer oral, así como de otros aspectos en general de esta enfermedad y del mecanismo genético y tumorogénesis del cáncer. Para ello hemos revisado los trabajos publicados de los últimos diez años sobre todos los aspectos generales del cáncer oral, destacando, entre otros, los referentes a factores de riesgo, diagnóstico y tratamiento. Las conclusiones más importantes de esta revisión han sido que, el cáncer oral, es un problema que aumenta con la edad, a partir de los 50 años en adelante, y que el 90% de los tumores que aparecen en boca son carcinomas mucoepidermoides de células escamosas. Es una enfermedad multifactorial, pero dentro de los factores de riesgo, se destacan el papel del tabaco y el alcohol. La prevalencia del cáncer oral sigue en aumento, por lo que el papel del odontólogo es primordial para la detección precoz de estos procesos, realizando una correcta historia clínica y exploración extra e intraoral, consiguiendo disminuir su morbimortalidad. The aim of this revision was to update the actual situation of oral cancer, and other important aspects of this illness explaining how the genetic mechanism and tumorogenesis in cancer works. We have reviewed the articles published in the last ten years about the general aspects of oral cancer, distinguishing the risk factors, diagnosis and treatment. The most important conclusions of this review, in relation to oral cancer, have been that this illness is a problem which increases with age, from 50 years old onwards, and that around 90% of the tumours that appear in the oral cavity are squamous cell carcinomas. Oral cancer is multifactorial, but the two most important risk factors are tobacco and alcohol. The prevalence of oral cancer continues to rise, that is why the role of the dentist is very important in detecting this illness in its early stages, by doing a correct anamnesis and a correct extraoral and intraoral inspection, decreasing the morbility and mortality.

El metabolismo de polímeros de ADP-ribosa (PAR) está involucrado en múltiplesfunciones celulares, como la señalización y reparación del ADN, el mantenimiento dela integridad genómica, la decisión entre la supervivencia y muerte celular y elmecanismo de muerte. Poli(ADP-ribosa)polimerasa (PARP) y poli(ADPribosa)glicohidrolasa (PARG) son las proteínas involucradas en esta vía metabólica. PARP es la enzima encargada de sintetizar al polímero, mientras que PARG esresponsable de su degradación. En Trypanosoma brucei ambas proteínas,denominadas TbPARP y TbPARG, son codificadas por un gen de copia única. En lapresente tesis se muestra la caracterización de la actividad de TbPARP in vitro en lareacción de PARilación. Estudios funcionales de TbPARP y TbPARG en el contextodel parásito permitieron identificar su localización subcelular en condiciones normalesy de estrés oxidativo. También se describe aquí la cinética de aparición de PAR en elnúcleo. Mediante la obtención de líneas transgénicas de parásitos procíclicos sobreexpresantesde TbPARP y silenciados (ARNi) para ambas enzimas se realizaronensayos de supervivencia a distintas concentraciones del agente genotóxico H2O2. Losmismos presentaron diferentes grados de citotoxicidad y variaciones en el mecanismode muerte celular de acuerdo a la presencia o ausencia de polímero en el núcleo. También se estudió el efecto de la acumulación nuclear del polímero sobre laprogresión del ciclo celular en cultivos transgénicos sincronizados. Palabras claves: Trypanosoma brucei, PARP, PARG, PAR, ciclo celular, estrésoxidativo, Enfermedad del sueño. Poly(ADP-ribose)polymerase (PAR) metabolism is involved in multiple cellularfunctions such as DNA signaling and repair, maintenance of genomic integrity,switching between cell survival and death, and decision of death pathways. Poly(ADPribose)polymerase (PARP) and poly(ADP-ribose)glycohydrolase (PARG) are proteinsinvolved in this metabolic pathway. PARP synthesizes the polymer while PARG is incharge of its hydrolysis. In Trypansoma brucei both proteins, named TbPARP and TbPARG, are codified by a single copy gene. The present thesis shows thecharacterization of in vitro activity of TbPARP carried out in the PARylation reaction. Functional studies of TbPARP and TbPARG in the context of the parasite allowed theidentification of their subcelular localization in normal conditions and under oxidativestress. Kinetics of PAR appearance in the nucleus is also described here. We obtainedtransgenic lines of procyclic parasites which over-expressed TbPARP or downregulatedboth enzymes to perform survival assays at different concentrations of thegenotoxic agent H2O2. They presented variation in the cytotoxicity levels and in thedeath pathway involved according to the presence or absence of PAR in the nucleus. Ithas also been studied the effect of PAR nuclear accumulation on cell cycle progressionin synchronized transgenic cultures. Key words: Trypanosoma brucei, PARP, PARG, PAR, cell cycle, oxidative stress, African trypanosomiasis. Fil: Schlesinger, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, pertenece a la familia Arenaviridae. Los virus pertenecientes a esta familia son capaces de causar infecciones persistentes en roedores, los cualesactúan como reservorios naturales, asegurándose así su evolución y perpetuación en la naturaleza. Asimismo,son capaces de multiplicar en una amplia variedad de cultivos celulares pudiendo desarrollar el estadio depersistencia en la mayoría de ellos. El objetivo de este trabajo fue determinar las diferencias existentes entreinfecciones agudas y persistentes en cultivos de células Vero frente a tratamientos que tienden adesestabilizar el equilibrio virus célula. A tal fin, mediante la infección experimental de células Vero con la cepa XJCl3, se obtuvo una línea celular persistentemente infectada con dicho virus, denominada V3, que se utilizócomo modelo de estudio. En los ensayos realizados con el agente mutagénico 5-fluoruracilo (5-FU) se observó que la susceptibilidad a lainhibición ejercida por esta droga sobre JUNV dependió del lapso transcurrido entre el momento de lainfección y el tratamiento, y de la m.o.i. utilizada sugiriendo que la proporción de células infectadas almomento de tratar definía la resistencia a la droga. En este sentido, las células V3 resultaron menos afectadaspor el 5-FU en comparación con las células infectadas y tratadas durante la etapa aguda. Por otro lado, el análisis del ciclo celular de células Vero mostró que la infección con JUNV generó alteracionesen la respuesta del cultivo frente a estímulos como la confluencia de las células de la monocapa y eltratamiento con agentes inductores de arresto del ciclo. Durante ensayos de transfección con proteínas viralesdicha alteración del ciclo fue asociada a la nucleoproteína viral N. Sin embargo, a pesar de la aparentemanipulación del ciclo celular por parte del virus no se pudo asociar alteraciones inducidas del ciclo, a unadisminución en el rendimiento viral. Teniendo en cuenta que los cultivos persistentemente infectados no presentan el efecto citopático (EC) típicode las infecciones agudas de este virus en células Vero, se evaluó en primer lugar la naturaleza de dichofenómeno. El estudio de distintos indicadores de apoptosis mostró que dicho evento seguía una cinéticasimilar a la desarrollada por el EC viral, observándose además un incremento en la expresión de p53 y en elclivaje de la caspasa 3. Cuando estos indicadores se analizaron en células V3, los valores encontradospresentaron valores similares a los de células Vero sin infectar. Por otro lado, al analizar la respuesta de los distintos cultivos frente a la inducción de apoptosis con staurosporina (STS) o luz ultravioleta (UV) los cultivospersistentemente infectados resultaron más resistentes que los cultivos infectados de forma aguda y lascélulas sin infectar frente a la apoptosis inducida por luz UV y todos se comportaron de manera similar frente ala STS. Este comportamiento sugiere que JUNV podría estar modulando negativamente la apoptosis durante lapersistencia de manera específica frente a ciertos estímulos aunque no frente a un inductor fuerte como la STS. La resistencia al estrés térmico también fue evaluada como un parámetro diferencial entre los distintos tiposde cultivos. En forma similar a lo que sucedió con el 5-FU el virus resultó más resistente al tratamiento concalor cuando éste se aplicó a tiempos de tratamiento p.i. tardíos y a mayores m.o.i.. La síntesis de HSP-70,principal efector de la respuesta celular al shock térmico, no se asoció temporalmente con la reducción de lostítulos virales. De manera similar a lo observado con la respuesta al shock térmico, el tratamiento con arsenitode