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Objetivo: analisar os recentes estudos com a hidroxicloroquina no tratamento da COVID-19. Métodos: comunicação breve relatando os principais resultados com o uso da hidroxicloroquina em ensaios clínicos e o panorama mundial desses estudos. Resultados: a maioria dos ensaios clínicos no mundo é com a hidroxicloroquina, e os resultados com o seu uso são variados. Conclusão: é urgente avaliar melhor a eficácia da hidroxicloroquina no possível tratamento da COVID-19 em pacientes não severos. Objective: analyze the most recent studies with hydroxychloroquine in the treatment of COVID-19. Methods: brief communication reporting the main results with the use of hydroxychloroquine in clinical trials and the global panorama of these studies. Results: the majority of clinical trials in the world are with hydroxychloroquine, and the results with its use are varied. Conclusion: it is urgent to better evaluate the efficacy of hydroxychloroquine in the possible treatment of COVID-19 in non-severe patients.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. O tratamento atual para o câncer de boca é feito através de cirurgia, radioterapia, quimioterapia ou uma associação destas modalidades terapêuticas. Por promoverem graves efeitos adversos aos pacientes, constantes esforços são tomados no desenvolvimento de novos protocolos terapêuticos que possam substituir ou auxiliar os tratamentos convencionais. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma alternativa que tem sido utilizada clinicamente com sucesso para o tratamento de tumores superficiais com efeitos colaterais mínimos. Esta dissertação teve como objetivo a avaliação da aplicação da TFD mediada pela Alumínio-Cloro-Ftalocianina (AlClFt) em formulação lipossomal sobre o Câncer de Boca em modelos experimentais in vitro e in vivo. Experimentos in vitro utilizando células derivadas de carcinoma epidermóide bucal humano (linhagem OSCC) demonstraram alta eficiência daTFD na destruição destas células tumorais. Para os experimentos in vivo, foram induzidos três diferentes modelos experimentais: (1) indução química pela aplicação tópica do carcinógeno 4-NQO na língua de camundongos Swiss; (2) injeção das células OSCC no subcutâneo dorsal de camundongos nude-Balb/c; (3) injeção de células derivadas do tumor de Ehrlich na lingua de camundongos Swiss. A análise histológica dos três modelos experimentais monstrou que a TFD atua na destruiçao tumoral pela (1) indução de citotoxidade direta às células tumorais e (2) pela promoção de efeitos lesivos nos vasos do microambiente neoplásico, que culminaria no desenvolvimento de necrose tumoral por hipóxia. Os resultados apresentados indicam excelentes perspectivas para a utilização da TFD mediada pela AlClFt em ensaios clínicos posteriores. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT Surgery, chemotherapy, radiotherapy or a combination of these three methods are common treatments for oral cancer. Although these protocols have demonstrated some effectiveness in oral cancer therapy, they can promote a series of side effects for patients during treatment. Alternatively for these traditional treatments, Photodynamic Therapy (PDT) has been used clinically for oral cancer and precancerous lesions treatment. The objective of this study was the evaluation of PDT mediated by Aluminum-Chlorine-Phtalocyanine (AlClPc) in different in vitro and in vivo oral cancer models. In vitro experiments showed PDT as a high citotoxic treatment in oral squamous cell carcinoma cell line (OSCC). As animal model, three different tumor were induced: (1) 4-NQO carcinogenesis induction in Swiss mice tongue; (2) injection of OSCC cell line in dorsal subcutaneous Balb/c-nude mice; (3) Ehrlich tumor cell injection in Swiss mice tongue. Histopathological analyses showed that PDT produce a (1) direct citotoxicity in tumor cells and (2) vascular damage that could produces hypoxia areas in tumor microambient. Taken together, the results indicated that PDT mediated by AlClPt has excellent perspectives to be applied in future clinical trials.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2021. Entre as diversas abordagens terapêuticas contra o câncer, a terapia fotodinâmica (TFD) destaca-se por ser uma técnica menos invasiva, mais seletiva e específica. A combinação de fotossensibilizantes (FS) com nanomateriais tem melhorado a eficiência da TFD. Assim, o presente trabalho teve como objetivo utilizar reagentes de proveniência natural, especificamente manteiga de murumuru (Astrocaryum murumuru), na composição de nanossistemas para serem associados a FS já utilizados em terapia fotodinâmica anticâncer, no caso, cloreto de alumínio-ftalocianina (AlFtCl). Os resultados obtidos revelaram nanopartículas eficientes para o carreamento de AlFtCl, alta estabilidade inicial quando estocadas a temperatura ambiente ou a 4 °C, diâmetro hidrodinâmico (DH) menor que 100 nm e índice de polidispersão (IPD) < 0.2. A nanopartícula lipídica sólida de manteiga de murumuru associada a AlFtCl na concentração de 20 μM (NLSM-AlFtCl-20) apresentou excelente atividade fotodinâmica e ausência de toxicidade quando não irradiada. Além disso, as células de melanoma murino B16F10, quando tratadas com NLSM- AlFtCl-20 apresentaram características morfológicas semelhantes às apresentadas pelas células tratadas com mitoxantrona (MTX), um quimioterápico com potencial indutor de apoptose. O nanossistema proposto além de fornecer informações importantes para o desenvolvimento de protocolos clínicos mais eficientes de terapia anticâncer, promove o fortalecimento