Search

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O melanoma é reconhecidamente uma neoplasia extremamente agressiva, apesar de uma morbidade não tão significativa entre os cânceres de pele, possui alta taxa de mortalidade, tanto em medicina humana quanto veterinária. Aliado a isso, o melanoma canino, por apresentar características histopatológicas e moleculares semelhantes às humanas, é considerado um bom modelo para estudos comparativos de desenvolvimento e progressão neoplásica. Sabe-se que um importante parâmetro de agressividade tumoral é o índice proliferativo e apoptótico, onde tumores mais agressivos devem apresentar maiores taxas de proliferação celular e menores taxas de apoptose. Nesse contexto, é descrito que a resistência a apoptose é uma característica importante relacionada ao desenvolvimento tumoral. O estudo da apoptose, evento ainda pouco compreendido em melanomas, pode auxiliar na compreensão sobre agressividade e progressão desses tumores. Assim, esse trabalho tem como objetivo caracterizar e correlacionar a expressão imunohistoquímica de Ki67, Bcl-2, Bax, Caspase-3, Caspase-3 clivada e Caspase-9 clivada, bem como com as características histopatológicas observadas em melanomas caninos. Foram selecionados 40 casos de melanomas caninos cutâneos e orais, para avaliação histopatológica (presença de êmbolo, desmoplasia, atividade juncional, índice mitótico, ulceração) e realização da técnica de imunohistoquímica. Entre os marcadores, Ki67 se correlacionou apenas com a expressão de Bax,de forma positiva, Bcl-2 foi relacionado positivamente com Caspase-3 clivada e Caspase-9 clivada e a elevação da expressão de Caspase-3 clivada está relacionada ao aumento da expressão de Caspase-9 clivada. Observou-se diferença significativa quando associados os grupos de baixa e alta expressão de Ki67 e os grupos de baixa e alta expressão de Caspase-3 clivada (35% dos casos com baixas expressões de ambos marcadores). Entre os grupos oral e cutâneo, o segundo apresentou uma maior expressão de Caspase-9 clivada. Não foi encontrada nenhuma associação entre o índice mitótico, as características histológicas e os grupos de alta e baixa expressão dos marcadores imuno-histoquímicos estudados. Assim, nosso trabalho evidenciou que uma maior proliferação celular e uma maior expressão de proteínas anti-apoptóticas estão relacionadas a um aumento da expressão de proteínas pró apoptóticas. Foi observado também que melanomas orais, tido como mais agressivos, apresentam menor expressão de proteína indutora da cascata de apoptose quando comparado aos melanomas cutâneos. Melanoma is an extremely aggressive neoplasm, although it’s morbidity is not so significant among skin cancers. It has a high mortality rate in both human and veterinary medicine. In addition, canine melanoma, due to its histopathological and molecular characteristics similar to the human ones, is considered a good model for comparative studies of development and neoplastic progression. It is known that na important parameter of tumor aggressiveness is the proliferative and apoptotic index, where more aggressive tumors must present higher rates of cell proliferation and lower rates of apoptosis. In this context, resistance to apoptosis is described as na important feature related to tumor development. The study of apoptosis, na event still poorly understood in melanomas, may help in understanding the aggressiveness and progression of these tumors. Thus, this work aims to characterize and correlate the immunohistochemical expression of Ki67, Bcl-2, Bax, Caspase-3, Caspase-3 cleaved and Caspase-9 cleaved, as well as the histopathological features observed in canine melanomas. We selected 40 cases of cutaneous and oral canine melanomas for histopathological evaluation (presence of plunger, desmoplasia, junctional activity, mitotic index, ulceration) and immunohistochemical technique. Among the biomarkers, Ki67 correlated only with Bax expression, positively, Bcl-2 was positively related to cleaved Caspase-3 and Caspase-9 cleaved, and the elevation of cleaved Caspase-3 expression is related to increased expressionof Caspase-9 cleaved. Was observed a significant difference when the low and high Ki67 expression groups and the low and high expression groups of Caspase-3 cleaved (35% of cases with low expression of both biomarkers) were associated. Among the oral and cutaneous groups, the second presented a greater expression of Caspase-9 cleaved. No association was