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RESUMO: O pescado é um alimento altamente perecível, possui pH próximo a neutralidade, elevada atividade de água e alto teor de nutrientes facilmente utilizáveis por micro-organismos. Vibrio parahaemolyticus pode ser encontrado em ambientes com salinidade entre 3% e 8% e tem pH ideal para multiplicação entre 7,8 e 8,6. É um patógeno que pode causar gastrenterite aguda pelo consumo de frutos do mar contaminados, crus ou mal cozidos. Mesmo os processos de tratamento de água como cloração, adição de antibióticos e filtros apresentam dificuldade em reduzir a contaminação por Vibrio, sendo suposto que este gênero bacteriano pode formar biofilmes em diferentes superfícies. O objetivo do trabalho foi verificar a capacidade de V. parahaemolyticus isolados de pescados formarem biofilme após estresse subletal. No decorrer de um ano, foram realizadas 12 coletas mensais de amostras de peixes capturados no estuário da Lagoa dos Patos, as quais foram analisadas quanto à presença de V. parahaemolyticus. Concomitantemente, foram coletadas assepticamente amostras de água do estuário para análise de sanilidade e pH. Os isolados de Vibrio foram analisados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) para identificação da espécie pela presença dos genes toxR. Além dos isolados obtidos no presente trabalho, também foram estudadas 15 outras cepas de V. parahaemolyticus previamente isoladas em outros trabalhos. As cepas foram avaliadas quanto à capacidade de produção de biofilme em placas de microtitulação. A capacidade de produção de biofilme após as cepas serem submetidas a diferentes tipos de estresse subletal (42ºC, 20ºC, 4ºC e pH ácido) também foi testada. Dentre os 120 peixes analisados, foram isolados V. parahaemolyticus de quatro (3,33%) pescados, sendo Mugil platanus a única espécie de peixe na qual o micro-organismo foi encontrado. Das 19 cepas analisadas, 89,5% foram capazes de formar biofilme, o que parece indicar que essa capacidade tem um papel importante na sobrevivência do micro-organismo nos pescados. Dessas, 25% das cepas aumentaram a capacidade de formar biofilme. Com base nos resultados, conclui-se que peixes da espécie M. platanus do estuário da Lagoa dos Patos são hospedeiros de V. parahaemolyticus e que a quase totalidade das cepas são formadoras de biofilme. A exposição a condições subletais de estresse tem efeito distinto sobre as diferentes cepas, induzindo aumento na capacidade de formar biofilme em algumas. Este foi o primeiro estudo realizado com V. parahaemolyticus, para avaliar o efeito de fatores de estresse sobre a formação de biofilme. ABSTRACT: Fish is a highly perishable food, has a neutral pH, high water activity and high content nutrient, which makes it favorable to the microorganisms multiplication. Vibrio parahaemolyticus may be found in environments with a salinity of 3% and 8% and has optimal pH for multiplication between 7.8 and 8.6. This pathogen can cause acute gastroenteritis by consumption of contaminated raw or undercooked seafood. There is difficulty in reducing Vibrio contamination during fish processing, being supposed that this bacterial genus can form biofilm on different surfaces. The aim of this study was to verify the ability of V. parahaemlyticus isolated from fish from biofilm after sublethal stress. In the course of one year, 12 monthly samples of fish caught in the Lagoa dos Patos Estuary were analyzed for the presence of V. parahaemolyticus. Concurrently, water samples from estuary were collected aseptically for salinity analysis and pH. Vibrio isolates were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) to identification of the species by presence of the toxR gene. In addition to the isolates obtained in this study were also studied 15 other strains of V. parahaemolyticus previously isolated in other works. The strains were evaluated for biofilm production capacity in microtiter plates. The biofilm production capacity after the strains had being subjected to different types of sublethal stress (42oC, 20°C, 4°C and acid pH) was also tested. Among the 120 analyzed fish, V. parahaemolyticus were isolated from four (3.33%) fishes, and Mugil platanus was the only species in which the microorganism was found. Among the 19 strains analyzed, 89.5% were able to form biofilm, which seems to indicate that this ability has an important role in the microorganism survival in the fish. Among these strains, 25% increased the ability to form biofilm after sublethal exposure. Based on the results, we concluded that fish of the species M. platanus of the Lagoa dos Patos Estuary are hosts of V. parahaemolyticus and that almost all of these strains are forming biofilm. Exposure to sublethal stress conditions has distinct effect on different strains, inducing an increase in the ability to form biofilm in some. This was the first study about the effects of stress on the V. parahaemolyticus biofilms formation.