das cadeias de valor da biodiversidade amazônica, uma das maiores potencialidades bioeconômicas do país. Among the various therapeutic approaches against cancer, photodynamic therapy (PDT) stands out for being a less invasive, more selective and specific technique. The combination of photosensitizers (FS) with nanomaterials has improved the efficiency of PDT. Thus, the present work aimed to use reagents of natural origin, specifically murumuru butter (Astrocaryum murumuru), in the composition of nanosystems to be associated with FS already used in anti-cancer photodynamic therapy, in this case, aluminum chloride-phthalocyanine (AlFtCl) . The results obtained revealed efficient nanoparticles for carrying AlFtCl, high initial stability when stored at room temperature or at 4 ° C, hydrodynamic diameter (DH) less than 100 nm and polydispersion index (IPD)

Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2020. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Introdução: O ambiente tolerogênico imposto pela célula neoplásica é uma das estratégias adquirida para progressão do tumor. Essa condição impede que o reconhecimento de antígenos tumorais por células T citótoxicas que tem a função vigilância imunológica. Pesquisadores investem muitos esforços para compreender e contornar esse ambiente supressor, dentre esses, há uma nova visão acerca do uso dos quimioterápicos, exemplificando, como a doxorrubicina (Dox) e paclitaxel (Pacli), que podem induzir um subtipo específico de apoptose, denominado de morte celular imunogênica (MCI), desencadeando uma ativação da resposta imune através de padrões moleculares associados a dano celular (DAMP). Objetivo: Nesse presente trabalho avaliamos uma abordagem de quimio-imunoterapia no tratamento do câncer de mama metastático utilizando uma formulação farmacêutica que contem nanocarreadores lipossomais como veículo da combinação dos fármacos Pacli e Dox para desencadear ação contra células tumorais de mama metastátizadas para região pulmonar com auxílio da ativação do sistema imune pelo aumento do infiltrado linfocítico. Além disso, avaliamos a redução da toxicidade sistêmica dos quimioterápicos carreados em nanosistema lipossomal. Metodologia: O nanosistema lipossomal (Lipo) foi idealizado para carrear simultaneamente, doxorrubicina e paclitaxel (Lipo-Pacli/ Dox), dois quimioterápicos com farmacocinética e polaridades diferentes. Atividade antitumoral e a segurança in vivo foram realizados testes pré-clínicos em camundongos (Balb/c) submetidos a indução xenoenxerto com células tumorais de cancer de mama murino (4T1). O tratamento foi realizado em ciclos das dosagens da formulação Lipo-Pacli / Dox. Após período de tratamento de pré-tratamento realizamos imuno-histoquímica para analisar amostras de tecido embebidas em parafina quanto à presença de linfócitos infiltrantes de tumor CD3+ positivos. Resultados: Observamos que essa encapsulação dos quimioterápicos tem ganhos na redução da toxicidade sistêmica. É importante ressaltar que o tratamento com a combinação de Pacli / Dox coencapsulados em lipossomos aumentou a sobrevida dos animais, sendo que este grupo de tratamento obteve 100% dos animais vivos durante período experimental (51 dias). O que não pôde ser visto com o tratamento com a combinação de Pacli / Dox na forma livre tendo uma redução de animais desse grupo restando apenas 40% até o final do período experimental. Evidência demonstrada pelo aumento significativo de linfócitos TIL presente nos locais metastáticos pulmonares. Interessante que essa infiltração linfocitária estivesse fortemente correlacionada com o comprometimento das metástases. Conclusão: Em conjunto, esses resultados indicam que, dentro dessa abordagem, Dox e Pacli poderiam atuar não apenas como drogas citotóxicas, mas também positivamente na modulação do sistema imunológico levando sucesso no tratamento oncológico para aplicação na clínica. Consequentemente, apresentando uma incidência significativamente menor de metástases na apresentação do que aqueles com baixo número de linfócitos infiltrantes de tumor. The tolerogenic environment imposed by the neoplastic cell is one of the acquired strategies for tumor progression. This condition prevents tumor cells from reducing the recognition and presentation of antigens to cells that have the function of immune surveillance. Researchers invest a lot of efforts to circumvent this suppressive environment, consequently preventing the growth of the tumor. Among these efforts, a new view on the use of chemotherapeutic drugs, such as paclitaxel (Pacli) and doxorubicin (Dox) clinically used in oncology, these can induce a specific subtype of apoptosis, called Immunogenic Cell Death (ICD), triggering an activation of the immune response through antigen-presenting molecules. In this present work, we evaluated a chemo-immunotherapeutic approach, which uses a combination of the chemotherapeutic drugs paclitaxel and doxorubicin, which are inducers of immunogenic cell death, transported in liposomal nanocarriers to trigger action against distant tumor cells with the help of the activation of the immune system by increasing the immune system. lymphocytic infiltrate. In addition, to evaluate the reduction of systemic toxicity caused by the administration of these drugs. The liposome was designed to carry doxorubicin and paclitaxel, two chemotherapeutic drugs with different pharmacokinetics and polarities, highly cytotoxic. We observed that this encapsulation of chemotherapy has gains in reducing systemic toxicity. It is important to highlight that the treatment with the combination of Pacli / Dox coencapsulated in liposomes increased the animals' survival, being that this treatment group obtained 100% of the live animals until the end of the experimental period. What cannot be seen with the treatment with the combination of Pacli / Dox in the free form having a reduction of animals of this group remaining only 40% until the end of the experimental period. Evidence demonstrated by the significant increase in TIL lymphocytes present in the metastatic lung sites. It is interesting that this lymphocytic infiltration was strongly correlated with the impairment of metastases. Together, these results indicate that, within this approach, Pacli and Dox could act not only as cytotoxic drugs, but also as immunological modulators for clinical applications