sodio (Ars), inductor de estrés oxidativo, resultó menos efectivo cuanto mayor era la proporción de célulasinfectadas en los cultivos. El conjunto de resultados permite concluir que las características diferenciales presentadas por los cultivosinfectados en forma persistente serían adquiridas durante el transcurso de la infección, al menos en el caso dela resistencia a los inductores de: extinción viral (5-FU), estrés térmico y oxidativo (HS y Ars) y alteraciones delciclo. Esta estrategia estaría basada en la acumulación de suficiente cantidad de proteínas, en particular, lanucleoproteína N, a fin de controlar las respuestas a estrés, ya sea por intervención directa de dichas proteínaso a través de la modulación en la formación de gránulos de estrés citoplasmáticos y/o de cuerpos nuclearesasociados a la proteína de leucemia promielocítica. Junín virus (JUNV), the etiological agent of the Argentine Hemorrhagic Fever, belongs to the family Arenaviridae. Viruses belonging to this family are able to cause persistent infections in rodents, which act asnatural reservoirs, thus ensuring their evolution and perpetuation in nature. They are also able to multiply in awide variety of cell cultures having the capacity to develop persistence stage in most of them. The aim of thisstudy was to determine the differences in the response of acute and persistent infection of JUNV in Vero cellsto treatments that tend to disrupt the virus-cell equilibrium typical of the latter. To this end, we obtained a cellline persistently infected with the virus, called V3, through experimental infection of Vero cells with JUNV XJCl3 strain, which was used as a study model. Studies performed with the mutagenic agent 5-fluorouracil (5-FU) showed that susceptibility to inhibitionexerted by this drug on JUNV depended on the time elapsed between the time of infection and treatment, andthe m.o.i. used suggesting that the proportion of infected cells when treatment was applied defined thedegree of drug resistance. In this sense, the V3 cells were less affected by the 5-FU compared with treatedacutely infected cells. On the other hand, cell cycle profile of Vero cells infected with JUNV was different from acutely and noninfected cultures when subjected to conditions of cell cycle arrest. During transfection assays with plasmidsexpressing viral proteins, alterations of cell cycle, similar to those observed by infection, were associated withthe expression of the viral nucleocapsid N. However, despite the apparent alteration of cell cycle by the virus,no effect on viral replication could be associated with experimentally induced cell cycle alterations. Given that persistently infected cultures do not exhibit the typical cytopathic effect (CE) characteristic ofacutely infected Vero cells, the nature of this phenomenon was evaluated in first place. The study of variousindicators of apoptosis showed that this event followed similar kinetics as the CE that took place in infectedcells, with a concomitant increase in expression of p53 and cleavage of caspase-3. By contrast, the level ofthese apoptotic markers was similar for V3 and non-infected Vero cells. On the other hand, the response totwo apoptosis inducers, staurosporine (STS) and UV radiation revealed that persistently infected culturesshowed resistance to the latter whereas acutely, persistently and non-infected cells were equally susceptibleto STS. This is probably due to the fact that induction of apoptosis by UV treatment is carried out by a specificcellular pathway that might be modulated by the virus during persistence, while STS exerts its effect as a multitargetagent. The tests performed to determine the effect of HSP-70 induction on JUNV replication of the virus showed thatthis protein was not involved in the reduction of viral titer. Similar to the results obtained with 5-FU, the viruswas more resistant at late p.i. treatment times and high m.o.i.. Both heat-shock and treatment with theoxidative stress-inducing drug sodium arsenite (Ars) were effective in reducing viral titers. Further analysis ofthe activity of heat shock showed that its range of action embraced 2 steps of the viral cycle: the processesleading to the budding of virions and protein translation. Heat-shock response was also evaluated as a differential parameter among the different types of infected andnon-infected cell cultures. Similarly to the conclusions withdrawn with 5-FU, JUNV infections were moreresistant to heat-shock when treatment was applied late during infection or when high m.o.i. were employed. Synthesis of HSP-70, main effector of heat-shock response, could not be associated to the decrease in virustiter observed in heat-shocked cultures. Also, arsenite, an oxidative stress inducer, diminished viral replication. The degree of arsenite inhibition was dependent of the proportion of infected cells in the monolayer. Altogether, the results allow to conclude that the differential characteristics between JUNV acutely andpersistently infected Vero cells would be acquired during the course of infection, at least for the resistance to 5-FU, heat shock, oxidative stress and altered cell cycle. This strategy would be based on the premise ofaccumulation of viral proteins, particularly the nucleoprotein, in order to control cellular response to stress,either directly or by modulating stress granules formation and/or nuclear bodies associated to thepromielocytic leukemia protein. Fil: Fernández Bell Fano, Pablo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Son pocas las técnicas de coloración de fluorescencia utilizadas en estudios del ciclo celular bacteriano, de manera que se evaluaron las características tintoriales de Neisseria gonorrhoeae con la tinción diferencial de fluorescencia modificada y la asociación con la presencia de ADN y ARN. El propósito del estudio fue aportar evidencias sobre el mecanismo de reacción de la tinción de fluorescencia modificada, así como la de ofrecer esta técnica como una herramienta complementaria en estudios del ciclo celular. A los aislamientos de N. gonorrhoeae se les realizó el ciclo celular transfiriendo un cultivo en crecimiento óptimo a un caldo BHI con 5% de sangre humana. Se tomaron alícuotas para realizar extendidos para la tinción, pre y post tratamiento con ADNasa y ARNasa a intervalos de 5 a 120 min, y se aplicó la prueba de McNemar para verificar la asociación de la reactividad tintorial antes y después del tratamiento enzimático. En el ciclo celular, la tinción de la bacteria fue predominante el anaranjado ligeramente fluorescente y la secuencia de color en el ciclo fue amarillo, anaranjado y verde. Las células que se tiñeron de anaranjado o amarillo, después del tratamiento enzimático, cambiaron a verdes ligeramente fluorescentes o verdes casi imperceptibles, existiendo asociación estadísticamente significativa (p < 0,05) entre el color amarillo y anaranjado ligeramente fluorescente o fluorescente con presencia de ADN y ARN. Se concluye que el ADN y ARN participan en el carácter tintorial amarillo y anaranjado ligeramente fluorescente o fluorescente del método de coloración diferencial de fluorescencia modificado en el ciclo celular de N. gonorrhoeae. There are few fluorescent staining techniques used in studies of the bacterial cell cycle, so that the staining characteristics of Neisseria gonorrhoeae were analyzed by the modified differential fluorescent staining method and the association with the presence of DNA and RNA. The purpose of this study was to provide evidence on the reaction mechanism of modified differential fluorescent staining method, as well as offering the technique as a complementary tool in studies of the cell cycle. The cell cycle was evaluated in isolates of N. gonorrhoeae transferring a culture in optimal growth to BHI broth with 5% human blood. Aliquots were taken to prepare slide spreads for staining, before and after treatment with DNase and RNase at 5 to 120 min intervals, and the McNemar test was applied to verify the association of the staining reactivity before and after enzyme treatment. In the cell cycle, the bacteria staining was predominantly slightly fluorescent orange and the color sequence in the cycle was yellow, orange and green. Cells which stained orange or yellow, after the enzyme treatment, changed to slightly fluorescent green or almost imperceptible green, with statistically significant association (p < 0,05) between the yellow and orange slightly fluorescent or fluorescent with the presence of DNA and RNA. We conclude that DNA and RNA are involved in the yellow and orange dye by modified differential fluorescent staining method in the cell cycle of N. gonorrhoeae.

