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RESUMEN Se reporta un carcinoma de células escamosas (CCE) localizado en la vulva de una yegua mestiza de 12 años, criado bajo un sistema de tipo extensivo. La yegua presentaba un tumor granulomatoso adherido a la vulva, que presentaba un crecimiento progresivo y afectaba a toda la zona vulvar. El tumor presentaba color rojo blanquecino, de consistencia sólida, superficie irregular y con ulceraciones. El diagnóstico se realizó mediante la técnica histopatológica utilizando tres fragmentos y tuvo un resultado compatible para carcinoma de células escamosas. ABSTRACT It is reported a squamous cell carcinoma (CCE) located in the vulva of a female 12- year-old crossbreed horse, raised in an extensive system. The mare presented a granulomatous tumour adhered to the vulva, which had progressive growth and affected the entire area of the vulva. The tumour showed a whitish red colour, solid consistency, non-regular surface and ulcerations. The diagnosis was made using the histopathological technique using three fragments and had a compatible result for squamous cell carcinoma.

[ES] La miocardiopatía arritmogénica (MCA) es una enfermedad genética rara (OMIM #107970; ORPHA247) con una prevalencia de entre 1:1000 y 1:5000. Se caracteriza por la sustitución progresiva del miocardio por tejido fibroadiposo y puede debutar directamente con muerte súbita. Se conocen 16 genes cuyas mutaciones pueden ser causantes de MCA, siendo más frecuentes las mutaciones en genes desmosómicos (desmoplaquina-DSP, placofilina-2, desmocolina-2, desmogleína-2 y placoglobina). El patrón de herencia de estos genes es con frecuencia autosómico dominante, tiene una penetrancia incompleta y una expresividad variable. La epigenética modula la producción proteica pero el estudio del tejido clave en la MCA plantea limitaciones éticas en tanto en cuanto supone tener que realizar una biopsia endomiocárdica asumiendo potenciales riesgos de complicaciones. Por ello, decidimos verificar si el frotis bucal (fácilmente accesible, barato y sin riesgos) puede actuar como como espejo de lo que sucede en el corazón. Más concretamente, desde un punto de vista bibliográfico evaluamos si el estado los promotores de los genes causantes de la enfermedad son metilables. De entre ellos seleccionamos el gen DSP para el estudio de su metilación por pirosecuenciación en la muestra disponible en humanos, pues es uno de los que tenemos familias bien caracterizadas en la consulta de Cardiopatías Familiares. Se reclutaron 13 portadores de mutación en DSP sin expresión del fenotipo de MCA, 25 pacientes MCA y 11 familiares sanos. Gracias a la actividad trasplantadora del centro en el que se realizó el trabajo, se reclutaron 7 pacientes con muestra pareada de frotis bucal y miocardio obtenidos al acudir a recibir un trasplante cardíaco por insuficiencia cardíaca terminal, independientemente del diagnóstico de base. Se analizaron 4 regiones del gen que comprendían 14 sitios metilables de una isla CpG y un shore localizada en el promotor del gen. Este estudio se realizó en queratinocitos bucales como biomarcador de fenotipo subrogado de la MCA. Dada la situación de alerta sanitaria quedó pendiente la validación de los resultados downstream mediante la cuantificación del mRNA de DSP en dichas muestras para correlacionar el nivel de metilación y de expresión del gen en cada una de las muestras recogidas., [EN] Arrhythmogenic cardiomyopathy (ACM) is a rare genetic disease (OMIM # 107970; ORPHA247) with a prevalence of between 1:1000 and 1:5000. It is characterized by the progressive replacement of the myocardium by fibrofatty tissue and can debut directly with sudden death. Mutations in 16 genes were identified as the cause of ACM with mutations being more frequent in desmosomal genes (desmoplakin-DSP, placophilin-2, desmocollin-2, desmoglein-2 and plakoglobin). The inheritance pattern of these genes is often autosomal dominant, has incomplete penetrance, and variable expressivity. Epigenetics modulates protein production, but the study of the heart tissue in ACM poses ethical limitations as it involves having to perform an endomyocardial biopsy, assuming potential risks of complications. Therefore, we decided to verify if oral keratinocytes (easily accessible, cheap and without risks) can act as a substitute of what happens in the heart. From a bibliographic point of view, we evaluated whether the state of the promoters of the genes causing the disease are methylable. From among them, we selected the DSP gene for the study of its methylation by pyrosequencing in the sample available in humans, since we have well-characterized families in the Family Heart Disease consultation. 13 DSP mutation carriers without expression of the ACM phenotype, 25 ACM patients and 11 healthy family members were recruited. Thanks to the transplantation activity of the center where the work was carried out, we recruited 7 patients with a paired sample of oral keratinocytes and myocardial tissue, regardless of the underlying diagnosis. 4 regions of the gene were analyzed that comprised 14 methylatable sites of a CpG island and shore located in the gene promoter. This study was carried out in oral keratinocytes as a surrogate phenotype biomarker of ACM. Given the health alert situation, the validation of the downstream results by quantifying the DSP mRNA in said samples are pending to correlate the level of methylation and gene expression in each of the samples collected., Este trabajo fue parcialmente financiado con ayudas de investigación del Instituto de Salud Carlos III, FEDER “Unión Europea”, "Una forma de hacer Europa” [PI18/01582; CIBERCV, Biobanco La Fe PT17/0015/0043] y el Memorial Nacho Barberá.