RESUMO: As bactérias do gênero Vibrio habitam ambiente tipicamente marinho e estuarino, sendo comumente isoladas de pescados. As principais espécies de Vibrio reportadas como agentes de infecções em humanos são V. vulnificus , V. parahaemolyticus , V. cholerae e V. mimicus . V. vulnificus é considerado o mais perigoso, podendo causar septicemia e levar à morte. V. parahaemolyticus é um patógeno importante nas regiões costeiras de clima temperado e tropical em todo o mundo e tem sido responsável por casos de gastroenterites associadas ao consumo de peixes, moluscos e crustáceos marinhos. V. cholerae causa surtos, epidemias e pandemias relacionados com ambientes estuarinos. V. mimicus pode causar episódios esporádicos de gastroenterite aguda e infecções de ouvido. A patogenicidade das bactérias está ligada à habilidade do micro-organismo em iniciar uma doença (incluindo entrada, colonização e multiplicação no corpo humano). Para que isso ocorra, os micro-organismos fazem uso de diversos fatores. O objetivo desta revisão foi sintetizar o conhecimento disponível na literatura sobre os fatores de patogenicidade de V. vulnificus , V. parahaemolyticus , V. cholerae e V. mimicus . ABSTRACT: Bacteria of the genus Vibrio typically habitat marine and estuarine environment and are commonly isolated from fish. The main Vibrio species reported as agents of infections in humans are V. vulnificus , V. parahaemolyticus , V. cholerae and V. mimicus . V. vulnificus is considered the most dangerous, may cause sepsis and lead to death. V. parahaemolyticus is an important pathogen in coastal regions of temperate and tropical climates around the world and has been responsible for cases of gastroenteritis associated with consumption of fish, shellfish and marine crustaceans. V. cholerae causes outbreaks, epidemics and pandemics related to estuarine environments. V. mimicus can cause sporadic episodes of acute gastroenteritis and infections. The pathogenicity of the bacteria is linked to the ability of the micro-organism to initiate a disease (including entry, colonization and multiplication in the human body). For this to occur, the micro-organisms make use of several factors. The objective of this review is to summarize the knowledge available in the literature on the factors of pathogenicity of V. vulnificus , V. parahaemolyticus , V. cholerae and V. mimicus .

Vibrio parahaemolyticus pode causar vibriose em camarão cultivado e também gastrenterites no consumidor. Neste trabalho foram verificadas as condições higiênico-sanitárias em camarões (Litopenaeus vannamei) e na água de viveiros de carcinicultura no litoral piauiense quanto a V. parahaemolyticus. Foram coletadas 148 amostras de água e 72 amostras de camarão em três fases de cultivo: pós-larva, juvenil e engorda em quatro propriedades. Foram transferidos 25g de cada amostra para frasco contendo 225mL de água peptonada com 3% de sal para o preparo da diluição 10-1, a partir dessa foram preparadas as diluições 10-2 e 10-3. Para o teste presuntivo, alíquotas de 1,0mL dessas diluições foram semeadas em três tubos com caldo Horie Arabinose Violeta de Etila (37ºC/24 horas). Repicou-se para agar TCBS (37ºC/24 horas). As colônias típicas foram semeadas em: agar motilidade sal, agar nutritivo sal, caldo peptonado sal e ágar TSI sal (incubados a 37ºC/24 horas), testes bioquímicos: halofilismo (0; 3; 6; 8 e 10%), crescimento a 42ºC, teste de Kanagawa, prova de Hugh-Leifson, descarboxilação da lisisna e arginina e fermentação de manitol e sacarose. V. parahaemolyticus foi semelhante estatisticamente nas amostras de água e das fases pós-larva e engorda em todas as propriedades estuário e viveiros. Nas amostras de camarões também não houve diferença significativa estatística entre propriedades e fases de cultivo As águas do sistema produtivo e os camarões cultivados no litoral piauiense apresentam condições higiênico-sanitárias satisfatórias quanto à enumeração de Vibrioparahaemolyticus. Vibrio parahaemolyticus can cause vibriosis in shrimp, and also can cause gastroenteritis in consumers. Study the sanitary and hygienic conditions of shrimps (Litopenaeus vannamei) and water from ponds of shrimp farms of the coast of Piauí were evaluated for V. parahaemolyticus. 148 samples of water and 72 samples of shrimp were collected in three different farming stages (postlarvae, juvenile and growout) from four shrimp farms. 25 g of each sample was transferred to a flask containing 225mL of peptone water with 3% of salt for the preparation of the 10-1 dilution, from which the 10-2 and 10-3 dilutions were prepared. For the presumptive test aliquotes of 1,0mL of these dilutions were streaked in three Horie arabinose ethyl violet broth tubes (37ºC/24 hours). They were restreaked TCBS agar (37ºC/24 hours). The typical colonies were streaked motility salt agar, nutrient salt agar, salt peptone broth and TSI salt agar (37ºC/24 hours) and then biochemical tests were performed: halofilic (0; 3; 6; 8 and 10%), growth at 42ºC, Kanagawa test, Hugh-Leifson test, lysine and arginine decarboxylation and fermentation of mannitol and sucrose. The presence of V. parahaemolyticus was statistically similar in samples of water and of postlarvae and grow out stages in all shrimp farms both in estuary and pond. In samples of shrimp there was no statistical difference among shrimp farms and farming stages. The water from the productive system and the shrimp raised in the cost of Piauí has satisfactory hygienic and sanitary conditions to Vibrioparahaemolyticus count.

