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El cáncer de páncreas es la cuarta causa de muerte por cáncer en los países industrializados. En 2030, las predicciones señalan que puede pasar a ser la segunda. Pese a la relativa baja incidencia de este tipo de cáncer, su elevada mortalidad hace que la supervivencia a los 5 años no supere el 5%. El carácter sistémico de esta enfermedad, dado que en el momento del diagnóstico un alto porcentaje de casos presenta una patología localmente avanzada o con metástasis, hace que la cirugía sea una opción aplicable en un bajo número de pacientes. Además, esta neoplasia se caracteriza por presentar una elevada resistencia a quimio y radioterapia. Así, el desarrollo de nuevas terapias contra esta enfermedad resulta especialmente necesario. Los recientes avances en las investigaciones oncológicas ponen de manifiesto el complejo entramado de desregulaciones de las células tumorales implicadas en el desarrollo del cáncer. Entre ellas, las alteraciones postranscripcionales han demostrado contribuir significativamente a la progresión tumoral, también, en el cáncer de páncreas. Este tipo de desregulaciones abren nuevas posibilidades para el diseño de terapias oncoselectivas basadas en agentes biológicos, como la viroterapia. Así, en la presente tesis se han estudiado las implicaciones de las Proteínas de Unión a Elementos de Poliadenilación Citoplasmática (CPEBs), el uso de codones de las distintas proteínas adenovirales, y la incorporación de dianas para miRNAs desregulados en condiciones tumorales, como elementos de regulación postranscripcional capaces de conferir selectividad tumoral a la expresión de proteínas virales. De esta manera, hemos demostramos que resulta posible explotar la reprogramación postranscripcional CPEB-dependiente con el fin de dotar de especificidad tumoral a la expresión de transgenes. Cuando el transgén controlado es el gen maestro adenoviral E-1A, responsable de la expresión del resto de genes virales, esta regulación confiere oncoselectividad a los adenovirus. Así mismo, también demostramos que, a diferencia del resto de proteínas estructurales del virus, la fibra adenoviral presenta un uso de codones desoptimizado para su expresión en células humanas. Así, mientras que la optimización del uso de codones de la fibra mejora su expresión cuando ésta proteína se expresa de manera aislada, los adenovirus que expresan la fibra optimizada presentan una expresión atenuada de la propia fibra y del resto de proteínas estructurales del virus, generando una replicación viral deficitaria. En su conjunto, nuestros datos sugieren que el uso balanceado de codones entre las proteínas de expresión tardía de los adenovirus favorecería su óptima traducción. Por último, demostramos que la introducción de dianas para miRNAs desregulados en condiciones tumorales en el 3’UTR de genes estructurales, es una estrategia capaz de generar nuevos adenovirus cuya replicación se vea restringida a las células tumorales., Pancreatic cancer is he fourth cause of cancer-related death in developed countries. In 2030 it is expected to become the second one. Despite the relative low incidence of this cancer type, its high mortality leads to a survival after 6 months of 5%. The systematic character of this illness, associated to its high metastasis levels, makes surgery a suboptimal solution in the majority of cases. Besides that, this cancer type presents a high resistance to chemo and radiotherapy, making the development of alternative therapies a must. Recent advances in oncology research have highlighted the complex alteration of regulatory networks leading to cancer development. Among them, posttranscriptional modifications have proven to be necessary to allow tumour progression — also in the case of pancreatic cancer. However, this type of modifications is not easily controlled by conventional treatments. Conversely, they open new possibilities to therapies based on biologic agents, such as virotherapy. In this thesis, we have proven that posttranscriptional reprogramming can be exploited to generate tumour specificity in transgene expression. When the controlled gene is the adenoviral master gene El A, responsible for the expression of the rest of viral genes, this regulation confers tumour specificity to adenoviruses. Furthermore, we have also proven that there is a balanced codon usage in adenoviral proteins that favours their translation probably by allowing an optimal distribution of cellular translational resources. In the near future, this type of posttranslational modulation could allow the design of new adenoviruses in which therapeutic proteins could be expressed without compromising viral fitness. Finally, we demonstrate that the introduction of tumour deregulated miRNA targets in the 3'UTR of structural proteins is a new strategy to generate adenoviruses with an expression pattern restricted to tumour cells.

