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INTRODUÇÃO: o câncer gástrico é a segunda maior causa de morte por câncer em todo o mundo, sendo o estadiamento TNM o fator mais importante para o prognóstico dos pacientes, especialmente a presença de metástases linfonodais. A invasão vascular linfática detectada no tumor primário se correlaciona com a ocorrência de metástases linfonodais e é também considerada fator prognóstico independente nos pacientes com câncer gástrico. A avaliação da angioinvasão realizada apenas pela coloração de rotina hematoxilina-eosina pode gerar tanto resultados falso-positivos quanto falso-negativos. O estudo imuno-histoquímico utilizando marcadores específicos do endotélio vascular possibilita distinção da ocorrência de invasão. A quantificação dos fatores angiogênicos e linfangiogênicos tem sido explorada na tentativa de predizer o prognóstico de diversas neoplasias. No câncer gástrico, um parâmetro promissor é a densidade microvascular linfática e sanguínea. OBJETIVOS: um de nossos objetivos é analisar comparativamente a detecção de invasão vascular linfática e sanguínea, pela hematoxilina-eosina e pela imuno-histoquímica com marcação por D2-40 e CD34 em uma série de carcinomas gástricos e correlacioná-las com os demais fatores prognósticos. Outro objetivo é avaliar densidade microvascular linfática e sanguínea em três aumentos microscópicos por meio de três marcadores: CD34, CD105 e D2-40. MATERIAL E MÉTODOS: foi realizado estudo imuno-histoquímico em cortes seriados, em 95 casos consecutivos de CG para avaliar a presença de invasão vascular linfática e sanguínea. Para a determinação da densidade microvascular, foram selecionados 52 casos. Foram comparados os resultados de invasão vascular entre as análises pela imuno-histoquímica e hematoxilina-eosina. A densidade microvascular foi realizada em cada marcador através da contagem dos microvasos em três aumentos microscópicos diferentes (100x, 200x e 400x). RESULTADOS: a detecção de invasão vascular linfática foi consideravelmente maior que a sanguínea. Foram identificados oito casos de falso-positivo e 13 casos de falso-negativo para invasão linfática. Foram identificados 24 casos de falso-positivo e 10 casos de falso-negativo para invasão sanguínea. A concordância diagnóstica entre os métodos foi moderada para invasão linfática (Kappa=0,50) e baixa para invasão sanguínea (Kappa=0,20). A correlação entre a presença de metástases linfonodais e a presença de IVL e IVS foi estatisticamente significativa, tanto na avaliação pela HE (p=0,001, p=0,013), quanto pela IHQ (p=0,001, p=0,019). Em relação à densidade microvascular, quando avaliamos no aumento de 100x, obtivemos um valor bem menor que em 200x que, por sua vez, foi menor que em 400x. Esse fato ocorreu de forma proporcional e semelhante nos três marcadores, sendo estatisticamente ignificativa (p

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No. of bitstreams: 1 PDF Final.pdf: 4765427 bytes, checksum: ae3f93ce46ff32b7ce466869740090de (MD5) FAPESB O presente trabalho teve como objetivo estudar, por meio da imunohistoquímica, a participação de componentes celulares estromais a exemplo dos mastócitos (mast cell triptase), miofibroblastos (alfa-SMA) e macrófagos (CD163) e componentes vasculares (CD34 e D2-40) em uma série de tumores odontogênicos queratocísticos (TOQ), na tentativa de fornecer subsídios para compreender a interação entre esses componentes e o comportamento biológico distinto desta lesão. Para fins comparativos, cistos radiculares (CRs) e folículos pericoronários (FPs) também foram incluídos. A amostra foi composta por 30 TOQs, 15 CRs e 07 FPs. Para a avaliação dos mastócitos, miofibroblastos e macrófagos, foram quantificadas as células imunorreativas aos marcadores mast cell triptase, alfa-SMA e CD163, respectivamente, em 10 campos (400x). Os índices angiogênico e linfangiogênico foram avaliados por meio da densidade microvascular (MVD) e densidade microvascular linfática (MVDL) dos microvasos marcados, respectivamente, pelos marcadores CD34 e D2- 40. Foi utilizado o teste ANOVA com pós-teste de correção de Tukey, para análise estatística entre os marcadores segundo o tipo de lesão. Para a análise da correlação entre os marcadores dentro da mesma lesão, utilizamos a correlação de Pearson. Para a associação, no TOQ, entre os marcadores e a presença de