RESUMEN: El liquen plano oral (LPO) es una enfermedad inflamatoria que cuenta con la participación tanto de componentes innatos como adaptativos del sistema inmune. Aunque no se identifica un factor causal en LPO, se ha asociado una hipersensibilidad celular con su fisiopatología. Además, la cronicidad de la enfermedad podría causar su transformación maligna. Los receptores tipo toll (TLRs) tiene un rol importante en la respuesta inmune innata dada en el establecimiento de LPO. Una familia de factores de transcripción, la familia de Factores Reguladores de Interferón (IRF), específicamente, el patrón de expresión del factor regulador de interferón 6 (IRF6) se postula como una molécula útil en determinar el pronóstico de LPO, como componente clave de la señalización de TLRs, vía TLR2-IRAK1, que podría impartir especificidad a las respuestas inmunes posteriores por medio de la producción de citocinas en los queratinocitos orales afectados en LPO. Por lo tanto, inicialmente se planteó un modelo sobre el proceso inflamatorio en LPO, enfatizado en el papel de los queratinocitos orales. Esta tesis de maestría tuvo como objetivos evaluar la expresión de IRF6, TLR2 y de las citocinas IFNγ, IL1β, IL6, IL10 y TNFα, como principales actores del modelo propuesto. Para alcanzar estos objetivos, se realizó la estandarización y validación de la citología oral en base líquida para el análisis celular y molecular de los queratinocitos orales con la medición de la expresión de TLR2 e IRF6 mediante ensayos de qPCR; en los que se observó una variación en la expresión de TLR2 e IRF6 entre los pacientes con LPO estando levemente disminuidas respecto al control. Y se realizó recolección de saliva no estimulada para determinar la concentración de las citocinas mencionadas mediante un ensayo de Luminex, en el que se identificó una mayor expresión de IFNγ e IL10. Estos hallazgos permiten postular un mecanismo de compensación inflamatorio provocado por el incremento de IFNγ, y abren las puertas para nuevas investigaciones que incluyan un mayor número de pacientes de LPO categorizados por tipo de lesión y tiempo aproximado de diagnóstico que permitan validar el modelo inflamatorio propuesto y pueda ser aplicado a otros desordenes potencialmente malignos o cáncer y así avanzar en sus diagnósticos y pronósticos. ABSTRACT: Oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease with a strong immune mechanism involved. And this bilaterally affects the stratified squamous epithelium of the oral mucosa. Although no causal factor is identified in OLP, cellular hypersensitivity has been associated with its pathophysiology. In addition, the chronicity of the disease could cause its malignant transformation. Toll-like receptors (TLRs) play an important role in the innate immune response given in the onset of OLP. A family of transcription factors, the Interferon Regulatory Factors (IRF), specifically, the expression patterns of interferon regulatory factor 6 (IRF6) is postulated as a useful molecule in determining the prognosis of OLP, as a key component of TLR signaling, via TLR2-IRAK1, could impart specificity to subsequent immune responses through the production of cytokines in the LPO- affected oral keratinocytes. Therefore, a model of the inflammatory process in OLP, emphasizing on the role of oral keratinocytes, was proposed initially. This master's thesis aimed to evaluate the expression of IRF6, TLR2 and the cytokines IFNγ, IL1β, IL6, IL10 and TNFα as main actors of the proposed model. In order to reach these aims, the standardization and validation of the liquid-based oral cytology for the cellular and molecular analysis of oral keratinocytes was carried out to measure the expression of TLR2 and IRF6 through qPCR assays, in which a differential expression was observed for TLR2 and IRF6 in OLP patients being slightly lower when compared to the control group. And, unstimulated saliva was collected to determine the concentration of the mentioned cytokines using a Luminex assay, in which a higher expression of IFNγ and IL10 was identified. These findings allow the postulation of an inflammatory compensation mechanism caused by the increase of IFNγ. These results open the doors for new investigations that include a greater number of OLP patients categorized by type of injury and approximate time of diagnosis that allow the validation of the proposed inflammatory model and can be applied to other potentially malignant disorders or cancer and therefore advance in their diagnoses and prognosis.

