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Submitted by Marilene Donadel (marilene.donadel@unioeste.br) on 2022-10-03T18:27:18Z No. of bitstreams: 1 Gabriel_Fraga_2022.pdf: 3913225 bytes, checksum: 005b7b13ba3af8f194eaa111aaff3f6b (MD5) Made available in DSpace on 2022-10-03T18:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gabriel_Fraga_2022.pdf: 3913225 bytes, checksum: 005b7b13ba3af8f194eaa111aaff3f6b (MD5) Previous issue date: 2022-09-05 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The electrospinning of polymeric solutions has become an attractive method for application in biomedical areas, such as obtaining dressings. Thus, biocompatible polymers are widely electrospun for tissue engineering, an example is a poly(vinyl alcohol) PVA. However, this polymer has a solubility in water, which is amplified when it is in the form of nanofibers. Therefore, PVA nanofibers need to undergo a crosslinking process in order to improve their stability in water, thus maintaining their morphological structure. In this study, electrospun PVA membranes containing the antibiotic chloramphenicol (CLF) for application as dressings were subjected to two types of crosslinking using citric acid (CA) or glutaraldehyde (GLA). The SEM images showed that it was possible to obtain PVA nanofibers containing the antibiotic chloramphenicol with diameters varying between 600 and 700 nm, with the smallest diameter 593 nm being observed for membranes crosslinked with CA. Crosslinking with citric acid was able to provide better stability of the fibers against aqueous media, maintaining the morphological structures with a loss of 0.7% of the mass after 24h. However, cross-linking with GLA was not able to maintain the fibrous structure, allowing the fibers to coalesce. The improvement in thermal stability promoted by crosslinking was observed in the TGA analysis, as well as in the increase in crystallinity confirmed by the DSC, XRD, and FTIR analyses. The FTIR analysis confirmed the incorporation of the drug in the fibers, while the TGA analysis showed that the CLF delays the thermal degradation of the polymer. The absence of peaks referring to CLF in the X-ray diffractograms and the DSC curves indicate that the drug is possibly in its amorphous state, which improves the drug's solubility making it more bioavailable. The CLF release mechanism shows that the kinetics follows the Weibull model for matrix release systems, presenting a burst release in the first 30 min. The membranes showed hemotoxicity below the established limit (5%), being suitable for application in medical devices, in addition, in the presence of the drug, it promotes antimicrobial activity observed by the disk diffusion assays. Thus, through the results obtained, it was found that these membranes are promising for application in dressings. A eletrofiação de soluções poliméricas tem se tornado um método atrativo para aplicação nas áreas biomédicas, como a obtenção de curativos. Assim, polímeros biocompatíveis são amplamente eletrofiados para engenharia de tecidos, um exemplo é o álcool poli(vinílico) PVA. No entretanto, este polímero possui uma solubilidade em água, a qual é amplificada quando está na forma de nanofibras. Portanto, nanofibras de PVA necessitam passar por um processo de reticulação, com a finalidade de melhorar a estabilidade em água, mantendo, desta maneira, sua estrutura morfológica. Neste estudo membranas eletrofiadas de PVA contendo o antibiótico cloranfenicol (CLF) para aplicação como curativos, foram submetidas a dois tipos de reticulação utilizando ácido cítrico (CA) ou glutaraldeído (GLA). A imagens de MEV mostraram que foi possível obter nanofibras de PVA contendo o antibiótico cloranfenicol com diâmetros variando entre 600 e 700 nm, sendo o menor diâmetro 593 nm foi observado para as membranas reticuladas com CA. A reticulação com ácido cítrico foi capaz de conferir melhor estabilidade das fibras frente a meios aquoso, mantendo as estruturas morfológicas com perda de 0,7% da massa após 24h. Entretanto, a reticulação com GLA não foi capaz de manter a estrutura fibrosa permitindo a coalescência das fibras. A melhora na estabilidade térmica promovida pela reticulação foi observada nas análises de TGA, bem como no aumento da cristalinidade confirmado pelas análises de DSC, DRX e FTIR. As análises de FTIR comprovaram a incorporação do fármaco nas fibras, enquanto as análises de TGA mostraram que o CLF retarda a degradação térmica do polímero. A ausência de picos referente ao CLF nos difratogramas de raios-X e nas curvas de DSC indicam, que possivelmente o fármaco esteja em seu estado amorfo, o que melhora a solubilidade do fármaco tornando mais biodisponível. O mecanismo de liberação do CLF mostra que a cinética segue o modelo de Weibull para sistemas matriciais de liberação, apresentando uma liberação de instantânea nos primeiros 30 min. As membranas apresentaram hemotoxicidade abaixo abaixo do limite estabelecido (5%), sendo adequada para aplicação em dispositivos médicos, além disso, na presença do fármaco promovem atividade antimicrobiana observada pelos ensaios de difusão de disco. Assim, mediante aos resultados obtidos, constatou-se que estas membranas são promissoras para aplicação em curativos.

RESUMO Estações de tratamento de esgotos (ETEs) estão entre as principais fontes de disseminação de bactérias resistentes a antibióticos (BRAs) e genes de resistência (GRAs) no ambiente. Este trabalho quantificou a ocorrência de bactérias resistentes aos antibióticos ampicilina e cloranfenicol no esgoto bruto (EB), no efluente tratado (ET) e no lodo de duas ETEs em escala plena por um período de nove meses. As unidades investigadas utilizavam os seguintes sistemas de tratamento: ETE-A, sistema de lodos ativados convencional; e a ETE-B, reatores anaeróbios (UASB) seguidos de filtros biológicos percoladores (FBP). Os resultados evidenciaram que a ETE-A foi mais eficiente na redução das concentrações de bactérias resistentes à ampicilina e ao cloranfenicol (cerca de 1,1 e 0,7 log10UFC.mL−1 de remoção, respectivamente), quando comparada com a ETE-B (0,5log10 UFC.mL−1 de remoção para as bactérias resistentes ao cloranfenicol e nenhuma remoção para as resistentes à ampicilina). As amostras de lodo, de ambas ETEs, apresentaram elevadas concentrações de bactérias heterotróficas totais — BHTs (4,8–7,6 log10UFC.mL−1) e de BRAs (3,0–6,3 log10UFC.mL−1). A maioria das cepas resistentes à ampicilina e ao cloranfenicol isoladas foi identificada como sendo da família Enterobacteriaceae. Algumas das espécies identificadas são bactérias potencialmente patogênicas, tais como: Klebsiella pneumoniae, Aeromonas hydrophila, Escherichia coli, Enterococcus faecium, Salmonella spp. Os resultados chamam a atenção para a disseminação de BRAs, potencialmente patogênicas, no meio ambiente a partir do efluente final (proveniente do tratamento secundário) das ETEs, independentemente do tipo de sistema adotado. Fica evidente que para reduzir significativamente a concentração das BRAs no ET, este deveria passar por tratamento adicional e desinfecção. ABSTRACT Sewage treatment plants (STP) are among the main sources of dissemination of antibiotic-resistant bacteria (ARB) and antibiotic-resistance genes (ARG) into the environment. This work quantified the occurrence of cultivable ampicilin-resistant and chloramphenicol-resistant bacteria in raw sewage, treated effluent and sludge samples from two full-scale STP over nine months. The STP investigated used the following treatment systems: STP-A used conventional activated sludge system; and STP-B, anaerobic reactors (UASB) followed by percolating biological filters (PBF). Results showed that was more efficient in reducing the concentrations of ampicilin- and chloramphenicol-resistant bacteria (around 1.1 and 0.7 log10UFC.mL−1, respectively) when compared to STP-B (0.5 log10 UFC.mL−1 removal of cloramphenicol-resistant bacteria and no-removal of ampicilin-resistant bacteria). Sludge samples, from both STP, showed high concentrations of total heterotrophic bacteria (THB; 4.8–7.6 log10UFC.mL−1) and ARB (3.0–6.3 log10UFC.mL−1). Most of the isolated ampicilin- and chloramphenicol-resistant strains were identified as members of the Enterobacteriaceae family. Some of the identified species are potential pathogenic bacteria, such as Klebsiella pneumoniae, Aeromonas hydrophila, Escherichia coli, Enterococcus faecium, Salmonella spp. These results call attention to the spread of ARB, potentially pathogenic, in the environment from the final effluent (from secondary effluent) on the STP, regardless of the type of system adopted. It is evident that in order to significantly reduce the concentration of ARB in the treated effluent, it should undergo additional treatment and disinfection.