Objetivos: Analizar las características clínicas y virológicas de las infecciones del tracto respiratorio inferior (ITRI) de los lactantes hospitalizados en nuestro medio y encontrar parámetros clínicos, analíticos o radiológicos que se relacionen, en el momento del ingreso, con una evolución más grave. Pacientes y métodos: Se realizó un estudio prospectivo de los niños menores de 24 meses ingresados por ITRI durante seis temporadas epidemiológicas consecutivas. Resultados: Se estudiaron 617 lactantes de los cuales el 64% presentaba bronquiolitis; el 24,6%, bronquitis espástica el 4,4%, laringitis, y el 6,8%, neumonía. La edad media fue de 269 ± 188 días, la razón varón/mujer de 1,6 y la estancia media 6,6 ± 3,5 días. Se aisló al menos un agente viral en el 55,6% de los episodios, que en el 83,6% correspondió al virus respiratorio sincitial (VRS). Otros virus aislados con menor frecuencia fueron: parainfluenza (7%), adenovirus (4,3%) e influenza (4%). Se detectaron coinfecciones en el 6,2 % de los casos VRS(+). Los niños VRS(+) tuvieron menor edad (p < 0,005), mayor puntuación de la escala clínica RDAI (Respiratory Distress Assessment Instrument) (p < 0,002) y mayor duración de la hospitalización (p < 0,001) que el resto. Se realizó radiografía de tórax al 94,3% de los pacientes, en la que se encontró infiltrado y/o atelectasia pulmonar en el 39,5%, lo que se relacionó de manera significativa con fiebre > 38,5 °C y concentraciones de proteína C reactiva > 30 mg/l (p < 0,001 y p < 0,002), pero no con puntuaciones elevadas de la escala clínica, ni con saturación de oxígeno (SaO2) < 90 %, ni con ingreso prolongado. La hospitalización de más de 5 días se relacionó en el análisis bruto con menor edad (p < 0,01), escala clínica > 6(p < 0,003), SaO2 ≤ 87% (p < 0,01) y aislamiento de VRS (p < 0,001). En el análisis multivariado sólo la SaO2 ≤ 87% y la presencia de VRS se asociaron con hospitalización de más de 5 días. Conclusión: Las ITRI más frecuentes del lactante hospitalizado en nuestro medio son las bronquiolitis VRS(+), con características clínicas similares a las descritas en otros países. La hipoxia al ingreso y el aislamiento de VRS en aspirado nasofaríngeo son los factores de riesgo más importantes de hospitalización prolongada. : Objectives: The aim of this study was to assess the clinical and viro-logical characteristics of lower respiratory tract (LRT) infection in hospitalized infants in Spain and to identify clinical, radiological or laboratory parameters that could, on admission, be associated with a more severe clinical course. Patients and methods: A prospective study of infants less than 24 months old hospitalized for LRT infection during six consecutive seasons was performed. Results: A total of 617 infants were included in the study. Diagnosis was bronchiolitis in 64 %, wheezy bronchitis in 24.6%, laryngitis in 4.4% and pneumonia in 6.8%. The mean age was 269 ± 188 days, the male/female ratio was 1:6 and the mean hospital stay was 6.6 ± 3.5 days. At least one viral agent was identified in 55.6% of the episodes, of which 83.6 % were due to respiratory syncytial virus (RSV). Other less frequently identified viruses were parainfluenza in 7%, adenovirus in 4.3% and influenza in 4%. Coinfection was identified in 6.2 % of RSV-positive infants. These infants were younger (p < 0.005), had higher respiratory distress assessment instrument (RDAI) scores and longer hospital stay than infants in the other etiologic groups. Chest radiographs were performed in 94.3 % of the infants and 39.5 % showed infiltrate or atelectasis. This radiological alteration was significantly associated with a fever of more than 38.5 °C and reactive C protein concentrations of more than 30 mg/L (p < 0.001 and p < 0.002), but not with higher RDAI score, SaO2 equal to or less than 87%, or longer hospital stay. In the crude analysis, hospitalization for more than 5 days was associated with lower age (p < 0.01), a mean RDAI score of more than 6 (p < 0.003), SaO2 equal to or less than 87% (p < 0.01) and RSV infection (p < 0.001). However, in the multivariate analysis only SaO2 equal to or less than 87 % and RSV infection were significantly associated with prolonged hospitalization. Conclusion: The most common lower respiratory tract infections in hospitalized infants in Spain are the various types of RSV-positive bronchiolitis, which have a clinical pattern similar to that described in other countries. Hypoxia on admission and RSV infection are the most important risk factors for prolonged hospitalization.