Resumen El carcinoma espinocelular es un subtipo de neoplasia que no involucra a los melanocitos, y junto con el carcinoma basocelular, representan el 75% de los carcinomas de piel no melanoma. En Colombia, se calculó que de 2003 a 2007 el cáncer no melanoma registró un incremento de 19 a 39 casos por 100 000 habitantes. El carcinoma espinocelular tiende a aparecer en fototipos de piel 1 y 2, en áreas fotoexpuestas que representan cabeza y cuello (70%), en extremidades superiores (25%) y en zonas no fotoexpuetas como glúteos y mucosas genitales (5%). Este artículo hace un reporte de caso de un carcinoma espinocelular en un paciente de 51 años con un cuadro clínico aproximadamente de dos años que se caracterizó por diversos tumores localizados en labio inferior derecho y maxilar inferior y que estuvo relacionado a exposición solar crónica y presencia de queratosis actínica en cara y cuero cabelludo. Abstract Spinocellular carcinoma is a subtype of neoplasia that does not involve melanocytes, and together with basal cell carcinoma, they represent 75% of non-melanoma skin carcinomas. In Colombia, it was calculated that from 2003 to 2007 non-melanoma cancer registered an uptick of 19 to 39 cases per 100,000 inhabitants. Spinocellular carcinoma tends to appear in skin phototypes 1 and 2, in photoexposed areas that represent head and neck (70%), in upper extremities (25%) and in non-photoexposed areas such as buttocks and genital mucous membranes (5%). This article makes a case report of a spinocellular carcinoma in a 51-year-old patient with a clinical picture of approximately two years that was characterized by various tumors located in the right lower lip and lower jaw related to chronic sun exposure and presence of actinic keratosis on face and scalp. Resumo O carcinoma espinocelular é um subtipo de neoplasia que não envolve os melanócitos, e junto com o carcinoma baso-celular, representam 75% dos carcinomas de pele não melanoma. Na Colômbia, calculou-se que de 2003 a 2007 o câncer não melanoma registrou um aumento de 19 a 39 casos por 100 000 habitantes. O carcinoma espinocelular tende a aparecer em fototipos de pele I e II, em áreas fotoexpostas que representam cabeça e pescoço (70%), em extremidades superiores (25%) e em áreas não fotoexpostas como glúteos e mucosas genitais (5%). Este artigo faz um relato de caso de um carcinoma espinocelular num paciente de 51 anos com um quadro clínico aproximadamente de dois anos que se caracterizou por diversos tumores localizados em lábio inferior direito e maxilar inferior e que esteve relacionado à exposição solar crónica e presença de ceratose actínica na cara e no couro cabeludo.

En los últimos años se revalorizó la idea de que el estado de salud se logra cuando hay un equilibrio psico-neuro-inmuno-endocrino. Células de los sistemas nerviosos, endocrino e inmune pueden sintetizar neurotransmisores, hormonas y citoquinas, así como sus respectivos receptores. Entre los neurotransmisores, la catecolamina dopamina no solo tiene un importante rol a nivel del sistema nervioso central regulando la actividad locomotora, cognitiva y comportamental, sino que puede modular funciones de glándulas endócrinas centrales. Además, se lo ha considerado un neurotransmisor clave entre el sistema nervioso y el sistema inmune, así como un mediador producido y liberado por las propias células inmunes, que, junto con las catecolaminas adrenalina y noradrenalina, puede modular diferentes procesos inmunológicos. La piel constituye la primera barrera inmunológica contra agentes microbianos y químicos ambientales. En la piel, los queratinocitos, fibroblastos y células inmunes residentes como los macrófagos, son capaces de reconocer noxas o señales de daño internas y externas, a través de receptores de reconocimiento de patrones (ejemplo, TLRs) desencadenando vías de señalización que permiten promover una respuesta inmune a nivel cutáneo. Por otro lado, los disruptores endocrinos, como el Bisfenol A (BPA), son sustancias presentes en el medio ambiente capaces de alterar el equilibrio hormonal. Considerando que: 1) la piel se encuentra ricamente inervada por nervios simpáticos productores de catecolaminas; 2) que el denominado "sistema inmune de la piel" se compone de una compleja red de células inmunes y no inmunes, entre ellas los queratinocitos y los macrófagos; y 3) que el BPA puede entrar en contacto con la piel y ser absorbido por la misma, se propuso como objetivo de esta Tesis doctoral, en el marco de las interacciones bidireccionales entre los sistemas inmune y neuroendócrino, evaluar la influencia de agonistas dopaminérgicos sobre los mecanismos moleculares que llevan a la activación de células del sistema inmune cutáneo, como queratinocitos y macrófagos e investigar los efectos de un tóxico ambiental disruptor endócrino -BPA- sobre estas células y su interacción con la vía dopaminérgica. Los resultados obtenidos sugieren que, en queratinocitos humanos, los agonistas dopaminérgicos pueden estimular la producción de IL-6 e IL-8, efectos mediados por receptores dopaminérgicos, β-adrenérgicos y la intervención de mecanismos oxidativos independientes de receptores. El aumento observado sobre la producción de citoquinas se acompañó con la activación del factor de transcripción nuclear NFκB. Además, la dopamina disminuyó la migración de los queratinocitos concordante con la disminución en la actividad MMP-9, acciones que serían mediadas en parte por receptores β-adrenérgicos. Además, se demostró, en macrófagos humanos, que la dopamina estimuló la producción de IL-8, sin modificación de IL-1β, acción mediada parcialmente por receptores β-adrenérgicos, y la actividad de MMP-9, sin involucrar la activación del factor de transcripción NFκB. Resultados obtenidos con los medios condicionados de los macrófagos indicarían que el efecto estimulante de dopamina sobre la producción de IL-8 en los macrófagos THP-1 favorecería la migración de los queratinocitos, efecto que se vería inhibido en presencia de altos niveles de IL-6, sugiriendo un efecto modulador del neurotransmisor en la interacción entre ambas células en relación con el proceso de cicatrización. También, se estudió la participación de receptores de la inmunidad innata, TLR3, en la neuromodulación de la respuesta inmune cutánea, demostrando que la disminución en la producción de IL-8 por parte de dopamina, estaría relacionada con una menor actividad de MMP-9 y un retraso en la migración celular inducida por el ligando de TLR3 luego de producirse la herida en los queratinocitos. Por último, se demostró que el disruptor endocrino, a tiempos cortos, no modificó la producción de citoquinas ni la respuesta a dopamina en los queratinocitos HaCaT. Con una estimulación prolongada del BPA, no se observaron cambios en los niveles de IL-6 ni en la activación de NFκB inducidos por dopamina, pero si sobre la producción de IL-8 y la actividad de MMP-9, a diferencia de lo obtenido en ausencia del disruptor endocrino. En cuanto a los macrófagos humanos, se observó que el BPA, a tiempos cortos, no modificó los niveles de IL-8 ni la respuesta a dopamina. La estimulación prolongada de BPA sobre los macrófagos modificó los niveles de IL-8 a diferencia de lo observado en ausencia de BPA. Además, no se indujo la activación de la vía de NFκB en ausencia o presencia de dopamina, pero si favoreció la actividad de MMP-9. Estos resultados sugieren que el BPA, a tiempos cortos, solo o en combinación con dopamina no modificaría la producción de citoquinas en nuestros modelos de queratinocitos y macrófagos humanos. Por otro lado, pudimos inferir de los resultados obtenidos, que las células cultivadas con BPA por tiempos prolongados pueden afectar la respuesta a dopamina en queratinocitos y macrófagos humanos. En conjunto estos resultados, proponen que la dopamina es un neurotransmisor importante en las interacciones neuro-inmuno-endocrino a nivel de la piel, sugiriendo un rol que podría ser desfavorable en procesos fisiológicos como la cicatrización. Estos resultados, serían de interés desde el punto de vista de los tratamientos de enfermedades neurodegenerativas y/o dermatológicas, ya que existen fármacos utilizados en la clínica para tratar estos desórdenes que poseen acción neuroinmunoendocrina. Además, se estableció una interacción entre los disruptores endocrinos y las acciones dopaminérgicas a nivel de células del sistema inmune cutáneo, un área de estudio novedosa que podría ser útil para estudios inmunotoxicológicos. Fil: Parrado, Andrea Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina

Resumen La ingeniería de tejidos aplicada a lesiones de la piel propone constantemente métodos innovadores con el propósito de mejorar la calidad de vida de las personas con estas patologías. El objetivo de este estudio fue cultivar fibroblastos y queratinocitos humanos sobre soportes artificiales poliméricos termosensibles y membranas acelulares derivadas de vejiga porcina. Se establecieron cultivos primarios y subcultivos y, subsecuentemente, se obtuvieron epidermis diferenciadas y estratificadas a partir de queratinocitos que crecieron en cocultivo con una capa alimentadora (feeder layer) de fibroblastos dérmicos humanos. Mediante microscopía óptica, se efectuaron observaciones relacionadas con el crecimiento y la diferenciación de ambos tipos celulares. Se encontró que las células epiteliales cultivadas sobre soportes termosensibles produjeron láminas epidérmicas bastante semejantes a una epidermis natural, mientras que la membrana acelular derivada de vejiga porcina resultó menos exitosa para el desarrollo de queratinocitos. Abstract Innovative methods are constantly proposed by tissue engineering in order to improve the quality of life of people affected by skin injuries. The aim of this study was the in vitro culture of human fibroblasts and keratinocytes on both artificial polymeric thermosensitive and porcineurinary-bladder-derived acellular scaffolds. Primary cultures and subcultures were established and, subsequently, differentiated and stratified epidermises were obtained from keratinocytes co-cultured with a human dermal fibroblast feeder layer. Observations on both structure and differentiation of keratinocytes and fibroblasts were performed by optical microscopy. It was observed that epithelial cells cultivated on thermosensitive scaffolds were able to produce epidermal sheets similar to normal epidermis, whereas keratinocyte development was less successful on the porcine-urinary-bladder-derived acellular membrane.

