CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O câncer da mama continua sendo a segunda maior causa de morte em mulheres e a previsão é que a incidência desta doença aumente a cada ano. Apesar do grande número de pesquisas, estudos in vitro de linhagens celulares de câncer de mama derivadas de tumores não metastáticos têm sido raramente relatados ao passo que estes podem oferecer dados relevantes em relação a estágios de desenvolvimento do tumor e contribuir para um melhor entendimento da fisiopatologia da doença. O estudo dos componentes produzidos e secretados (secretoma) pelas células tumorais demonstraram a contribuição desses para o processo de tumorigênese em vários tipos de câncer, tais como câncer de mama e próstata. Entretanto, a atividade do secretoma das células MACL-1 sobre células não tumorais ainda não foi investigada e os componentes ainda não estão bem descritos. Para isso, fibroblastos CCD19-Lu foram expostos ao secretoma das células de adenocarcinoma de mama (MACL-1) verificando a morfologia, proliferação, expressão de proteínas e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Os ensaios de co-cultura em Transwell domonstraram que, quando expostas ao secretoma das células MACL-1, as células CCD19-Lu tiveram sua morfologia e proliferação alteradas, bem como aumento na expressão de Vimentina, da proteína de ativação de fibroblastos (FAP), do fator de transcrição nuclear NFκB, de proteases e de IL-6. Essas alterações sugeriram uma mudança no fenótipo dessas células e as análises proteômicas indentificaram uma atividade específica de proteínas decorrente do aumento na produção de ROS pelas células CCD19-Lu expostas a esse secretoma e permitiram estabelecer uma correlação direta com as alterações fenotípicas observadas nesses fibroblastos. Desta forma, sugerimos que as células MACL-1 oriundas de um tumor de mama primário secretam proteínas com atividades capazes de alterar o fenótipo de fibroblastos CCD19-Lu levando à modificações principalmente na expressão de proteínas que apontam para uma possível transformação dessas células em fibroblastos associados ao câncer (CAFs). Breast cancer remains the second cause of death in women and the incidence of this disease is growing every year. In spite the large studies in vitro of breast cancer cell lines derived from non-metastatic tumors have been rarely reported whereas they may offer relevant data regarding stages of tumor development and contribute to a better understanding of pathophysiology. The components studies produced and secreted (secretoma) by the tumor cells demonstrated their contribution to process of tumorigenesis in several types of cancer, such breast and prostate. However, MACL-1 cells secretome activity on nontumor cells has not been investigated and components are still poorly described. Then, CCD19-Lu fibroblasts were exposed of MACL-1 cells secretome and we evaluated changes in morphology, proliferation rate, protein expression and reactive oxygen species (ROS) production. Co-cultures in Transwells assays showed that, when exposed to MACL-1 cells secretome, CCD19-Lu cells had their morphology and proliferation rate altered and an increased in Vimentin, fibroblast activation protein (FAP), nuclear transcription factor NFκB, proteases and IL-6 expression. These results suggested a phenotype changes of cells and proteomic analyzes identified proteins specific activity to increase of ROS production by CCD19-Lu cells exposed MACL-1 cells secretome establish a direct correlation with the phenotypic alterations observed in fibroblasts. Thus, we suggest that MACL-1 cells from a primary breast tumor secrete proteins with biochemical activities capable of altering CCD19-Lu fibroblasts phenotype leading to modifications mainly in the proteins expression point to a possible transformation of these cells into cancer associated fibroblasts (CAFs).