found between the mitotic index, the histological characteristics and the high and low expression groups of the immunohistochemical biomarkers studied. Thus, our work has shown that increased cell proliferation and increased expression of anti-apoptotic proteins are related to an increase in the expression of pro-apoptotic proteins. It was also observed that oral melanomas, considered to be more aggressive, have lower expression of apoptosis cascade inducing protein when compared to cutaneous melanomas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T18:08:59Z : No. of bitstreams: 1 ishii_pl_me_rcla.pdf: 341469 bytes, checksum: 30957c71a427ca667e0c86edb9d40228 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A Nutrigenômica é definida como o efeito da dieta na expressão gênica, e a extensão pela qual as diferenças genéticas entre os indivíduos influenciam a resposta a um padrão específico de dieta, à ingestão de alimentos funcionais e à suplementação de micronutrientes, em termos de um resultado para a saúde humana. A α-tomatina é um glicoalcalóide encontrado no tomate (Lycopersicon esculentum) que possui funções biológicas importantes como a redução dos níveis de colesterol LDL, inibição do crescimento de células cancerosas, estimulação do sistema imune e efeito antimetastático. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade da α-tomatina, os seus efeitos na proliferação celular, na indução de apoptose e expressão de RNAm dos genes APC, Ciclina A2, Catenina, CASP9, BAK, BAX e BCL-XL em células HT29. As células foram cultivadas em meio de cultura DMEM, suplementado com 10% de soro bovino fetal, e tratadas nas concentrações de 0,1, 1 e 10 μg/mL para o ensaio do MTT e proliferação celular. Na análise de apoptose morfológica utilizou-se as concentrações de 0,1, 1 e 2 μg/mL. Já para a avaliação da expressão gênica utilizou-se a concentração de 1 μg/mL. Após 12 horas de tratamento, o RNA das células foi extraído e a expressão dos genes foi avaliada através do método de PCR em tempo real. O gene GPDH foi utilizado como normalizador. A análise estatística foi realizada por ANOVA/Tukey para o ensaio do MTT. Os resultados do ensaio de cinética de proliferação celular, viabilidade celular e avaliação da indução de apoptose foram analisados estatisticamente através de ANOVA/Dunnet, e para a análise da expressão gênica utilizou-se o método de Pfaffl et al. (2002), através do cálculo estimado pelo método ΔΔCt. Os estudos experimentais indicaram que a α-tomatina foi citotóxica apenas na concentração de 10 μg/mL... Nutrigenomics is defined as the effect of diet on gene expression, and the extent to which genetic differences between individuals influence the response to a specific pattern of diet, intake of functional foods and micronutrient supplementation, in terms of a result for human health. The α- tomatine is highlighted as a glycoalkaloid found in tomato (Lycopersicon esculentum) that has important biological functions such as reducing levels of LDL cholesterol, inhibit cancer cell growth, stimulation of the immune system and antimetastátic effect. In view of these considerations, the objective of this study was to evaluate the cytotoxicity of α-tomatine, their effects on cell proliferation, induction of apoptosis and morphological expression of mRNA of APC gene, Cyclin A2, β-Catenin, CASP9, BAK, BAX and BCL-XL in HT29 cells. The cells were grown in DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum, and treated at concentrations of 0.1, 1 and 10μg/mL for the MTT assay and cell proliferation. In the morphological analysis of apoptosis, we used concentrations of 0.1, 1 and 2μg/mL. As for the evaluation of gene expression we used a concentration of 1 mg/mL. After 12 hours of treatment, the RNA from cells was extracted and gene expression was evaluated by the method of real-time PCR. The gene GPDH was used as normalizer. Statistical analysis was performed by ANOVA / Tukey test for MTT. The test results of kinetics of cell proliferation, cell viability and assessment of apoptosis were analyzed with ANOVA / Dunnet, and for analysis of gene expression we used the method of Pfaffl et al. (2002), by calculating estimated by ΔΔCt. Experimental studies suggested that α-tomatine was cytotoxic only at concentration of 10μg/mL. In the evaluation of cell proliferation were no significant differences in the treatments with α-tomatine, except that for the concentration... (Complete abstract click electronic access below)