1. Cuphea spp. : perfil fitoquímico, estudos in vitro da inibição da enzima conversora de angiotensina e da atividade antiquimiotáxica, otimização da extração, desenvolvimento e validação de método analítico
- Author
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Santos, Marí Castro, Henriques, Amelia Teresinha, and Mendez, Andreas Sebastian Loureiro
- Subjects
Phytochemistry ,Compostos fenólicos ,Farmácia ,Phenolic compounds ,Ultrasound-assisted ,Ultrassom ,UPLC-validation ,Anti-inflamatórios ,Antiinflammatory ,Extract optimization ,Peixe-zebra ,Cuphea ,Angiotensin-converting enzyme ,Zebrafish ,Miquelianin - Abstract
O gênero Cuphea (Lythraceae) compreende aproximadamente 108 espécies identificadas no Brasil. Vários estudos mostraram que Cuphea spp. têm potencial para atuar principalmente como antimicrobiano, anti-inflamatório, diurético, antihipertensivo e antitumoral. Investigações fitoquímicas indicaram a presença majoritária de compostos polifenólicos. O presente trabalho teve como objetivo investigar a composição química de quatro espécies de Cuphea encontradas no Rio Grande do Sul, avaliar a inibição da enzima conversora de angiotensina (ECA), in vitro, otimizar o método extrativo e validar o método para quantificação da miquelianina em C. glutinosa. Por fim, avaliar a atividade anti-inflamatória, in vitro, com a atividade antiquimiotáxica das espécies de Cuphea, e investigar o potencial antiinflamatório da miquelianina, in vivo, em modelo zebrafish. As análises químicas dos compostos foram realizadas por UHPLC-MS usando ESI-Q-TOF. Os ensaios de inibição da ECA foram determinados com base no método descrito por Tabatabei com algumas modificações, na concentração de 100 ng/mL e os valores foram determinados por experimentos em triplicata. As condições ótimas para a extração de miquelianina das folhas de C. glutinosa foram determinadas utilizando um planejamento fatorial fracionário (PFF) e um planejamento composto central (PCC). O método por UPLC-PDA foi validado, seguindo as diretrizes atuais. A atividade antiinflamatória, in vitro, foi avaliada pela capacidade de C. calophylla, C. carthagenensis, C. glutinosa, C. racemosa, e dos compostos isolados: miquelianina, miricitrina, além do controle positivo indometacina (em concentrações de 0,1 a 10 μg/mL) em inibir a migração de leucócitos pelo método de Boyden. Para atividade anti-inflamatória, in vivo, o indutor inflamatório (LPS) foi injetado no zebrafish por via intraperitoneal e após seis horas, nos grupos controle (PBS-negativo e dexametasona-positiva) e miquelianina foram injetadas as concentrações de 2,5, 7,5 e 15 mg/kg. Os grupos foram mantidos em aquários separados e após 24 horas, os animais foram sacrificados, dissecados e o cérebro congelado (-80ºC). Utilizando o homogenato cerebral, a modulação neuro-inflamatória foi avaliada (kits ELISA IL-1β e TNF-α). Os resultados mostraram 26 compostos polifenólicos, principalmente derivados de quercetina, miricetina e canferol. Desses compostos, dez são descritos no gênero pela primeira vez. A inibição da atividade da ECA apresentou como principais resultados: miquelianina 32,41%, C. glutinosa (31,66%), C. carthagenensis (26,12%) e C. calophylla (23,81%). Os resultados indicaram C. glutinosa como a espécie mais promissora. Assim sendo, a espécie teve a obtenção do seu extrato otimizado com os seguintes parâmetros: planta:solvente 1:60 (m/v), porcentagem de solvente etanol 38%, tempo de 60 minutos, cinco extrações e tamanho de partícula ≤ 180 μm. O método apresentou excelente seletividade, linearidade, precisão (repetibilidade e precisão intermediária abaixo de 2,18 e 1,40%, respectivamente) e acurácia (recuperação média de 90,6%). O conteúdo médio de miquelianina em C. glutinosa foi de 1,03%. A capacidade dos extratos hidroalcóolicos das espécies de Cuphea, miquelianina e miricitrina, de inibir a migração de leucócitos, foi estatisticamente significante em relação ao controle negativo (p
- Published
- 2020