Los tumores de hipófisis son adenomas benignos de incidencia frecuente que se originan apartir de los distintos tipos celulares hipofisarios por expansión clonal. En todos los tipos deadenomas hipofisarios se ha visto una sobreexpresión de pituitary tumor transforming gene (PTTG). PTTG facilita la progresión del ciclo celular ya que actúa como securina, regulandola correcta separación de las cromátidas hermanas en metafase, entre otras funciones. Portratarse de un regulador del ciclo celular, el balance de los niveles de expresión de PTTG enla célula es importante, y la desregulación de estos niveles por defecto o exceso conduce ainestabilidad genómica, aneuploidía, apoptosis, daño al ADN, y conlleva al desarrollo detumores. Se desconoce la causa que provoca el desbalance de PTTG al momento inicial deldesarrollo de tumores de hipófisis. En este trabajo identificamos y describimos por primeravez un mecanismo de desregulación de los niveles de expresión de la proteína PTTG, quedesencadena su acción como oncogen, permitiendo el avance de la tumorigenicidadhipofisaria. El mismo involucra la sobreexpresión de RWD-containing sumoylation enhancer (RSUME) al momento inicial del proceso tumoral y, como consecuencia, la inducción de lamodificación de PTTG por SUMO, reduciendo su degradación por ubiquitinación yaumentando su estabilidad proteica. Este efecto de RSUME conduce a un aumento de laactividad PTTG y conlleva a hiperactividad del ciclo celular, aneuploidía, anormalidadescromosómicas, células multinucleadas y otros efectos tumorigénicos mediados por PTTG. Además, demostramos que PTTG y RSUME colocalizan a nivel celular y su expresióncorrelaciona positivamente en adenomas hipofisarios humanos. Pituitary tumors are benign adenomas of frequent incidence originating from differentpituitary cell types by clonal expansion. In all types of pituitary adenomas has been anoverexpression of pituitary tumor transforming gene (PTTG). PTTG facilitates cell cycleprogression by acting as securin, regulating the correct separation of sister chromatids inmetaphase. Being a cell cycle regulator, the balance of PTTG expression levels in the cell isimportant, and deregulation of these default levels or excess leads to genetic instability,aneuploidy, apoptosis, DNA damage, among others, and leads to the development oftumors. The underlying cause of the imbalance of PTTG the initial stage of development ofpituitary tumors is unknown. In this paper we identify and describe for the first time amechanism for deregulation of the expression levels of PTTG protein, which triggers itsaction as oncogene, allowing the advance of pituitary tumorigenicity. It involvesoverexpression of RWD-containing sumoylation enhancer (RSUME) at the initial moment ofthe tumor process and, as a result, induction of PTTG by SUMO modification, reducingdegradation by ubiquitination and increasing protein stability. This effect of RSUME leads toan increase of PTTG activity and leads to hyperactivity of the cell cycle, aneuploidy,chromosomal abnormalities, multinucleated cells and other tumorigenic effects mediated by PTTG. Furthermore, we demonstrate that PTTG and RSUME colocalize at the cellular leveland its expression correlates positively in human pituitary adenomas. Fil: Fuertes, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

RESUMEN: El concepto de célula es clave en la organización del conocimiento biológico, la célula es una entidad compleja y abstracta en la mente de los estudiantes; aunque esta es una conjunto física, real, que existe en el mundo biológico, generalmente este concepto se forma a partir del discurso presentado por los docentes de ciencias naturales en los últimos años de la escuela primaria. Para los organismos pluricelulares, el ciclo celular es fundamental en el desarrollo de su estructura, formación de tejidos y funcionamiento; por tal motivo, es de suma importancia la comprensión de este proceso, su interpretación, y la estructuración de una representación funcional que del mismo se haga en la mente de los estudiantes como mediadora entre el mundo vivo y el sujeto que aspira acercarse a él para entenderlo y aprehenderlo.

Las hormonas tiroideas (HTs) son importantes reguladoras de la respuesta inmune, pero su participación en el desarrollo tumoral es controversial. El objetivo de este trabajo fue estudiar la modulación de las HTs sobre el comportamiento biológico y evolución del linfoma T EL-4 creciendo in vivo en ratones singeneicos eu- (controles), hiper- (hiper) o hipotiroideos (hipo). El tratamiento de las células EL-4 in vitro con HTs indujo un aumento en la proliferación y cambios en los niveles de expresión de reguladores del ciclo celular a tiempos cortos, pero llevó a la apoptosis a tiempos más largos de cultivo. La inoculación de las células EL-4 en animales hiper desarrolló tumores sólidos de mayor volumen que el de los Controles, pero los hipo presentaron un mayor número de metástasis. Adicionalmente, los tumores hiper mostraron un aumento en los niveles de expresión de ciclinas, mientras que en los hipo encontramos niveles incrementados de p16, p27 y p53. Los tumores hiper también exhibieron mayor angiogénesis por inmunohistoquímica y una expresión aumentada de metaloproteasas, por qRT-PCR, junto con incrementada apoptosis. Por otra parte, los ratones hiper mostraron un menor infiltrado linfocitario tumoral, compuesto por un menor porcentaje de linfocitos CD8+ que los ratones control. Por otra parte, los bazos de estos animales presentaron una aumentada proporción y actividad de células NK, junto con un menor porcentaje de células supresoras de origen mieloide. Los ratones hipo, sin embargo, mostraron una reducción en la actividad citotóxica específica contra células tumorales. Nuestros resultados sugieren que el estado tiroideo es capaz de modular el crecimiento tumoral a través de mecanismos que involucran la regulación de proteínas relacionadas con la progresión y/o arresto del ciclo celular y de la angiogénesis, y a través del control de la respuesta inmune antitumoral que puede limitar su diseminación. Thyroid hormones (THs) are important regulators of immune response, but their role in tumor development is still controversial. The aim of this work was to evaluate THs involvement in the biological behavior and evolution of the EL-4 T lymphoma, growing in vivo in singeneic eu- (controls), hyper- (hyper) or hypothyroid (hypo) mice. The in vitro treatment of EL-4 cells for short periods of time with THs increased cell proliferation and led to changes in the expression of cell cycle regulators. However, longer treatment with THs induced apoptosis in these cells. Hyperthyroid mice that were inoculated with EL-4 cells showed an increased solid tumor volume compared to controls, while hypo exhibited a higher number of metastases. These results were associated with an increment in the expression of cyclins in hyper tumors, and higher levels of p16, p27 and p53 in tumors from hypo mice. An immunohistochemical analysis of tumor sections demonstrated an increased angiogenesis in hyper tumors, which was accompanied with an augmented expression of metalloproteases, measured by qRT-PCR, and an increased apoptosis. Furthermore, a lower number of tumor infiltrating lymphocytes was found in hyper mice, which was comprised of a decreased percentage of CD8+ lymphocytes compared to controls. However, the spleens obtained from these animals showed an increased proportion and activity of NK cells, together with a diminished percentage of tumor derived suppressor cells. Hypo mice, on the other hand, displayed a reduced tumor-specific cytotoxic activity. Our results suggest that thyroid status can directly modulate tumor development through the regulation of proteins that are involved with the cell cycle progression and/or arrest and through the regulation of angiogenesis. Together with this, thyroid status can also regulate tumor dissemination as a result of the modulation of the anti-tumor immune response. Fil: Sterle, Helena Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El hígado es un órgano que presenta una gran capacidad regenerativa. Para estudiar este fenómeno, el modelo de hepatectomía parcial en ratón es el más adecuado (Higgins GM, Anderson RM. Arch Pathol. 