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O diagnóstico da toxoplasmose congênita é complexo e pode levar meses para ser confirmado, visto que a maioria dos recém-nascidos não apresenta sintomatologia e níveis detectáveis de anticorpos IgM e IgA anti-Toxoplasma gondii. Além disso, gestantes podem apresentar IgM residual, dificultando o diagnóstico da infecção aguda durante a gestão. Apesar dos diversos testes sorológicos desenvolvidos, há escassez na literatura sobre biomarcadores que possam auxiliar no diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita e aguda. Objetivo: Analisar o perfil de imunoreatividade das proteínas de T. gondii com potencial para serem biomarcadores para o diagnóstico da toxoplasmose aguda e para o diagnóstico e prognóstico da toxoplasmose congênita. Métodos: Foram selecionadas amostras de soro de crianças com toxoplasmose congênita sintomática e assintomática e de mulheres em idade fértil e/ou gestantes com toxoplasmose adquirida aguda e crônica. Estas amostras foram agrupadas de acordo com os resultados laboratoriais e clínicos dos pacientes. Foi realizada eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) para separação das proteínas de T. gondii. A técnica de Immunoblotting foi aplicada para a análise do perfil de proteínas imunorreativas à anticorpos IgG anti-T.gondii, utilizando membranas de nitrocelulose sensibilizadas com proteínas do parasito. Resultados: Foram analisadas 116 amostras de soro. Na comparação do perfil de proteínas imunorreativas a anticorpos presentes nas amostras dos diferentes grupos e subgrupos, as proteínas de 150, 18.5 e 16.96 kDa foram prevalentemente reconhecidas pelas amostras do grupo de infecção adquirida. As proteínas de 343, 189, 150, 75 e 42 kDa apresentaram maiores chances de ser detectadas pelo subgrupo de infecção congênita sintomática, enquanto as proteínas de 61, 50 e 16.96 kDa foram reconhecidas significativamente pelo subgrupo de infecção adquirida aguda. Conclusões: Diante dos resultados obtidos foi possível identificar potenciais biomarcadores que poderão auxiliar no diagnóstico e tratamento precoce da toxoplasmose, evitando o aparecimento de manifestações clínicas no decorrer da vida de crianças congenitamente infectadas. Introduction: The diagnosis of congenital toxoplasmosis is complex and might take months to confirm since most newborns do not present symptoms and levels of undetected IgM and IgA anti-Toxoplasma gondii antibodies. Besides, pregnant women may have residual IgM, making it difficult to diagnose acute infection during pregnancy. Despite the various serological tests developed, there are few studies about biomarkers that can assist in the diagnosis of acute and congenital toxoplasmosis. Objective: Analyze the immunoreactivity profile of T. gondii protein with the potential to be biomarkers for the diagnosis of acute toxoplasmosis and the diagnosis and prognosis of congenital toxoplasmosis. Methods: Serum samples were selected from children with symptomatic and asymptomatic congenital toxoplasmosis and women of childbearing age or pregnant women with acute and chronic acquired toxoplasmosis. These samples were grouped according to the patients' laboratory and clinical results. Sodium Dodecyl Sulfate - Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) was used to separate T. gondii proteins. The Immunoblotting technique was applied to the analysis of immunoreactive bands profile by IgG antibodies, using nitrocellulose membranes sensitized with parasite proteins. Results: One hundred and sixteen samples were analyzed. When comparing immunoreactive bands profile for antibodies present in samples from different groups and subgroups, the 150, 18.5, and 16.96 kDa proteins were more immunoreactive by the antibodies present in serum samples from the acquired infection group. The 343, 189, 150, 75, and 42 kDa proteins showed more chance to be detected by the symptomatic congenital infection subgroup, while the 61, 50, and 16.96 kDa proteins were significantly immunoreactive by the acute infection subgroup. Conclusions: Before obtained results, it was possible to identify potential biomarkers that may assist in early diagnosis and treatment of toxoplasmosis, avoiding the appearance of clinical manifestations throughout the life of children congenitally infected. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás Outro