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2020. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). A fibrogênese é o equilíbrio entre os fatores que promovem a biossíntese, o acúmulo de matriz extracelular e sua degradação em tecidos conjuntivos, promovendo a homeostasia. Entretanto, diante da disrupção do equilíbrio homeostático, ocorre a superprodução de matriz extracelular, acarretando no desenvolvimento heterogêneo e progressivo de tecido fibrótico pela extensão tecidual. Nesse sentido, o tecido pulmonar, condicionado a desenvolver processos patológicos com características fibróticas, demonstra preocupação entre os estudiosos, necessitando de estratégias terapêuticas que viabilizem a homeostasia pulmonar, em virtude de não existirem medicamentos que inibam a progressão da patologia, apenas desacelere. Assim sendo, com base nos mecanismos inflamatórios que podem desencadear o processo progressivo da FP, verificou-se que o uso de ácidos graxos poli- insaturados, como ômega-3, podem modular a resposta inflamatória na produção de eicosanoides anti-inflamatórios e de pró-resolução. Nesse sentido, a administração de EPA e DHA vem sendo utilizada com o intuito de atenuar e/ou até mesmo inibir a progressão fibrótica. Contudo, os fatores envolvidos na baixa solubilidade em água, menor estabilidade química e biodisponibilidade desses ácidos graxos condicionam em desafios para garantir a rápida absorção na membrana celular e eficácia terapêutica. É nesse contexto que, com a utilização das aplicabilidades da nanotecnologia, tornou-se possível o estabelecimento de um nanocarreador lipídico para a administração intra- gástrica do óleo de peixe, enriquecida de EPA e DHA, com finalidades de prevenção da inflamação. Dessa forma, tendo em vista que na literatura, não existem estudos que conferem a utilização de nanoemulsão de óleo de peixe em modelo experimental de FP, o objetivo deste trabalho foi verificar se a administração intra-gástrica de NEW3 pode influenciar nos aspectos morfofisiológicos em modelo experimental de FP. Para este fim, foi necessário estabelecer um pré-tratamento durante 21 dias por via oral em camundongos BALB/c fêmeas, realizando, logo após, o desafio inflamatório pulmonar com o uso do fármaco bleomicina por procedimento cirúrgico via intratraqueal. Foram utilizadas diferentes técnicas de análise como a histopatológica, técnica de imageamento in vivo, mensuração da frequência respiratória e mecânica ventilatória. Contudo, o tempo de duração estabelecido após o desafio inflamatório correspondeu ao 29°, 33° e 36°, aproximadamente um mês após a indução inflamatória. Utilizando essas técnicas, verificou-se que, diante dos grupos experimentais, controle negativo, controle positivo, OG, OP e NEW3, ocorreu a progressão de um processo fibrótico em todos os grupos, entretanto, enquanto que o grupo pré-tratado com OG apresentou exacerbação da condição patológica, o grupo pré-tratado com NEW3 demonstrou a atenuação diante da progressão da FP, evidenciado por alvéolos pulmonares sem acúmulo exacerbado de massas fibróticas e ausência de deformação na estrutura alveolar, área do espaço aéreo pulmonar não apresentou diferença estatística com o grupo controle negativo (p

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2020. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico e Institutos Nacionais de Ciência e Tecnologia (INCTs). A aplicação da nanotecnologia na terapia do câncer tem sido promissora. Por ser uma tecnologia que fornece uma abordagem abrangente e única contra o câncer por meio do diagnóstico, prevenção, terapia e medicina personalizada. Com essa tecnologia, podem ser utilizadas diferentes estratégias para o tratamento do câncer como, por exemplo, o medicamento terapêutico sendo carreado por nanopartículas e com alvo específico, liberação controlada do agente terapêutico na região de interesse e métodos para o diagnóstico precoce. Embora nanopartículas geralmente se acumulem 10 vezes mais em tumores quando comparado com fármacos convencionais, menos de 1% da dose injetada atinge tipicamente o tumor, pois ficam retidas no fígado e baço. Os macrófagos específicos para o fígado, chamados de células de Kupffer e que constituem uma das principais barreiras no uso de nanopartículas para o tratamento do câncer, foram identificados pela primeira vez no fígado por von Kupffer e correspondem a maior população de macrófagos teciduais. Essas Células de Kupffer fazem parte do Sistema Fagocitário Mononuclear e são predominantemente distribuídas no lúmen dos sinusóides hepáticos, exibindo atividade endocítica contra os materiais que passam pelo sangue e entram no fígado. Por esse motivo, as células de Kupffer são centrais no processo de eliminação de nanopartículas que atravessam as barreiras epiteliais do corpo. Diante da problemática apresentada, este