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Submitted by Lara Maria Biancheti (lara.biancheti@unesp.br) on 2022-07-14T14:15:04Z No. of bitstreams: 1 dissertação mestrado - Lara Biancheti.pdf: 1112807 bytes, checksum: 60ad60a0618446f4cec48c46b2119255 (MD5) Rejected by Vivian Letícia Duarte Parisi (vivian.parisi@unesp.br), reason: Sua submissão será devolvida para que você possa fazer as correções. 1. Falta a FICHA CATALOGRÁFICA (Obrigatório pela ABNT NBR14724), informamos que é imprescindível que coloque a ficha gerada pelo sistema: Você poderá elaborar a sua ficha, acessando o Sistema Gerador de Fichas Catalográficas online. Na página da Biblioteca encontrará as informações necessárias: https://www.ibilce.unesp.br/#!/biblioteca/servicos-oferecidos/crie-sua-ficha-catalografica/ https://www.biblioteca.unesp.br/ficha/ Na sua ficha não tem os descritores e a ficha gerada pelo sistema não sai esse texto embaixo, essa página da folha de rosto também não é paginada. 2. As palavras-chave devem ser separadas por ponto e iniciar em maiúscula Ex: Palavra- chave. Palavra-chave. Palavra-chave. 3. Sugerimos que você faça adequações no SUMÁRIO conforme a norma ABNT NBR 6027 e 6024. Observe os negritos. Nas seções terciárias não vai o negrito. 4. Sugerimos corrigir as REFERÊNCIAS conforme a norma ABNT NBR 6023 atualizada, pois não é utilizado mais os sinais de abertura e fechamento < > nas referências de endereço eletrônico. Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. Estamos à disposição caso necessite esclarecer alguma dúvida ou necessite algum auxílio para efetuar as correções. Atenciosamente, Repositório Institucional UNESP UNESP - Câmpus de São José do Rio Preto Rua Cristóvão Colombo, 2265 - Jd. Nazareth São José do Rio Preto – SP. on 2022-07-14T18:15:32Z (GMT) Submitted by Lara Maria Biancheti (lara.biancheti@unesp.br) on 2022-07-14T19:39:51Z No. of bitstreams: 1 dissertação mestrado - Lara Biancheti.pdf: 1116258 bytes, checksum: f889010a7db582744a3955b0742f994f (MD5) Approved for entry into archive by Vivian Letícia Duarte Parisi (vivian.parisi@unesp.br) on 2022-07-14T20:36:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 biancheti_lm_me_sjrp.pdf: 1116258 bytes, checksum: f889010a7db582744a3955b0742f994f (MD5) Made available in DSpace on 2022-07-14T20:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 biancheti_lm_me_sjrp.pdf: 1116258 bytes, checksum: f889010a7db582744a3955b0742f994f (MD5) Previous issue date: 2022-07-01 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A cultura de cana-de-açúcar para produção de açúcar e álcool é a maior geradora de resíduos agrícolas do Brasil. A principal dificuldade no uso dos resíduos lignocelulósicos em biotecnologia é a complexidade de suas estruturas havendo necessidade de tratamentos específicos para a desconstrução dessa organização estrutural, sendo a lignina o composto responsável pela maior parte da resistência à degradação química e biológica da fibra do bagaço. Os tratamentos químicos, como a hidrólise ácida ou alcalina, são os mais utilizados pela indústria, porém, a de pré-tratamentos aumentam a eficiência da hidrólise. Entre os agentes oxidantes químicos, o ozônio é o que possui maior reatividade sobre as substâncias com grupos funcionais com alta densidade eletrônica, incluindo aqui as ligações de alcenos, tais como aquelas amplamente presentes em lignina, tendo como vantagens a bioconversão efetiva da lignina em seus compostos derivados; não produção de resíduos tóxicos e o fato de que as reações podem ser realizadas à temperatura e pressão ambiente. O presente trabalho visou testar a ozonólise como mecanismo de pré-tratamento do material lignocelulósico de modo a empregá-lo, por meio da biotransformação mediada por microrganismos, na produção de vanilina, substância de grande interesse comercial com aplicação nas industrias alimentícia, farmacológica e química. Verificamos que o tratamento foi eficiente e que seus compostos derivados conseguiram ser convertidos em vanilina através do metabolismo bacteriano. A produção por Micrococcus luteus chegou a 145 mg/L às 10 horas de cultivo com compostos derivados do tratamento hidrotérmico, demonstrando um grande potencial de se obter compostos de importância econômica, como vanilina e acetovanilona, a partir de bagaço de cana hidrolisado usando cultivo microbiano. Além disso, outras substâncias foram geradas a partir do pré tratamento de ozônio, como o ácido ferúlico (52 mg/L) e ácido cumárico (149 mg/L), que podem ser utilizadas tanto como produtos finais, quanto como precursoras na produção de outros compostos na indústria. The cultivation of sugarcane for the production of sugar and alcohol is the largest generator of agricultural waste in Brazil. The main difficulty in the use of lignocellulosic residues in biotechnology is the complexity of their structures, requiring specific treatments to deconstruct this structural organization, with lignin being the compound responsible for most of the resistance to chemical and biological degradation of bagasse fiber. Chemical treatments, such as acid or alkaline hydrolysis, are the most used by the industry, however, pre-treatments increase the hydrolysis efficiency. Among the chemical oxidizing agents, ozone is the one with the highest reactivity on substances with functional groups with high electron density, including here the alkene bonds, such as those widely present in lignin, with the advantages of effective bioconversion of lignin into its compounds. derivative compounds; no production of toxic residues and the fact that the reactions can be carried out at ambient temperature and pressure. The present work aimed to test ozonolysis as a pre-treatment mechanism of lignocellulosic material in order to use it, through biotransformation mediated by microorganisms, in the production of vanillin, a substance of great commercial interest with application in the food, pharmacological and chemical industries. We verified that the treatment was efficient and that its derivative compounds were able to be converted into vanillin through bacterial metabolism. The production by Micrococcus luteus reached 145 mg/L at 10 hours of cultivation with compounds derived from the hydrothermal treatment, demonstrating a great potential to obtain compounds of economic importance, such as vanillin and acetovanilone, from hydrolyzed sugarcane bagasse using microbial culture. In addition, other substances were generated from the ozone pretreatment, such as ferulic acid (52 mg/L) and coumaric acid (149 mg/L), which can be used both as final products and as precursors in the production of other compounds in the industry.