Resumo: Objetivou-se avaliar um programa de controle da artrite encefalite caprina (AEC), por meio de testes diagnósticos sensíveis, separação de mãe e cria após o parto e medidas de manejo, com o intuito de formar rebanho livre do vírus. Utilizou-se um total de 47 cabritos da raça Saanen, mantidos isoladamente até o resultado dos primeiros testes de reação em cadeia de polimerase nested (PCR nested) e Western Blotting (WB), com base na coleta de sangue no momento do nascimento (M0). No PCR nested, quatro animais foram positivos, no M0, e foram eutanasiados. Posteriormente, os demais 43 cabritos foram submetidos à coleta de sangue aos 60 (M60) e 270 (M270) dias de vida para realização de novos testes de WB e PCR nested, que não detectaram animais positivos. Pode-se afirmar que a metodologia adotada neste estudo foi efetiva no controle da doença, nas fases de aleitamento e pós-aleitamento, e que a combinação do sistema de manejo, a fim de propiciar diminuição de risco de transmissão horizontal, com técnicas de diagnóstico mais apuradas, como o WB e a PCR nested, é relevante para elaboração de plano estratégico de controle da enfermidade. [Bases for a program of control of caprine arthritis encephalite in dairy flock]. Abstract: We aimed to evaluate a program to control Caprine Arthritis Encephalitis (CAE), using diagnostic tests, separation of the mother and postpartum and other management measures, in order to form a free flock of the virus. We used a total of 47 Saanengoats in isolation until the results of the first nested Polymerase Chain Reaction (nested PCR) and Western Blotting (WB) tests, based on blood collection at the time of birth (M0). In the nested PCR, 4 animals were positive, at M0, and were eliminated. Later, the other 43goats were submitted to blood collection at 60 (M60) and 270 (M270) days of life to perform new tests of WB and nested PCR, which did not detect positive animals. We can affirm that the methodology adopted in this study was effective in the control of the disease, in the phase of breastfeeding and post-breastfeeding, and that the combination of the management system, which allows a reduction of risk of horizontal transmission, with more accurate diagnostic techniques, such as WB and nested PCR, is relevant for the elaboration of a strategic plan for the disease control. Made available in DSpace on 2020-11-30T09:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC-2020-Art-39.pdf: 124573 bytes, checksum: e4e73d5f2c3b4131f9575990c34a69fe (MD5) Previous issue date: 2020

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Lolium multiflorum (Lm) é uma espécie de gramínea que tem sido caracterizada como uma importante fonte alergênica na sensibilização de indivíduos na região sul do Brasil. Apesar de sua relevância, não há muitas informações importantes na literatura que caracterizem seus alérgenos, bem como a resposta imune dos pacientes frente a essa fonte alergênica, o que dificulta o diagnóstico e tratamento específico dos pacientes. O objetivo nesse estudo foi avaliar os antígenos imunodominantes do extrato total de Lm (S1) e da fração isolada (S2) com potencial aplicação para o diagnóstico da alergia, por meio da frequência da reatividade dos anticorpos IgE e IgG4. Para tanto, foi feita a extração de proteínas do pólen de Lm com PBS, centrifugada e dialisada e denominada sobrenadante 1 (S1), e então foi utilizado um protocolo de cromatografia de troca iônica para isolar -expansinas de S1, fração essa nomeada de sobrenadante 2 (S2). Após isso, tanto S1 quanto S2 foram submetidas a SDS-PAGE para obter