1931). Esta técnica, conjuntamente con el uso de modelos animales modificados genéticamente, nos puede facilitar el estudio de las diferentes moléculas o vías de señalización implicadas en el proceso de regeneración hepática. La resección hepática es una de las medidas terapéuticas más efectivas para el tratamiento del carcinoma hepatocelular. Uno de los problemas a los que se enfrentan estos pacientes es que la aparición de un hepatocarcinoma se asienta sobre un hígado fibrótico o cirrótico. En este contexto clínico, la técnica de la resección se ve comprometida debido a que el hígado cirrótico regenera deficientemente (Bège T, et al. J Gastrointest Surg. 2007). Por este motivo, el procedimiento quirúrgico está asociado a un índice muy elevado de mortalidad (entre el 20 y el 50% según diversos autores). Es por ello, que hipotetizamos que el estudio de la regeneración hepática y el hallazgo de nuevas vías de señalización implicadas en este proceso, posibilitarán el desarrollo de nuevas dianas terapéuticas para el tratamiento de la enfermedad hepática crónica. En este contexto, creemos que el estudio de las vías de regulación del metabolismo lipídico hepático tienen más potencialidad terapéutica. Por ejemplo, se ha demostrado que el colesterol es importante en la proliferación celular y se conoce que su deficiencia evita la progresión de las células a través del ciclo celular. Se sabe que cuando hay una acumulación de esteroles, disminuyen la actividad de la proteína HMGCR (HMG-coA reductasa) una enzima limitante en la síntesis del colesterol) y la expresión del receptor de las lipoproteínas de baja densidad (LDL). Por el contrario, cuando disminuyen los niveles de colesterol las células mantienen la actividad de la proteína HMGCR y aumenta la expresión del receptor LDL (LDLR). Todo este proceso está regulado por el factor de transcripción SREBP (Brown MS et al. Cell, 1997 y Espenshade PJ. J Cell Sci. 2006). A parte de la implicación del colesterol en la regulación del ciclo celular, también es conocido que durante la regeneración hepática se acumulan grandes cantidades de lípidos en forma de gotas llamadas lipid droplets, las cuales están compuestas mayoritariamente por colesterol y ésteres de colesterol. (Garcia-Arcos I. et al. Lipids. 2010). Aun no se conocen con exactitud los mecanismos y la funcionalidad de esta esteatosis transitoria, ni los mecanismos a través de los cuales la célula es capaz de acumular lípidos durante el proceso regenerativo. Lo que si se ha observado es que tras la hepatectomía parcial existe un descenso de lípidos en el suero, y un aumento de la expresión del gen LDLR. Estos datos sugieren que este receptor estaría involucrado en el transporte de los lípidos hasta el interior de la célula. (Bocchetta M. et al. J Cell Physiol. 1993). Teniendo en cuenta los antecedentes descritos, el objetivo general de la presente tesis doctoral fue el de investigar como afecta el metabolismo lipídico al ciclo celular y a la regeneración hepática. Específicamente, la tesis se ha dividido en dos estudios: PRIMER ESTUDIO: - El miR-33 se encuentra en el mismo locus genómico que el gen Srebp, y se ha demostrado que este gen regula el ciclo celular. Por lo tanto el objetivo general del primer estudio fue: - Estudiar el papel del miR-33 en la regulación del ciclo celular y su implicación en la regeneración hepática. Objetivos específicos: 1. Estudiar la función de miR-33 en la regulación de las CDKs y las ciclinas y, por tanto, su papel en la regulación del ciclo celular. 2. Identificar posibles dianas de interacción de miR-33 con el 3’UTR de las quinasas dependientes de ciclina (CDKs). 3. Caracterizar la función del miR-33 durante la regeneración hepática en ratones a los que se les ha practicado una hepatectomía parcial. SEGUNDO ESTUDIO: La hipótesis específica del segundo estudio plantea que la actividad del receptor de las LDL afecta al lipidoma del hepatocito durante el proceso de regeneración hepática. Por lo tanto el objetivo general del estudio fue: • Analizar el efecto de la deficiencia del receptor LDL en la formación de lipid droplets y en la proliferación hepatocelular durante la regeneración hepática inducida por hepatectomía parcial. Los resultados obtenidos en el primer estudio se resumen en: 1. El miR33 regula la expresión post-transcripcional de la ciclina dependiente de quinasa CDK6 y de la ciclina D1. 2. miR33 se une de manera directa al 3’UTR de los mRNA de Cdk6 y Ccnd1. 3. El miR33 regula la proliferación celular y la progresión del ciclo celular. 4. El antagonismo de miR33 en ratones promueve la regeneración hepática. Los resultados obtenidos en el primer estudio se resumen en: 1. Los ratones LDLR-/- presentan esteatosis y niveles elevados de colesterol circulante. 2. Los ratones LDLR-/- presentan una peor regeneración hepática y presentan una disminución de la función hepática tras la PHx. 3. Los LDLR-/- presentan una alteración en la progresión del ciclo celular y una menor expresión de IL-6, TNF-α y HGF durante la regeneración hepática. 4. La deficiencia del gen LDLR no interfiere en la formación de los lipids droplets pero si en la composición de los mismos. Considerando los resultados presentados en esta Tesis Doctoral formulamos las siguientes conclusiones: 1. miR-33 regula la expresión de los genes Cdk6 y Ccnd1. 2. La regulación de los genes Cdk6 y Ccnd1 se lleva a cabo mediante la unión específica de miR-33 al los transcritos de estos genes. 3. miR-33 regula la proliferación celular de hepatocitos mediante la inhibición de la expresión de Cdk6 y Ccnd1. 4. El tratamiento de ratones hepatectomizados con anti-miR-33 estimula la regeneración hepática. 5. Los ratones deficientes en LDLR presentan una regeneración hepática anómala tras el procedimiento quirúrgico de la hepatectomia parcial. 6. Los ratones deficientes en LDLR muestran una disminución significativa de la función hepática en las etapas iniciales del proceso de regeneración tras una PHx. 7. Los ratones deficientes en LDLR presentan una desregulación de los niveles de IL-6, TNF-alfa y HGF hepáticos durante la regeneración hepática. 8. Los ratones deficientes en LDLR muestran una disminución de la expresión hepática de marcadores de ciclo celular. 9. La deficiencia del gen LDL modifica el lipidoma hepático pero no compromete la formación de lipid droplets. 10. El hígado en regeneración de los ratones deficientes en LDLR-/- presenta una concentración de ésteres de colesterol, colesterol y fosfatidilcolina compatible con un estado quiescente; en contraposición a la composición del lipidoma que predomina en los hígados regenerativos. Considerando las conclusiones expuestas, nuestros datos sugieren que miR-33 tiene potencialidad terapéutica como modulador de la regeneración hepática en el contexto clínico. Además, creemos que el estudio del lipidoma hepático, previo o inmediatamente posterior a la resección hepática, permitiría prever posibles complicaciones hepáticas en pacientes a los que se les ha practicado una hepatectomía terapéutica., Liver shows a well-known regenerative capacity. To study this phenomenon, the partial hepatectomy in rodents has been shown to be the most suitable model. This technique, in combination with the use of genetically modified animal models, can accelerate the study of different molecules or signaling pathways involved in the regeneration process. One of the signaling pathways that potentially have a therapeutically impact are the regulatory pathways of hepatic lipid metabolism. It has been demonstrated that cholesterol is important in cell proliferation and it is known that deficiency prevents the progression of cells through the cell cycle. This process is regulated by the transcription factor SREBP. It is also known that during liver regeneration, there is an accumulation of large amounts of lipids in the form of drops called lipid droplets, which are composed largely of cholesterol and cholesterol esters. It has been observed that after a partial hepatectomy there is a reduction of lipid levels in plasma, and increases the expression of the LDLR gene, suggesting that this receptor might be involved in the transport of lipids through the cell. The overall objective of this thesis was to assess how the lipid metabolism affects the cell cycle during liver regeneration at two different levels. - To study the role of miR-33, a micro RNA encoded in an intronic region of the SREBP gene, in cell cycle regulation and its implication in liver regeneration. -Using genetically modified LDLR-/- mice, analyze the effect of the deficiency of the LDL receptor in the formation of lipid droplets and hepatocellular proliferation during liver regeneration induced by partial hepatectomy. As the results, this thesis proves that miR-33 regulates the post-transcriptional expression of CDK6 and C1 by binding specifically at the 3`UTR of both mRNAs. Therefore miR-33 itself regulates the cell proliferation and cell cycle. A synthetic antagonist of miR-33 stimulates liver regeneration in healthy mice. On the other hand LDLR-/- mice show a deficient liver regeneration and a deficient hepatic function after a partial hepatectomy. Biochemistry and molecular analyses indicate that these mice show altered cell cycle and a decreased expression of different growth factors (IL-6, TNF-alpha and HGF) in the event of hepatic damage. Although LDLR-/- mice are able to form lipid droplets, there are significatively changes on its composition and might be used as an indication of the liver regeneration potential or its performance Our data suggests that miR-33 is an hepatic regeneration modulator and can become a future target molecule in the clinical context because its therapeutical potential. Furthermore the study of hepatic lipidome on patients that need to undergo hepatic surgery might be a tool to foresee failure and decreases the mortality and morbidity of hepatectomy as a therapeutic tool.