O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - Brasil (CAPES) - C?digo de Financiamento 001. Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2021-07-16T14:04:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) thais_machado_lima.pdf: 1926360 bytes, checksum: 2ab2f26a0f614e6c3b891fc54bd04c44 (MD5) Approved for entry into archive by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2021-07-16T14:07:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) thais_machado_lima.pdf: 1926360 bytes, checksum: 2ab2f26a0f614e6c3b891fc54bd04c44 (MD5) Made available in DSpace on 2021-07-16T14:07:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) thais_machado_lima.pdf: 1926360 bytes, checksum: 2ab2f26a0f614e6c3b891fc54bd04c44 (MD5) Previous issue date: 2021 Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) Apesar da toxicidade, muitos metais se tornaram essenciais para a manuten??o da sociedade moderna, dentre eles o chumbo (Pb) e o c?dmio (Cd), que s?o considerados dois dos metais mais t?xicos. A identifica??o desses metais pode ser realizada empregando-se t?cnicas eletroqu?micas que apresentam diversas vantagens, tais como: baixo custo da instrumenta??o, portabilidade, seletividade e alta sensibilidade. A efici?ncia da t?cnica eletroqu?mica ? relacionada ao tipo de material empregado na prepara??o do eletrodo de trabalho. A modifica??o desse eletrodo ? uma forma de controlar as propriedades qu?micas e f?sicas da interface eletrodo-solu??o. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um sensor eletroqu?mico para a determina??o simult?nea dos ?ons chumbo (Pb2+) e c?dmio (Cd2+) em solu??es aquosas, utilizando eletrodos de grafite (EG) modificados eletroquimicamente com filmes polim?ricos. Para isto, foram avaliados os mon?meros: ?cido p-hidroxibenz?ico, ?cido p-hidroxifenil?cetico e o ?cido p-cum?rico, em que o ?cido p-cum?rico apresentou as melhores respostas eletroqu?micas para a detec??o dos metais. A eletropolimeriza??o foi realizada empregando-se a t?cnica de voltametria c?clica (VC), em que as condi??es experimentais e voltam?tricas foram otimizadas para a melhor detec??o dos ?ons Pb2+ e Cd2+, as quais envolveram a eletropolimeriza??o do ?cido p-cum?rico em meio b?sico (NaOH 0,1 M), contendo 2,5 mM do composto e utilizando 25 ciclos sucessivos de potencial a 50 mV/s, na faixa de varredura de potencial de -0,25 a +0,8 V vs. Ag/AgCl. A detec??o eletroqu?mica foi realizada empregando-se etapa de eletrodeposi??o dos ?ons met?licos seguida por redissolu??o an?dica por voltametria de onda quadrada, utilizando-se os seguintes par?metros otimizados: potencial de deposi??o (Edep) de -1,6 V durante 125 s, incremento de varredura de potencial de 2 mV, amplitude de pulso de potencial de 80 mV, frequ?ncia de aplica??o de pulso de potencial de 5 s-1 e varredura de potencial de -0,9 a -0,3 V. O sensor apresentou uma resposta linear para o Pb2+ na faixa de 0,2 a 4,6 ?mol/L (42 a 962 ?g/L) com um limite de detec??o (LOD) de 0,058 ?mol/L (12 ?g/L) e um limite de quantifica??o (LOQ) de 0,19 ?mol/L (40 ?g/L). Para o Cd2+, obteve-se uma resposta linear na faixa de 1,4 a 8,6 ?mol/L (156 a 962 ?g/L) com LOD de 0,16 ?mol/L (18 ?g/L) e LOQ de 0,52 ?mol/L (59 ?g/L). Um desvio padr?o relativo (DPR) de 1,92% para o Cd2+ e 1,56% para o Pb2+ foi obtido para os estudos de repetibilidade (n=10). An?lises de reprodutibilidade (n = 6) apresentaram um DPR de 7,4% e 5,3% para o Cd2+ e o Pb2+, respectivamente. O sensor manteve 85% de sua atividade quando armazenado por um per?odo de 3 meses a 4 oC. Medidas de adi??o e recupera??o apresentaram valores aproximados de 118% para o chumbo e de 112% para o c?dmio. Diante dos resultados, os EG modificados com filmes polim?ricos de poli(?cido p-cum?rico) mostraram promissores na detec??o simult?nea de Pb2+ e Cd2+, apresentando limites de quantifica??o e detec??o na ordem de ?g/L, o que sugere potencial de aplica??o, por exemplo, em amostras de efluentes e cosm?ticos com margem de seguran?a, com base nos limites de concentra??o estabelecidos pela legisla??o brasileira, que s?o, para o Pb2+: 97 ?mol/L (20 mg/L) em cosm?ticos e 2,4 ?mol/L (500 ?g/L) em efluentes; e para o Cd2+: 890 ?mol/L (100 mg/L) em cosm?ticos e 1,8 ?mol/L (200 ?g/L) em efluentes. Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2021. Many metals have become essential for the maintenance of modern society despite their toxicity, including lead (Pb) and cadmium (Cd), which are considered two of the most toxic metals. The identification of these metals can be performed using electrochemical techniques that have several advantages, such as low cost of instrumentation, portability, selectivity, and high sensitivity. The efficiency of the electrochemical technique is related to the type of material used in the preparation of the working electrode. The modification of this electrode is a way to control chemical and physical properties of the electrode-solution interaction. In this context, the objective of this work was to develop an electrochemical sensor for simultaneous determination of lead (Pb2+) and cadmium (Cd2+) ions in aqueous solutions, using graphite electrodes (GE) modified electrochemically with polymeric films. For this purpose, it was used the following monomers: p-hydroxybenzoic acid, p-hydroxyphenylacetic acid, and p-coumaric acid. The later presented the better electrochemical responses for the detection of metals. Electropolymerization was performed by cyclic voltammetry (CV) and the conditions were optimized for best detection of Pb2+ and Cd2+ ions: the electropolymerization of p-coumaric acid (PCA) in basic medium (NaOH 0.1 M), in a solution containing 2.5 mM of the PCA, and 25 consecutive cycles at 50 mV/s in the potential range of -0.25 to +0.8 V vs. Ag/AgCl. The modified electrodes showed smaller interference in the electrochemical redox process of the ferrocyanide/ferricyanide potassium pair, indicating an electrodeposition of a material with low resistivity. Electrochemical detection was carried out by anodic stripping-square wave voltammetry using the following optimized parameters: deposition potential (Edep) = ?1.6 V (125 s), step 2 mV, amplitude 80 mV, frequency 5 s?1, and potential range of -0.9 to 0.3 V. The sensor showed a linear range for Pb2+ of 0.2 to 4.6 ?mol/L (42 to 962 ?g/L) with a limit of detection (LOD) of 0.058 ?mol/L (12 ?g/L), and a limit of quantification (LOQ) of 0.19 ?mol/L (40 ?g/L). For Cd2 + a linear range was obtained of 1.4 to 8.6 ?mol/L (156 to 962 ?g/L) with a LOD of 0.16 ?mol/L (18 ?g/L), and LOQ of 0,52 ?mol/L (59 ?g/L). For repeatability studies (n=10), the PCA/GE showed a relative standard deviation (RSD) for Ipa of 1.92% for Cd2+ and 1.56% for Pb2+. The inter-day reproducibility analysis showed RSD values of 7.4% and 5.3% for Cd2+and Pb2+, respectively (n = 6). A loss of response was detected after storage (3 months at 4 ?C), where the sensor retained approximately 85% of initial response for Cd2+ and 92% for Pb2+. Recovery measures were obtained in the order of 118% for lead and 112% for cadmium Thus, the GE modified with polymeric films of poly (p-coumaric acid) showed promise in the simultaneous determination of Pb2+ and Cd2+, with limits of quantification and detection in the order of ?g / L, which suggests potential application, for example, in effluent and cosmetic samples with a safety margin based on permitted levels of these metals by Brazilian legislation: 97 ?mol/L (20 mg/L) in cosmetics, and 2,4 ?mol/L (500 ?g/L) in effluents for Pb2+, and 890 ?mol/L (100 mg/L) in cosmetics, and 1,8 ?mol/L (200 ?g/L) in effluents for Cd2+.