o perfil eletroforético. Para a avaliação da reatividade de anticorpos específicos, 46 pacientes atópicos (AT) e 16 não-atópicos (NAT) foram selecionados por meio do teste cutâneo de puntura. Os níveis de anticorpos IgE e IgG4 específicos a S1 e S2 foram determinados por ELISA e Immunoblotting. O perfil eletroforético de S1 revelou maior intensidade nas bandas de 12, 32 e 58 kDa, enquanto a de 32 kDa foi o principal componente na fração S2. Os níveis de anticorpos específicos da classe IgE mensurados por ELISA frente a S1 foram significativamente maiores em AT quando comparados a indivíduos NAT, da mesma maneira, os níveis de anticorpos específicos da classe IgE mensurados por ELISA frente a S2 foram significativamente maiores em pacientes AT quando comparados a NAT, mostrando um grau semelhante de reatividade de IgE ao extrato S1 e fração S2. Os níveis de anticorpos da subclasse IgG4 também foram significativamente maiores, em soros de indivíduos AT quando comparados a soros de indivíduos NAT frente ao extrato S1, da mesma forma os níveis de anticorpos da subclasse IgG4 foram significativamente maiores em soros de indivíduos AT quando comparados aos soros de indivíduos NAT frente a fração S2, o que revela similitude nas reatividades ao extrato S1 e a fração S2. A reatividade dos anticorpos das classes IgE e IgG4 dos soros de pacientes AT frente a S1 e S2 demonstrou que a banda de 32 kDa foi o componente com maior reatividade em ambos os extratos, reconhecidos por 100% dos pools de soros. Assim, este estudo demonstrou que a fração S2 é tão efetiva quanto o extrato alergênico S1 para o diagnóstico de indivíduos atópicos, com destaque para a banda de 32 kDa que foi o componente mais imunodominante, podendo assim ser o principal alérgeno no desencadeamento da resposta alérgica induzida por Lm. Além disso, os resultados de IgG4 também são promissores e novos estudos são necessários para entender melhor se S2 pode ser útil na imunoterapia específica. Lolium multiflorum (Lm) has been an important source for sensitizing individuals in the southern region of Brazil but despite its importance, there is no information in the literature that characterizes its allergens, making it difficult for specific diagnosis and treatment of patients. The aim was to characterize novel immunodominant antigens derived from Lm total extract (S1) and a fraction isolated (S2) in this study with potential application for allergy diagnosis by evaluating the frequency of IgE and IgG4 reactivity. An ion-exchange chromatography protocol was used to isolate -expansins from the S1 and the eluted aliquot was named S2. After that, both extracts were submitted to SDS-PAGE to obtain the electrophoretic profile. For evaluating the reactivity of specific antibodies, 46 atopic (AT) patients and 16 non–atopic (NAT) individuals were selected. The levels of specific IgE and IgG4 antibodies against S1 or S2 were determined by ELISA and Immunoblotting. The electrophoretic profile of S1 total extract showed more intensity with 12, 32, and 58 kDa bands while the 32 kDa was the main component in the S2 fraction. Specific IgE antibody levels measured by ELISA were significantly greater in AT compared to NAT subjects, using either S1 extract or S2 fraction, showing a similar degree of IgE reactivity in all individuals when using S1 or S2 in the coating phase. Specific IgG4 antibody levels measured by ELISA were significantly greater in AT compared to NAT subjects, using either S1 extract or S2 fraction, showing a similar degree of IgG4 reactivity in all individuals when using S1 or S2 in the coating phase. Thus, this study demonstrated that S2 is as effective as S1 allergen extract for diagnosing atopic individuals, particularly, the 32 kDa band was the most immunodominant component and it may be a major allergen in triggering the allergic response induced by Lm. The frequency of serum reactivity from AT patients against S1 and S2 extracts determined that the 32 kDa band was the component with the highest reactivity in both extracts, recognized by 100% of the serum pools of AT patients. Thus, this study demonstrated that the S2 fraction is as effective as the S1 allergenic extract for the diagnosis of atopic individuals, especially the 32 kDa band that was the most immunodominant component and could therefore be the main allergen in triggering the allergic response induced by Lm. In addition, IgG4 results are also promising and further studies are needed to be performed to better understand whether S2 may be useful in specific immunotherapy. Dissertação (Mestrado)