Resumen Introducción: A pesar de que existen opciones terapéuticas para el tratamiento de defectos de la mucosa bucal, persiste la necesidad de encontrar sustitutos funcionales, anatómicos y estéticamente similares al tejido que se va a reemplazar, así como soluciones que reduzcan la morbilidad de los injertos autólogos. Objetivo: Determinar la compatibilidad clínica e histológica de aloinjertos equivalentes de mucosa bucal elaborados mediante ingeniería tisular en ratas no consanguíneas. Materiales y métodos: Se utilizó una muestra de mucosa bucal de ratas Sprague Dawley para la obtención de un cultivo de fibroblastos y otro de queratinocitos y fibroblastos. En ambos casos, se usó una membrana de colágeno comercial como soporte. Después de diez semanas de cultivo, las membranas resultantes se injertaron en cuatro ratas Wistar. La primera fase del estudio consistió en la elaboración de los tejidos análogos de mucosa bucal mediante ingeniería tisular, los cuales se implantaron en ratas Wistar inmunocompetentes; posteriormente, se evaluaron las características clínicas e histológicas del aloinjerto. Resultados: La evaluación in vivo de los tejidos análogos demostró que se habían integrado correctamente en los huéspedes inmunocompetentes, y se había logrado el aumento del biotipo periodontal y la creación de una zona con mayor queratinización. Desde el punto de vista histológico, el tejido adquirió características similares a las de la muestra de mucosa bucal de control, sin ningún tipo de reacción inflamatoria ni signos clínicos o histológicos de rechazo. Conclusión: Hubo compatibilidad clínica e histológica de los aloinjertos equivalentes de mucosa bucal obtenidos mediante ingeniería tisular. Abstract Introduction: Although there are therapeutic options for the treatment of oral mucosa defects, the need for functional, anatomical and aesthetically similar substitutes persists, as well as for solutions to reduce autologous grafts morbidity. Objective: To determine clinical and histological compatibility of equivalent oral mucosa allografts generated through tissue engineering in non-consanguineous rats. Materials and methods: We used a sample of oral mucosa from Sprague Dawley rats to obtain a fibroblast culture and a keratinocytes and fibroblasts co-culture. In both cases, we used a commercial collagen membrane as "scaffold". After ten weeks of culture, we grafted the resulting membranes into four Wistar rats. The first phase of the study was the development of the oral mucosa equivalents generated by tissue engineering. Then, we implanted them in immunocompetent Wistar rats, and finally we evaluated the clinical and histological features of the allografts. Results: In vivo evaluation of mucosal substitutes showed a correct integration of artificial oral mucosa in immunocompetent hosts, with an increase in periodontal biotype and the creation of a zone with increased keratinization. Histologically, the tissue was similar to the control oral mucosa sample with no inflammatory reaction nor clinical or histological rejection signs. Conclusion: The equivalent oral mucosa allografts generated by tissue engineering showed clinical and histological compatibility.

Keratinocytes, the main cells of the epidermis, require mitotically inactive but live feeder-layer cells for their survival and proliferation. We evaluated four X-ray irradiation doses on 3T3 murine fibroblasts for feeder-layer production. Each dose effect was evaluated by cell counting and cellular viability determination (MTT), cell adhesion (plating efficiency) and cell migration (scratch wound healing). Mitotic arrest was suggested by nuclear staining (GIEMSA). We determined that an 80 Gy X-ray dose generated enough cell damage to cause mitotic arrest yet keeping metabolically active cells up to 25 days. Los queratinocitos, las principales células de la epidermis, requieren una capa alimentadora de células viables mitóticamente inactivadas para su supervivencia y proliferación in vitro. Para la producción de capas alimentadoras a partir de fibroblastos murinos 3T3, se evaluaron cuatro dosis de radiación con rayos X. Los efectos de las dosis se evaluaron mediante recuentos celulares y determinación de la viabilidad (MTT), adhesión (eficiencia de plateo) y migración celular (scratch wound healing). Además, se encontraron evidencias que sugieren el arresto mitótico mediante una tinción nuclear (GIEMSA). Se observó que una dosis de radiación correspondiente a 80 Gy generó daños suficientes en la línea celular para causar el arresto mitótico, manteniendo a la vez la actividad metabólica basal durante 25 días.

Innovative methods are constantly proposed by tissue engineering in order to improve the quality of life of people affected by skin injuries. The aim of this study was the in vitro culture of human fibroblasts and keratinocytes on both artificial polymeric thermosensitive and porcine-urinary-bladder-derived acellular scaffolds. Primary cultures and subcultures were established and, subsequently, differentiated and stratified epidermises were obtained from keratinocytes co-cultured with a human dermal fibroblast feeder layer. Observations on both structure and differentiation of keratinocytes and fibroblasts were performed by optical microscopy. It was observed that epithelial cells cultivated on thermosensitive scaffolds were able to produce epidermal sheets similar to normal epidermis, whereas keratinocyte development was less successful on the porcine-urinary-bladder-derived acellular membrane. La ingeniería de tejidos aplicada a lesiones de la piel propone constantemente métodos innovadores con el propósito de mejorar la calidad de vida de las personas con estas patologías. El objetivo de este estudio fue cultivar fibroblastos y queratinocitos humanos sobre soportes artificiales poliméricos termosensibles y membranas acelulares derivadas de vejiga porcina. Se establecieron cultivos primarios y subcultivos y, subsecuentemente, se obtuvieron epidermis diferenciadas y estratificadas a partir de queratinocitos que crecieron en cocultivo con una capa alimentadora (feeder layer) de fibroblastos dérmicos humanos. Mediante microscopía óptica, se efectuaron observaciones relacionadas con el crecimiento y la diferenciación de ambos tipos celulares. Se encontró que las células epiteliales cultivadas sobre soportes termosensibles produjeron láminas epidérmicas bastante semejantes a una epidermis natural, mientras que la membrana acelular derivada de vejiga porcina resultó menos exitosa para el desarrollo de queratinocitos.