Submitted by WAGNER SOARES RAMOS (wagner.ramos@unesp.br) on 2019-04-18T16:22:48Z No. of bitstreams: 2 Wagner S Ramos_Versão Completa.pdf: 4633354 bytes, checksum: fc68c35e7b334472195e53fb18369f84 (MD5) Wagner S Ramos_Versão Parcial.pdf: 1745979 bytes, checksum: ba22dbcd2f82f491482512b3d9a781eb (MD5) Approved for entry into archive by Maria Irani Coito (irani@fcfar.unesp.br) on 2019-04-23T21:18:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ramos_ws_me_arafcf_par.pdf: 1747113 bytes, checksum: f6de16818bcdfe98858fa1db7ae82389 (MD5) Made available in DSpace on 2019-04-23T21:18:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ramos_ws_me_arafcf_par.pdf: 1747113 bytes, checksum: f6de16818bcdfe98858fa1db7ae82389 (MD5) Previous issue date: 2019-04-01 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O ácido p-cumárico (APC) é um composto fenólico não flavonóide que apresenta segurança e eficácia bem descritas na ciência dos alimentos devido suas propriedades antioxidante, antitumoral, anti-inflamatória, antimicrobiana e por apresentar baixa toxicidade oral. Essas propriedades são pouco exploradas em produtos para cuidados com a pele. O objetivo do presente estudo foi avaliar de forma in vitro a segurança e a eficácia do APC e incorporá-lo em emulsão cosmética óleo em água (O/A). Nossos estudos in vitro e alternativos ao uso de animais foram conduzidos para verificar a citotoxicidade do APC em células de queratinócitos (HaCat) e fibroblastos humanos (HDFa), o potencial de irritação ocular (HET-CAM) e a atividade antimicrobiana em diferentes cepas. Emulsões contendo APC foram submetidas ao estudo de estabilidade e de liberação, retenção e permeação cutâneas. Resultados: o IC50 do APC em células HaCat e HDFa foi 693,57 e 2.814,75 μg/mL, respectivamente. Além disso 100 μg de APC foram levemente tóxicos em membrana corioalantóica de ovo embrionado. As concentrações bactericidas mínimas em cepas de E. coli, S. aureus, P. aeruginosa e S. epidermidis, foram 3.000 μg/mL, 1.875 μg/mL, 3.750 μg/mL e 3.750 μg/mL, respectivamente. Emulsões contendo diferentes concentrações de APC foram estáveis durante o período de estabilidade acelerada. Após 12 horas 91,08 ± 0,03% do APC foi liberado da formulação e após 24 horas, 0,52 ± 0,18% e 0,94 ± 0,37% ficaram retidos no estrato córneo e na epiderme/derme, respectivamente. Nossos resultados indicam que as concentrações de APC estudadas podem ser eficazes e seguras para uso em cosméticos, incluindo aqueles para uso na região dos olhos, ainda que estudos complementares sejam necessários. p-Coumaric acid (PCA) is a non flavonoid phenolic compound whose safety and efficacy widely described in food science papers due to antioxidant, antitumor, anti inflammatory properties, and low oral toxicity. These characteristics are poorly or no described when PCA is added to skin care products. The aim of the present study was to evaluate the safety and efficacy of PCA through in vitro assays, and then add it in oil in water cosmetic emulsion (O/W). Our in vitro trials, without animal use were conducted to predict PCA´s cytotoxicity in HaCat and HDFa cells, ophthalmic irritation potential, and antibacterial activity against differents strains. Emulsions with PCA has been tested to predict shelf life, dermal absorption, and dermal retention. Results: PCA´s IC50 in HaCat and HDFa cells was 693.57 and 2,814.75 μg.mL-1, respectively. In addition 100 μg of APC were slightly toxic in chorioallantoic membrane assay. The minimum bactericidal concentrations against E. coli, S. aureus, P. aeruginosa and S. epidermidis strains were 3,000 μg.mL-1, 1,875 μg.mL-1, 3,750 μg.mL-1, and 3,750 μg.mL-1 , respectively. Emulsions containing 0.04%, 0.06%, 0.08% and 0.10% of PCA were stable during self life testing for ninety days. After 12 hours 91.08 ± 0.03% of PCA was released of the emultion, and after 24 hours 0.52 ± 0.18% and 0.94 ± 0.37%, were present in stratum corneum and epidermis/dermis, respectively. Our findings indicate that PCA concentrations would be effective and safe to use in cosmetic products, even eye cosmetics, although complementary assays are necessary. 001

In this work, atomic force microscopy and Raman spectroscopy were used to evaluate druginduced biomechanical and biochemical changes in biological cells. First, an atomic force microscope was used to investigate the effects of treatment with Semaphorin 3A on the biomechanical properties of thymocytes, through the analysis of morphology, membrane roughness and cell elasticity. The results indicated that treatment with Semaphorin 3A directly affected these properties, inducing the formation of filopodia, increasing stiffness and roughness of the cell membrane due to rearrangement of the cytoskeleton. In the second study, based on the changes observed in the Raman spectra, the drug-induced anti-inflammatory response in A549 cells was evaluated through a comparative analysis of the actions of dexamethasone and p-coumaric acid. The results of this study indicated that both drugs were efficient in the inflammatory process. However, a joint analysis of the Raman technique with multivariate statistical methods revealed different action mechanisms of the drugs, indicating p-coumaric acid as a natural therapeutic compound for the treatment of inflammatory lung diseases. Additionally, the Raman technique was also used to investigate mechanisms of cell death induced by flavonoids in macrophages infected with Leishmania amazonensis promastigotes. The biochemical changes observed in Raman spectra were associated with markers of cell death. Such alterations evidenced the major molecular mechanisms induced by flavonoids in cell behavior. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Neste trabalho, a microscopia de força atômica e a espectroscopia Raman foram utilizadas para avaliar alterações biomecânicas e bioquímicas induzidas por fármacos em células biológicas. Primeiramente, um microscópio de força atômica foi usado para investigar os efeitos do tratamento com Semaforina 3A nas propriedades biomecânicas de timócitos, por meio das análises da morfologia, rugosidade da membrana e elasticidade celular. Os resultados indicaram que o tratamento com Semaforina 3A afetou diretamente tais propriedades, induzindo a formação de filopódios, aumentando a rigidez e a rugosidade da membrana celular devido ao rearranjo do citoesqueleto. No segundo estudo, com base nas alterações observadas nos espectros Raman, a resposta anti-inflamatória induzida por fármacos em células A549 foi avaliada através de uma análise comparativa das ações da dexametasona e do ácido p-cumárico. Os resultados deste estudo indicaram que ambos os fármacos foram eficientes no processo inflamatório. No entanto, uma análise conjunta da técnica Raman com métodos estatísticos multivariados, revelou diferentes mecanismos de ação dos fármacos, indicando o ácido p-cumárico como um composto terapêutico natural para o tratamento de doenças inflamatórias pulmonares. Adicionalmente, a técnica Raman também foi usada para investigar mecanismos de morte celular induzidos por flavonoides em macrófagos infectados com promastigotas de Leishmania amazonensis. As alterações bioquímicas observadas nos espectros Raman foram associadas a marcadores de morte celular. Tais alterações evidenciaram os principais mecanismos moleculares induzidos pelos flavonoides no comportamento celular.