RESUMENObjetivo. Estudiar el ciclo celular y realizar la descripción cromosómica de Espeletiopsis muiska, utilizando células meristemáticas de ápices radicales obtenidos a través de cultivo in vitro de embriones en medio MS suplementado con AIB. Materiales y métodos. Se colectaron ápices radicales a diferentes horas del día y se contaron en ellos las células presentes en cada fase mitótica, se determinó la duración del ciclo celular y la hora de mayor actividad mitótica. La descripción de los cromosomas y la elaboración del cariotipo de la especie, se realizó utilizando un protocolo que permitió la obtención de cromosomas metafásicos. Resultados. Respecto a la duración del ciclo celular, se encontró que la interfase comprende el 94.65% y la mitosis el 5.35% del total del ciclo celular. Entre las fases mitóticas la profase tiene mayor duración, 1.92%, mientras que la anafase es la más corta, 0.96%. En cuanto a la hora mitótica, las células meristemáticas de los ápices radicales presentaron mayor actividad entre las 10:30 y las 11:15. Con el estudio citogenético se encontraron 19 pares de cromosomas con longitudes e índices centroméricos similares y cariotipo asimétrico. Conclusiones. El estudio detallado de los cromosomas, permitió determinar un complemento cromosómico 2n=38+2B, dos cromosomas con microsatélites terminales y uno con constricción secundaria.

Antecedentes: extractos etanólicos de P. peruviana han mostrado actividad citotóxica contra diferentes células cancerosas. Objetivo: estudiar la actividad anticancerígena de un extracto acuoso del fruto uchuva en células de cáncer de colon SW480 y SW620. Materiales y métodos: se analizaron citotoxicidad e índice de selectividad (SI) (MTT), antiproliferación (sulforodamina-B), apoptosis (ciclo celular, anexina-V, receptores TRAIL-DR4/-DR5 y caspasa-3), actividad antioxidante (contenido de flavonoides y carotenoides totales). Resultados: el extracto acuoso de uchuva mostró efecto citotóxico y antiproliferativo en células SW480 (IC50=44,2 mg/mL, SI=11,6) y SW620 (IC50=85,1mg/mL, SI=6,0). Las células hipodiploides SW480 y SW620 aumentaron 13% y 12%, respectivamente. Las células apoptóticas incrementaron 19% y 21% en SW480 y SW620, respectivamente, con incremento en la expresión de receptores TRAIL-DR4/-DR5 en SW480 (+59%/+53%) y SW620 (+67%/+65%), y activación de caspasa-3 en ambas líneas celulares. El extracto neutralizó radicales OH-, presentó baja capacidad reductora y atrapadora de especies reactivas del oxígeno y nitrógeno. El contenido de flavonoides y carotenoides fue 487,1 mg catequina y 0,9 mg β-caroteno por 100 g de liofilizado, respectivamente. Conclusiones: estos hallazgos sugieren que la uchuva puede ser una fuente prometedora de compuestos bioactivos con actividad quimiopreventiva en cáncer de colon humano. Background: Ethanolic extracts from P. peruviana showed cytotoxic activity against different cancer cell lines. Objective: To evaluate the antiproliferative activity of aqueous extract of the fruit golden berryin colon cancer cells. Materials and Methods: We analyzed cytotoxicity and selectivity index (SI) (MTT), antiproliferation (sulforhodamine-B), apoptosis (cell cycle, Annexin-V, receptors TRAIL-DR4/-DR5 and caspase-3), and antioxidant activity (content of total carotenoids and flavonoids). Results: The aqueous extract showed cytotoxic and antiproliferative effect on SW480 (IC50 = 44.2 mg/ml, SI = 11.6) and SW620 (IC50 = 85.1 mg/ml, SI = 6.0). The hypodiploid SW480 and SW620 cells increased 13% and 12% respectively as well as apoptotic SW480 and SW620 cells (19% and 21 %, respectively), expression of receptors TRAIL-DR4 /-DR5 (SW480: +59% / +53%; SW620: +67% / +65%) and activation of caspase-3. The aqueous extract scavenged OH- radicals, showed low oxygen radical capacity and low scavenging capacity for reactive oxygen and nitrogen species. The total flavonoids and carotenoids contente was 487.1 mg catechin y 0.9 mg β-carotene by 100 g powder, respectively. Conclusions: These findings suggest that golden berry may be a promising source of bioactive compounds with chemopreventive activity against human colon cancer.