RESUMO Estações de tratamento de esgotos (ETEs) estão entre as principais fontes de disseminação de bactérias resistentes a antibióticos (BRAs) e genes de resistência (GRAs) no ambiente. Este trabalho quantificou a ocorrência de bactérias resistentes aos antibióticos ampicilina e cloranfenicol no esgoto bruto (EB), no efluente tratado (ET) e no lodo de duas ETEs em escala plena por um período de nove meses. As unidades investigadas utilizavam os seguintes sistemas de tratamento: ETE-A, sistema de lodos ativados convencional; e a ETE-B, reatores anaeróbios (UASB) seguidos de filtros biológicos percoladores (FBP). Os resultados evidenciaram que a ETE-A foi mais eficiente na redução das concentrações de bactérias resistentes à ampicilina e ao cloranfenicol (cerca de 1,1 e 0,7 log10UFC.mL−1 de remoção, respectivamente), quando comparada com a ETE-B (0,5log10 UFC.mL−1 de remoção para as bactérias resistentes ao cloranfenicol e nenhuma remoção para as resistentes à ampicilina). As amostras de lodo, de ambas ETEs, apresentaram elevadas concentrações de bactérias heterotróficas totais — BHTs (4,8–7,6 log10UFC.mL−1) e de BRAs (3,0–6,3 log10UFC.mL−1). A maioria das cepas resistentes à ampicilina e ao cloranfenicol isoladas foi identificada como sendo da família Enterobacteriaceae. Algumas das espécies identificadas são bactérias potencialmente patogênicas, tais como: Klebsiella pneumoniae, Aeromonas hydrophila, Escherichia coli, Enterococcus faecium, Salmonella spp. Os resultados chamam a atenção para a disseminação de BRAs, potencialmente patogênicas, no meio ambiente a partir do efluente final (proveniente do tratamento secundário) das ETEs, independentemente do tipo de sistema adotado. Fica evidente que para reduzir significativamente a concentração das BRAs no ET, este deveria passar por tratamento adicional e desinfecção.

A problemática da multirresistência cruzada a diferentes classes de antibiótico MDR (Resistência a múltiplos fármacos) tem se tornado um acontecimento rotineiro na medicina atual, implicando em falha terapêutica. As bombas de efluxo colaboram de forma considerável para essa resistência aos agentes antibacterianos, a expressão desses mecanismos é controlada por reguladores transcricionais. TtgR é um regulador de ligação multidrogas da bomba TtgABC, presente em P. putida, ele apresenta uma forte similaridade com QacR, uma proteína de ligação de múltiplos fármacos de S. aureus. Expomos aqui três estruturas cristalográficas de TtgR, estirpe DOT-T1E, em complexo com o flavonoide Quercetina (QUE) e com os antibióticos Tetraciclina (TAC) e Cloranfenicol (CLM). Através de dados com estruturas cristalinas e simulações computacionais foi possível analisar as contribuições energéticas desses efetores ao sítio de ligação geral de TtgR utilizando a Teoria Funcional da Densidade (DFT) e do Método de Fracionamento Molecular com Capas Conjugadas (MFCC). Os resultados mostraram os valores energéticos de cada resíduo de aminoácido constituinte do bolso de interação com os ligantes em análise. Essa avaliação se deu em um raio de até 13,0 Å de distância dos fármacos. Esses efetores se acoplam a proteína TtgR de forma semelhante, compartilhando um core hidrofóbico, como: LEU93, LEU92, ILE141, VAL171 e VAL96. Foi constatado algumas interações específicas com aminoácidos polares, como ARG176, que se fez importante para os complexos TtgR-QUE e TtgR-TAC e a HIS70 para os complexos TtgR-TAC e TtgR-CLM. Essa caracterização energética nos fornecem informações relevantes para compreensão da resistência MDR, concomitante a novas possibilidades no planejamento de drogas frente a esse mecanismo de resistência. The problem of cross-resistance to different classes of MDR (multidrug resistance) antibiotic has become a routine event in current medicine, implying therapeutic failure. Efflux pumps collaborate considerably for this resistance to antibacterial agents, the expression of such mechanisms is controlled by transcriptional regulators. TtgR is a multidrug binding regulator of the TtgABC pump, present in P. putida, it exhibits strong similarity to QacR, a multiple drug binding protein of S. aureus. We show here three crystallographic structures of TtgR, DOT strain T1E, in complex with the flavonoid Quercetin (QUE) and with the antibiotics Tetracycline (TAC) and Chloramphenicol (CLM). Through data with crystalline structures and computational simulations, it was possible to analyze the energetic contributions of these effectors to the general bonding site of TtgR using the Functional Density Theory (DFT) and the Molecular Fractionation Method with Conjugated Layers (MFCC). The results showed the energetic values of each amino acid residue constituting the interaction pocket with the ligands under analysis. This evaluation occurred within a radius of up to 13.0 Å away from the drugs. These effectors couple to the TtgR protein in a similar way, sharing a hydrophobic core, such as: LEU93, LEU92, ILE141, VAL171 and VAL96. It was observed some specific interactions with polar amino acids, such as ARG176, which became important for the TtgRQUE and TtgR-TAC complexes and HIS70 for the TtgR-TAC and TtgR-CLM complexes. This energetic characterization provides us with information relevant to understanding MDR resistance, concomitant with new possibilities in drug planning versus this mechanism of resistance.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Contaminantes emergentes têm sido mencionados frequentemente como ameaças potenciais ao meio ambiente. Os produtos farmacêuticos são uma classe representativa desses contaminantes, com destaque para os antibióticos. Sistemas Aquosos Bifásicos (SAB) são uma alternativa potencial para partição/extração de antibióticos. Para isso é de grande importância o desenvolvimento de dados de equilíbrio líquido-líquido para esses sistemas, ampliando sua faixa de aplicação. Assim, dados de equilíbrio líquido-líquido para SAB compostos pelos polímeros poli(óxido de propileno) (PPO425) e poli(óxido de etileno) (PEO900) e diferentes eletrólitos de amônio (NH 4 C 2 H 3 O 2 , (NH 4 ) 2 C 4 H 4 O 6 , (NH 4 ) 2 C 6 H 6 O 7 e NH 4 CHO 2 ) foram determinados em diferentes temperaturas. Os parâmetros energéticos para estes sistemas foram estudados através do modelo nonrandom two-liquid (NRTL) como também os fatores que influenciam sua formação (ânion, hidrofobicidade e temperatura). Foi verificado que o aumento da temperatura aumenta a área bifásica em todos os sistemas e que o ânion tartarato apresentou maior capacidade em formar SAB com PPO425. O modelo NRTL apresentou resultados satisfatórios com desvios de 1,82 %. Em outro trabalho, realizou-se o estudo termodinâmico das forças motrizes envolvidas no processo de partição do antibiótico cloranfenicol em diferentes SAB formados por polímero e eletrólito. Os parâmetros termodinâmicos variação da energia livre de Gibbs de