Resumo: O vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) pertence à família Retroviridae, subfamília Lentivirinae, gênero Lentivírus. Ele causa uma infecção denominada de Artrite Encefalite Caprina (AEC) que é capaz de se disseminar em um rebanho por um longo período. Com o presente estudo objetivou-se acompanhar a soroconversão da AEC, utilizando teste sorológico (Western Blotting), e a dinâmica de detecção da doença, com o uso da técnica molecular Reação em Cadeia de Polimerase nested (PCR nested). Dois lotes distintos de animais foram utilizados em momentos diferentes, sendo o primeiro formado com cabritos da raça Saanen, composto por 47 animais, e o segundo formado por 24 cabritos das raças Saanen e Anglo-nubiana. Em ambos os lotes realizaram-se testes de Western Blotting (WB) e PCR nested no momento imediatamente após o nascimento. No primeiro lote, os animais provieram de progenitores sorologicamente negativos para AEC, e permaneceram isolados individualmente até o resultado dos testes (PCR nested e WB). Dos 47 cabritos nascidos, 43, negativos em ambos os testes, foram acompanhados em mais dois momentos distintos: aos 60 dias de idade (M60) e aos 270 dias de vida (M270), compreendendo assim a fase de aleitamento e pós-aleitamento. No segundo lote, 24 cabritos das raças Saanen e Anglo-nubiana foram testados (WB e PCR nested) no momento do nascimento, aos 15 dias de idade e uma vez por mês, durante um período de 24 meses. Neste lote os animais descenderam de progenitores sorologicamente positivos para AEC. Somente cabritos positivos na primeira prova de PCR nested foram inseridos no estudo. Em ambos os lotes, todos os partos foram rigorosamentee assistidos, realizando-se a separação imediata dos animais recém-nascidos das mães, no intuito de não permitir contato entre ambos. Nos 47 animais estudados no primeiro lote, o teste de WB não detectou positividade ao longo de todo o experimento e, pelo teste de PCR nested, 4 animais foram diagnosticados como positivos, todos no M0, e foram eliminados do rebanho. Nos outros momentos, M60 e M270, nenhum animal foi indicado como positivo pela técnica de PCR nested. Durante o estudo com os 24 animais do segundo lote, para cada um dos testes foram realizados 624 exames, totalizando 1.248 exames. No teste de PCR nested, dos 624 exames, 360 foram positivos. Já no WB apenas 9 exames foram positivos. A técnica de PCR nested superou a capacidade diagnóstica do WB durante todo o experimento, com 57,7% de positividade nas amostras testadas, contra apenas 1,4% de resultados positivos no WB. Das amostras positivas no WB, quatro foram detectadas aos 15 dias, duas aos 270 dias e apenas uma aos 240, 600 e 690 dias. Em conclusão, pode-se afirmar que a metodologia adotada nos animais do primeiro lote foi efetiva no controle da doença, na fase de aleitamento e pós-aleitamento, acreditando-se até mesmo numa possível eliminação do vírus da AEC no novo rebanho. Concluiu-se, também, que possivelmente ocorreu a transmissão intrauterina de CAEV para a prole, a partir de progenitores sorologicamente positivos e negativos. A combinação do sistema de manejo, que propicie diminuição de risco de transmissão horizontal, com o uso da associação de técnicas de diagnóstico mais apuradas, como o WB e a PCR, é relevante para elaboração de um plano estratégico de controle da enfermidade. Espera-se que com esses resultados, seja