La propuesta de aula: el ciclo celular y su papel en el desarrollo, crecimiento, restitución y reparación de tejidos, es diseñada para estudiantes de ciclo tres, tiene como población de estudio, los estudiantes de grado séptimo de la institución educativa Jesús María Aguirre Charry, La propuesta de aula se inicia con un diagnóstico de los conceptos previos esenciales para la comprensión del ciclo celular; a partir del cual se definen los problemas cognitivos presente en los estudiantes. Durante la propuesta se propone una fase refuerzo, la cual se espera colabore en la superación de los conflictos cognitivos, la comprensión del ciclo celular y aplicación en los procesos relacionados con formación y reparación de tejidos. Además, se presentan estrategias didácticas con actividades contextualizadas y lecturas que facilitan la transposición de conceptos, el desarrollo habilidades de pensamiento; lo cual tiene como fin mejorar la comprensión, modificar los modelos mentales y contribuir a un aprendizaje significativo del ciclo celular y su función en el organismo. Abstract. Classroom proposal: The cell cycle and its role in the development, growth, and tissue reparation, is designed for students in cycle three, the population to be studied are seventh graders students from the school Jesús María Aguirre Charry. The proposed class begins with a diagnosis of previous concepts, essential for understanding the cell cycle from which the cognitive problems presented in students are defined. As a second step, the class proposes a reinforcement phase, which is expected to improve the cognitive conflicts and the comprehension of the cell cycle; and finally, its application in the processes related to formation and reparation of tissues. This proposal, also presents teaching strategies and contextualized reading activities which main goal is facilitate the transposition of concepts and the development of critical thinking skills that can contribute to modify the mental framework of the students and develop a meaningful learning of the cell cycle and its role in the body. Maestría

[spa] El comportamiento fagotrófico en especies fitoplanctónicas fue evaluado por medio de técnicas de análisis celular que permiten establecer patrones individuales de cada una de ellas. Primeramente, se calibró el contenido vacuolar como tasas de ingestión comparando la captación de microesferas fluorescentes de látex y el contenido de las vacuolas alimenticias por medio de la hibridación fluorescente in situ (CARD-FISH) en especies fitoplanctónicas bajo condiciones controladas de cultivo. Se obtuvo que el contenido de las vacuolas alimenticias caracterizado por la técnica del CARD-FISH refleja las tasas de ingestión obtenidas por la captura de microesferas al menos a escalas de horas. Así mismo, las tasas de digestión fueron diferentes entres protistas mixotróficos dependiendo de su tamaño celular, los individuos pequeños (10 μm) presentan mayor contenido de presas en sus vacuolas, pero, debido a por su baja abundancia, el impacto sobre el bacterioplancton es bajo. Especies con tamaño pequeños (, [eng] The feeding behaviour of phytoplankton species was evaluated through single cell analysis. Firstly, food vacuole content was calibrated as ingestion rate, comparing the intake of fluorescent microspheres and the prey vacuole content measured by Catalized Reported Deposition-Fluorescent in Situ Hybridization (CARD-FISH) on phytoplankton species in culture conditions. It has been observed that the food vacuole content properly reflects the ingestion rates at scales of hours. Likewise, digestion rates varied between species as a function of cell size: small individuals (10 μm), presented lower content of preys than bigger individuals, although, due to their higher abundance and faster digestion rates, they exerted a high grazing pressure on the bacterial communities. The main conclusion of this work is that, even under optimum light conditions, the phagotrophic activity in some typical phytoplankton groups of high mountain lakes (Chrysophyta and Cryptophyta), is significant; nevertheless, some particularities have been observed in the feeding behaviour of some species. Also, it has become clear that the size of both predator and prey are the most important parameters to explain ingestion rates.

The life of an mRNA from transcription to degradation offers multiple control check points that regulate gene expression. Transcription, splicing, and translation have been widely studied for many years; however, in recent years, new layers of posttranscriptional and posttranslational control have been uncovered. They involve the regulation of the metabolism of mRNA in cytoplasmic foci. They are collections of ribonucleoprotein complexes that, in most cases, remain still uncharacterized, except the processing bodies (PBs) and stress granules (SGs), which have been studied (and reviewed) in detail. A challenging prospective is to know how many different classes of foci exist, which functions they support, how are they formed, and how do they relate one to each other. Here, we present an update of the component of the different granules, a possible function, and hypothesis on their in vivo dynamics related to translational control., Facultad de Ciencias Exactas

A lo largo de la evolución, los organismos con tejidos renovables han desarrollado mecanismos para prevenir la tumorigénesis. Entre ellos, podemos mencionar a la senescencia celular y a la apoptosis. La senescencia se caracteriza por el arresto permanente del ciclo celular en respuesta a insultos tanto endógenos como exógenos. En los últimos años se han estudiando las moléculas involucradas en la activación de este mecanismo, destacándose la participación de los inhibidores de quinasas dependientes de ciclinas (CKIs) p21Cip1, p16INK4a y p15INK4b. En nuestro laboratorio se ha demostrado que la proteína p19INK4d (p19), un miembro de la familia INK4 de CKIs, se induce significativamente en respuesta a diversos genotóxicos aumentando la eficiencia de la reparación del ADN. El daño al ADN es un agente causal común de la respuesta senescente, independientemente del estímulo que le da origen. Los efectos provocados por diferentes inductores, tales como las especies reactivas de oxigeno (considerablemente aumentadas a lo largo del envejecimiento), los agentes genotóxicos (frecuentemente empleados en quimioterapia) o la activación de oncogenes, culminan dañando al ADN y activando en consecuencia mecanismos de arresto del ciclo celular. El arresto es dependiente de factores que controlan la progresión del ciclo tales como p53 y pRb-p16. Si bien estos son lo principales efectores moleculares involucrados en la iniciación y mantenimiento del estado de senescencia, las proteínas que participan en los mecanismos que sostienen la irreversibilidad del arresto del ciclo no han sido aún identificadas. La proteína p19 desempeña un papel importante en la respuesta celular frente al daño al DNA, además de ser un inhibidor del ciclo celular en la fase G1. Estas propiedades la convierten en un factor con potencial para participar en la iniciación y/o mantenimiento del estado de senescencia. El objetivo general de este trabajo de investigación consiste en determinar la participación de p19 en la inducción y/o mantenimiento de la senescencia. En este trabajo demostramos por primera vez que p19 induce su expresión en respuesta a distintos tipos de senescencia. Dicha inducción va acompañada de un arresto irreversible del ciclo y se correlaciona con la aparición de distintos marcadores de senescencia. Entre ellos, el aumento en la expresión p16INK4a y p21. La inducción de estos dos genes se corresponde temporalmente con la de p19, lo que indica que p19 se induce tempranamente en respuesta a un estímulo que dispara la senescencia. Demostramos que hay una relación directa entre la inducción de p19 y el establecimiento de la senescencia, dado que modulando los niveles de p19 se observó una alteración en el arresto del ciclo y en la actividad β-galactosidasa asociada a senescencia. Se observó que la inducción de p19 esta regulada a nivel transcripcional. En senescencia genotóxica la inducción depende de E2F, sin embargo en senescencia fisiológica, pese a que hay un efecto inductor a nivel transcripcional, es independiente de este factor. La activación de p19 en senescencia está mediada por la vía de señalización relacionada a la respuesta general al daño, es decir la vía ATM/ATR--Chk1--p53. Por otro lado también se observó que p38 esta involucrada en la inducción de p19. En respuesta a un estímulo senescente, p19 se transloca al núcleo y se une fuertemente a la cromatina, particularmente a la fracción correspondiente a la heterocromatina. Cuando se analizaron los niveles de mRNA y proteína de p19 en diversos tejidos de ratones de distintas edades, se observó un aumento en los niveles de p19 directamente correlacionado a la edad de los ratones. Esto nos indica que la inducción de p19 no se limita solamente a los modelos de cultivos celulares utilizados, sino que también hay una correlación entre el aumento de expresión de p19 y el envejecimiento de un mamífero. Descifrar los mecanismos involucrados en senescencia así como identificar las proteínas que participan tanto en su inducción como en su mantenimiento en respuesta a diferentes insultos, resulta un gran desafío para el desarrollo de estrategias para combatir el cáncer y enfermedades asociadas al envejecimiento. During evolution, organisms with renewable tissues have developed mechanisms