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Os peixes provenientes do estuário da Lagoa dos Patos foram coletados no desembarque e após o processamento, e analisados para verificar a sua contaminação. Para comparação dos isolados, foi feita análise pela rep-PCR. As espécies desembarcadas foram a corvina (Micropogonias furnieri), a tainha (Mugil platanus) e o linguado (Paralichthys orbignyanus). V. parahaemolyticus foi isolado de 4,61% amostras de peixes inteiros e 4,61% de peixes já eviscerados e prontos para o comércio. S. enterica foi isolada de 1,54% de eviscerados. Quatro cepas V. parahaemolyticus, apresentaram idêntico perfil de bandas, sendo uma de peixe inteiro e uma de peixe eviscerado do 2º desembarque e duas do 3º desembarque, ambas de peixes já limpos. Outras duas cepas foram oriundas de peixes inteiros de desembarques diferentes e apresentaram distintos perfis de bandas. No caso do 2º desembarque, a matéria-prima permaneceu contaminada com a mesma cepa bacteriana mesmo após a evisceração e a higienização do pescado para venda, indicando que estes procedimentos não foram suficientes para eliminar o micro-organismo do alimento. No 3º desembarque, provavelmente tenha ocorrido contaminação cruzada a partir de algum outro pescado contaminado. S. enterica foi identificada em duas amostras de peixes já processados, oriundos do mesmo desembarque e as duas cepas apresentaram perfis de bandas iguais. Como não houve isolamento do micro-organismo de peixes inteiros, presume-se que a causa da contaminação por S. enterica se deva a falhas higiênico-sanitárias no processo de evisceração, como utensílios ou mãos dos manipuladores contaminados. V. parahaemolyticus ocorre naturalmente em pescados do estuário da Lagoa dos Patos e pode permanecer nos peixes após evisceração e higienização. S. enterica pode estar presente no pescado pronto para a venda, provavelmente devido a práticas higiênico-sanitárias impróprias durante seu processamento, uma vez que esta bactéria não foi isolada de peixes inteiros. Existe a necessidade de orientar os manipuladores quanto aos seus hábitos higiênico-sanitários, além de significativa melhoria nas operações de limpeza e sanificação, de modo a serem eliminados os riscos microbiológicos e assim garantir a inocuidade do alimento. In recent years, the fish consumption has been increasing, since it provides protein, has low amount of saturated fat and is rich in micronutrients, as well as being a source of fatty acids that can offer health benefits. However, the fish is a potential vehicle for microorganisms that can cause diseases in humans, because they are subject to contamination by microorganisms acquired in the aquatic environment, as well as during harvesting, handling and shipping. Thirteen landings of fish were monitored and 130 fish (65 integer and 65 clean) were analyzed for the presence of Vibrio parahaemolyticus and Salmonella enterica. Fish from Lagoa dos Patos estuary were collected on the arrival and after being processed, and then analyzed to verify its contamination. In order to compare the isolates, rep-PCR analysis was performed. The species colected were croakers (Micropogonias furnieri), gray mullet (Mugil platanus) and the flounder (Paralichthys orbignyanus). V. parahaemolyticus was isolated from 4.61 % of whole fish samples and 4.61 % of gutted fish and ready to trade. S. enterica was isolated from 1.54% of gutted fish. Four V. parahaemolyticus strains showed identical profile bands, one from whole fish and one from gutted fish from the both the second landing, and two from gutted fish from the third landing. Two other strains came from whole fish from different landings and has showed distinct banding profiles. On the second landing, the fish remained contaminated with the same bacterial strain even after gutting and hygienization, when ready for sale, indicating that these procedures were not enough to eliminate the microorganism. On the third landing, probably a cross contamination from some other contaminated fish has occurred. S. enterica was identified in two samples of fish already processed, that came from the same landing and the two strains showed the same bands profiles. As there was no isolation of this microorganism in the whole fish, it is assumed that the cause of contamination with S. enterica is due to hygienic and sanitary failures in the evisceration process, such as contaminated utensils or hands. V. parahaemolyticus naturally occurs on the fish of Lagoa dos Patos estuary, and can remain in the fish after gutting and cleaning. S. enterica may be present in fish ready for sale, probably due to improper sanitary-hygienic practices during processing since this bacterium was not isolated from the whole fish. There is a need to guide the handlers about hygienic and sanitary habits, besides a significant improvement in cleaning and sanitizing operations, in order to eliminate the microbiological risks and ensure the food safety.