inflamação, utilizamos o Teste T de Student. A análise da expressão do marcador mast cell triptase revelou existir diferenças significativas (p0,05). A respeito dos macrófagos, não houve diferenças significativas (p= 0,084) entre as densidades de macrófagos presentes nos TOQs (2,31), CRs (1,42) e FPs (0,14). Na avaliação do índice angiogênico, não houve diferenças significativas da MVD entre as três lesões estudadas. No entanto, para o índice linfangiogênico, houve diferença significativa (p0,05). Não foi encontrada associação significativa (p>0,05) entre os marcadores estudados com a presença de inflamação no TOQ. No presente trabalho, encontramos uma correlação positiva e moderada entre os marcadores mast cell triptase e o CD34 nos TOQ (p = 0,025). Já nos CRs encontramos uma correlação inversa e moderada entre os marcadores SMA x CD34 (p = 0,017). Nos FPs também encontramos uma correlação inversa entre os mesmos marcadores anteriores, porém forte (p=0,049). Embora os componentes celulares estromais e microvasculares aqui representados por mastócitos, miofibroblastos, macrófagos CD163 positivos e vasos CD34 e D240, respectivamente, sejam importantes para manutenção do arcabouço estrutural do TOQ e CR, existiu uma interação significante entre mast cell triptase e CD34 no TOQ e entre CD34 e o alfa –SMA no CR. The present study aimed to investigate, by immunohistochemistry, the participation of stromal cell components such mast cell (mast cell tryptase), myofibroblasts (alpha- SMA) and macrophages (CD163) and vascular components (CD34 and D2-40) in a series of keratocysts odontogenic tumors (OKT) in an attempt to provide information to understand the interaction between these components and the biological behavior of this lesion. For comparative purposes, radicular cysts (RCs) and pericoronal follicles (PFs) were also included. The sample comprised 30 OKTs, 15 RCs and 07 PFs. For the evaluation of mast cells, myofibroblasts and macrophages, the cells immunoreactive with biomarkers mast cell tryptase, alpha- SMA and CD163 were quantified, respectively, in 10 fields (400x). The angiogenic and lymphangiogenic index were assessed by microvessel density (MVD) and lymphatic microvessel density (MVDL) of microvessels marked respectively by for CD34 and D2-40. ANOVA with post-test Tukey correction for statistical analysis between markers was used according to the type of injury. To analyze the correlation between markers within the same lesion, we used the Pearson correlation. For the association, the OKT between markers and the presence of inflammation, we used the Student's t test. The analysis of expression of mast cell tryptase shows any significant differences (p < 0.05) between the density of mast cells present in RCs (22.7) than FPs (1.23) and TOQs (7.39) and the density of mast cells present in TOQs and FPs. There was also a significant difference (P < 0.05) between the density of myofibroblasts in TOQs (29.25) compared to CRs (4.66) and FPs (1.50). The difference in density between the RCs of myofibroblasts and PFs was not significant (p> 0.05). With respect to macrophages, no significant differences (p = 0.084) between the densities of macrophages present in TOQs (2.31), CR (1.42) and FPs (0.14). With respect to the angiogenic index, there were no significant differences in MVD between the three lesions studied. However, for the lymphangiogenic index, a significant difference (p < 0.05) between MVDL present in TOQs (11.64) compared to CRs (4.19) and FPs (0.167). The difference between MVDL of CRs compared to FPs was not statistically significant (p > 0.05). No significant association (p > 0.05) between the biomarkers studied in the presence of inflammation in the OKT was found. In the present study, we found a moderate positive correlation between mast cell tryptase and CD34 markers in OKT (p = 0.025). Have the CR and found an inverse correlation between moderate SMA x CD34 (p = 0.017). In PFs also found an inverse correlation between the SMA x CD34, but strong (p = 0.049). Although stromal microvascular and cellular components represented here by mast cells, myofibroblasts, and CD163 positive macrophages and vessels CD34 and D240 are important for maintaining the structural framework of the OKT and RC, a significant interaction between mast cell tryptase x CD34 existed in OKT and between CD34 x alpha- SMA in RC.