transferência ( padrão de transferência ( ) e variação de entropia padrão de transferência foram determinados, variando de (-15.45±0.02) kJ mol -1 < mol -1 , (-80.88±1.30) kJ mol -1 < T ), variação de entalpia < (-2.64±0.02) kJ < (-8.33±0.04) kJ e (-64.09±0.85) kJ mol -1 < < (1.26±0.12) kJ mol -1 , mostrando que o processo de transferência de cloranfenicol da fase rica em eletrólito para a fase rica em polímero é entalpicamente dirigido e ocorre espontaneamente. Os efeitos da natureza do cátion, ânion, massa molar e hidrofobicidade do polímero foram investigados, mostrando a influência dessas propriedades nos parâmetros termodinâmicos. No último capítulo é apresentada a proposta de um método em fluxo para extração, pré-concentração e determinação de cloranfenicol em amostra aquosa usando SAB com detecção UV- Vis. Emerging pollutants have often been mentioned as potential threats to the environment. Pharmaceuticals are a representative class of these contaminants, especially antibiotics. Aqueous Two Phase Systems (ATPS) are a potential alternative for antibiotic partition/extraction. For this, the development of liquid- liquid equilibrium data for these systems is highly important, expanding its range of application. Thus, liquid-liquid equilibrium data for ATPS composed of poly(polypropylene oxide) (PPO425) and poly(ethylene oxide) (PEO900) and different ammonium electrolytes (NH 4 C 2 H 3 O 2 , (NH 4 ) 2 C 4 H 4 O 6 , (NH 4 ) 2 C 6 H 6 O 7 and NH 4 CHO 2 ) were determinated at different temperatures. The energetic parameters for these systems were assessed with the nonrandom two-liquid (NRTL) model as well as the factors that influence its formation (anion, hydrophobicity and temperature). It was verified that temperature increases enlarge the biphasic area in all systems and that the tartrate anion presented greater capacity to form ATPS with PPO425. The NRTL model presented satisfactory results with deviations of 1.82 %. In another work, the thermodynamic study of the driving forces involved in the process of partitioning the antibiotic chloramphenicol was carried out in different ATPS formed by polymer and electrolyte. The thermodynamic parameters transfer standard Gibbs free energy change ( ), and transfer standard entropy change ( ( from (-15.45±0.02) kJ mol -1 < < ), transfer standard enthalpy change ) were determined, ranging < -(2.64±0.02) kJ mol -1 , (-80.88±1.30) kJ mol -1 < (-8.33±0.04) kJ and (-64.09±0.85) kJ mol -1 < T < (1.26±0.12) kJ mol - , showing that the chloramphenicol transfer process from the electrolyte-rich phase to the polymer-rich phase is enthalphically driven and occurs spontaneously. The effects of the cation nature, anion, molar mass and hydrophobicity of the polymer were investigated, showing the influence of these properties on the thermodynamic parameters. In the last chapter a method in flow for extraction, preconcentration and determination of chloramphenicol in aqueous sample using ATPS with UV-Vis detection is proposed.

Submitted by Renorbio (renorbioba@ufba.br) on 2019-05-13T17:28:13Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO CESAR - VERSÃO CORRIGIDA FINAL.pdf: 3445774 bytes, checksum: 59ec936639b9c39195a57dbc92daffe4 (MD5) Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2019-05-17T13:56:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO CESAR - VERSÃO CORRIGIDA FINAL.pdf: 3445774 bytes, checksum: 59ec936639b9c39195a57dbc92daffe4 (MD5) Made available in DSpace on 2019-05-17T13:56:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO CESAR - VERSÃO CORRIGIDA FINAL.pdf: 3445774 bytes, checksum: 59ec936639b9c39195a57dbc92daffe4 (MD5) Os biomarcadores têm sido utilizados como ferramentas preventivas na avaliação de riscos ambientais. O presente estudo teve como objetivo caracterizar as transaminases alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) como biomarcadores de toxicidade usando caranguejo semiterrestre Cardisoma guanhumi . O cloranfenicol , um antibiótico de uso ilegal em aquiculturas no mundo , foi utilizado como agente indutor.As transaminases ALT e AST da hemolinfa de dez indivíduos foram quantificadas antes e após tratamento com cloranfenicol. Técnicas histoquímicas foram utilizadas para avaliação histopatológica do hepatopâncreas de C. guanhumi. Adicionalmente, foi feita uma investigação de possíveis alterações do perfil das proteínas majoritárias nahemolinfa de animais controle e tratados, através de eletroforese em gel desnaturado de poliacrilamida - SDS (SDS-PAGE). As análises histopatológicas demonstraram que o tratamento com cloranfenicol na dosage de 50 mg/Kg, promoveu danos no tecido hepatopâncreático, evidenciados pela grande vacuolização, aumento no diâmetro vacuolar e intensa atividade secretora. Um aumento de 10 vezes e 5 vezes nos níveis hemolinfáticos de ALT e AST, respectivamente, demonstra que o efeito tóxico do antibiótico pode ser detectado pela quantificação dos níveis hemolinfáticos de ALT e AST. A eletroforese de gel de poliacrilamida revelou uma alteração no perfil das proteínas presentes na hemolinfa, caracterizado principalmente por redução nas bandas de 120 KDa e 15 KDa e aumento na banda de 30 KDa. A validação das transaminases ALT e AST como biomarcadores de toxicidae em C. guanhumi amplia as perspectivas da utilização desses biomarcadores para avaliação dos riscos ambientais de outros antibióticos similares, usados em aquicultura. Biomarkers have been used as preventive tools in environmental risk assessment. The present study aims to characterize the alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) as biomarkers of toxicity in the semi-terrestrial crab Cardisoma guanhumi. Chloramphenicol, an illegal antibiotic, used worldwide in aquaculture was used as a toxicity inductor. ALT and AST were quantified in hemolymph of ten individuals before and after treatment with chloramphenicol. Histochemical techniques were used for histopathological evaluation of the hepatopancreas of C. guanhumi. In addition, an investigation was made in changes to major proteins in the hemolymph control and treated animals using SDS-PAGE. Histopathological analysis showed that treatment with 50 mgIkg chloramphenicol at a dose of promoted hepatopancreatic damage , evidenced by extensive vacuolization , increase of vacuolar diameter and intense secretory activity. 10 times and 5 times in hemolymphatic AST and ALT were observed, respectively, demonstrating that toxic effect of the antibiotic can be detected by quantifying the hemolymphatic levels of those enzymas. SDS-PAGE revealed a change in proteins profile of the hemolymph, mainly characterized by reduction of 120 kDa and 15 kDa, as well as increased 30 kDa.Validation ALT and AST as biomarkers for toxicity in C. guanhumi broadens the perspectives of using those biomarkers for environmental risk assessment on other similar antibiotics, used in aquaculture.