possível compreender e traçar medidas de monitoramento, controle e erradicação da AEC em rebanhos caprinos, com a realização de inquéritos de forma periódica e contínua. [Methodologies for monitoring seroconversion and control of lentivirus infection in goats]. Abstract: The Caprine Arthritis Encephalitis virus (CAEV) belongs to the family Retroviridae, subfamily Lentivirinae, genus Lentivirus. It causes an infection called Caprine Arthritis Encephalitis (AEC) that is capable of spreading in a herd for a long time. The present study aimed to follow the seroconversion of the AEC, using serological testing (Western Blotting), and the dynamics of detection of the disease, with the use of the molecular technique Polymerase Chain Reaction nested (PCR nested). Two different batches of animals were used at different times, the first one consisted of Saanen goats, composed of 47 animals, and the second was made up of 24 goats from the Saanen and Anglo-Nubian races. Western Blotting (WB) and nested PCR were performed in both batches immediately after birth. In the first batch, the animals came from serologically negative progenitors for AEC, and remained individually isolated until the test results (nested PCR and WB). Of the 47 goats born, 43, negative in both tests, were followed in two different moments: at 60 days of age (M60) and at 270 days of life (M270), thus comprising the phase of suckling and post-suckling. In the second batch, 24 goats of the Saanen and Anglo-Nubian races were tested (WB and nested PCR) at birth at 15 days of age and once a month for a period of 24 months. In this lot the animals descended from serologically positive parents to AEC. Only goats positive in the first nested PCR test were inserted into the study. In both batches, all deliveries were strictly attended, and the newborns were immediately separated from their mothers in order to avoid contact between the two. In the 47 animals studied in the first batch, the WB test did not detect positivity throughout the experiment and, by the nested PCR test, 4 animals were diagnosed as positive, all in M0, and were eliminated from the herd. At the other times, M60 and M270, no animals were indicated as positive by the nested PCR technique. During the study with the 24 animals of the second batch, 624 tests were performed for each of the tests, totaling 1,248 tests. In the nested PCR test, of the 624 exams, 360 were positive. In WB, only 9 tests were positive. The nested PCR technique surpassed the diagnostic capacity of the WB throughout the experiment, with 57.7% positivity in the samples tested, against only 1.4% positive WB results. Of the WB positive samples, four were detected at 15 days, two at 270 days and only one at 240, 600 and 690 days. In conclusion, it can be affirmed that the methodology adopted in the animals of the first batch was effective in controlling the disease, in the phase of breastfeeding and post-suckling, believing even a possible elimination of the AEC virus in the new herd. It was also concluded that intrauterine transmission of CAEV to offspring may have occurred from serologically positive and negative progenitors. The combination of the management system, which allows for a reduction in the risk of horizontal transmission, using the combination of more accurate diagnostic techniques, such as WB and PCR, is relevant for the elaboration of a strategic disease control plan. It is hoped that with these results, it will be possible to understand and devise measures for monitoring, control and eradication of AEC in goats, by conducting periodic and continuous surveys. Made available in DSpace on 2020-01-29T00:36:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CNPC2019UPA13.pdf: 1177279 bytes, checksum: 13ca0741b21a94806597c8ace0e657ec (MD5) Previous issue date: 2019 Tese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Federal do Piauí, Teresina. Orientadora: Maria Socorro Pires e Cruz; Coorientador: Raymundo Rizaldo Pinheiro (CNPC).