Objetivo: describir las características clínicas y etiológicas de la enfermedad diarreica aguda en los niños que consultan en el Centro de Asistencia del Sindicato Médico del Uruguay y evaluar el cumplimiento de la pauta de atención de la institución. Metodología: entre el 1 de abril de 1997 y el 31 de marzo de 1998 se evaluaron 177 niños menores de cinco años, de un total de 184 que consultaron por enfermedad diarreica aguda en el Servicio de Urgencia Pediátrica. Se investigó rotavirus y adenovirus en materias fecales, Shigella y Salmonella en aquellos que presentaron sangre y/o mucopus. Resultados: la mayoría de los niños (n=115) consultaron en otoño. La mitad eran varones. Predominaron los niños de 1 a 2 años de edad (n=93). Sólo tres tenían problemas nutricionales. Presentaron deposiciones con moco y/o sangre 24 niños, vómitos 87, fiebre 63 y deshidratación sólo cinco. Se asoció otitis media en cinco niños, infección respiratoria aguda alta en 25 e infección respiratoria aguda baja en dos. Requirieron internación 14 niños; cuatro presentaron intolerancia a la lactosa; ninguno requirió terapia intensiva; el promedio de estadía fue 3,2 días; ninguno falleció. La investigación causal se realizó en 120 niños (68%). Se identificó un agente enteropatógeno potencial en materias fecales de 61 pacientes (51%): rotavirus en 55, en un caso asociado a Shigella, y adenovirus en 6. En todos los casos se manejó correctamente la pauta de tratamiento propuesta. Conclusiones: la población asistida en el Centro de Asistencia del Sindicato Médico del Uruguay tiene características clínicas diferentes a la asistida en el sector público. Se asoció rotavirus a enfermedad diarreica aguda en un elevado porcentaje. El cumplimiento de la pauta fue muy satisfactorio. Objetivo: Descrever as caraterísticas clínicas e da origem da enfermidade diarreica aguda nas crianças que consultaram no Centro de Assistência do Sindicato Médico do Uruguai e avaliar o cumprimento das regras de atenção da instituição. Metodología: Entre 1/IV/97 e 31/III/98, estudaram-se 177 crianças com menos de 5 anos de um total de 184 que consultaram por enfermidade diarreica aguda no Serviço de Urgência Pediátrica. Investigou-se rotavirus e adenovirus em matérias fecais, Shigella e Salmonella em aqueles que apresentaram sangue e/o mucopus. Resultados: A maioria das crianças (n=115) consultaram em outono. A metade do sexo masculino. Predominaram as crianças de 1 a 2 anos de idade (n=93). Somente 3 tinham problemas nutricionais. Apresentaram materia fecal com muco e /o sangue 24 crianças, vômito 87, febre 63 e desidratação somente 5. Associou-se otitis média em 5 crianças, e infecção respiratória aguda alta em 25 e infecção respiratória aguda baixa em 2. Foi necessária a internação em 14 crianças; 4 apresentaram intolerância à lactose; nenhuma necessitou terapia intensiva; a média de estadia foi 3,2 dias; nenhuma faleceu. A investigação causal realizou-se em 120 crianças (68%). Identificou-se um agente enteropatógeno potencial em matérias fecais de 61 pacientes (51%): rotavirus em 55, em um caso associado a Shigella, e adenovirus em 6. Em todos os casos aplicaram-se corretamente as regras de tratamento propostas. Conclusões: A população assistida no Centro Assistencial do Sindicato Médico do Uruguai tem caraterísticas clínicas diferentes à assistida no setor público. Rotavirus se associou a enfermidade diarreica aguda em uma elevada percentagem. O cumprimento das regras foi muito satisfatório. Objective: to describe clinical and etiologic features of children with acute diarrhea who consulted at Centro de Asistencia del Sindicato Médico del Uruguay and to evaluate the compliance of guidelines for standard treatment of this disease. Methods: between April 1, 1997 and March 31, 1998, 177 of the 184 children under five years who consulted with acute diarrhea at the Pediatric Emergency Ward were evaluated. Stools were examined for rotavirus and adenovirus; Shigella and Salmonella were investigated when stools had blood or mucus. Results: Most children (n=115) consulted in autumn. Half of the children were male; 93 were under 2 years of age. Only 3 had malnutrition. Bloody or mucous stools were present in 24 patients, vomiting in 87, fever in 63 and dehydration in 5. Otitis media was associated in five children, upper acute respiratory infection in 25 and lower acute respiratory infection in two. Fourteen children were hospitalized; 4 had lactose intolerance, none required intensive care, mean duration of hospitalization was 3.2 days; there were no deaths. Microbiologic investigation was performed in 120 children (68%). A potential entheropathogen was identified in 51 (61%): rotavirus in 55, in one case associated with Shigella, and adenovirus in six. Guidelines for standard treatment were followed in all the patients. Conclusions: clinical features of children with acute diarrhea who consult in Centro de Asistencia del Sindicato Medico del Uruguay are different from those of children assisted in public hospitals. Rotavirus was associated to acute diarrhea in a high percentage of cases. Compliance with guidelines for standard treatment was highly satisfactory.