trabalho teve por objetivo modular a captação de uma nanoemulsão lipídica no sistema fagocitário mononuclear hepático pela ação da cloroquina para bloquear temporariamente a endocitose das nanopartículas pelas células de Kupffer. The application of nanotechnology in cancer therapy has been promising. It is a technology that provides a comprehensive and unique approach to cancer through diagnosis, prevention, therapy and personalized medicine. Different strategies for the treatment of cancer can be used, for example, the therapeutic drug being carried by nanoparticles and with a specific target, controlled release of the therapeutic agent in the region of interest and methods for early diagnosis. Although nanopharmaceuticals generally accumulate 10 times more in tumors when compared to conventional drugs, less than 1% of the injected dose typically reaches the tumor, because they get stuck in the liver and spleen. The liver-specific macrophages called Kupffer cells are one of the main barriers in the use of nanoparticles for the treatment of cancer. They were first identified in the liver by von Kupffer and correspond to the largest population of tissue macrophages. Kupffer cells are part of the Mononuclear Phagocyte System and are predominantly distributed in the lumen of hepatic sinusoids exhibiting endocytic activity against materials that pass through the blood and enter the liver. For this reason, Kupffer cells are central to the process of eliminating nanoparticles that cross the body's epithelial barriers. In view of the problem presented, this study aimed to modulate the capture of a lipid nanoemulsion in the hepatic mononuclear hepatic phagocytic system by the action of chloroquine to temporarily block an endocytosis of the nanoparticles by Kupffer cells.

Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. No câncer de mama as metástases estão intimamente relacionadas com modificações na matriz extracelular, onde a modificação mais proeminente observada em estudos recentes é o aumento da deposição de colágeno. As terapias atuais são pouco eficazes em impedir o desenvolvimento e progressão da doença, bem como a reincidência da mesma ao longo dos anos. Com o intuito de incrementar os efeitos da terapia, a associação entre a nanotecnologia e os fármacos utilizados busca melhorar aspectos do tratamento como a eficácia e diminuir os efeitos adversos relacionados ao seu uso. No presente trabalho um modelo de enxerto tumoral de células de carcinoma mamário murino (4T1®ATCC), a uma concentração de 4x104 células/50μL de meio de cultivo, enxertadas no flanco esquerdo de camundongos BalbC fêmeas foi utilizado para avaliação da eficácia do quimioterápico doxorrubicina associado a nanoemulsões e administração simultânea de losartana. Visando potencializar o efeito da terapia, a administração simultânea de losartana foi utilizada como uma tentativa de diminuir os níveis de deposição de colágeno na matriz extracelular de tecidos pulmonares e facilitar a chegada do fármaco aos sítios alvos por meio da ação descompressora dos vasos que permeiam o microambiente tumoral. O tratamento foi administrado por cinco dias consecutivos após quatro semanas do enxerto, nas concentrações de 20mg/kg para doxorrubicina em sua forma livre, 20mg/kg+ 40mg/kg para doxorrubicina livre e losartana, 40mg/kg para doxorrubicina associada a nanoemulsão e 40mg/kg + 40mg/kg para doxorrubicina associada a nanoemulsão e losartana, respectivamente. O acompanhamento in vivo do estado clínico dos camundongos ao longo de cinco semanas mostrou que o tratamento com nanoemulsão e losartana não foi tóxico, enquanto a doxorrubicina promoveu toxicidade que pôde ser observada no comportamento e aspecto físico dos camundongos. As avaliações ex vivo de materiais biológicos realizadas por meio de histologia, imunohistoquímica, ELISA e contagem de nódulos corroboram dados encontrados em estudos científicos, como o menor nível de colágeno nos grupos com administração simultânea de losartana e menor grau metastático. Concluiu-se que a doxorrubicina associada a nanoemulsões e administração de losartana não apresentou diferenças significativas em comparação à doxorrubicina em sua forma livre quando se trata da atividade antitumoral no sítio primário, mas foi capaz de diminuir o grau de colágeno encontrado nos tecidos, bem como as metástases nos tecidos pulmonares, não apresentando toxicidade significativa para os camundongos. In breast cancer metastasis are closely related to changes in the extracellular matrix, where the most prominent modification observed in recent studies is the increase in collagen deposition. Current therapies are poorly effective in preventing the development and progression of the disease, as well as its recurrence over the years. In order to increase the effects of therapy, the association between nanotechnology and the drugs aims to improve treatment efficacy and to reduce adverse effects related to its use. In the present work a murine mammary carcinoma cell (4T1®ATCC) tumor graft model, at a concentration of 4x10 4 cells/50μl culture medium, grafted on the left flank of female BalbC mice was used to evaluate the efficacy of doxorubicin with nanoemulsions and simultaneous administration of losartan. In order to potentiate the effect of the therapy, the simultaneous administration of losartan was used as an attempt to decrease the levels of collagen deposition in the extracellular matrix of lung tissues and to facilitate the drug delivery at the target sites through the decompressive action of the vessels that permeate the tumor microenvironment. The