Introdução: Recentemente, tem sido proposto o estudo de fatores prognósticos em neoplasias precoces do trato gastrointestinal (TGI) submetidas a dissecção endoscópica da submucosa (DES) pesquisados por meio de estudos imuno-histoquímicos, tais comoma invasão vascular sanguínea (CD 34) e linfática (D2-40), a superexpressão da proteína Her-2/neu e a mensuração da atividade proliferativa através da marcação imuno-histoquímica do Ki 67. Objetivos: Nosso objetivo foi determinar o papel do estudo imuno-histoquímico no estadiamento de espécimes de dissecção endoscópica da submucosa: analisando comparativamente a detecção de IVL e sanguínea (IVS), pela HE e pela imuno-histoquímica (IHQ) com marcação por D2-40 e CD34 em uma série de produtos de DES, índice de proliferação celular com marcação pelo Ki 67 e superexpressão da proteína Her-2/neu, e correlacioná-las com os demais fatores prognósticos. Material e métodos: foi realizado estudo IHQ em cortes seriados, utilizando os marcadores D2-40 (endotélio linfático) e CD34 (pan-endotelial) em 30 casos consecutivos de produtos de DES com diagnóstico histológico de carcinoma para avaliar a presença de IVL e IVS. Também foram utilizados os marcadores Ki 67 (proliferação celular) e Her-2/neu. Os resultados obtidos pela análise à IHQ foram comparados com a detecção de IVL e IVS pela HE, e correlacionados com outros fatores prognósticos, assim como o índice de proliferação celular e a superexpressão do Her-2/neu. Resultados: A detecção de IVL foi consideravelmente maior que a de IVS. A presença de IVL foi detectada em 6/30 casos (20%) pela HE e em 9/30 casos (30%) pela IHQ. Dos 6 casos com IVL ao HE, 3 eram falso-positivos à IHQ. A IHQ detectou IVL em 6 casos que haviam sido considerados negativos ao HE. A IVS foi evidenciada em 5/30 casos (16,7%) pela HE e pela IHQ em apenas 1 caso (3,3%). Foram identificados, pela análise à IHQ, 5 casos falso-positivos e 1 caso falso-negativo para IVS. A comparação entre a detecção de IVL e IVS por ambos os métodos não mostrou diferença significativa. A concordância diagnóstica entre os métodos foi fraca para IVL (Kappa=0,211) e pobre para IVS (Kappa=0,167). O fator clínico-patológico relacionado à presença de IVL foi a profundidade do tumor nas camadas m1 (p=0,031) e m3 (p=0,047). Em contrapartida, todas as variáveis analisadas não mostraram correlação com a presença de IVS. Quando analisamos o índice de proliferação celular detectado pelo exame IHQ (Ki 67), não identificamos relação estatisticamente significativa com as variáveis analisadas. Todos os casos mostraram-se negativos para a superexpressão da proteína Her-2/neu. Conclusão: Nossos resultados indicaram que a análise histopatológica dos produtos de DES realizando exclusivamente a coloração de rotina HE, como usualmente ocorre, não permite a avaliação adequada da presença de IVS ou IVL. O presente estudo contribuiu para ampliar e refinar o protocolo estabelecido uma vez que propõe a inclusão de estudos imuno-histoquímicos para pesquisa de IVS e IVL (CD34 e D2-40), proliferação celular (Ki 67) e superexpressão da proteína Her-2/neu. Desta forma são fornecidas, todas as informações atualmente possíveis que possam ser extraídas do produto de DES aprimorando o estadiamento da neoplasia. Introduction: Recently, it has been proposed the study of prognostic factors in malignant neoplasms of the gastrointestinal tract (GIT) submitted to endoscopic submucosal dissection (ESD) investigated by immunohistochemical studies, such as lymphatic (D2-40) and blood vascular invasion (CD 34), overexpression of Her-2/neu protein and measurement of proliferative activity by immunohistochemical staining of Ki 67. Objective: Our objective was to determine the role of immunohistochemical study in the staging of specimens of endoscopic submucosal dissection: analysis comparing the detection of BVI and LVI , the HE and immunohistochemistry (IHC) with dialing D2-40 and CD34 in a series of DES products, with cell proliferation by Ki 67 labeling and Her-2/neu protein overexpression, and correlate them with other prognostic factors. Material and Methods: The study was performed IHC in serial sections, using markers D2-40 (lymphatic endothelium) and CD34 (pan-endothelial) in 30 consecutive cases of DES products with histological diagnosis of carcinoma to assess the presence of LVI and BVI . We also used markers Ki 67 (cell proliferation) and Her-2/neu. The results obtained by the analysis were compared with IHC detection of LVI and BVI by HE, and correlated with other prognostic factors, as well as the rate of cell proliferation and overexpression of Her-2/neu. Results: Detection