O perfil protéico de animais da raça nelore mocho de uma população segregante para a maciez da carne de extremos valores de força de cisalhamento, grupo extremo baixo (M) e grupo extremo alto (D), apresentou proteínas diferentemente expressas as quais houve maior abundância relativa de proteínas do processo glicolítico no grupo M e proteínas do metabolismo oxidativo evidenciadas mais expressas no grupo D, fato que provavelmente está correlacionado à maciez final da carne. Apenas identificada no grupo D, a proteína citocromo c indica indução do processo apoptótico neste grupo de animais. Proteínas estruturais foram identificadas no grupo M, indicando uma possível maior proteólise. A calpastatina foi somente identificada no grupo D, esta proteína está altamente relacionada com a maciez final da carne por ser inibidora natural das calpaínas. A separação de calpastatina por cromatografia em coluna de troca iônica de dois músculos diferentes descreveu dois picos de actividade inibitória de calpaínas: pico 1 (CAST1) e pico 2 (CAST2). Atividade de CAST 1 aumentada durante o período post mortem no Triceps brachii e não apresentou diferença entre os dias em Longissimus dorsi e por outro lado, a atividade total de calpastatina e CAST 2 diminuiu durante o envelhecimento post mortem. A banda de 115 kDa da calpastatina diminuiu sua intensidade durante o envelhecimento post mortem em ambos os músculos com mais de 70% da alteração ocorrendo no primeiro dia. As proteínas mitocondriais da subunidade ATP sintase beta aumentaram e a Succinil-CoA ligase diminuiu após o envelhecimento e a Adenilato quinase isoenzima diminuiu no dia 7. Os picos de calpastatina apresentavam faixas fosforiladas fracas e apresentavam manchas em IP e MW diferentes do que 2D-SDS-PAGE. Durante o processo de purificação dos picos de calpastatina a actividade por mg de proteína aumentou mas perdeu metade da atividade total apresentada durante a primeira etapa de purificação. Para o pico 2 de calpastatina a actividade específica aumentou 139,8 vezes e no final deste processo permaneceu 36% da atividade total. A calpastatina purificada foi identificada no gel de segunda dimensão com um peso molecular semelhante ao western blot. Spots do pico 1 da calpastatina e dois do pico 2 da calpastatina foram identificados como peptídeos pertencentes à molécula da calpastatina. Sequêcia de peptídeos identificados em Spot a partir do pico 1 purificado como parte do domínio inibidor III e IV e do terminal C e do pico 2 purificado uma sequêcia de peptideos identificados como parte do domínio inibidor I, II e III. Estes resultados levam-nos a crer que ambos os picos, neste caso, são produtos de degradação da molécula intacta e, provavelmente, os pequenos peptideos são quebrados durante o processo. Os resultados do presente estudo mostram que é possível a purificação de formas distintas de calpastatina activa, contudo a forma intacta de calpastatina não estava presente nesta purificação. A presença de peptídeos não foi conclusiva para determinar a origem ea composição de cada pico ativo. The protein profile of hornless Nellore cattle from a segregating population for meat tenderness of extremes shear force, low extreme group (M) and extreme high (D) group, showed differentially expressed proteins. They had greater relative abundance of proteins of the glycolytic process in group M and proteins of the oxidative metabolism evidenced more expressed in group D, fact that probably is correlated to the final tenderness of the meat. Only identified in group D, the cytochrome c protein indicates induction of the apoptotic process in this group of animals. Structural proteins were identified in group M, indicating a possible greater proteolysis. Calpastatin was only identified in group D, this protein is highly related to the final meat tenderness because it is a natural inhibitor of the calpain. Separation of calpastatin by ion exchange column chromatography of two different muscles described two peaks of calpain inhibitory activity: peak 1 (CAST1) and peak 2 (CAST2). CAST 1 activity increased during the post-mortem period in Triceps brachii and showed no difference between days in Longissimus dorsi and on the other hand, total activity of calpastatin and CAST 2 decreased during post-mortem aging. The 115 kDa band of calpastatin decreased its intensity during post-mortem aging in both muscles with more than 70% of the change occurring on the first day. The mitochondrial ATP synthase beta subunit proteins increased and Succinyl CoA ligase decreased after aging and Adenylate kinase isoenzyme decreased