O objetivo deste trabalho foi realizar o isolamento e analisar o perfil de resistência antimicrobiana de Enterococcus de carcaças de frango resfriadas e congeladas comercializadas no Distrito Federal, detectando genes de resistência antimicrobiana e identificando as espécies Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium por reação polimerase em cadeia. Foram analisadas 100 carcaças de frangos, das quais foram isoladas 50 cepas de Enterococcus spp., sendo 42% de E. faecalis e 2% de E. faecium. O teste de susceptibilidade antimicrobiana demonstrou que todas as cepas isoladas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano, dos quais 90,47% das cepas de E. faecalis, 100% das cepas de E. Faecium e 82,14% dos Enterococcus spp. apresentaram resistência à Tetraciclina; 80,95% das cepas de E. faecalis e 35,71% das cepas de Enterococcus spp. foram resistentes à Eritromicina; 39,28% dos Enterococcus spp. e 23,80% dos E. faecalis à Ciprofloxacina e 28,57% dos E. faecalis apresentaram resistência ao Cloranfenicol. Foram detectados os genes de resistência antimicrobiana erm(B), vanC-1, aph(3')-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6')-le-aph(2'')-la, erm(A) e tet(M) - este último mais frequente. Estes resultados sugerem sérios problemas para a Saúde Pública, uma vez que esses microrganismos podem possuir a capacidade de transmitir genes de resistência antimicrobiana para outros microrganismos presentes na microbiota intestinal de humanos e animais, podendo inviabilizar o uso destas drogas para tratamentos clínicos.

O objetivo deste trabalho foi realizar o isolamento e analisar o perfil de resistência antimicrobiana de Enterococcus de carcaças de frango resfriadas e congeladas comercializadas no Distrito Federal, detectando genes de resistência antimicrobiana e identificando as espécies Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium por reação polimerase em cadeia. Foram analisadas 100 carcaças de frangos, das quais foram isoladas 50 cepas de Enterococcus spp., sendo 42% de E. faecalis e 2% de E. faecium. O teste de susceptibilidade antimicrobiana demonstrou que todas as cepas isoladas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano, dos quais 90,47% das cepas de E. faecalis, 100% das cepas de E. Faecium e 82,14% dos Enterococcus spp. apresentaram resistência à Tetraciclina; 80,95% das cepas de E. faecalis e 35,71% das cepas de Enterococcus spp. foram resistentes à Eritromicina; 39,28% dos Enterococcus spp. e 23,80% dos E. faecalis à Ciprofloxacina e 28,57% dos E. faecalis apresentaram resistência ao Cloranfenicol. Foram detectados os genes de resistência antimicrobiana erm(B), vanC-1, aph(3')-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6')-le-aph(2'')-la, erm(A) e tet(M) - este último mais frequente. Estes resultados sugerem sérios problemas para a Saúde Pública, uma vez que esses microrganismos podem possuir a capacidade de transmitir genes de resistência antimicrobiana para outros microrganismos presentes na microbiota intestinal de humanos e animais, podendo inviabilizar o uso destas drogas para tratamentos clínicos. The aim of this study was to isolate and analyze the antimicrobial profile resistance of Enterococcus from cooled and frozen poultry carcasses commercialized at the Federal District area, detecting the antimicrobial resistance genes and identifying Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium by polymerase chain reaction. One hundred poultry carcasses were analyzed and 50 strains of Enterococcus spp. were isolated, of which 42% were E. faecalis and 2% E. faecium. The antimicrobial susceptibility test showed that all isolates were resistant to at least one antibiotic; 90,47% of E. faecalis, 100% of E. faecium and 82,14% of Enterococcus spp. were resistant to Tetracycline; 80,95% of E. faecalis and 35,71% of Enterococcus spp. strains were resistant to Erythromycin; 39,28% of Enterococcus spp. and 23,80% of E. faecalis to Ciprofloxacin, and 28,57% of E. faecalis were resistant to Chloramphenicol. There were detected erm(B), vanC-1, aph(3')-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6')-le-aph(2'')-la, erm(A) and tet(M) resistance genes, the last one most often verified. The results might suggest problems for public health due the high resistance, since these microorganisms have ability to transmit genes for antimicrobial resistance to others in the intestinal tract of humans and animals. Thus, the use of these drugs for clinical treatment could be hindered.

O objetivo deste trabalho foi realizar o isolamento e analisar o perfil de resistência antimicrobiana de Enterococcus de carcaças de frango resfriadas e congeladas comercializadas no Distrito Federal, detectando genes de resistência antimicrobiana e identificando as espécies Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium por reação polimerase em cadeia. Foram analisadas 100 carcaças de frangos, das quais foram isoladas 50 cepas de Enterococcus spp., sendo 42% de E. faecalis e 2% de E. faecium. O teste de susceptibilidade antimicrobiana demonstrou que todas as cepas isoladas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano, dos quais 90,47% das cepas de E. faecalis, 100% das cepas de E. Faecium e 82,14% dos Enterococcus spp. apresentaram resistência à Tetraciclina; 80,95% das cepas de E. faecalis e 35,71% das cepas de Enterococcus spp. foram resistentes à Eritromicina; 39,28% dos Enterococcus spp. e 23,80% dos E. faecalis à Ciprofloxacina e 28,57% dos E. faecalis apresentaram resistência ao Cloranfenicol. Foram detectados os genes de resistência antimicrobiana erm(B), vanC-1, aph(3')-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6')-le-aph(2'')-la, erm(A) e tet(M) - este último mais frequente. Estes resultados sugerem sérios problemas para a Saúde Pública, uma vez que esses microrganismos podem possuir a capacidade de transmitir genes de resistência antimicrobiana para outros microrganismos presentes na microbiota intestinal de humanos e animais, podendo inviabilizar o uso destas drogas para tratamentos clínicos. The aim of this study was to isolate and analyze the antimicrobial profile resistance of Enterococcus from cooled and frozen poultry carcasses commercialized at the Federal District area, detecting the antimicrobial resistance genes and identifying Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium by polymerase chain reaction. One hundred poultry carcasses were analyzed and 50 strains of Enterococcus spp. were isolated, of which 42% were E. faecalis and 2% E. faecium. The antimicrobial susceptibility test showed that all isolates were resistant to at least one antibiotic; 90,47% of E. faecalis, 100% of E. faecium and 82,14% of Enterococcus spp. were resistant to Tetracycline; 80,95% of E. faecalis and 35,71% of Enterococcus spp. strains were resistant to Erythromycin; 39,28% of Enterococcus spp. and 23,80% of E. faecalis to Ciprofloxacin, and 28,57% of E. faecalis were resistant to Chloramphenicol. There were detected erm(B), vanC-1, aph(3')-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6')-le-aph(2'')-la, erm(A) and tet(M) resistance genes, the last one most often verified. The results might suggest problems for public health due the high resistance, since these microorganisms have ability to transmit genes for antimicrobial resistance to others in the intestinal tract of humans and animals. Thus, the use of these drugs for clinical treatment could be hindered.