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-graduação em Ciências dos Alimentos Esta pesquisa teve por objetivo identificar e quantificar vibrios marinhos potencialmente patogênicos em ostras (Crassostrea gigas) e águas provenientes da Baía Sul de Santa Catarina, Brasil. Assim como avaliar a patogenicidade e susceptibilidade destas cepas frente a diferentes antibióticos e verificar a eficácia da depuração de ostras (Crassostrea gigas) contaminadas com Vibrio parahaemolyticus ou Vibrio vulnificus usando luz ultravioleta (UV) isoladamente e efeito sinérgico com cloro. Das 60 amostras de ostras 48,3% estavam contaminadas por uma ou mais espécies de vibrio. As espécies mais frequentes foram V. parahaemolyticus e V. vulnificus. As contagens de V. parahaemolyticus e V. vulnificus nas amostras variaram entre < 0,5 log10 NMP g-1 a 2,3 log10 NMP g-1 de ostra, e < 0,5 log10 NMP g-1 a 2,1 log10 NMP g-1 de ostra, respectivamente. Das 60 amostras de água 73,3% estavam contaminadas por uma ou mais espécies de vibrios. As contagens de V. parahaemolyticus e V. vulnificus nas amostras variaram entre < 0,3 log10 NMP 100 mL-1 a 1,7 log10 NMP 100 mL-1 de água marinha, e < 0,3 log10 NMP 100 mL-1 a 2,0 log10 NMP 100 mL-1 de água marinha, respectivamente. Das 120 cepas enviadas para tipificação, foram avaliadas as características de 106 cepas reativadas. Destas 83 (78,3%) foram previamente identificadas como V. parahaemolyticus, 20 (18,9%) como V. vulnificus, três (2,8%) como V. cholerae. Foram caracterizados 20 diferentes sorotipos de V. parahaemolyticus, e identificados genes de patogenicidade tanto de V. parahaemolyticus quanto de V. cholerae. A resistência à gentamicina e cefuroxima foi observada em 84,3% das cepas testadas para ambos antibióticos, e a resistência a ampicilina foi observada em 80,0% das cepas de Vibrio spp. O cloranfenicol foi o antibiótico ao qual as cepas de Vibrio spp. foram mais sensíveis, seguido da tetraciclina, diferente do observado para V. cholerae que apresentou maior sensibilidade a Amoxicilina + clavulanato. Para o experimento de depuração as ostras foram contaminadas com um coquetel de cinco cepas de V. parahaemolyticus ou V. vulnificus ao nível de 104 a 105 UFC mL-1. A depuração foi realizada num sistema fechado de recirculação. As contagens de V. parahaemolyticus ou V. vulnificus foram realizadas no tempo zero, 6, 18, 24 e 48 h. Três tratamentos foram realizados: T1 (controle), T2 (luz UV) e T3 (luz UV mais cloro). Após 48 h de depuração de V. parahaemolyticus, T3 reduziu 3,1 log NMP g-1 e T2 reduziu 2,4 log NMP g-1, enquanto T1 reduziu apenas 2,0 log NMP g-1. Após 48 h de depuração de V. vulnificus, tanto T2, como T3 foram eficientes na redução das contagens, reduzindo a população em 2,5 e 2,4 log NMP g-1, respectivamente, enquanto que T1 reduziu apenas 1,4 log NMP g-1. O tratamento utilizando Luz UV mais cloro foi mais eficiente para controlar V. parahaemolyticus em ostras. Tanto o tratamento utilizando luz UV, como o tratamento utilizando luz UV mais cloro foram eficientes para reduzir as contagens de V. vulnificus. Os resultados desta pesquisa servem de subsídio para analise de risco de vibrios potencialmente patogênicos em ostras. The purpose of this study was to assess the incidence and level of contamination for Vibrio spp. in seawater and oysters (Crassostrea gigas) harvested in Southern Brazil, as to evaluate the pathogenicity of strains and test the susceptibility of these strains to different antibiotics, and to evaluate efficacy of depuration using UV light and UV light plus chlorinated seawater for decontaminating Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus in oysters. Of the 60 oysters# samples analyzed, 29 (48.3%) contained one or more vibrio species. The most frequently isolated species were Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus. The