to prevent tumorigenesis, including cellular senescence and apoptosis. Cellular senescence is characterized by a permanent cell cycle arrest triggered by endogenous as well as exogenous stress. Over the years, studies on the molecules involved in the activation of this mechanism have highlighted the role of the cyclin-dependent kinase inhibitors (CKIs) p21Cip1, p16INK4a and p15INK4b. In our laboratory, the p19INK4d protein, a member of the INK4 family of CKIs, has been shown to become significantly induced in response to various types of genotoxic stress and to stimulate DNA repair. DNA damage is a common trigger of cellular senescence, independently of the stimulus that originated it. As such, oxygen reactive species (significantly increased during aging), genotoxic drugs (frequently used in chemotherapy) or oncogene activation lead to DNA damage and consequently activate the cell cycle arrest machinery. The arrest requires factors that regulate cell cycle progression such as p53 and pRb-p16. Although these are the main molecular effectors involved in the initiation and maintenance of the senescent state, the proteins responsible for the irreversibility of the cell cycle arrest remain yet to be identified. The p19 protein plays an important role in the cellular DNA damage response, in addition to being a G1-phase cell cycle inhibitor. These attributes point to p19 as a potential factor involved in the initiation and/or maintenance of the senescent state. The aim of this thesis is therefore to examine the role of p19 in the induction and/or maintenance of cellular senescence. The data presented here shows for the first time that p19 expression is upregulated by different types of senescence. This induction is associated with an irreversible cell cycle arrest and correlates with the appearance of multiple markers of cellular senescence, including an increase in p16INK4a and p21 expression. The up regulation of these two genes temporarily correlates with that of p19, suggesting that p19 is early induced following stimuli that trigger the senescence program. Modulation of p19 levels affected cell cycle arrest and senescence-associated β-galactosidase activity, indicating a direct link between p19 induction and the establishment of cellular senescence. Although this induction occurs at the transcriptional level for both genotoxic-induced and physiological (replicative) senescence, it is mediated by distinct mechanisms, requiring the E2F transcription factors only in the first context. p19 activation during senescence is mediated by the canonical DNA damage signaling pathway ATM/ATR--Chk1--p53. Finally, p38 is also shown to be involved in p19 induction. Following a senescence-triggering stimulus, p19 translocates to the nucleus and tightly associates with chromatin, particularly the fraction corresponding to heterochromatin. Analysis of p19 mRNA and protein levels in several tissues from differently aged mice revealed an up regulation of p19 that correlates with age. This indicates that p19 induction is not limited to the cell culture models used and that there is a correlation between p19 expression and the aging of a mammal. To elucidate the mechanisms involved in senescence and to identify the proteins that mediate its induction as well as its maintenance constitute an important challenge for the development of therapeutic strategies aiming to overcome cancer and aging-associated diseases. Fil: Sonzogni, Silvina Verónica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

El hexaclorobenceno (HCB) es un contaminante ambiental altamente persistente y ubicuo, que produce efectos deletéreos para la salud humana. La exposición de animales de laboratorio al mismo, induce disfunciones endocrinas tiroideas (Kleiman de Pisarev et al., 1990, Alvarez et al., 2004), reproductivas (Foster et al., 1992; Alvarez et al., 2000) e inmunomodulación (Ezendam et al., 2004) entre otros efectos. El HCB se localiza en una variedad de tejidos y fluidos humanos con un amplio rango de concentraciones según el contenido lipídico y el grado de exposición al mismo. En trabajos previos demostramos que el tratamiento de ratas con HCB (1000 mg/kg p.c.) produce una disminución de los niveles circulantes de 3,3’,5,5’-tetraiodotironina (T4) total, y un aumento en la concentración sérica de la hormona estimulante de la tiroides (TSH), sin alterar el peso tiroideo (Kleiman de Pisarev et al., 1989). Estos datos sugerían la existencia de algún mecanismo inhibitorio del crecimiento tiroideo, o pro-apoptotico desencadenado por el HCB. En base a los antecedentes de la literatura y a nuestros resultados previos, nos propusimos como objetivo general, investigar las bases bioquímicas y moleculares del mecanismo de acción del HCB sobre la regulación del crecimiento celular tiroideo. Para ello estudiamos la apoptosis, la proliferación celular, el estado oxidativo y las cascadas de señalización de receptores de factores de crecimiento (RFC), realizando estudios in vivo en ratas hembras Wistar e in vitro en células foliculares tiroideas de rata Fisher (FRTL-5). Demostramos que el HCB administrado a ratas durante 30 días, en dosis que no modifican el status tiroideo (1-100 mg/kg p.c.), aumenta la expresión del factor de crecimiento transformante-β1 (TGF-β1) y la apoptosis a través de la vía mitocondrial, promoviendo la liberación del citocromo c, de la mitocondria hacia el citosol y la activación de la caspasa-9. Los estudios en células FRTL-5, demostraron que el HCB incrementa la expresión de TGF-β1, disminuye la expresión de tiroglobulina (TG) e induce la apoptosis a través de mecanismos dependientes e independientes de caspasas. El aumento en la producción de ROS y subsecuente activación de ERK1/2, están asimismo involucrados en el efecto apoptótico del HCB. Por otra parte, el plaguicida induce un desbalance en proteínas involucradas en el control de la progresión del ciclo celular llevando a un arresto en las fases G1 y G2/M, del mismo. En conclusión, nuestros resultados demuestran por primera vez, que el HCB induce un desbalance en la homeostasis del crecimiento celular y disfunción tiroidea. Hexachlorobenzene (HCB) is a widespread and persistent environmental pollutant with deleterious effect on human health. Chronic administration of HCB to laboratory animals elicits a number of effects including, thyroid (Kleiman de Pisarev et al., 1990, Alvarez et al., 2004) and reproductive dysfunctions (Foster et al., 1992; Alvarez et al., 2000) and immunopathology (Ezendam et al., 2004). HCB is found in a variety of human tissues and fluids with a wide range of values depending on the dose and time of exposure, and on the tissue lipid content. We have demonstrated that HCB administration (1000 mg/kg b.w), reduced total serum 3,3’,5,5’-tetraiodothyronine (T4) levels, increased thyroid stimulating hormone (TSH) levels, but had no effect on thyroid weight in rats (Kleiman de Pisarev et al., 1989). As TSH stimulates thyroid follicular cell proliferation, our data suggested the existence of a thyroid growth inhibitory mechanism, or a pro-apoptotic effect, triggered by the HCB. The aim of the present study was to determine the biochemical and molecular mechanism of action of HCB, on the regulation of thyroid follicular cells growth. We examined parameters of apoptosis, cell proliferation, oxidative status and growth factor receptor (GFR) signaling pathways in vivo, in female Wistar rats, and in vitro, in Fischer rat thyroid cell line (FRTL-5). Our results showed that HCB administered to Wistar rats during 30 days, at doses that do not disrupt thyroid economy (1-100 mg/kg p.c.), induce transforming growth factor-β1 (TGF-β1) expression and apoptosis in the thyroid gland, involving the mitochondrial pathway. HCB promotes cytochrome c release from the mitochondria and caspase-9 activation. In FRTL-5 cell line, HCB increases TGF-β1 expression, decreases thyroglobulin (TG) protein levels, and induces apoptosis through a caspase dependent and independent mechanism, involving ROS production and ERK1/2 activation. In addition, HCB induces alterations in cell cycle regulatory proteins, and G1 and G2/M cell cycle arrest. In conclusion, our results show for the first time, that HCB induces an imbalance in the homeostasis of follicular thyroid cells growth and thyroid dysfunction. Fil: Chiappini, Florencia Ana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

[ES]La división celular es un proceso esencial que permite el desarrollo de un individuo pluricelular adulto a partir de una única célula, así como la regeneración de los tejidos, que necesitan el reemplazo de las células que van perdiendo.Durante el ciclo celular, todos los componentes de la célula madre deben duplicarse y repartirse entre las células hijas. El DNA ha de replicarse una única vez en cada ciclo y de forma exacta, y las cromátidas hermanas producidas han de segregarse a cada una de las células hijas, lo que requiere cambios en la condensación del DNA y en la organización del citoesqueleto., [EN]Cell division is an essential process that allows the development of a multicellular individual adult from a single cell and tissue regeneration, they need to replace the cells that are perdiendo.Durante the cell cycle, all components stem cell must be duplicated and distributed among the daughter cells. The DNA has to replicate only once in each cycle and accurately, and have produced sister chromatids segregate to each daughter cell, which requires changes in DNA condensation and the organization of the cytoskeleton.