BIZERRA, A. M. C.; Biorreduções de cetonas pró-quirais e nitrocompostos com células íntegras de Vigna unguiculata L. e produção enzimática de ésteres de cloranfenicol. 2012. 277 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. This work is divided into two parts: the first related biotransformations of organic compounds with the species Vigna unguiculata, and the second on the enzymatic synthesis of esters of chloramphenicol. Reactions bioreduction of ketones and nitrocompounds with grains of Vigna unguiculata (feijão de corda). After performing a reduction of acetophenone with screnning varying the reaction conditions, we found those that led to better results for conversion and enantiomeric excess. These conditions were applied to 34 other susbtratos, including: aliphatic ketones and aromatic ring with different substituents such as nitro, methoxy, and alkyl halide in various positions, nitro, β-keto ester, a ketone α, β-unsaturated and benzonitrile. Overall, the results obtained with the biorreduções can be considered satisfactory, as well as the enantiomeric excess values. In the second part, we used the commercial lipases: CAL-B, PSL-C (I) and PSL-C Amano in acylation reactions of the drug chloramphenicol, an exhaustive study in search of optimum reaction conditions mainly exploring the activity regioselective these enzymes. Were obtained from eight derivatives of this drug, depending on the acylating agent used, seven of these, and a monoacilados, di-acylated. As acyl donor was used several vinyl esters, saturated or not and with various chain lengths. Reaction parameters such as: variations of the solvent, temperature, concentration of the acylating agent and medium were optimized to obtain these derivatives. Virtually all products were obtained in high percentages of conversion, except for those with unsaturation. It is also carried out in a bench scale procedure using the enzyme CAL-B, and significant results were obtained in all cases. At the end of the study we adopted a procedure for recycling of the same enzyme, which was proven its efficiency in reuse. Este trabalho encontra-se dividido em duas partes: a primeira relacionada à biotransformações de compostos orgânicos com a espécie Vigna unguiculata, e a segunda, relativa à síntese enzimática de ésteres de cloranfenicol. Reações de biorredução de cetonas e nitrocompostos com grãos de Vigna unguiculata (feijão de corda). Após realizado um screnning com redução de acetofenona variando-se as condições reacionais, encontrou-se aquelas que levaram ao melhores resultados de conversão e excesso enantiomérico. Essas condições foram aplicadas para outros 34 susbtratos, entre eles: cetonas alifáticas e aromáticas com diferentes substituintes no anel como: nitro, metóxi, alquila e halogênios em várias posições, nitrocompostos, β-ceto-ésteres, uma cetona α,β-insaturada e benzonitrila. No geral, o resultados obtidos com as biorreduções podem ser considerados satisfatórios, assim como os valores de excesso enantiomérico. Na segunda parte, utilizou-se as lipases comerciais: CAL-B, PSL-C(I) e PSL-C Amano, em reações de acilação do fármaco cloranfenicol, num estudo exaustivo em busca de condições ótimas de reação explorando principalmente a atividade regiosseletiva dessas enzimas. Foram obtidos oito derivados desse fármaco, a depender do agente acilante utilizado, sendo sete destes, monoacilados e um, di-acilado. Como doador acila usou-se diversos ésteres vinílicos, saturados ou não e com diversos tamanhos de cadeia. Parâmetros reacionais como: variação do solvente, da temperatura, concentração do meio e agente acilante foram otimizados para obtenção desses derivados. Praticamente todos os produtos foram obtidos em elevados percentuais de conversão, exceto para aqueles que possuem insaturação. Realizou-se ainda um procedimento em escala de bancada utilizando a enzima CAL-B, sendo obtidos resultados bem significativos em todos os casos. Ao final do estudo adotou-se um procedimento de reciclagem desta mesma enzima, onde ficou comprovada sua eficiência no reuso.

Orientador: Marcelo Alexandre Prado Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O crescimento do setor aquícola no Brasil se encontra em evidência. Em 2010 o volume produtivo foi maior que 479.390 toneladas, apresentando incrementos de 15,3%, em relação à produção de 2009, e 31,2%, em relação ao triênio 2008-2010. Neste mesmo ano de 2010, a aquicultura continental brasileira registrou volumes produtivos na ordem de 394.340 toneladas, das quais 63,4% foram representadas pela soma de tilápia e carpa. Na piscicultura nacional e mundial, principalmente em regiões tropicais, a tilápia representa uma das espécies mais indicadas para o cultivo intensivo. Dados da Balança Comercial de Pescados apontam que em 2005 o volume de exportação de tilápia brasileira já se aproximava de 314,8 toneladas. Em 2010 o montante de pescado brasileiro exportado se aproximou de US$ 263 milhões. Neste período os principais países importadores foram EUA, Europa e Ásia. A Comunidade Européia estabelece barreiras à exportação do pescado brasileiro, na busca pelo atendimento a exigências quanto à comprovação de teores de contaminantes, tais quais antibióticos, em produtos importados. Quanto ao cloranfenicol, a preocupação se relaciona à proibição de seu uso em animais destinados ao consumo humano, baseada em evidências toxicológicas como a ocorrência de anemia aplástica. Outro fator que contribui para a imposição de barreiras à exportação nacional é a falta de dados analíticos relacionados a pescados brasileiros. Para determinação analítica de Cloranfenicol, o método de cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massas (CL-EM) é exigido em função de sua sensibilidade e seletividade. Métodos rápidos e eficientes se fazem necessários. Perante tais necessidades, este trabalho desenvolveu e validou uma metodologia analítica para determinação quantitativa de resíduos de cloranfenicol em pescado. O procedimento de extração apresentou inúmeras vantagens: é rápido, direto, apresenta baixo custo, e exclui etapas adicionais de limpeza (como extração em fase sólida). Ainda, utiliza pequenas quantidades de amostra e de solvente. Na etapa de separação e detecção foi empregada a técnica cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massas em "tandem¿ com ionização por "electrospray¿ (CLAE-ESI/EM/EM). O método se adéqua à Comissão de Decisão 2002/657/EC quanto ao número de pontos de identificação requeridos pela para substâncias com tolerância zero. O tempo de corrida cromatográfica foi igual a 9 minutos. O método é linear na faixa entre 0,03µg/kg e 0,33µg/kg, além de preciso, e exato. Recuperações variaram entre 91,33 e 108,00%. A transição de quantificação 321.9>152.1 apresentou LQ igual a 0,03µg/kg, sendo o LMDR requerido pela Commission Decision 2003/181/EC = 0,30µg/kg Abstract: The growth of the aquaculture industry in Brazil is in evidence. In 2010, domestic production was greater than 479,390 tons, showing an increase of 15.3% compared to 2009 production, and of 31.2% compared to the period 2008-2010. In