treatment was administered for five consecutive days after four weeks of grafting, at concentrations of 20mg/kg for doxorubicin in its free form, 20mg/kg + 40mg/kg for free doxorubicin and losartan, 40mg/kg for doxorubicin associated with nanoemulsion and 40mg/kg + 40mg/kg for doxorubicin associated with nanoemulsion and losartan, respectively. In vivo monitoring of the clinical status of mice over five weeks showed that treatment with nanoemulsion and losartan was non-toxic, whereas doxorubicin promoted toxicity that could be observed in the behavior and physical appearance of the mice. Ex vivo evaluations of biological materials performed using histology, immunohistochemistry, ELISA and lung nodule counts corroborate data found in scientific studies, such as the lower level of collagen in the groups with simultaneous administration of losartan and lower metastatic degree. It was concluded that doxorubicin associated with nanoemulsions and administration of losartan did not present significant differences compared to doxorubicin in its free form when it treated the antitumor activity at the primary site, but was able to decrease the degree of collagen found in the tissues, as well as metastasis in the lung tissues, showing no significant toxicity to the mice.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2016. Sistema autonanoemusificante (do inglês, Self-nanoemulsified drug delivery system  SNEDDS) é um sistema nanotecnólogico simples que possui aplicação para liberação e entrega de fármacos. Esse sistema utiliza via de administração oral para entrega de fármacos, tendo em sua composição uma fase lipídica que pode ser composta por óleos (vegetal e animal) e agentes emulsificantes. A formação de nanogotículas ocorre quando fase lipídica entra em contato com uma fase aquosa (exemplo fluídos gastrointestinais), formando dispersões lipídicas, que facilitam a absorção e o aumento da concentração do fármaco em níveis plasmáticos. O sistema autoemulsificante é foco da presente dissertação, sendo utilizado como carreador para a molécula epiisopiloturina (EPI), um alcaloide que tem caraterística hidrofóbico, extraída de uma planta nativa brasileira da espécie Pilocarpus microphyllus, esta molécula tem se destacado por ter efeito antiparasitário, demonstrado atividade biológica in vitro e in vivo contra o parasita Schistosoma mansoni causador da esquistossomose em humanos. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho consiste em incorporar o alcaloide EPI em uma formulação lipídica, sendo produzida pelo sistema autoemulsificante que promova o aumento da biodisponibilidade plasmática desta molécula. Como estratégia metodológica para produção da nanoformulação foi desenvolvida as seguintes etapas: a seleção dos componentes da fase oleosa da nanoformulação (óleo e agente emulsificante); produção das nanoformulações pelo sistema autoemulsificante; avaliação das características nanoscópicas da nanoformulação; incorporação de EPI na nanoformulação e o perfil de liberação in vitro de EPI associada na nanoformulação. A próxima etapa consiste na avaliação da biodisponibilidade de EPI em modelo experimental in vivo, usando camundongos Swiss. Como resultados, foi selecionado para fase lipídica óleo de copaíba como nanocarreador e o agente emulsificante o tensoativo cremophor EL. As melhores nanoformulações produzidas pelo sistema autoemulsificante foram as nanoformulação SNEDDS 1:1, 1:6 e 2.1 (razão óleo/surfactante), sendo estas de escolha para carrear a molécula EPI. No experimento de liberação de EPI in vitro, pelo método de dialise, foi demonstrado que o pH do meio dialisador interfere na liberação e que o pH ácido promove uma liberação mais rápida de EPI do nanocarreador. Além do mais, EPI incorporado em nanogotículas pequenas tem liberação mais rápida, comparando com nanoformulações de tamanho maiores. O teste de biodisponibilidade in vivo demonstrou que a molécula EPI carreada em lipídios promove uma maior concentração de EPI no plasma, comparado com a administração da molécula livre. As nanoformulações, contendo a epiisopiloturina, não demonstram toxicidade aos animais experimentais. Como conclusão, observou-se que a nanoformulação SNEDDS 2.1 contendo o alcaloide epiisopiloturina mostrou-se segura e eficaz para carrear e aumentar a disponibilidade plasmática do composto EPI pela via administração oral. The emulsifying system also known as self-Nano emulsified drug delivery system-SNEDDS is a nanotechnology easy system to a application to deliver drugs. The system is administered orally is based on lipids (vegetable and animal oil) that are associated with an emulsifying agent. The formation of nano droplets occurs when the lipid phase is in contact with an aqueous phase (gastrointestinal fluid) forming lipid dispersions to facilitate the absorption and increasing the drug concentration in plasma levels. The emulsifying system it is the focus of this dissertation is used as a carrier the molecule epiisopiloturina (EPI) lipophilic compound, extracted from plant native to Brazil of plant species Pilocarpus microphyllus, highlights this is molecule antiparasitic effect biological activity in vitro and in vivo against the parasite Schistosoma mansoni, a causative agent of schistosomiasis in humans.Thus, the objective of this study is to incorporate alkaloid EPI produced the emulsifying system promotes increased plasma bioavailability of this molecule. To develop such a system three stages were followed; selection of the nanoformulation components (oil and surfactant); production of the nanoformulations; nanoformulation