counts of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus in the samples ranged between < 0.5 log10 MPN g-1 to 2.3 log10 MPN g-1 of oyster, and < 0.5 log10 MPN g-1 to 2.1 log10 MPN g-1of oyster, respectively. Of the 60 seawater samples analyzed, 44 (73.3%) contained one or more species vibrios. The counts of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus in the samples ranged between < 0.3 log10 MPN 100 mL-1 to 1.7 log10 MPN 100 mL-1 of seawater, and < 0.3 log10 MPN 100 mL-1 to 2.0 log10 MPN 100 mL-1 of seawater, respectively. Of the 120 strains sent for typing were evaluated the characteristics of the strains 106 reactivated, 83 (78.3%) were previously identified as V parahaemolyticus, 20 (18.9%) as V vulnificus, three (2.8%) and V. cholerae. Were characterized 20 different serotypes of V. parahaemolyticus, and isolated genes of patogenicity for V. parahaemolyticus and V. cholerae. The gentamycin and cefuroxime resistance was observed in 84.3% of the strains to both antibiotics, and the ampicillin resistance was observed in 80.0% of the strains of Vibrio spp. Chloramphenicol is the antibiotic to which the strains of Vibrio spp. were more susceptible. The tetracycline antibiotic was the second to which the strains of V. parahaemolyticus and V. vulnificus were more susceptible than the observed for V. cholerae that showed greater susceptibility to amoxicillin + clavulanate. For depuration the oysters were contaminated with five-strain cocktail of V. parahaemolyticus or V. vulnificus to level of 104 to 105 CFU mL-1. The depuration was conducted in a recirulated closed system. Counts of V. parahaemolyticus or V. vulnificus were determined at zero, 6, 18, 24 and 48 h. Three treatments were conducted: T1 (control treatment); T2 (UV treatment); and T3 (UV plus chlorine treatment). After 48 h of depuration of Vibrio parahaemolyticus, T3 reduced 3.1 log MPN g-1 and T2 reduced 2.4 log MPN g-1, while T1 reduced only 2.0 log MPN g-1. After 48 h of depuration of Vibrio vulnificus, T2 as well as T3 were efficient reducing counts in 2.5 and 2.4 log MPN g-1, respectively; while T1 reduced only 1.4 log MPN g-1. UV light plus chlorine treatment was more efficient for controlling V. parahaemolyticus in oysters. Both UV light and UV light plus chlorine were efficient for V. vulnificus. These results serve as input for risk analysis studies of potentially pathogenic vibrios in oysters in southern Brazil.

Dissertação de mestrado em Sistemas de Prevenção e Controlo Alimentar, apresentada na Escola Superior Agrária de Santarém, Instituto Politécnico de Santarém. Apesar dos riscos envolvidos com a contaminação de peixes e mariscos com Vibrio parahaemolyticus há uma falta de informação sobre a ocorrência destes na Europa. O Vibrio parahaemolyticus é muito abundante no ambiente aquático, nomeadamente nas águas mais quentes. Na sequencia das análises efectuadas, no PCR em Tempo Real, 21% das amostras revelaram ser positivas, no método clássico, todas as amostras tiveram resultado negativo. Os positivos, embora numa percentagem baixa, poderão ser um problema para a segurança alimentar, uma vez que foram detectados unicamente pelo método do PCR em Tempo Real, podendo representar um factor adicional na ocorrência de casos isolados do consumo do alimento contaminado. A compatibilização dos resultados do PCR em tempo real com o Método Clássico de análise, não foi possível pois a técnica de PCR em Tempo Real, oferece uma maior celeridade nos resultados, consegue de quantidades reduzidas de amostras encontrar resultados que o Método Clássico não faz. Despite the risks involved with the contamination of seafood with Vibrio parahaemolyticus is a lack of information on their occurrence in Europe. Vibrio parahaemolyticus is abundant in the aquatic environment, particularly in warmer waters. Following testing, the Real Time PCR, 21% of the samples proved to be positive, the classic method, all samples were negative. Although, a low percentage of positives may be a problem for food security, since it was detected only by the method Real-Time PCR and may represent an additional factor in the occurrence of isolated cases of eating contaminated food. The compatibility the results of Real-Time PCR with the classic method of analysis wasn’t possible because the Real-Time offers more rapid results, can of small amounts of samples, find results that the classical method doesn’t.