the same year, the Brazilian continental aquaculture recorded production volumes of around 394,340 tonnes, of which 63.4% were represented by the sum of tilapia and carp. Tilapia is one of the most suitable species for intensive fish farming. In 2005 the export volume of Brazilian Tilapia had already approached 314.8 tons. . In 2010 Brazil exported U.S. $ 263 million in fish. The main importers were U.S.A., Europe and Asia. The European Community establishes barriers to Brazilian exports of fish. There is a need of meeting requirements of laboratory tests in order to show levels of antibiotics in certain products. The concern in relation to chloramphenicol relates to the prohibition of its use in animals intended for human consumption, due to toxicological factors such aplastic anemia. Another factor that contributes to the imposition of trade barriers is the lack of available data concerning its presence in Brazilian fishes. For the determination of chloramphenicol in fishes, the method LC-MS (liquid chromatography with detection by mass spectrometry) is required due to its sensitivity and selectivity. Methods for the analysis of chloramphenicol should be related to speed and efficiency. Given these needs, this study developed and validated an analytical method for quantitative determination of chloramphenicol residues in fish. The extraction procedure has shown several advantages: is fast, direct, is inexpensive and eliminate additional cleanup steps (i.e. solid phase extraction). What is more, requires low amounts of sample and of solvents. For the separation and detection steps, HPLCESI/ MS/MS has been employed. The method is adequate for the number of identification points required by the Commission Decision 2002/657/EC for substances with zero tolerance,. In chromatography, the run time was equal to 9 minutes. The method is linear in the range between 0.03µg/kg and 0.33µg/kg. It is also precise, and accurate. Recoveries ranged between 91.33 and 108.00%. The quantification transition 321.9>152.1 showed a LOD and LOQ of 0.03µg/kg. The MLPR required by Commission Decision 2003/181/EC is of 0.30mg / kg Mestrado Ciência de Alimentos Mestre em Ciência de Alimentos

MONTENEGRO, T. G. C. Síntese quimioenzimática de derivados do cloranfenicol e tianfenicol, e estudo químico bioguiado de fungos associados à ascidia Eudistoma vannamei. 2011. 215 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. Este trabalho descreve: 1) síntese quimioenzimática de ésteres do cloranfenicol (1) e tianfenicol (2), utilizando lipases como fonte biocatalítica; 2) avaliação do potencial atitumoral de fungos marinhos isolados da ascídia Eudistoma vannamei. Na primeira parte, realizou-se a síntese enzimática de dois derivados monoacilados do cloranfenicol (1), através de reações de hidrólise de derivados diacilados, e oito derivados monoacilados do tianfenicol (2), pela acilação e hidrólise enzimática do tianfenicol e derivados diacilados, respectivamente. Os seguintes parâmetros foram variados: enzima, solvente, temperatura, pH e proporção entre solvente e agente hidrolítico e, na hidrólise enzimática dos derivados de cloranfenicol diacilados, os melhores resultados foram com a mistura de CH3CN:tampão fosfato (pH 7) na proporção de 20:80, CAL-B como biocatalisador, temperatura de 20 ºC, agitação de 250 rpm e tempo reacional de 24 h. A reação de acilação enzimática do tianfenicol (2), utilizando CAL-B como biocatalisador e ésteres vinílicos como doadores de grupos acila, se mostrou bastante eficiente, com altos índices de conversão e seletividade. Os processos forneceram unicamente os produtos de acilação da hidroxila menos impedida (3’-OH). A eficiência da enzima CAL-B reciclada na reação de acilação do tianfenicol (2) foi investigada, sendo possível concluir que esta se mantém ativa durante os cinco processos reacionais testados. A hidrólise enzimática dos derivados diacilados do tianfenicol forneceu, majoritariamente, os produtos de hidrólise na posição 3. Na segunda parte do trabalho, foram isoladas 11 cepas fúngicas (EV1 a EV11) da ascídia E. vannamei, as quais foram cultivadas em meio líquido BD (batata-dextrose) com objetivo de realizar um estudo bioguiado através da avaliação da atividade citotóxica de seus extratos e frações. Foram ensaiados os extratos acetoetílico do meio líquido e metanólico do micélio, previamente separados. Os extratos mais ativos foram os oriundos de EV10 e EV11, os quais foram identificados como Aspergillus sp. por análise molecular. O fungo EV10 foi cultivado em grande escala para fracionamento bioguiado e isolamento dos metabólitos secundários bioativos. Foi possível isolar quatro micotoxinas: meleína, cis-4-hidroximeleína, trans-4-hidroximeleína e ácido penicílico, dentre as quais, somente o ácido penicílico foi identificado como responsável pela atividade do extrato.

Aiming to evaluate the behavioural, survival and developmental responses of healthy larvae of Poecilia reticulata subjected to the prophyllatic against bacteria, fungi and parasites, a randomized experiment was carried out at the Aquaculture Laboratory of the State University of Maringá, state of Paraná, using six treatments (control, methylene blue, chloramphenicol, formalin, KMnO4 and NaCl) and four repetitions. Length prophylactic treatment varied from 30 minutes to 48 hours. After bath treatment, animals’ growth was evaluated during the following 20 days. Behavioural analysis during bath treatment showed that when the animals were exposed to formalin, they lost their sense of direction and collided against the wall. In the treatment with chloramphenicol, development of the larvae was better (P < 0.05) when treated with formalin. In relation to survival, there were no differences between the treatments. Thus, any methodology may be applied in this study when related to survival. Prophylaxis with chloramphenicol is the preferred treatment to formalin when evaluating growth Com o objetivo de avaliar o comportamento, a sobrevivência e desenvolvimento de larvas saudáveis de Poecilia reticulata submetidas à profilaxia contra bactérias, fungos e parasitas, foi conduzido no Laboratório de Aqüicultura da Universidade Estadual de Maringá, Estado do Paraná, um experimento delineado ao acaso com 6 tratamentos (controle, azul de metileno, cloranfenicol, formalina, KMnO4 e NaCl) e 4 repetições. Os banhos profiláticos variaram conforme o tratamento, de 30 minutos a 48 horas. Posteriormente, avaliou-se, por 20 dias, o desenvolvimento dos animais. A análise comportamental realizada durante o banho mostrou que, quando expostos à formalina, os animais perdiam o senso de direção e chocavam-se contra a parede. O desenvolvimento das larvas no tratamento com cloranfenicol apresentou-se melhor (P < 0,05) em relação ao tratamento com formalina. Quanto à sobrevivência, não houve diferença entre os tratamentos. Sendo assim, quaisquer metodologias empregadas neste estudo podem ser aplicadas quando relacionadas à sobrevivência. Ao se avaliar o crescimento, deve-se dar preferência à profilaxia com cloranfenicol em vez de formalina