evaluation; incoporation of EPI in the nanoformulation and the in vitro release profile of EPI associated in the nanoformulation; after establishing the constituents elements of the nanoformulation an in vivo bioavailability test was conducted using Swiss mice. We found out that the optimum lipid phase for EPI was copaiba oil. The optimum surfactant for maintaining the emulsification was Cremophor EL. The most promising nanoformulations with EPI were SNEDDS 1:1 , 1:6 and 2.1 for the release of EPI through dialysis method. Furthermore, the pH of the solvent happened to interfere EPI release, where acidic pH favored a faster release of EPI. Moreover, the smaller droplets have quicker release in comparison to bigger droplets in the nanoformulations. The in vivo bioavailability test showed that the molecule EPI carried from lipids promotes greater concentration of EPI in plasma. The in vivo bioavailability test showed that the EPI molecule carried from lipid promotes a higher concentration of EPI in plasma compared to the administration of the free molecule. Nanoformulations EPI don’t toxic to the experiment in animals. In conclusion, we showed that SNEDDS 2.1 containing the alkaloid epiisopiloturina proved to be safe and effective for carrying and increase the availability of the compound in the plasma through oral administration.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. Os agentes de contraste iodados atuais causam diversos efeitos adversos e não proporcionam imageamento por período maior que trinta minutos surgindo a necessidade pela busca por agentes de contraste que diminuam os efeitos adversos e propiciem um imageamento de longo prazo. Nesse sentido o desenvolvimento de um agente de contraste iodado nanoestruturado torna-se promissor uma vez que sua estrutura nano traz por si a diminuição dos efeitos adversos e esta permite controlar o tempo que o agente de contraste permanecerá no organismo fornecendo assim um imageamento mais prolongado. O presente estudo desenvolveu uma nova formulação nanoestruturada contendo agentes de contraste iodados para a utilização em raio-x utilizando duas vias de síntese, uma com carreadores nanoestruturado lipídicos, o que posteriormente demonstrou ser inviável, e a utilização das Bases de Schiff, que demonstrou ser promissora. Os carreadores nanoestruturados lipídicos demonstraram a impossibilidade de ligação covalente do iodo ao ácido graxo, fazendo com que o iodo se deslocasse facilmente para o meio, o que é inviável para um agente de contraste. As Bases de Schiff formadas se ligaram covalentemente ao iodo fazendo com que este não fosse para o meio fornecendo a formação de um agente de contraste seguro. Antes da iodação as base de Schiff foram acopladas a moléculas de ácido graxo de sete carbonos para conferir hidrofobicidade, o que é perfeito para formação de nanoemulsão. Logo após a Base de Schiff foi iodada. As estruturas, tanto lipídicas como a Base de Schiff com acoplamento com cadeia de sete carbonos e a estrutura iodada, tiveram suas capacidades de absorção de raio-x medidas no aparelho IVIS® LUMINA XR Series III. A base de Schiff iodada demonstrou uma capacidade de absorção de raio-x de cerca de 2,17 vezes maior que a água demonstrando ser excelente para a finalidade proposta. A base de Schiff iodada com cadeias C7 nanoemulsionada obteve a absorção de raio-x de cerca de 1,22 vezes maior que a água. O acoplamento com cadeias C7 à base de Schiff trouxe a inversão da densidade do óleo fazendo com que esta se tornasse mais pesado que a água provavelmente devido ao alto peso molecular conferido a base de Schiff com o acoplamento. A partir dos resultados obtidos foi observado que a base de Schiff iodada acoplada com cadeias C7 e nanoemulsionada é promissora como agente de contraste necessitando tão somente testes in vivo para completa certificação de um novo tipo de agente de contraste nanoemulsionado no mercado. Due to the current iodinated contrast agents cause many adverse effects and not offering imaging for a period longer than thirty minutes, there is a need for the search for contrast agents that reduce the adverse effects and conducive to long-term imaging. Therefore the development of a nanostructured iodinated contrast agent becomes promising since their nano structure in itself brings the reduction of adverse effects, and this allows to control the time that the contrast agent remains in the body thereby providing a longer imaging. The objective of this study was to develop a new formulation containing nanostructured iodinated contrast agents for use in computed tomography using two synthetic routes, one with nanostructured lipid carriers, which subsequently proved to be impracticable, and another synthetic route was the use of Schiff Bases which proved to be promising. The Schiff bases had their characteristics evaluated for their preparation, iodination thereof, coupling of carbon chains to give to these lipid solubility and obtaining of X-ray image by IVIS® LUMINA XR Series III machine. The Schiff base iodinated showed an x-ray absorbing capability to approximately 2,17 times greater than the water proving to be excellent for the proposed purpose. The coupling of the C7 chains brought to the Schiff base a density inversion of the oil causing it to become heavier than water probably due to the high molecular weight given to Schiff base with the coupling. This coupled Schiff sample was taken to IVIS® LUMINA XR Series III (28 Kv 100 uA) and had demonstrated its large absorption by x-ray which shows be great for a contrast agent. The Schiff base with iodine and coupling C7 was nanoemulsioned and tested in by IVIS® LUMINA XR Series III (28 Kv 100 uA) and demonstrated x-ray absorption but not as intensely as the Schiff base iodine C7 not nanoemulsioned, probably due to the dilution that the nanoemulsion suffered. From the results obtained it was observed that the Schiff base iodinated coupled with C7 and nanoemulsioned is promising as a contrast agent requiring solely in vivo tests for full certification of a new type of contrast agent in the market nanoemulsioned.