Introducción: La epidermólisis Bullosa (EB) o "piel de cristal" es un grupo de trastornos hereditarios, el cual afecta las proteínas que forman la unión dermo-epidérmica de piel y mucosas, lo que lleva a la formación de lesiones ampollares. Objetivo: Comunicar la primera intervención con cultivos de queratinocitos humanos alogénicos (CQHA) en el tratamiento de la EB, en un centro de salud familiar de Chile el año 2013. Metodología: Se presenta el caso de un paciente de 4 años, quien presentaba lesiones en el 80% del cuerpo de 48 meses de evolución. Se realizó una intervención de la extremidad inferior derecha con el 90% comprometido con CQHA durante 5 sem con el fin de lograr la reepitelización y formación de piel indemne. Resultados: Posterior a las 5 sem del tratamiento se logró reepitelización del 90% de la extremidad intervenida, incremento del diámetro de la pierna de 23 a 27 cm., en la escala de valoración de heridas se reduce de 30 a 13 puntos y en la escala de valoración análoga del dolor de 8 a 2 puntos. Conclusión: Se presenta una alternativa terapéutica para pacientes con EB. Background: Epidermolysis bullosa (EB) or "crystal skin" is a group of inherited disorders that affect the protein that forms the anchor between dermis and epidermis, producing blister injuries. Case report: We report a four years old boy with junctional EB and lesions in 80% of the body lasting 48 months. His right lower limb was treated with allogeneic human cultured queratinocytes during five weeks. After the treatment period, a re-epithelization of 90% of the intervened limb was observed. Its diameter increased from 23 to 27 cm, the wound assessment scale score decreased from 30 to 13 and the visual analogue pain assessment score decreased from eight to two. Therefore allogeneic human cultured queratinocytes are a novel therapeutic alternative for EB.

A nivel mundial los dermatofitos son conocidos como unos de los principales patógenos causantes de infecciones en la piel. En la literatura médica se encuentra ampliamente documentado las manifestaciones clínicas y las opciones terapéuticas; sin embargo, su fisiopatología sigue siendo un área en el que aún queda mucho por saber, a pesar de múltiples experimentos y estudios llevados a cabo desde el siglo XX. Los mecanismos de adhesión y de invasión se relacionan con la producción de adhesinas específicas a receptores de la piel, proteasas, sibtilisinas, crecimiento longitudinal y transversal del hongo y a la identificación de genes codificadores de estas características. Se presenta a continuación una revisión sobre el mecanismo cómo estos hongos se adhieren e invaden la piel en los humanos. Dermatophytes are known for being one of the most common pathogens that causes skin infections around the world; although its clinical spectrum and management are widely investigated their physiopathology is still unknown. There are having been multiple investigations since 20th century, but the exact mechanisms of skin adherence and invasion is not completely understood yet. The adhesion and invasion mechanisms are related with the production of specific adhesins to skin receptors, proteases, sibtilisinas, and transverse to longitudinal growth of the fungus, and the identification of the genes coding for these characteristics. Here, we present a summary of what is known until now of these mechanisms.

La Psoriasis, que parece no tener una mayor prevalencia en infectados por el VIH, sí que presenta en su evolución en estos casos diferencias significativas ligadas no solo a la inmunodepresión, sino también a la propia acción del virus sobre los factores que influyen en la agudización de la psoriasis, como la estimulación de los queratinocitos, favorecer la presencia de infecciones en la piel, o la liberación de sustancia P que favorece igualmente el incremento queratinocítico. Se presenta un caso clínico y su expresión gráfica a través de las imágenes acompañantes. Psoriasis, which does not appear to have greater prevalence amongst HIV+ patients, does however present in its progress significant differences in these cases that are not only linked to immunodepression, but also to action of the virus itself on factors that aggravate psoriasis, such as the stimulation of keratinocytes, the favouring of skin infections, or the liberation of substance P, which also encourages growth in keratinocytes. A clinical case is presented along with explanatory imagess

En el campo de la regeneración de piel, la ingeniería de tejidos busca superar las limitaciones asociadas con el uso de autoinjertos inmediatos, dado que la elección de una región donante en el paciente, constituye un riesgo para el mismo, además de ser insuficiente cuando la lesión es extensa. Se ha comprobado que el empleo de la submucosa del intestino delgado de cerdo (SIS) (por la sigla en inglés small intestinal submucosa), por su especial composición, como biomaterial de relleno para tratar lesiones, disminuye el dolor y la inflamación desde su primera aplicación y favorece la movilidad temprana de la región lesionada. Con el fin de determinar la utilidad de SIS, como sustituto epidérmico, en el presente estudio se desarrolló un protocolo para el cultivo primario de queratinocitos humanos, provenientes de prepucios infantiles, sobre una matriz de SIS como soporte. Se evaluó el potencial de adherencia y la capacidad de proliferación de queratinocitos sobre este sustrato. Tissue engineering, in the fields of skin regeneration, seeks to overcome the limitations associated with the use of immediate auto-grafts, since choosing the donor region of the patient constitutes a risk for the patient himself and is insufficient if the injury that has to be repaired is very large. The use of the pig’s small intestine submucosa (SIS) has being proved as a filling biomaterial to treat injuries, because of its special composition, it lowers pain and inflammation since its first application and it favours early mobility to the wounded area. The present study developed a protocol for the primary culture of human keratinocytes from infant foreskins, and used small intestinal submucosa (SIS) like culture substrate. Cellular adherence potential and proliferation capability of the keratinocytes over this substrate was evaluated.