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:05:55Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Barja Fidalgo Silva de Andrade.pdf: 4036167 bytes, checksum: 1033a225281357e5929bc8e1a4575756 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:05:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Barja Fidalgo Silva de Andrade.pdf: 4036167 bytes, checksum: 1033a225281357e5929bc8e1a4575756 (MD5) Previous issue date: 2008-02-27 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro The aim of these "in vitro" and "in vivo" studies was to evaluate an endodontic treatment for deciduous teeth, minimally invasive, using the CTZ paste (chloramphenicol, tetracycline and zinc oxide/eugenol). In the "in vitro" study the antimicrobial activity of the CTZ paste on standard microorganisms (E.coli , S.aureus, S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa) was evaluated. The agar diffusion and broth dilution methods were used and the CTZ paste was compared to the ZOE (zinc oxide/eugenol), L&C® (calcium hydroxide), 3-Mix (minociclyne, ciprofloxacin, metronidazole e propylene glycol) and Guedes-Pinto (iodoform, paramonoclorophenol e Rifocort®) pastes. The antimicrobial activity of the CTZ paste, through the dentinal tubules, were tested on S.mutans, E.faecalis and P.aeruginosa. In the study "in vivo" the clinical performance of CTZ paste was acessed. Six children, aged 7 and 8 years, presenting a decayed lower primary molar decayed with pulp pathology were randomly allocated into the test group (CTZ) and in the control group (ZOE). Clinical and radiographic exams were performed after 2 weeks, 3 and 6 months of follow-up. The results of the "in vitro" experiments demonstrated that CTZ paste had an antimicrobial activity similar to the antimicrobial activity of the 3 Mix paste, with the exception of P.aeruginosa, where CTZ paste presented a worse antimicrobial activity than the 3 Mix paste. The antimicrobial activity of CTZ paste was better than the antimicrobial activity of the other tested materials. Moreover, the CTZ showed an antimicrobial activity through the dentine on S.mutans and E.faecalis. CTZ and ZOE presented a similar clinical performance especially immediately after the treatment. These results suggest that the minimally invasive technique employing the CTZ paste can be an alternative to traditional endodontic treatment and may prevent the early loss of deciduous teeth with pulp pathology. Nevertheless, a clinical trial with an adequate sample size and a longer follow-up period should be performed in order to produce conclusive evidence about the clinical effectiveness of the CTZ paste. O objetivo destes estudos "in vitro" e "in vivo" foi avaliar uma técnica de tratamento endodôntico de dentes decíduos, minimamente invasiva, utilizando a pasta CTZ (cloranfenicol, tetraciclina e óxido de zinco/eugenol). No estudo "in vitro" foi analisada a ação antimicrobiana da pasta CTZ, sobre microrganismos-padrão (E.coli, S.aureus, S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa), pelos métodos de difusão em ágar e diluição em caldo, comparativamente com o OZE (óxido de zinco e eugenol) e as pastas L&C® (hidróxido de cálcio), 3 Mix (metronidazol, ciprofloxacin e minociclina e propileno glicol) e Guedes-Pinto (iodofórmio, paramonoclorofenol e Rifocort®). A difusibilidade da atividade antimicrobiana da CTZ através dos túbulos dentinários de raízes dentes decíduos recém extraídos, sobre S.mutans, E.faecalis e P.aeruginosa também foi analisada. No estudo "in vivo" foi avaliado o desempenho clínico da pasta CTZ no tratamento endodôntico de dentes decíduos em comparação com o OZE. Seis crianças, com idades entre 7 e 8 anos, apresentando um dente decíduo posterior inferior com comprometimento pulpar extenso, foram alocadas aleatoriamente em dois grupos, sendo que em um foi utilizada a técnica da pasta CTZ (grupo teste) e no outro o tratamento endodôntico radical com OZE (grupo controle). O acompanhamento clínico e radiográfico foi realizado em intervalos de 2 semanas, 3 e 6 meses. Os resultados dos experimentos "in vitro" demonstraram que a pasta CTZ possui atividade antimicrobiana da comparável a da pasta 3 Mix e superior aos demais materiais sobre todos os tipos de microrganismos, exceto para a P.aeruginosa onde a CTZ apresentou uma atividade menor do que a da pasta 3 Mix apesar de ainda superior as demais. Além disso, a CTZ demonstrou atividade antimicrobiana por difusibilidade sobre o S.mutans e E.faecalis. Os resultados do experimento clínico demonstraram um desempenho similar entre a pasta CTZ e o OZE, especialmente logo após o tratamento. Esses resultados sugerem que a técnica minimamente invasiva empregando a pasta CTZ pode ser um alternativa ao tratamento endodôntico radical evitando a perda precoce de dentes decíduos, com comprometimento pulpar. Porém, um ensaio clinico com tamanho amostral adequado e acompanhamento de longa duração deve ser realizado para que se possa obter evidência conclusiva sobre a efetividade do tratamento clínico com a pasta CTZ.

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Este trabalho teve por objetivo avaliar a influência do cultivo da soja sobre a dinâmica da população bacteriana, em dois solos de Cerrado do Estado de São Paulo, originalmente cobertos com Paspalum notatum (em Barretos) e Brachiaria decumbens (em São Carlos). Nesses solos, a densidade da população de bactérias em geral variou de 398,1 x 10³ a 467,7 x 10³ e de 123 x 10³ a 218,8 x 10³ ufc (unidades formadoras de colônias)/g de solo seco, respectivamente. O cultivo da soja, em ambos os solos, resultou em incrementos variados nos números de ufc/g de solo seco da população de bactérias em geral, das resistentes aos antibióticos estreptomicina e cloranfenicol, e de actinomicetos. A população de actinomicetos ocorreu no solo principalmente como esporos, e as variações das relações esporos/hifas entre os solos não-rizosférico e rizosférico não foram significativas. Os resultados evidenciam que o cultivo da soja influenciou de forma diferenciada a população desses solos. The effect of soybean cultivation on the population dynamics of the bacterial community was evaluated in two "Cerrado" soils of São Paulo State, Brazil. The experimental areas, in the vicinities of the cities of São Carlos and Barretos, were previously cultivated, respectively, with Paspalum notatum and Brachiaria decumbens. The bacterial population densities in these soils varied from 398.1 x 10³ to 467.7 x 10³ cfu (colony forming units) and from 123 x 10³ to 218.8 x 10³ cfu/g of dried soil, respectively, in São Carlos and Barretos soils. Soybean cultivation in both soils resulted in increments in the total bacterial population density, in the actinomycetes population, and in the bacterial population resistant to the antibiotics streptomycin and chloramphenicol. Actinomycetes were present in these soils mainly as spores. Soybean cultivation did not alter the actinomycetes spores/hyphae ratio when comparing rhizospheric and non-rhizospheric soils. The results show that soybean cultivation affected the bacterial population of these soils.