on day 7. Calpastatin peaks had weak phosphorylated bands and had different IP and MW patches than 2D-SDS -PAGE. During the purification process of the calpastatin peaks the activity per mg of protein increased but lost half of the total activity presented during the first purification step. For peak 2 of calpastatin the specific activity increased 139.8 times and at the end of this process 36% of the total activity remained. Purified calpastatin was identified on the second-size gel having a molecular weight similar to the western blot. Spots from calpastatin peak 1 and two from calpastatin peak 2 were identified as peptides belonging to the calpastatin molecule. Sequence of peptides identified in Spot from purified peak 1 as part of the inhibitory domain III and IV and of the C-terminus and from the purified peak 2 a sequence of peptides identified as part of the inhibitory domain I, II and III. These results lead us to believe that both peaks, in this case, are degradation products of the intact molecule, and probably the small peptides are broken down during the process. The results of the present study show that purification of distinct forms of active calpastatin is possible, however, the intact form of calpastatin was not present in this purification. The presence of peptides was not conclusive to determine the origin and composition of each active peak. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The nematode Strongyloides stercoralis responsible for strongyloidiasis diagnosed by detection of larvae in feces. However, the elimination of low larvae hampers the detection of disease particularly in cases of immunosuppression. Immunodiagnostic tests have been developed, but the difficulty of obtaining larvae of S. stercoralis for the production of homologous antigenic extract, thereby Strongyloides venezuelensis and their different evolutionary forms for the production of antigen extracts. The aim of this study was to evaluate the detection of antibodies anti S. venezuelensis against alkaline extracts of L3 larvae, parthenogenetic females or eggs in experimental strongyloidiasis associated with immunosuppression. Male rats were divided into two groups: non-immunosuppressed and immunosuppressed experimentally infected and serum from all animals were obtained at 0, 5th, 8th, 13th and 21th days post infection (d.p.i.). The test enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to compare the reactive potential of alkaline extracts of L3 larvae, parthenogenetic females and eggs of S. venezuelensis in rats non-immunosuppressed and immunosuppressed. Immunoblotting was also evaluated for detection of IgG anti S. venezuelensis in both groups front to alkaline of the three developmental forms of the parasite extracts. In all comparative ELISA extracts were skilled in detecting IgG S. venezuelensis. The extract of larvae showed reactivity from the 5th dpi ceasing at 21th d.p.i in the non-immunosuppressed group while the group immunosuppressed this reactivity remained at 21th d.p.i. immunoblotting showed the reactivity profile with immunoreactive fractions in immunosuppressed group from the 5th d.p.i. while the non-immunosuppressed group reactivity from 8th d.p.i. The alkali extracts of parthenogenetic females and eggs showed a similar profile of reactivity in both ELISA and immunoblotting. Immunoreactive protein fractions of 26 and 17 kDa present in the alkaline extract of larvae presented as important markers of infection in immunosuppressed animals. It is concluded that all alkali extracts have diagnostic potential in experimental strongyloidiasis especially the larval extract in cases of immunosuppression, and immunoblotting an important complementary diagnostic tool. O nematódeo Strongyloides stercoralis é responsável pela estrongiloidíase cujo diagnóstico é realizado pela detecção de larvas nas fezes. Porém a baixa eliminação de larvas dificulta a detecção da doença em especial em casos de imunossupressão. Testes imunodiagnósticos têm sido desenvolvidos, porém há dificuldade de se obter larvas de S. stercoralis para a produção de extrato antigênico homólogo assim o parasito Strongyloides venezuelensis e suas diferentes formas evolutivas são utilizados para produção de extratos antigênicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a detecção de anticorpos anti S. venezuelensis a partir de extratos alcalinos de larvas L3, fêmeas partenogenéticas ou ovos na estrongiloidíase experimental associada à imunossupressão. Ratos machos foram divididos em dois grupos: não-imunossuprimidos e imunossuprimidos