El liquen plano oral (LPO) es una enfermedad mucocutánea inflamatoria crónica, con una etiología aún desconocida, de base autoinmune, que suele cursar con manifestaciones orales, con una clínica e histología características y de curso evolutivo benigno, pero susceptible de transformación maligna. En los últimos años se ha investigado la relación entre su patogenia y los mecanismos apoptóticos de destrucción celular. Material y método: Búsqueda bibliográfica en el servidor de la U.S. National Library of Medicine and the National Institutes of Health (Pubmed) con las palabras clave "apoptosis AND oral lichen planus". Discusión: Existen diferentes estudios que evalúan la relación de los diferentes marcadores apoptóticos (TNF-α, bcl-2, Fas, p53, BMP-4, granzima B, MMP…) con la patogenia, evolución, clínica y malignización del LPO. Para la determinación de estos factores se emplean técnicas de anatomía patológica e inmunohistoquímica (TUNEL, PCR,…). Conclusión: no existe consenso en los resultados y las consiguientes conclusiones obtenidas en los diferentes estudios sobre la influencia de cada uno de los marcadores apoptóticos en el desarrollo de las lesiones de LPO. Es necesaria una mayor y más profunda investigación en búsqueda de un factor siempre asociado a las formas clínicas agresivas con mayor tendencia a la malignización. Oral lichen planus (OLP) is a mucocutaneous inflammatory chronic disease, with unknown etiology, autoinmune, usually associated with characteristical oral manifestations. Despite it has a benign evolution, is posible to become malign. Lately, relation between the pathogenesis and apoptotic cells destroy has been investigated. Methods: A bibliography survey was carried out with th U.S. National Library of Medicine and the National Institutes of Health (Pubmed) with the keywords "apoptosis AND oral lichen planus". Discussion: Several trials evaluate the relationship among several apoptotic markers (TNF-α, bcl-2, Fas, p53, BMP-4, granzyme B, MMP…) and OLP pathogenesis, evolution, clinic and malignization. These studies employed histology and immunohistochemistry (TUNEL, PCR) Conclusion: Lack of consensus on results and conclusions about the influence of each apoptotic marker in the OLP development. Further investigation is required to obtain an apoptotic marker strongly associated with aggressive clinic and high-risk of malignancy.

En Antioquia, es necesario buscar una solución disponible, efectiva y económicamente viable para afrontar los problemas de la piel de los pacientes que, por accidentes o enfermedades, han disminuido su calidad de vida y se encuentran aislados a la espera de tratamientos que les permitan recuperar la funcionalidad de su cuerpo y les reduzcan los riesgos por la exposición de los tejidos internos. Las diferentes soluciones existentes en el mercado todavía no han llegado a superar algunos obstáculos tales como el cubrimiento de todas las extensiones, los altos costos, la funcionalidad de los tejidos restaurados, los rechazos de tipo inmune y la escasez de los sitios donantes. Este artículo presenta una revisión literaria que busca mostrar las diferentes alternativas de solución para pacientes con problemas de piel, dando énfasis en las soluciones clásicas aplicables y económicamente viables desde la ingeniería de tejidos en el sector antioqueño. In Antioquia (Colombia), there are many patients who suffer dermal injuries caused by accident or disease. Therefore, it is necessary to pursue available, effective and affordable solutions to overcome dermal problems. Physicians and patients are both expecting corrective treatments that can reduce inner tissue exposition and allow the possibility of recovering skin functionality. Although there are many solutions for skin replacement, some obstacles remain, such as: high costs, limited availability of skin for implantation in extended areas, adequate functionality of the restored tissue and immunological rejection. Due to these issues, this article presents some of the existing alternative solutions for patients with skin injuries, considering the histology and physiology of the skin, and regarding the classical and economically attainable solutions to be used in Antioquia.

La observación de una muestra de Leucoplasia en un paciente masculino de 49 años mostró alteraciones de los queratinocitos, variación en el número de desmosomas y una evidente espongiosis. Algunos cambios vistos en el queratinocito como el incremento de polisomas, la presencia de núcleo picnótico y la estructura variable del nucléolo han sido relacionados con una potencial malignidad de las lesiones leucoplásicas. Observation of biopsy from a male 49 years patient with oral leucoplakia showed alteration of keratinocytes, variation in the number of desmosome and an evident spongiosis. Changes of keratinocytes including an increment of polysomes, presence of pyknotic nucleus and variable nucleolus structure have been related to the malignancy potential of oral leukoplakia lesions.