El sistema ubiquitina-proteasoma es una vía reguladora fundamental para controlar la estabilidad de las proteínas dentro de varios procesos celulares, como la señalización y el ciclo celular. En respuesta a señales particulares, proteínas reguladoras específicas son marcadas con una cadena de moléculas de ubiquitina a través de la acción de una cascada enzimática compuesta por una enzima activadora de la ubi- quitina (E1), una enzima conjugadora de la ubiquitina (E2), y una ubiquitina ligasa (E3). Las E3 son responsables de unir los sustratos y acercarlos a la E2 cargada con ubiquitina, la cual luego transfiere la ubiquitina al sustrato y a la siguiente ubiqui- tina de la cadena en una reacción secuencial. Una de las ubiquitina ligasa E3 res- ponsables en el control directo de proteínas involucradas en el ciclo celular es el complejo SCF (SKP1-CUL1-F-box). En esta tesis se estudió cuál es la función de las proteínas que forman parte del complejo SCF en la regulación del ciclo celular de Trypanosoma brucei. El análisis de los genomas de Tripanosomátidos mostró que las cuatro proteínas que forman parte del complejo se encuentran conservadas, a excepción de las proteínas F-box. Utilizando la técnica de ARN de interferencia en los dos estadios del ciclo de vida de Trypanosoma brucei, se determinó en que fase del ciclo celular estas proteínas tienen una función preponderante. Los resultados obtenidos muestran que las subunidades del complejo actúan en diferentes momen- tos del ciclo celular. No solo se demostró que la actividad del complejo SCF es im- portante para el crecimiento de los parásitos in vitro, sino que la enzima conjugadora de ubiquitina es necesaria para que los parásitos establezcan una infección en un hospedador mamífero. A su vez, se utilizó la técnica de Electroforesis bidimensional diferencial en gel (2D-DIGE) con el objetivo de identificar posibles sustratos del complejo de ubiquitinación. Este trabajo describe por primera vez la actividad de las subunidades homólogas del complejo SCF en el parásito Trypanosoma brucei. The ubiquitin–proteasome system (UPS) is a fundamental regulatory pathway for controlling protein stability that underlies many cellular processes, such as signaling and cell cycle progression. In response to particular signals, specific regulatory pro- teins are tagged with a chain of ubiquitin molecules through the action of an enzyma- tic cascade composed of an E1 ubiquitin activating enzyme, an E2 ubiquitin conjuga- ting enzyme (Ubc), and an E3 ubiquitin ligase. E3s are responsible for binding subs- trates and for bringing substrates into the proximity of a ubiquitin-charged E2, which then transfers ubiquitin to the substrate and to the ensuing ubiquitin chain in a pro- cessive reaction. One of the E3 responsible for the ubiquitination of cell cycle regula- tors is the SCF complex (SKP1-CUL1-F-box). In this thesis, we have studied the function of the proteins that form the core of the SCF complex in the Trypanosoma brucei cell cycle. The analysis of the Trypanosome genomes showed us that the four core subunit homologs are conserved, with the exception of the F-box proteins. Using RNA interference in both life cycle stages of Trypanosoma brucei, we were able to determine the cell cycle stages in which these proteins have important roles. The obtained results show that the subunits of the complex act at diferent points in the cell cycle. Not only we demonstrated that the activity of the complex is important for the parasites growth in vitro, but we showed that the ubiquitin conjugating enzyme is indispensable for establishing an infection in a mammalian host. At the same time, we utilized the Two-dimensional gel electrophoresis (2D-PAGE) technique for the purpose of identifiying possible substrates of the ubiquitination complex. This work analizes for the first time the activity of the subunits of the SCF complex in a lower eukaryote organism. Fil: Rojas, Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Se ha evaluado la capacidad sincronizante de afidicolina e hidroxiurea en cultivos de células de tabaco (Nicotiana tabacum) NT-1. Los cultivos sincronizados son poderosas herramientas en estudios moleculares y bioquímicos relacionados al ciclo celular y comúnmente se utilizan químicos para bloquear el ciclo celular. La línea celular de tabaco (Nicotiana tabacum) NT-1 proviene de la línea celular TBY-2, caracterizándose NT-1 por su menor velocidad de crecimiento y tamaño celular heterogéneo. Los resultados mostraron una sincronía del 30 % de NT-1 con afidicolina 5 mg/ml, similar a la obtenida con TBY-2. Se probaron diferentes concentraciones de hidroxiurea, obteniéndose niveles óptimos de sincronización de hasta 31 % con 0.75 mM. Se muestra también que es posible sincronizar cultivos NT-1 en porcentajes similares a cultivos TBY-2 con afidicolina e hidroxiurea. Para este propósito, se recomienda la hidroxiurea por ser químicamente más estable y económica. The synchronizing capacity of aphidicolin and hydroxyurea on NT-1 cultures of tobacco cells (Nicotiana tabacum) NT-1. Synchronized cell cultures are a powerful tool in biochemistry and molecular studies related to cell cycle and commonly chemicals are used to block the biochemical cycle. The tobacco cell line NT-1 comes from cell line TBY-2, the former being characterized with a slower growth rate and heterogeneous cell size. Results show 30 % synchrony with 5 mg/ml aphidicolin, similar to that obtained with TBY-2. Different concentrations of hydroxyurea were tested, obtaining an optimal synchrony of 31 % at 0.75 mM of concentration. It is also shown that it is possible to synchronize NT-1 cultures in similar percentages to those obtained with TBY-2, with either aphidicolin or hydroxyurea. For this purpose, hydroxyurea is recommended because of its lower cost and chemical stability.

Se evaluó el ciclo celular por Gram y tinción de fluorescencia modificada en bacterias aisladas de muestras perianales y uretrales, con observación en frotis de diplococcus Gram negativos o diplococcus anaranjados fluorescentes y cultivo negativo para Neisseria gonorrhoeae, de pacientes que acudieron a la consulta ITS-SIDA del ambulatorio “Dr. Arquímedes Fuentes Serrano”, Cumaná, Venezuela, con el objetivo de mostrar que en las bacterias aisladas, las características morfotintoriales por Gram y fluorescencia semejantes a diplococos, están asociadas al ciclo celular. Se hizo estudio microscópico del ciclo celular, a partir de cultivos sincrónicos a intervalos de tiempo de 5 minutos por 2 horas, tomando alícuotas, fijando en etanol, realizando extendidos y coloreando con Gram y fluorescencia.Se identificó Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter koseri, Staphylococcus epidermidis, S. saprophyticus, Streptococcus b-hemolítico grupo no A-no B y Enterococcus faecalis. Los cocos Gram positivos fueron los que expresaron características morfotintoriales de diplococcusGram negativos. Streptococcus b-hemolítico de 0-15 min, E. faecalis de 60-80 min, S. saprophyticus a los 10y 35, S. epidermidis a los 0,15, 20, 35, 40, 70, 90 y 95 min. Los Staphylococcus por fluorescencia, ademásde visualizarse como diplococcus anaranjados fluorescentes, se observaron verdes y amarillos. El colorvarío cíclicamente, iniciando como amarillo, pasando por anaranjado y luego verde. S. saprophyticus de40-120 min se obsevaron amarillos fluorescentes. S. epidermidis aún a los 50, 60 y 65 min se visualizaroncomo diplococcus anaranjados fluorescentes. Se concluye que los cocos Gram positivos presentan fase dediplococcus Gram negativos y anaranjados fluorescentes en su ciclo celular.