SOUSA. R. B. D. et al. Recuperação de cepas de Vibrio parahaemolyticus inoculadas no camarão Litopenaeus vannamei, submetido às temperaturas de resfriamento e congelamento. Arquivos de Ciências do Mar. Fortaleza, v. 44, n. 2, p. 62-69, 2011. The aim of this study was to evaluate the survival of Vibrio parahaemolitycus inoculated in shrimp Litopenaeus vannamei at different temperatures of refrigeration (refrigerator, freezer and isothermic box with ice) during ten days and on the 15th, 20th and 25th days. The experiment was repeated six times from October, 2005 to March, 2006. Shrimps were obtained on a fish market located at Praia do Mucuripe, Fortaleza, Ceará. In the laboratory, the shrimps were washed with distilled water and immersed in boiling water for five minutes in order to eliminate any other Vibrio species in the sample. The inoculation happened with the contact between the shrimps and the V. parahaemolyticus culture for five minutes. Then, the sample was divided in forty 25-g portions, one of which was used as initial time. The other 39 portions were separated in three batches maintained on freezer (-21°C), refrigerator (11°C) and isothermic box with ice (-1°C to 13°C). The number of V. parahaemolyticus was monitored for 10 days and on 15th, 20th and 25th days by the plate count method on TCBS and PCA media. All temperatures were efficient to control the viable cells of V. parahaemolyticus. The action of cold produced by ice, refrigerator and freezer inhibit the bacterial growth on shrimps. The freezer was the most efficient treatment in reducing the action of V. parahaemolyticus on the shrimp L. vannamei. O presente trabalho teve como objetivo recuperar Vibrio parahaemolyticus, inoculado em homogenato de camarão Litopenaeus vannamei livre de víbrios, submetido a diferentes temperaturas de refrigeração (caixa isotérmica com gelo, geladeira e freezer) por dez dias, e nos 15o, 20o e 25o dias. Foram realizadas seis repetições do experimento, no período de outubro de 2005 a março de 2006. O camarão foi adquirido na feira de pescado da Praia do Mucuripe, Fortaleza-Ceará. Em laboratório, 1.500 g de camarão eram lavados com água destilada e imersos em água fervente por cinco minutos para eliminar qualquer Vibrio presente na amostra. A contaminação do camarão era feita mediante o contacto dos animais com a cultura de V. parahaemolyticus, por cinco minutos. A amostra era dividida em 40 frações de 25 g sendo uma delas usada para contagem no tempo zero e as restantes divididas em três lotes sendo estocadas em três temperaturas: caixa isotérmica com gelo (-1 a 13ºC), geladeira (11ºC) e congelador (-21ºC). Por 10 dias seguidos, e nos 15o, 20o e 25o dias, V. parahaemolyticus eram quantificados nos camarões através do Método de Contagem Padrão em Placas, em meios de TCBS e PCA. Todas as três temperaturas foram eficientes no controle da viabilidade de V. parahaemolyticus. A ação do frio gerado por gelo, geladeira e freezer inibe o crescimento dessa bactéria em camarões, sendo a temperatura do freezer, a mais eficiente na redução dessa espécie bacteriana no camarão L. vannamei.