RESUMEN: Objetivo: revisar la literatura relacionada con la utilización de queratinocitos como células blanco de transferencia de genes en general y utilizando vectores retrovirales como vehículo de transferencia en particular. Fuente de los datos: se describen resultados obtenidos acerca del tema mencionado, publicados en las principales revistas de investigación en dermatología y terapia génica; además información obtenida de revisiones recientes publicadas por expertos en el área y algunas páginas web. Selección de los datos: se seleccionaron los datos más relevantes en relación con el tema propuesto, de trabajos publicados en los últimos 10 años, en los cuales se abordara experimentalmente el tema. Extracción de los datos: se incluyeron datos obtenidos de algunas páginas web especializadas en el tema de queratinocitos, transferencia de genes y vectores retrovirales (http://info.med.yale.edu/). (www.interscience.wiley.com). entre otros. Adicionalmente, datos de publicaciones y revisiones que tuvieran relevancia en áreas como: principios generales de transferencia de genes, tipos de vectores más utilizados, aplicaciones más importantes de los queratinocitos, importancia, ventajas y desventajas de estas células como células blanco de transferencia. Las bases de datos utilizadas fueron: Entrez Home.http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez/. SRS:http://srs,ebi.ac.uk/, DBGET: www.genome.ad.jp/dbget/ dbget2.html/ Síntesis de los datos: las bases de la terapia génica fueron cimentadas a principios de la década de los 60; este progreso científico continuó en los años ochenta con el desarrollo de las técnicas de clonación de genes, los vectores virales, los cultivos celulares y las técnicas de transfección in vitro. La comprensión de los procesos moleculares y celulares de muchas enfermedades, permitió pensar en la transferencia de genes como una herramienta terapéutica para el tratamiento tanto de enfermedades heredadas como adquiridas. Igualmente la transferencia de genes ha hecho posible introducir y expresar material genético exógeno en las células somáticas de mamíferos, proporcionando una poderosa herramienta para el estudio de la función y la regulación genética. Los queratinocitos han sido utilizados como células blanco para transferencia de genes. Tienen un amplio espectro de aplicaciones clínicas, ya que conforman un tejido que produce diferentes factores de crecimiento y citoquinas y secretan proteínas con acciones locales y sistémicas. Pueden ser modificados por diferentes métodos, de los cuales, el más utilizado tanto para estudios preclínicos como clínicos, se basa en vectores retrovirales. El propósito de esta revisión es describir las aplicaciones y ventajas de los queratinocitos como célula blanco para la transferencia de genes, mediada por los vectores retrovirales. Conclusiones: la accesibilidad de la piel como blanco terapéutico representa un potencial excitante en el desarrollo de protocolos de terapia génica para enfermedades cutáneas y algunas enfermedades metabólicas. Se ha logrado in vivo la reversión fenotípica para epidermolisis bullosa y para la ictiosis laminar e in vitro para el xeroderma pigmentoso Estos resultados positivos pueden llevar rápidamente a protocolos clínicos basados en la utilización del trasplante de epitelios artificiales reconstruidos ex vivo usando queratinocitos genéticamente modificados. Igualmente, se han obtenido resultados exitosos en algunas enfermedades metabólicas; en estas enfermedades el trasplante de epitelios artificiales autólogos que expresen los transgenes de interés representa una aproximación terapéutica potencial para la liberación sistémica de moléculas activas. A pesar de los logros alcanzados, se requiere todavía el desarrollo de protocolos eficientes para la transducción de células madres epidérmicas, al igual que información sobre la respuesta inmune producida por los queratinocitos trasplantados hacia los polipéptidos recombinantes. ABSTRACT: Objective: to review recent literature concerning the utilisation of keratinocytes as target cells for gene transfer and retroviral vectors as modifying systems for these cells. Source of data: papers published in the major dermatology and gene therapy journals addressing directly the issue were selected, as well as comprehensive reviews published by leading experts in the specific area of research. Data selection: all data were collected from original papers addressing skin, keratinocyte gene therapy and retroviral vectors published in the last 10 years. Extraction of data: the information was selected from some specialized web pages in keratinocytes, gene transfer, retroviral vectors, by its relevance to the topic (http://info.med.vale.edu/), (www.interscience.wilev.com). Aditionally, data from publications and reviews in areas such as gene transfer principles, vectors types, keratinocyte applications, importance, advantages and disadvantages of these cells as targets for gene transfer were also reviewed. The data base used were: Entrez Home.http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez/. SRS:http://srs.ebi.ac.uk/, DB GET : www.genome.ad.jp/dbget/dbget2.htm / Summary of the data: gene therapy has received much attention during last decade as a novel method for treating inherited and acquired diseases. The introduction and expression of a foreign gene provide a powerful tool for studying the basic processes of a particular type of cell. Keratinocytes have been used as suitable target cells for gene therapy. They have a wide spectrum of clinical applications since keratinocytes produce different growth factors, cytokines, and secreted proteins with local and systemic action. Keratinocytes can be modified by different methods; being the retroviral vector system the most extensively studied and used for preclinical and clinical gene transfer trials. Most of the retroviral vectors are derived from murine oncogenic retroviruses that have shown successful expression in human gene transfer. In this review, the authors describe some applications of keratinocytes retroviral transduction and the advantages of these cells as targets for gene transfer. Conclusions: the easy accessibility of the skin as a therapeutic target provides an exciting potential for the development of gene therapy protocols for some cutaneous and metabolic disorders. Phenotypic reversion has been achieved in vivo for junctional epidermolysis bullosa and lamellar ichthyosis and in vitro for xeroderma pigmentosum. These positive results should prompt clinical trials based on transplantation of artificial epithelia reconstructed ex vivo using genetically modified keratinocytes. Promising results have also been obtained in metabolic diseases. In these diseases, transplantation of autologous artificial epithelia expressing the transgenes of interest represents a potential therapeutic approach for the systemic delivery of active molecules. However, it is necessary to develop protocols for efficient gene transfer to epidermal stem cells and information about the host immune response to the recombinant polypeptides produced by the implanted keratinocytes. COL0027213