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2021-08-11T21:24:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_helena_piuma_goncalves.pdf: 2887165 bytes, checksum: ff8bd8eb9cc62d573c2813ac360e5754 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2021-08-13T20:29:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_helena_piuma_goncalves.pdf: 2887165 bytes, checksum: ff8bd8eb9cc62d573c2813ac360e5754 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2021-08-13T20:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_helena_piuma_goncalves.pdf: 2887165 bytes, checksum: ff8bd8eb9cc62d573c2813ac360e5754 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2019-02-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Os produtos naturais são considerados promissores agentes para prevenção e tratamento do câncer. O melanoma evidencia-se pela alta malignidade e potencial metastático, sendo a quimioterapia a principal modalidade de tratamento, porém, ocasiona citotoxicidade e efeitos deletérios ao organismo. Estas adversidades impulsionam a pesquisa por tratamentos alternativos para o melanoma, com eficácia e segurança. Neste âmbito, o objetivo do estudo foi avaliar a atividade citotóxica in vitro dos compostos fenólicos (ácido cafeico e ácido p-cumárico), terpênicos (eucaliptol e gama terpineno) e flavonoide (quercetina), em células neoplásicas de melanoma murino (B16F10) e células de linhagem de rim bovino (MDBK), além de avaliar as associações entres estes e a carboplatina. Os compostos fitoquímicos foram obtidos comercialmente (Sigma-Aldrich ®), sendo testados nas concentrações de 3 a 0,02 mg.mL-1. Após diluição em meio de cultivo celular e DMSO 0,5%, os compostos e carboplatina foram distribuídos em placas de 96 poços, sobre as células B16F10 e MDBK, que foram incubadas por 24 horas, a 37°C com atmosfera úmida e 5% de CO2. A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio MTT e a leitura por espectrofotômetro (540nm). Todos os compostos apresentaram efeito citotóxico para as células de melanoma, variando entre alta e moderada citotoxicidade. Em relação às células MDBK, os compostos apresentaram toxicidade baixa a moderada. A toxicidade dos compostos para as células B16F10 foi maior do que para as células MDBK. Considerando as médias de todas as concentrações testadas, a quercetina apresentou alta toxicidade para B16F10, e baixa toxicidade para as células MDBK. Os compostos ácico cafeico, ácido p-cumárico, eucaliptol e gama terpineno apresentaram baixa toxicidade para MDBK e moderada toxicidade para B16F10. Quanto às associações entre os compostos e carboplatina, os níveis de toxicidade variaram em função das concentrações testadas. Carboplatina (1 mg.mL-1) apresentou baixa toxicidade para as células de melanoma, enquanto que as associações de carboplatina com ácido cafeico, ácido p-cumárico, eucaliptol, gama terpineno e quercetina (1 mg.mL-1) promoveram aumento na toxicidade para B16F10. Conclui-se que os compostos ácido cafeico, ácido p-cumárico, eucaliptol, gama terpineno e quercetina apresentam atividade citotóxica em B16F10, e as associações dos compostos com carboplatina incrementaram a atividade deste quimioterápico. Portanto, estes compostos são promissores para a sequência de pesquisas. Natural products are considered promising agents for cancer prevention and treatment. Melanoma is evidenced by the high malignancy and metastatic potential, being that chemotherapy is the main treatment modality, however, its promotes cytotoxicity and deleterious effects to the organism. These adversities drive research into alternative treatments for treatment of melanoma, effectively and safely. In this context, the objective of this study was to evaluate the in vitro cytotoxic activity of phenolic compounds (caffeic acid and p-coumaric acid), terpenes (eucalyptol and gamma terpinene) and flavonoid (quercetin) in murine melanoma (B16F10) and bovine kidney cells (MDBK), in addition to evaluating the associations between these and carboplatin. Phytochemicals were obtained commercially (Sigma-Aldrich ®) and were tested at concentrations of 3 to 0.02 mg.mL-1. After dilution in cell culture medium and 0.5% DMSO, the compounds and carboplatin were distributed in 96-well plates on the B16F10 and MDBK cells, which were incubated for 24 hours at 37ºC with humid atmosphere and 5% of CO2. Cell viability was assessed by MTT assay and spectrophotometer reading (540nm). All compounds showed a cytotoxic effect on melanoma cells, ranging from high to moderate cytotoxicity. Regarding cytotoxicity in MDBK, the compounds showed low to moderate levels of toxicity. The toxicity of the compounds to B16F10 cells was greater than for MDBK cells. Considering the averages of all concentrations tested, the quercetin compound showed high toxicity to B16F10 cells, and low to MDBK cells. The compounds caffeic acid, p-coumaric acid, eucalyptol and gamma terpinene showed low toxicity to MDBK and moderate toxicity to B16F10 cells. Regarding the associations between the compounds and carboplatin, the levels of toxicity varied according to the concentrations tested, and their activities were dose-dependent. Carboplatin (1 mg.mL-1) had low toxicity to melanoma cells, whereas carboplatin (1 mg.mL-1) was associated with caffeic acid, p-coumaric acid, eucalyptol, gamma terpinene and quercetin in 1 mg. mL-1, all promoted increased cellular toxicity to B16F10. Thus, it is concluded that the compounds caffeic acid, pcoumaric acid, eucalyptol, gamma terpinene and quercetin have antiproliferative activity in B16F10, and the associations of the compounds with carboplatin increased the antiproliferative activity of this chemotherapeutic in neoplastic cells. Therefore, these compounds are promising for the sequence of researches with interest in molecules with antineoplastic activity.