Made available in DSpace on 2015-03-04T18:51:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Neto.pdf: 2082167 bytes, checksum: f56cf900db766b4f223ae0ad59348aa7 (MD5) Previous issue date: 2010-03-11 Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior Large scale gene expression analysis has fundamental importance for understanding cellular function and gene regulation mechanics. It enables the measurement of expression levels of thousands of genes simultaneously, and makes possible a wider understanding of the biological system. Among the main experimental techniques available for this purpose, microarray technology has been widely used. The objective of this work was to determine the genes of Vibrio parahaemolyticus which have their expression induced or repressed in presence of amino-sugars N-acetylglucosamine (NAG). V. parahaemolyticus is a marine bacterium, commonly found in water and in association with marine organisms. NAG is one of the most abundant amino sugars in the marine environment. For this, V. parahaemolyticus RIMD2210633, was cultivated in two media as sources of energy. The first medium consists of maltose and NAG (control) and the second only by NAG (treatment). Bacterial culture was done under aerobic conditions and low agitation at 28°C. Two samples were drawn from the medium 24 hours after the experiment beginning in order to perform the extraction of mRNA and preparation of cDNA. Three replicas of the experiments were made. Mixtures of cDNA prepared from RNA extracted from each replicate were used in hybridizations in microarray slides containing a total of 4832 ORFS from the V. parahaemolyticus RIMD2210633 genome. Comparative analysis of gene expression of V. parahaemolyticus in two culture conditions resulted in detection of 59 genes with expression induced, 38 repressed genes, and 4245 without modified expression (increased or decreased) in presence of NAG. In total, 523 genes were excluded from this comparison because the hybridization was unsatisfactory. There was a gene ordination following the functional classification of the database TIGR-CMR and KEGG. The genes with induced expression mainly belong to classes of regulatory functions, energy metabolism, and transport proteins. PilA and Chemotaxis proteins were found, suggesting a role of NAG in the transformation. Repressed expression genes are mainly included in the functions of energy metabolism, cell address, and hypothetical proteins. This study demonstrated that NAG interfere in regulation of different cell processes, including the ability to capture DNA from the medium by V. parahaemolyticus. A análise da expressão gênica em larga escala é de fundamental importância para a melhor compreensão do funcionamento celular e dos mecanismos de regulação gênica. Ela possibilita a medida dos níveis de expressão de milhares de genes simultaneamente, o que torna possível uma visão mais abrangente do sistema biológico. Dentre as principais técnicas experimentais disponíveis para esta finalidade, a tecnologia de microarranjo tem sido amplamente utilizada. O objetivo desta dissertação foi determinar os genes de V. parahaemolyticus que têm sua expressão induzida ou reprimida na presença do aminoaçúcar N-acetilglucosamina (NAG). V. parahaemolyticus é uma bactéria marinha, comumente encontrada na água e em associação com organismos marinhos. O NAG é um dos aminoaçúcares mais abundantes no meio marinho. Para isso, Vibro parahaemolyticus RIMD2210633, foi cultivada em dois meios como fontes de energia. O primeiro meio composto por maltose e NAG e o segundo apenas por NAG. O cultivo bacteriano foi feito em condições aeróbicas, sob baixa agitação, a 28°C. Foram retiradas duas amostras do cultivo no tempo de 24 horas após o início do experimento a fim de realizar a extração de mRNA e a preparação do cDNA. Os experimentos foram feitos em três replicas. As misturas de cDNA preparadas a partir do RNA extraído de cada réplica foram utilizadas em hibridizações em lâminas de microarranjo contendo um total de 4832 ORFS do genoma de V. parahaemolyticus RIMD2210633. A análise comparativa da expressão gênica de V. parahaemolyticus nas duas condições de cultivo resultou na detecção de 59 genes com expressão induzida, 38 genes reprimidos, e 4245 sem expressão modificada (aumentada ou diminuída) na presença de NAG. No total, 523 genes foram excluídos da comparação pois a hibridização não foi satisfatória. Ocorreu uma ordenação dos genes seguindo a classificação funcional do banco de dados TIGR-CMR e KEGG. Os genes com expressão induzida, pertencem principalmente às classes de funções regulatórias, metabolismo de energia, e proteínas de transporte. Foram também encontradas proteínas PilA e de quimiotaxia, sugerindo um papel da NAG na transformação. Já os genes de expressão reprimida compreendem principalmente as funções de metabolismo de energia, endereçamento celular, e proteínas hipotéticas. O presente estudo demonstrou que NAG interfere na regulação de diferentes processos celulales, incluindo a capacidade de captura de DNA do meio por V. parahaemolyticus.

