Dias, Isabella Jardelino, Gomes, Daliana Queiroga de Castro, Castro, Ricardo Dias de, Garcez Segundo, Aguinaldo Silva, Barboza, Carlos Augusto Galvão, Pereira, Jozinete Vieira, and Catão, Maria Helena Chaves de Vasconcelos
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No. of bitstreams: 2 PDF - Isabella Jardelino Dias.pdf: 4345735 bytes, checksum: cca6c747a3fb974b9f0872f877c83673 (MD5) Termos BDTD - Isabella Jardelino Dias.pdf: 251680 bytes, checksum: db726a2e997de6c09131382175fa4a90 (MD5) Previous issue date: 2021-10-07 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES This research aimed to evaluate the effect of Antimicrobial Photodynamic Therapy, using methylene blue as a photosensitizer, on the pathogenicity factors of Candida spp. An in vitro assay was performed on cell concentration in a spectrophotometer, fungal morphology quantified by area dimensions, chromatic density and numbers of reproductive shoots, rupture with the cell wall regeneration cycle, as well as the interaction of treatments with Ergosterol, a constituent of the plasma membrane of fungi. From the suspension of Candida albicans, tropicalis and krusei, represented by clinical isolates from patients with Acute Lymphocytic Leukemia and by ATCC and CBS strains, inoculums were prepared at a concentration of 1 x 106 and submitted to the following groups: G1 - Growth Control; G2 - Red Irradiation; G3 - Methylene Blue with 20 minutes exposure; G4 - PDTa with a pre-irradiation time of 15 minutes; G5 – TPDa with TPI of 20 minutes; G6 - Association of Nystatin and PDT with 15-minute TPI; G7 - Association of Nystatin and PDTa with TPI of 20 minutes; G8 - Nystatin. The light source used was the InGaAlP laser, with a wavelength of 660 nm, a power density of 3.57 W/cm² and an energy of 5.0 J and an energy density of 178.5 J/cm². The concentration of Methylene Blue was 0.1%. The results of the image tests were processed in the ImageJ program (1.51p) and, later, statistically analyzed in the SPSS Software (version 18), as well as the product of the other tests. Statistical analysis was performed using the One-way ANOVA and Two-way ANOVA parametric test, with a significance level of 5%. In all experiments, the clinical microorganisms showed greater resistance potential to the treatments submitted, when compared to the standardized ones, justified by the constant cyclical exposure to drugs and immunological resources of the host. As for cell concentration, Candida krusei expressed the highest color densities among the clinical microbiota treated, being the only microorganisms to present in the form of hyphae. Candida tropicalis was the species with the greatest potential to maintain the cell wall recovery cycle. PDTa was the most effective treatment among the groups, indicating the lowest indices of cell concentration, area, color density and formation of reproductive buds in clinical strains. Nystatin had unsatisfactory antimicrobial effects regarding the analyzed factors, mainly in clinical microorganisms, however, being the only therapy to bind to synthetic Ergosterol, which can develop action on the plasma membrane of the fungus. It is expected that the results pointed out by the study help in the consolidation of PDTa as an effective treatment for oral candidiasis and that its association with allopathic methods enable a greater microbial reduction in the microbiological pathways of Candida spp. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito da Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana, com uso de azul de metileno como fotossensibilizador, sobre os fatores de patogenicidade de Candida spp. Um ensaio in vitro foi realizado sobre a concentração celular em espectrofotrômetro, morfologia fúngica quantificada pelas dimensões de área, densidade cromática e números de brotos reprodutivos, ruptura com o ciclo de regeneração da parede celular, bem como a interação dos tratamentos com o Ergosterol, constituinte natural da membrana plasmática dos fungos. A partir da suspensão de Candida albicans, tropicalis e krusei, representados por isolados clínicos de pacientes com Leucemia Linfocítica Aguda e por estirpes ATCC e CBS, foram preparados inóculo na concentração de 1 x 106 e submetidos aos seguintes grupos: G1 - Controle de Crescimento; G2 - Irradiação Vermelha; G3 - Azul de Metileno com exposição de 20 minutos; G4 - TFDa com Tempo de Pré-Irradiação de 15 minutos; G5 - TFDa com TPI de 20 minutos; G6 - Associação de Nistatina e TFDa com TPI de 15 minutos; G7 - Associação de Nistatina e TFDa com TPI de 20 minutos; G8 - Nistatina. A fonte de luz utilizada foi o Laser InGaAlP, com comprimento de onda de 660 nm, densidade de potência de 3,57 W/cm² e com energia de 5,0 J e densidade de energia de 178,5 J/cm². A concentração do Azul de Metileno foi de 0,1%. Os resultados dos ensaios de imagens foram processados no programa ImageJ (1.51p) e, posteriormente, analisados estatisticamente no Software SPSS (versão 18), assim como o produto dos demais testes. A análise estatística foi realizada com o teste paramétrico One-way ANOVA e Two-way ANOVA, com um nível de significância de 5%. Em todos experimentos, os microrganismos clínicos apresentaram maior potencial de resistência aos tratamentos submetidos, quando comparado aos padronizados, justificado pela constante exposição clíclica à fármacos e recursos imunológicos do hospedeiro. Quanto a concentração celular, Candida krusei expressou as maiores densidades cromáticas entre as microbiotas clínicas tratadas, sendo os únicos microrganismos a apresentarem-se na forma de hifas. Candida tropicalis foi a espécie com maior potencial de manutenção do ciclo de recuperação da parede celular. A TFDa foi o tratamento mais efetivo entre os grupos, indicando os menores índices de concentração celular, área, densidade cromática e formação de brotos reprodutivos em cepas clínicas. A Nistatina obteve efeitos antimicrobianos insatisfatórios quanto aos fatores analisados, principalmente em microrganismos clínicos, entretanto, sendo a única terapêutica a ligar-se ao Ergosterol sintético, podendo desenvolver ação na membrana plasmática do fungo. Espera-se que os resultados apontados pelo estudo auxiliem na consolidação da TFDa como tratamento efetivo para candidose oral e, que sua associação a métodos alopáticos possibilitem uma maior redução microbiana perante as vias microbiológicas de Candida spp.