Orientadoresr: Daniele Ribeiro de Araujo, Eneida de Paula Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Compostos anti-inflamatórios não esteroídais (AINEs) são amplamente utilizados para o combate da inflamação, mas frequentemente acarretam efeitos adversos que impedem a continuação do tratamento. Atualmente, a terapia a base de plantas tem sido bastante empregada a fim de desenvolver novos fármacos que apresentem eficácia analgésica e anti-inflamatória. Nesse contexto, a utilização de sistemas carreadores, como as nanopartículas de hidróxidos duplos lamelares (HDL), visa melhorar propriedades biofarmacêuticas e farmacológicas dos compostos nelas intercalados. Dessa forma, este estudo teve como objetivo caracterizar a interação entre o ácido coumárico (AC), um composto fenólico extraído de plantas, e hidróxido duplo lamelares (HDL), nanopartículas inorgânicas, considerando parâmetros como a cinética de liberação in vitro, a citotoxicidade e as atividades analgésica-antiinflamatória em relação ao fármaco não intercalado. Os ensaios de liberação in vitro foram realizados utilizando uma célula de difusão vertical (com membrana de acetato de celulose, MWCO 1000 Da) e a viabilidade celular avaliada em células 3T3 pelo teste de incorporação do vermelho neutro (VN). Os testes farmacológicos realizados em camundongos swiss foram: a determinação do número de contorções abdominais, teste tail-flick, ensaios de peritonite e teste de formalina para o composto livre e intercalado nas concentrações de 10, 20 ou 30 mg/kg. Os ensaios de liberação in vitro mostraram que a intercalação reduziu significativamente a constante de liberação (Klib) do AC, em relação ao fármaco livre, sendo os valores de Klib de 41,6 ± 1,5 %.h-1 e 32,4 ± 1,5 %.h-1 , para o AC e AC-HDL, respectivamente. A viabilidade celular foi reduzida apenas em concentrações mais elevadas de AC e AC-HDL (10 e 12,5 mM). Porém, mesmo nestas concentrações foi observada porcentagem de viabilidade celular maior que 50%. Por fim, a avaliação farmacológica apontou o AC-HDL como um sistema de liberação com atividades analgésica e anti-inflamatória mais pronunciadas do que as observadas para anti-inflamatórios não esteroidais como a indometacina (p< 0,001). Esses efeitos foram obtidos para teste de tail-flick, quando o AC foi intercalado em HDL aumentou a duração da analgesia (~ 1,7 vezes) quando comparado com o grupo de controle indometacina. Assim, os resultados indicam que o AC intercalado em nanopartículas inorgânicas de HDL apresentou uma taxa de liberação lenta e também induziu uma atividade analgésica - anti-inflamatória, possivelmente, por um mecanismo semelhante ao observado para um anti-inflamatório não esteroidais como a indometacina Abstract: Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are widely used to avoid inflammation, but these compounds can evoke some side effects, considering these as an important limitation to the treatment. Currently, the plant-based therapy has been widely employed to develop new drugs which have analgesic and anti-inflammatory pharmacological activities. In this context, the use of inorganic nanoparticles is important to improve biopharmaceutical and pharmacological properties of the intercalated molecules. Thus, this study aimed to characterize the interaction between coumaric acid (CA), a phenolic compound extracted from plants, and layered double hydroxide (LDH), inorganic nanoparticles, considering parameters such as the in vitro release kinetics cytotoxicity and analgesic-antiinflammatory activities compared to the non-intercalated-CA. In vitro release tests were performed using a vertical diffusion cell (with cellulose acetate membrane, MWCO 1000 Da) and cell viability assessed in 3T3 cells by the neutral red (NR) uptake test. Pharmacological assays were carried in Swiss mice out in order to determine the number of writhings, tail-flick test, peritonitis test and formalin test for the free compound at three different concentrations (10, 20 or 30 mg/kg). In vitro release tests showed that the release constant (Krel) value was significantly reduced when compared to the non-intercalated CA (Krel values of 41.6 ± 1.5 %.h-1 and 32.4 ± 1.5 %.h-1 for the free CA and CA-HDL, respectively). Cell viability was reduced only at higher concentrations (10 and 12.5 mM) of CA and CA-HDL. However, even at these concentrations the percentage of cell viability was more than 50%. Finally, the pharmacological evaluation reveal the CA-HDL as a drug-release system with more pronounced analgesic-antiinflammatory effects than those observed for classic NSAIDs, such as indomethacin (p