of LVI was considerably higher than that of IVS. The presence of IVL was detected in 6/30 cases (20%) and by HE in 9/30 cases (30%) by IHC. Of the 6 cases with LVI HE, 3 were false positives at IHC. The LVI IHC detected 6 cases that were considered negative for HE. The BVI was observed in 5/30 cases (16.7%) by HE and IHC in only 1 case (3.3%). Were identified by analyzing the IHC, 5 false-positive and 1 false-negative for IVS. The comparison between the detection of LVI and BVI by both methods showed no significant difference. The diagnostic agreement between methods was weak for LVI (Kappa = 0.211) and poor for BVI (Kappa = 0.167). The clinicopathological factors related to the presence of LVI was the depth of tumor layers m1 (p = 0.031) and m3 (p = 0.047). In contrast, all other variables showed no correlation with the presence of IVS. When analyzing the rate of cell proliferation detected by immunohistochemical examination (Ki 67), we did not identify a statistically significant relationship with the variables analyzed. All cases proved negative for overexpression of Her-2/neu protein. Conclusion: Our results indicated that the histopathological analysis of DES products exclusively performing routine HE staining, as usually happens, does not allow the proper evaluation of the presence of LVI or BVI. This study helped to extend and refine the established protocol as proposing the inclusion of immunohistochemical studies researching for BVI and LVI (CD34 and D2-40), cell proliferation (Ki 67) and Her-2/neu overexpression of the protein. This way is submitted, all information currently possible that could be extracted from the product DES improving the staging of the neoplasm.

INTRODUÇÃO: o carcinoma gástrico (CG) é a segunda maior causa de morte por câncer em todo o mundo, sendo o estadiamento TNM o fator mais importante para o prognóstico dos pacientes, especialmente a presença de metástases linfonodais. A invasão vascular linfática (IVL) detectada no tumor primário se correlaciona com a ocorrência de metástases linfonodais e é também considerada fator prognóstico independente nos pacientes com CG. A avaliação da angioinvasão realizada apenas pela coloração de rotina hematoxilina e eosina (HE) pode gerar tanto resultados falso-positivos quanto falso-negativos. O D2-40 é um anticorpo monoclonal específico para endotélio linfático, sendo assim útil para identificar IVL e, desta forma, distinguir se a embolização tumoral se encontra em vasos sanguíneos ou linfáticos. OBJETIVOS: nosso objetivo foi analisar comparativamente a detecção de IVL e sanguínea (IVS), pela HE e pela imuno-histoquímica (IHQ) com marcação por D2-40 e CD34 em uma série de CG e correlacioná-las com os demais fatores prognósticos. MATERIAL E MÉTODOS: foi realizado estudo IHQ em cortes seriados, utilizando os marcadores D2-40 (endotélio linfático) e CD34 (pan-endotelial) em 95 casos consecutivos de CG para avaliar a presença de IVL e IVS. Os resultados obtidos pela análise à IHQ foram comparados com a detecção de IVL e IVS pela HE, e correlacionados com outros fatores prognósticos. Os dados clínico-patológicos e a presença de IVL e IVS foram correlacionados com a ocorrência de metástases linfonodais. RESULTADOS: a detecção de IVL foi consideravelmente maior que a de IVS. Sessenta e um casos (64,2%) apresentaram IVL na avaliação pela HE, que foi identificada em 66 (69,5%) pela IHQ. Dos 61 casos com IVL ao HE, 8 eram falso-positivos à IHQ. A IHQ detectou IVL em 13 casos que haviam sido considerados negativos ao HE. A IVS foi evidenciada em 38 casos (40,0%) pela HE e em apenas 24 (25,2%) pela IHQ. Foram identificados, pela análise à IHQ, 24 casos falso-positivos e 10 casos falso-negativos para IVS. A comparação entre a detecção de IVL por ambos os métodos não mostrou diferença significativa. Houve diferença estatisticamente significativa entre a detecção de IVS ao HE e à IHQ (p=0,02). A concordância diagnóstica entre os métodos foi moderada para IVL (Kappa=0,50) e baixa para IVS (Kappa=0,20). A correlação entre a presença de metástases linfonodais e a presença de IVL e IVS foi estatisticamente significativa, tanto na avaliação pela HE (p=0,001, p=0,013), quanto pela IHQ (p=0,001, p=0,019). A presença de metástases linfonodais se correlacionou ainda com: a profundidade de infiltração tumoral além da submucosa (CG avançado) (p=0,001), a classificação histológica de Laurén quando comparados os tipos difuso e misto/não classificável (p=0,017) e a invasão de órgãos por continuidade (esôfago e duodeno) (p=0,026). Os fatores clínico- patológicos relacionados à presença de IVL foram: topografia do tumor no terço