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociências e Nanobiotecnologia, 2014. Introdução: Diversos estudos reportam alterações na expressão gênica em resposta àexposição de células à nanomateriais, mas até o presente momento não há nenhumestudo sobre a toxicidade a nível epigenético causada por nanoestruturas e seus efeitosem sucessivas gerações celulares. Portanto, torna-se necessário estudar esses fenômenosa fim de contribuir no desenvolvimento de nanopartículas mais adequadas paraaplicações biológicas. Objetivo: Avaliar o perfil de metilação global de DNA emcélulas MCF-7 e MCF-10A em cultivo após a cessão da exposição de nanopartículas demaghemita funcionalizadas com citrato. Materiais e métodos: As NPM-citrato foramsintetizadas pelo método de coprecipitação de Fe (II) e Fe (III) e adição direta de ácidocítrico. As caracterizações das NPM-citrato foram realizadas por microscopia (MET,HRTEM, MEV e AFM) e por diâmetro hidrodinâmico e potencial zeta. Para detectar asconcentrações sub-letais IC-10 e IC-20, foram realizados a exclusão de viabilidade porcontagem de células coradas com Azul Tripan e o ensaio de citotoxicidade peladetecção da Lactato Desidrogenase (LDH). O ensaio de proliferação celular foirealizado no sistema xCELLigence™ (Roche/ACEA). A detecção de ferro intracelularfoi realizada pelo ensaio do Azul da Prússia. O perfil de metilação global de DNA foirealizado por ensaio colorimétrico. A expressão das DNMTs foi realizada por qRTPCR.Resultados: As NPM-citrato causaram efeito citostático em células MCF-7 eMCF-10A quando administradas nas concentrações 30 e 60μgFe/mL durante 24h. Apósa cessão da exposição das NPM-citrato, verificou-se que a proliferação das célulasMCF-7 tratadas foi maior que das células não tratadas. Além disso, foi constatado queas NPM-citrato encontravam-se no interior das células durante todo o experimento e quehavia uma dinâmica de metilação de DNA, mesmo após a exposição transiente dasNPM-citrato. Também foram identificadas diferenças entre o acúmulo de transcritos deDNA metiltransferases. Discussão: Os nanomateriais possuem um risco intrínseco emaplicações biológicas, mesmo quando administrados em concentrações consideradasnão-tóxicas por meio de técnicas convencionais. Isso porque seus efeitos em sistemasbiológicos podem se estender a múltiplas gerações, mesmo durante exposiçãotransiente. Conclusão: As NPM-citrato promovem alterações significativas no perfil demetilação global de DNA em células MCF-7 e não promovem em MCF-10A e essefenômeno pode ser explorado para aplicações biomédicas futuras. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT Introduction: Several studies have reported changes in gene expression in response toexposure of cells to nanomaterials, but to date there is no study on the toxicity causedby nanostructures at epigenetic level and their effects in successive cell generations.Therefore, it becomes necessary to study these phenomena in order to contribute to thedevelopment of more appropriate nanoparticles for biological applications. Objective:To evaluate the profile of global DNA methylation in MCF-7 and MCF-10A cells inculture after cessation of exposure to maghemite nanoparticles functionalized with citricacid. Methods: The NPM-citrate were synthesized by coprecipitation of Fe (II) and Fe(III) method and direct addition of citric acid. The characterizations of NPM-citratewere performed by microscopy (TEM, HRTEM, SEM and AFM) and by analysis of thehydrodynamic diameter and zeta potential. To detect the sub-lethal concentrations IC-10and IC-20, we performed the counting of the cells stained with Trypan Blue andcytotoxicity assay for detection of lactate dehydrogenase (LDH). The cell proliferationassay was performed in xCELLigence ™ (Roche / ACEA) system. Detection ofintracellular iron assay was performed by Prussian Blue. The profile global DNAmethylation was performed by colorimetric assay. The expression of DNMTs wasperformed by qRT-PCR. Results: NPM-citrate caused cytostatic effect on MCF-7 andMCF-10A cells when given at concentrations of 30 and 60μgFe/ml for 24h. After thetransfer of the NPM-citrate exposure, it was found that the proliferation of MCF-7treated cells was higher than untreated cells. Furthermore, it was found that the NPMcitrateis found inside the cells throughout the experiment and had a dynamic DNAmethylation even after transient exposure of NPM-citrate. Differences between thetranscript accumulation of DNA methyltransferases were also identified. Discussion:The combination of nanotechnology and epigenetics is still poorly understood becausethese are frontier areas of knowledge. Thus, nanomaterials have an intrinsic risk inbiological applications, even when administered in non-toxic concentrations consideredby conventional techniques. This is because their effects on biological systems can beextended to multiple generations, even during transient exposure. Conclusion: TheNPM-citrate promote significant changes in global DNA methylation in MCF-7 cellsand do not promote in MCF-10A and this phenomenon can be exploited for futurebiomedical applications.