Atualmente, são produzidas milhões de toneladas de resíduos provenientes do processamento agroindustrial. Muitos deles são ricos em compostos bioativos sendo potenciais fontes naturais dessas substâncias. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o teor de compostos fenólicos totais, a atividade antioxidante e a composição fenólica de três resíduos gerados por agroindústrias brasileiras: bagaço de uva Isabel (BI) (Vitis labrusca), bagaço de uva Verdejo (BV) (Vitis vinifera) e bagaço de goiaba (BG) (Psidium guajava). Os resultados do teor de compostos fenólicos totais (mg GAE g-1) encontrados nos extratos etanólicos e aquosos dos resíduos foram, respectivamente: BV (20,94±0,46; 8,03±0,43)> BI (16,57±0,19; 4,41±0,01)> BG (3,41±0,09; 1,88±0,06). Alta atividade antioxidante, principalmente em BV e BI, foi verificada nos ensaios realizados (ABTS ●, DPPH ● e auto-oxidação do sistema beta-caroteno/ácido linoléico). Uma forte correlação positiva entre atividade antioxidante e o teor de compostos fenólicos totais foi encontrada. Os compostos fenólicos encontrados, por cromatografia gasosa com espectrometria de massas (CG-EM), foram: ácido gálico, epicatequina, quercetina (BV, BI e BG); ácido isovanílico (BI, BG); ácido p-cumárico (BI); ácido caféico e resveratrol (BV, BI). Esses resultados mostram que os resíduos agroindustriais analisados, particularmente os vinícolas, são ricos em substâncias bioativas e podem ser explorados pela indústria de alimentos e farmacêutica. Nowadays, the agro-industrial processing produces millions of tons of wastes. Many of them are rich in bioactive compounds, being a potential natural source of these substances. This study aimed to evaluate the content of total phenolics, antioxidant activity and phenolic composition of residues generated by three Brazilian agribusiness: Isabel grape pomace (PI) (Vitis labrusca), Verdejo grape pomace (PV) (Vitis vinifera) and guava pomace (PG) (Psidium guajava). The results of total phenolics content (mg GAE g-1) found in the ethanol and aqueous extracts of residues were: PV (20.94±0.46; 8.03±0.43)>PI (16.57±0.19; 4.41±0.01)>PG (3.41±0.09; 1.88±0.06). High antioxidant activity of these extracts, particularly PV and PI, was found by the methods DPPH ●, ABTS ● and beta-carotene bleaching method. A strong positive correlation between antioxidant activity and content of total phenolic compounds was found. The following phenolic compounds were found by gas chromatography with mass spectrometry (GC-MS): gallic acid, epicatechin, quercetin (PV, PI and PG); isovanilic acid (PI, PG), p-coumaric acid (PI), caffeic acid and resveratrol (PV, PI). The results show that these residues, particularly the wineries, are rich in bioactive substances and should be exploited by the food industry and pharmaceuticals.

Os métodos usuais de controle de plantas daninhas não atendem mais as atuais e futuras exigências da sociedade em relação à preservação dos recursos naturais e da qualidade de vida. Uma alternativa para essa questão seriam os metabólitos secundários produzidos pelas plantas, que apresentam pouco risco para o ambiente e para os interesses da sociedade. Os objetivos deste trabalho foram isolar, identificar e caracterizar a atividade alelopática de substâncias químicas produzidas pela gramínea forrageira Brachiaria humidicola. Analisaram-se os efeitos alelopáticos dos extratos, frações e substâncias isoladas sobre a germinação e o desenvolvimento da radícula das invasoras malícia, fedegoso e mata-pasto, em bioensaios monitorados em períodos de 10 dias, em condições de 25 ºC e fotoperíodo de 12 horas, para a germinação, e 24 horas, para o desenvolvimento da radícula. A partir do extrato hidrometanólico, foi isolado e identificado o ácido p-cumárico. Os efeitos alelopáticos estiveram positivamente relacionados à concentração do ácido, à espécie de planta daninha e à característica da espécie analisada. Comparativamente, fedegoso e malícia se mostraram mais sensíveis aos efeitos alelopáticos. A germinação e o desenvolvimento da radícula do mata-pasto não foram afetados pelo ácido p-cumárico nas concentrações de 1,0 a 8,0 mg L¹. O alongamento da radícula se mostrou mais sensível aos efeitos alelopáticos do ácido pcumárico do que a germinação das sementes. The traditional methods of weed control in cultivated pasture do not meet society's present and future needs of protecting natural resources and life quality. An alternative to this problem could be the use of secondary metabolites produced by plants. These products present few risks to the environment and meet society interests. Therefore, this research was carried out to isolate, identify and characterize the allelopathic activity of chemical compounds produced by the forage grass Brachiaria humidicola. The allelopathic effects of the extracts, fractions and compound were tested on seed germination and root elongation of the weeds Mimosa pudica, Senna obtusifolia and Senna occidentalis. Germination bioassays were developed under 25 ºC and a photoperiod of 12 hours. For root elongation, the bioassay conditions were 25 ºC and photoperiod of 24 hours. Hydromethanolic extract was used as a source for isolating and identifying p-coumaric acid. The allelopathic effects were positively related to p-coumaric acid concentration, weed species and the evaluated parameter. Comparatively, S. occidentalis and M. pudica showed the greatest sensitivity to the allelopathic effects. For S. obtusifolia no allelopathic effects promoted by p-coumaric acid on seed germination or on root elongation could be detected under the concentration of 1.0 and 8.0 mg L-1. Root elongation was more sensitive to p-coumaric acid allelophatic effects than seed germination.