Study of physical and chemical parameters and isolation of Vibrio parahaemolyticus in some water samples from Anil river estuary (São Luis, state of Maranhão, Brazil) at natural banks of mollusks. The technique of the most probable number (MPN) with enrichment and a subsequent isolation was used in Thiosulphate citrate bile salt agar (TCBS). In addition, some physical and chemical parameters were monitored “in situ”. The determinations for pH varied (7.25 to 7.90), O2 (0.20 to 1.2mg/L), T°C (29 to 32°C), S‰, (5 to 28.0 UPS), NH4+ (0.04 to 3.41mg/L), NO2- (0.10 to 1.91mg/L), PO43- (0.03 to 4.88mg/L). The presence of V. parahaemolyticus was detected in 56.1% of station I and 55.4% of station II with levels from 1.1x10 to 1.1x105MPN/mL). The results require some special attention from the environmental control and Public Health organizations as soon as possible because the riverain communities are exploring the alive resources from that ecosystem as their own feeding and commerce Avaliação dos parâmetros físico-químicos e isolamento de Vibrio parahaemolyticus em águas do estuário do rio Anil (São Luís-MA, Brasil), em bancos naturais de moluscos. Foi utilizada a técnica do Número Mais Provável (NMP) com enriquecimento e subseqüente isolamento em agar tiossulfato-citrato-sacarose-sais-biliares (TCBS). Adicionalmente, foram monitorados “in situ” alguns parâmetros físico-químicos. As determinações para o pH variaram (7,25 a 7,90), O2 (0,20 a 1,2mg/L), T°C (29 a 32°C), S‰ (5 a 28,0 UPS), NH4+ (0,04 a 3,41mg/L), NO2- (0,10 a 1,91mg/L), PO43- (0,03 a 4,88mg/L). Em 56,1% na estação I e 55,4% na estação II, apresentaram positividade, para V. parahaemolyticus, com níveis entre 1,1x10 e > 1,1x105NMP/mL. Os resultados exigem uma atenção especial por parte dos órgãos de Controle Ambiental e de Saúde Pública locais, uma vez que os recursos vivos deste ecossistema são sistematicamente explorados pelas comunidades ribeirinhas para fins de consumo e comercialização

O ecossistema marinho é o habitat natural de bactérias como Vibrio parahaemolyticus, um importante patógeno causador de gastrenterite humana associada ao consumo de alimentos marinhos. Na presente investigação, foi avaliada a presença de V. parahaemolyticus a partir de 86 amostras de mexilhões in natura e pré-cozidos. Vibrio parahaemolyticus foi isolado a partir de 11,6% dos mexilhões in natura e pré-cozidos avaliados. Todas as cepas avaliadas demonstraram-se urease positivas e 28,5% Kanagawa positivas sugerindo um potencial patogênico para o homem. Houve a predominância do sorotipo O10:K52 e a identificação da cepa emergente O3:K6. Esses resultados apontam para a relevância epidemiológica de V. parahaemolyticus em casos de gastrenterite humana após consumo de mexilhões sem cozimento adequado (100ºC/15min). Além disso, é importante alertar as autoridades de Vigilância Sanitária no Brasil quanto a sua presença na cadeia alimentar e seus riscos para a Saúde Pública. The marine ecosystem is the natural habitat of bacteria like Vibrio parahaemolyticus, an important pathogen that cause human gastroenteritis associated with seafood consumption. In the present investigation, the presence of V. parahaemolyticus in 86 in natura and precooked mussel samples was evaluated. Vibrio parahaemolyticus was isolated from 11.6% of the in natura and precooked mussels. All strains tested were urease-positive and 28.5% were Kanagawa-positive, which suggests that they have pathogenic potential for humans. There was predominance of the O10:K52 serotype and the emerging O3:K6 strain was identified. These results show the epidemiological relevance of V. parahaemolyticus in cases of human gastroenteritis following mussel consumption without adequately cooking them (100°C/15min). Moreover, it is important to alert the Brazilian Sanitary Surveillance authorities regarding their presence in the food chain and their public health risks.

Foi estudada a ocorrência de Vibrio parahaemolyticus em quarenta amostras de mexilhões (Perna perna, Linnaeus, 1758) procedentes de banco natural da praia da Pinheira, município de Palhoça, Santa catarina, durante um período de três meses. Na metodologia de isolamento foi utilizada a técnica do Número Mais Provável (NMP) com enriquecimento em água alcalina peptonada e subseqüente plaqueamento em ágar TCBS (thiosulfate citrate bile salts sucrose). Em 52,5% das amostras de mexilhões foi constatada a presença de Vibrio parahaemolyticus, com níveis de contaminação entre