Embora a terapia fotodinâmica venha sendo utilizada como uma ferramenta útil nos últimos 30 anos em oncologia, poucos estudos clínicos em odontologia têm sido conduzidos. A terapia fotodinâmica (TFD) utiliza fotossensibilizantes atóxicos e seletivos que são administrados nas células alvo seguida de aplicação local de luz visível, produzindo espécies reativas de oxigênio capazes de ocasionar morte celular por apoptose ou necrose, de afetar a vascularidade local, além de exercer importantes efeitos no sistema imune. Novas gerações de fármacos fotossensibilizantes, como as ftalocianinas nanoparticuladas tem apresentado excelentes resultados na atividade antitumoral e antibacteriana. Neste contexto, o presente trabalho realizou o primeiro protocolo clínico de aplicação local da nanoemulsão de cloro-alumínio ftalocianina (AlClFc) seguida de irradiação em gengiva de humanos, e analisou descritiva e comparativamente, por meio de imunoistoquímica, a expressão de RANK, RANKL, OPG e VEGF em um modelo split-mouth. Oito voluntários saudáveis com indicação clínica de exodontia foram incluídos no estudo. Sete dias antes da exodontia, foi aplicado na gengiva dos participantes, 5µM de nanoemulsão de AlClFc seguida de irradiação com laser diodo (660nm, 100J/cm2), o lado contralateral foi utilizado como controle. Os espécimes teciduais foram removidos sete dias após a TFD e subdivididos em dois grupos (grupo teste e grupo controle) para análise histológica e imunoistoquímica. Os pacientes foram monitorados no dia aplicação, 7, 14 e 30 dias após a terapia para avaliação de efeitos adversos da terapia. Alterações vasculares foram observadas nas amostras gengivais que receberam a TFD. Áreas de edema e congestão vascular, além de intensa vascularização foram visualizadas. Adicionalmente, focos de calcificação distrófica em região subepitelial foram visualizados nos espécimes do grupo teste. Os resultados demonstraram um padrão similar dos escores de imunomarcação de RANK, RANKL e VEGF entre os grupos teste e controle, não havendo diferença estatística significante (p=0.317, p=0.777, p=.814, respectivamente). RANK e RANKL exibiram imunomarcação fraca ou ausente em todos os espécimes analisados. Não houve imunomarcação para a OPG. O VEGF mostrou imunomarcação moderada a forte nos espécimes do grupo teste. Adicionalmente, o estudo clínico mostrou que a terapia foi bem tolerada por todos os pacientes. Os efeitos adversos foram de curta duração e totalmente reversíveis. Tomados em conjunto, os resultados apresentados neste estudo mostraram que o protocolo da TFD mediada por nanoemulsão contendo AlClFc é segura para aplicação clínica em tecido gengival e, sugerem uma forte imunomarcação para o VEGF após a terapia. Although photodynamic therapy have been used as a useful tool over the past 30 years in oncology, few clinical trials have been conducted in dentistry. Photodynamic therapy (PDT) uses non - toxic photosensitizers and selective which are administered in target cells followed by local application of visible light, producing reactive oxygen species capable of causing cell death by apoptosis or necrosis, injured the local vasculature, and exert important effects on the im mune system. New generations of photosensitizing agents, such as nanoparticulate phthalocyanines, has shown excellent results in antitumor and antibacterial activity . In this context, the present work constitutes the first clinical protocol of local appli cation of nanoemulsion chloro - aluminum phthalocyanine (AlClFc) followed by irradiation in human gingiva, and analyzed descriptively and comparatively , by means of immunohistochemistry , the expression of RANK , RANKL , OPG and VEGF in a split - mouth model . Eight healthy volunteers with clinical indication for extraction were included in the study . Seven days before the extraction, was injected in the gingiva of participants, 5 μ M of nanoemulsion AlClFc followed by irra diation with diode laser (660nm , 7 J/cm2 ), the contralateral side was used as control. Tissue specimens were removed seven days after the TFD is performed. Tissues sample were divided into two groups (test and con trol groups) for histological and immunohistochemical analysis. Patients were monitored at days, 0, 7, 14 and 30 to assess adverse effects of the therapy. Vascular alterations were seen in gingival samples that received PDT. Areas of edema and vascular con gestion, and intense vascularization were viewed . Additionally, dystrophic calcification in subepithelial region were observed in the test group. The results showed a similar pattern of immunostaining scores of RANK, RANKL and VEGF between the test and co ntrol groups, with no statistically significant difference (p = 0.317, p = 0.777, p = 0 .814, respectively). RANK and RANKL exhibited weak or absent immunostaining in most specimens analyzed. There was n o immunostaining for OPG. VEGF showed moderate to stro ng immunostaining in specimens from the test group. In addition, the clinical study showed that therapy was well tolerated by all patients. Adverse effects were short - time and completely reversible. Taken together, the results presented in this study showe d that PDT mediated by nanoemulsion containing AlClPc is safe for clinical application in gingival tissue and suggests that a strong immunostaining for VEGF after therapy .