Há fatores que limitam a digestão das forragens tropicais e estão associados à dinâmica dos ácidos fenólicos da parede celular. Os estudos destes compostos em forragens podem ser facilitados pela disponibilidade de métodos sensíveis que permitam o processamento de grande número de amostras. No presente trabalho, descreve-se um método para a determinação de ácidos fenólicos na parede celular de forragens, utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Bagaço de cana, capim-elefante e folhas de mandioca foram utilizados como amostras experimentais. Para remover substâncias solúveis de baixa massa molecular, foram testados etanol 80% e o detergente neutro, determinando seus efeitos sobre a recuperação das moléculas e benefícios no perfil cromatográfico. Para a obtenção dos ácidos fenólicos livres, as amostras foram solubilizadas em NaOH 1 mol/L, 20ºC por 24 horas. O método proposto foi adequado para a determinação de ácidos fenólicos, apresentando grande sensibilidade e produtividade no laboratório. Para minimizar os efeitos negativos da formação de sal resultante da neutralização ácida do extrato alcalino, sugere-se a diluição da amostra ou a injeção de pequeno volume (5 uL) no aparelho. O efeito da utilização de solventes como etanol 80% ou detergente neutro é distinto sobre as amostras das gramíneas e leguminosas. A quantidade de extrativos nas folhas de mandioca foi superior a do bagaço de cana e capim-elefante. A concentração de ácidos fenólicos foi pouco alterada pela ação dos solventes, sendo maior nas amostras de bagaço de cana e capim-elefante, em relação às folhas de mandioca. O método apresentado constitui-se em uma importante ferramenta para o estudo dos ácidos fenólicos na parede celular de forragens tropicais. Factors that limit the digestion of tropical forages are associated to the dynamic of cell wall phenolic acids. The study of these compounds in forages may be facilitated by the availability of sensible methods that permit processing large amounts of samples. The present paper describes a method for determining phenolic acids in forage cell wall through high-performance liquid chromatography (HPLC). Sugar cane bagasse, elephant grass and cassava leaves were used as experimental samples. To remove soluble low molecular weight products, ethanol 80% and neutral detergent were essayed to determine their effects on the recovery of molecules and other benefits to chromatography profile. The sample solubilization with NaOH 1 mol/L, 20ºC for 24 hours, was used to obtain the free phenolic acids. The method described proved appropriate showing great sensibility and lab productivity. To minimize the effects of salt formation as a consequence of acid neutralization, sample dilution and reduced injection volumes (5uL) are suggested. The action of ethanol 80% and neutral detergent differ between grasses and legumes. The amount of extractives in cassava leaves was greater than in other materials.The method described in the present paper is an important tool to study phenolic acids in tropical forage cell wall.

Neste estudo, desenvolveu-se um método analítico para a determinação de compostos fenólicos em folhas de sobreiro (Quercus suber L.) dado estas substâncias desempenharem, nas plantas, papel importante nos mecanismos de resistência às doenças e pragas. Interessámo-nos pelos constituintes da fracção hidrolizada (ácido gálhico, ácido elágico, catequina, epicatequina, ácido cafeico, ácido p-cumárico e ácido ferúlico) que foram separados e identificados por DAD-HPLC², com base nos seus tempos de retenção e dados espectrais. A quantificação foi efectuada utilizando o método de padrão externo. In this study, an analytical method has been developed for the determination of phenolic compounds since they are related with disease and pests plant resistance mechanisms. The components of the hydrolysed extract (gallic acid, ellagic acid, catechin, epicatechin, caffeic acid, p-coumaric acid and ferulic acid) have been resolved and identified by DAD-HPLC based on their retention times and spectral data. For quantifications, the external standard method was used. Dans la présente étude, on a developpé une méthode analytique pour la détermination des composés phénoliques des feuilles de chêne liège (Quercus suber L.) car ces substances sont susceptibles d'avoir un rôle important sur les mécanismes de défense des plantes contre les parasites et maladies infectieuses. Nous nous sommes intéressées à la composition phénolique de la fraction hydrolysée (acide gallique, acide ellagique, catéchine, épicatéchine, acide caféique, acide p-coumarique, acide férulique) qui a été separée et identifiée par CLHP (Chromatographie Liquide à Haute Performance avec un detecteur à barrette de photodiodes) en fonction du temps et des données spectrales. La quantification a été effectuée en utilisant des étalons externes.