O sistema microssomal hepático citocromo P- 450, compreendendo famílias e subfamílias de isoenzimas, atua no metabolismo de um grande número de substratos endógenos e exógenos e desempenha um papel central na biotransformação dos fármacos e na ativação metabólica de compostos carcinogênicos. Muitos fármacos têm a capacidade de aumentar a atividade enzimática do sistema citocromo P - 450. Outros fármacos diminuem a atividade enzimática do sistema. O primeiro fenômeno é denominado de indução enzimática e o segundo é definido como inibição enzimática. A interação medicamentosa envolvendo fármacos anestésicos tem, na alteração do tempo de sono, a principal e mais visível alteração in vivo. No presente trabalho foi estudada a influência da administração prévia de fenilbutazona e de cloranfenicol sobre a anestesia promovida pela associação de xilazina e cetamina em ratos, cães e porcos. A fenilbutazona é um antiinflamatório com propriedades indutoras semelhantes às do fenobarbital, embora em menor intensidade. O cloranfenicol é um antibiótico com reconhecida capacidade inibidora, prolongando a ação de drogas como barbitúricos, fenitoína, varfarina e digoxina. Tanto a fenilbutazona quanto o cloranfenicol são de uso freqüente no exercício da clínica em medicina veterinária. Xilazina é um agonista adrenérgico alfa-2 com propriedades analgésicas, sedativas e miorrelaxantes. A cetamina é um composto de ação cataléptica, analgésica e anestésica que produz uma anestesia denominada de dissociativa. A xilazina e a cetamina são muito utilizadas em associação para promover anestesia em diferentes espécies animais. Nesse estudo foram utilizados 54 ratos Wistar, 18 cães sem raça definida e 18 porcos cruzamento Landrace - Duroc, todos de sexo masculino. Os ratos foram separados em três grupos denominados controle (CTL), fenilbutazona (FBZ) e cloranfenicol (CLF), com 18 animais em cada grupo. Os cães e porcos foram divididos em três grupos, em cada espécie, com seis animais em cada grupo, tendo sido também denominados CTL, FBZ e CLF. No primeiro dia do experimento, os animais dos grupos CTL, FBZ e CLF foram anestesiados, recebendo xilazina, na dose de 20 mg . kg-1 para os ratos e 1 mg . kg-1 para os cães e porcos, e cetamina na dose de 50 mg . kg-1 para os ratos e 1 O mg . kg- 1 para os cães e porcos. Os fármacos foram administrados simultaneamente, na mesma seringa, por via intraperitonial (i.p.) nos ratos e por via intravenosa (i.v.) nos cães e porcos. Foram avaliados e anotados os tempos até a perda do reflexo de endireitamento e até a sua recuperação nos ratos, cães e porcos. Nesta última espécie foi registrado o tempo de retomo à ambulação. A partir do sexto dia, os animais receberam doses diárias de solução fisiológica ou fenilbutazona ou cloranfenicol, durante cinco dias. A fenilbutazona foi administrada na dose de 125 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 25 mg . kg-1 para os cães e porcos . O cloranfenicol foi administrado na dose de 100 mg . kg-1 para os ratos e na dose de 50 mg . kg-1 para os cães e porcos. A fenilbutazona e o cloranfenicol foram administrados por via i.p. nos ratos e porcos e por via i.v. nos cães. A solução fisiológica foi administrada nos animais do grupo CTL, por via i. v .• nos cães e por via i.p. nos ratos e porcos. No décimo dia foram repetidos os procedimentos e as avaliações do primeiro dia e sacrificados todos os animais. Os fígados dos ratos foram pesados e reunidos em pool por grupo. Os fígados dos cães e porcos foram processados individualmente. Foram preparados microssomas hepáticos (GUENGERICH, 1994) e determinadas a concentração de proteínas hepáticas (LOWRY et a/., 1951), a concentração de citocromo P - 450 (OMURA & SATO, 1964a) e a velocidade de redução de NADPH- citocromo C (PHILLPS & LANGDON, 1962). Os dados foram analisados estatisticamente por ANOVA , teste de Student - Newman- Keuls e teste de Pearson. O nível de significância foi de a= 0,05. Os resultados revelaram que a fenilbutazona diminuiu o tempo de anestesia nos ratos, sem alteração nas outras duas espécies, e o cloranfenicol aumentou o tempo de anestesia nos ratos e cães, mas não nos porcos. A média dos pesos dos fígados dos ratos do grupo FBZ foi mais elevada do que a dos demais grupos. A velocidade de redução de NADPH - citocromo C foi maior no grupo FBZ nas três espécies, indicando uma situação de indução enzimática. Paralelamente, houve uma menor velocidade de redução no grupo CLF nos porcos. Foi verificada correlação inversa entre o tempo de anestesia e a atividade enzimática em ratos e porcos. The cytochrome P - 450 system, including families and sub-families of isoenzymes, catalyzes the metabolism of a great number of endogenous and exogenous substracts and plays a central role on drug detoxification and carcinogen metabolic activation. Many drugs have the ability of increasing cytochrome P - 450 system enzymatic activity. Others decrease enzymatic activity. The first phenomenon is called enzymatic induction and the second one is defined as enzymatic inhibition. Sleeping time is the most visible in vivo alteration in drug - interaction involving anesthetic agents. lnfluence of previous administration of phenylbutazone and chloramphenicol on xylazine - ketamine anesthesia in rats, dogs and pigs was studied. Beth phenylbutazone and chloramphenicol have been widely used in veterinary practice. Phenylbutazone is an antiinflammatory compound and a phenobarbital-like enzyme inductor but less potent than the barbiturate. Chloramphenicol is an antibiotic with inhibitory properties on the cytochrome P - 450 system increasing the effects of drugs like barbiturates, phenytoin, warfarin and digoxin. Xylazine hydrochloride is an a.2 - adrenergic agonist with analgesic, sedative and muscle relaxant properties. Ketamine hydrochloride is a compound with cataleptic, analgesic and anesthetic properties producing the so called dissociative anesthesia. Xylazine and ketamine have been used in combination to promete anesthesia in different animal species. Fifty four rats were divided into three groups designed as control (CTL), phenylbutazone (PBZ), and chloramphenicol (CHP), with 18 rats in each group. Dogs (n=18) and pigs (n=18) were divided into three groups on each species, called CTL group, PBZ group, and CHP group. Each group was formed by six animais. On the first day of the experiment the animais of CTL, PBZ and CHP groups were anesthetized with xylazine (20 mg. kg-1 i.p., rats; 1 mg . kg-1 i. v., dogs and pigs) and ketamine (50 mg . kg-1 i.p., rats; 10 mg . kg-1 i.v., dogs and pigs). Latency and duration of righting reflex loss were recorded in rats, dogs and pigs. Walking ability was recorded in pigs. From the day six to day 10 the animais of CTL, PBZ and CHP groups were injected with physiologic solution, phenylbutazone (125 mg . kg-1 i.p., rats; 25 mg . kg-1 i. v., dogs; 25 mg . kg-1 i.p., pigs) and chloramphenicol (100 mg . kg-1 i.p., rats; 50 mg . kg-1 i. v. , dogs; 50 mg . kg-1 i.p., pigs). Physiologic solution was administered i. v in dogs and i.p. in rats and pigs of CTL group. The procedures of the first day were repeated on the tenth day and the animais were killed. Rat livers were weighed and pooled by group and experiment. Dog and pig livers were processed individually. Hepatic microssomes were prepared according GUENGERICH (1994). Liver protein concentration was determined by the method described by LOWRY et a/. in 1951. Cytochrome P- 450 concentration was measured according OMURA & SATO ( 1964a). NADPH - cytochrome C reduction reactions were processed as described by PHILLIPS & LANGDON (1962). Data were analyzed by ANOVA, Student- Newman- Keuls and Pearson tests. The levei of significance was established in a.= 0.05. Sleeping time was decreased by phenylbutazone in rats and increased by chloramphenicol in rats and dogs. Livers were heavier in PBZ group than in the other groups. Reduction of NADPH - cytochrome C was increased in PBZ group in ali species, indicating enzymatic induction. The same parameter showed a decrease in CHP group in pigs. There were inverse correlation between sleeping time and enzymatic activity in rats and pigs.