distal do estômago (p=0,039), tipo macroscópico de Borrmann (p=0,001), invasão de órgãos por continuidade (p=0,003) e profundidade tumoral (p=0,001). Em contrapartida, a presença de IVS correlacionou-se apenas com a profundidade tumoral (p=0,003). CONCLUSÃO: a presença de IVL e IVS está relacionada à presença de metástases linfonodais no CG. A presença de IVL está associada a outros fatores de pior prognóstico nos tumores, como estágio avançado da neoplasia, invasão de órgãos por continuidade e o tipo misto/não classificável de Laurén, refletindo provavelmente o seu potencial metastático e comportamento agressivo. Nossos resultados mostram que a aplicação do método IHQ utilizando esses dois marcadores combinados é superior na detecção de IVL e IVS no CG, quando comparada à coloração de rotina pela HE, podendo ter grande aplicação na prática médica. BACKGROUND: Worldwide, gastric carcinoma (GC) is the second largest cause of cancer-related death. The TNM staging system for GC is widely used and it provides important prognostic information, especially with regards to the lymph node status. The presence of lymphatic invasion (LVI) detected on the primary tumor is the strongest risk factor for lymph node metastasis and is known as an independent prognostic factor in patients with GC. Because the evaluation of LVI is subjective with conventional Hematoxylin and Eosin (H&E) staining, it can lead to inaccurate false-positive and false-negative results. D2-40 is a specific monoclonal antibody for the lymphatic endothelium, being useful to identify LVI and distinguish lymphatic from blood vessel invasion (BVI) by neoplastic cells. AIMS: The aim of this study is to evaluate and compare LVI and BVI detected by H&E and immunohistochemistry (IHC) in a series of GC, relating them to morphologic features of the primary tumor and to the presence of lymph node metastasis. METHODS: IHC using D2-40 (lymphatic endothelial marker) and CD34 (pan-endothelial marker) was performed to study LVI and BVI in surgical specimens of a consecutive series of 95 primary GC. The results of the IHC study were compared with the detection of LVI and BVI by H&E, and related to other prognostic factors. The morphologic features of tumors and the presence of LVI and BVI were also related to the presence of lymph node metastasis. RESULTS: The detection of LVI was considerably higher than BVI. Sixty-one cases (64,2%) were positive for LVI when evaluated by H&E, whether 66 (69,5%) were detected by IHC. From the 61 cases with LVI by H&E, 8 were false-positives by IHC. The IHC detected LVI in 13 cases that were negative by H&E. BVI was identified in 38 cases (40,0%) by H&E and in just 24 (25,2%) by IHC. The IHC study identified 24 cases of false-positives and 10 cases of false-negatives for BVI. The comparison of LVI detected by both methods was not statistically significant. There was a significant difference between BVI detected by H&E and IHC (p=0,02). The average Kappa value determined for LVI was moderate (Kappa=0,50) and low for BVI (Kappa=0,20). The correlation between lymph node metastasis and the presence of LVI and BVI was statistically significant when evaluated by H&E (p=0,001, p=0,013), and IHC (p=0,001, p=0,019). The presence of lymph node metastasis was associated with the depth of tumor invasion when compared advanced to early GC (p=0,001), mixed-type of Lauréns classification when compared to the diffuse-type (p=0,017) and organ invasion (esophagus and duodenum) (p=0,026). The morphologic features associated with LVI were: location of tumor at distal third of the stomach (p=0,039), Borrmanns macroscopic type (p=0,001), organ invasion (p=0,003) and depth of tumor invasion (p=0,001). The presence of BVI is related only to the depth of tumor invasion (p=0,003). CONCLUSION: LVI was more easily identified in the D2-40 immunostained sections than in the H&E stained sections. The presence of LVI and BVI is associated with the presence of lymph node metastasis. The presence of LVI is associated to others morphological features of poor prognosis, as advanced stage of disease, mixed-type of Lauréns classification when compared to the diffuse-type and organ invasion (esophagus and duodenum), probably reflecting a potential for lymphatic metastatic spread and aggressive behavior. Our results show that the IHC method with these two markers is superior to the conventional H&E staining for detecting LVI and BVI in GC. Immunohistochemical identification of lymphatic and blood vessels in GC is useful to increase the accuracy of diagnosing the presence lymph or blood vessel invasion and to predict lymph node metastasis.