experimentalmente infectados e o soro de todos os animais foram obtidos no 0, 5º, 8º, 13º e 21º dias pós-infecção (d.p.i.). O teste enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) foi realizado para comparar o potencial reativo dos extratos alcalinos de larva L3, fêmeas partenogenéticas e ovos de S. venezuelensis em ratos não-imunossuprimidos e imunossuprimido. Immunoblotting foi avaliado quanto sua detecção de IgG anti S. venezuelensis em ambos os grupos frente aos extratos alcalinos das três formas evolutivas do parasito. No ELISA comparativo todos extratos foram efetivos na detecção de anti-IgG de S. venezuelensis. O extrato de larvas apresentou reatividade a partir do 5º d.p.i cessando no 21º d.p.i. no grupo não-imunossuprimido enquanto o grupo imunossuprimido essa reatividade permaneceu no 21º d.p.i.. O immunoblotting apresentou perfil de reatividade com frações imunorreativas no grupo imunossuprimido a partir do 5º d.p.i. enquanto o grupo não-imunossuprimido a reatividade a partir do 8º d.p.i. Os extratos alcalinos de fêmeas partenogenéticas e de ovos apresentaram similar perfil de reatividade tanto no ELISA comparativo quanto no immunoblotting. Frações proteicas imunorreativas de 26 e 17 kDa presentes no extrato alcalino de larvas apresentaram como importantes marcadores de infecção em animais imunossuprimidos. Conclui-se que todos os extratos alcalinos possuem potencial diagnóstico na estrongiloidíase experimental com destaque para o extrato de larvas em casos de imunossupressão, sendo o immunoblotting uma importante ferramenta diagnóstica complementar. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The specie Strongyloides venezuelensis is a parasite of rodents used in the study of parasite host relationship in helminth infected animals due to their resemblance of the cycle of Strongyloides stercoralis. The Syphacia muris is a nematode found in large numbers in the cecum of laboratory rats. The present study aimed carry out assessment parasitological and the cross-reactivity among rats (Rattus norvegicus) Wistar naturally infected with S. muris and experimentally infected with S. venezuelensis. Forty animals were used divided into four groups of 10 animals for evaluating the parasite load by quantification of helminths recovered from the intestines of animals and quantification of eggs S. venezuelensis per gram of feces. For cross-reactivity ELISA and immunoblotting were used. In addition, thirty animals were used for comparison of diagnostic methods for S. muris using the methods HPJ, Willis and Graham. Was demonstrated that elimination of eggs as well as the amount female parthenogenetic of S. venezuelensis decreases significantly by coinfection for S. muris. The method of Graham was the most effective in the detection of S. muris infection in rats. In ELISA was observed high cross reactivity at the sera from all rats infected with S. muris front to the total saline extract of S. venezuelensis and all animals infected only with S. venezuelensis front to the saline extract of S. muris. By immunoblotting demonstrated cross reactivity of IgG antibodies in sera from animals infected only with S. muris and recognition eight bands in the saline extract of S. venezuelensis. Of these only the bands of 68 and 102 kDa were considered to be immunodominant in specific serum from animals infected only with S. muris. In the sera from animals infected with S. venezuelensis there was the cross recognition of seven bands, and the 36, 91 and 149 kDa demonstrated the major peaks of reaction. The adaptive immune response generated for S. muris may have influenced in the infection by S. venezuelensis in coinfected animals, decreasing the animal load parasitic. This fact can be explained by antigenic similarity between the parasites and cross protection by IgG antibodies to antigens initially generated by S. muris. Given this, the rats kept in animal facilities should be periodically evaluated, once that infections with S. muris may compromise and interfere with experimental results with S. venezuelensis. A espécie Strongyloides venezuelensisé um parasito de roedores utilizado no estudo da relação parasito/hospedeiro em animais infectados pelo helminto devido àsemelhança do ciclo biológico de Strongyloides stercoralis. O nematódeo Syphacia muris é encontrado em grande número no ceco de ratos mantidos em biotério. Opresenteestudo teve como objetivoproceder aavaliação parasitológica edareatividade cruzada entre ratos(Rattus norvegicus)Wistarnaturalmente infectados com S. muris e experimentalmente infectadoscom S. venezuelensis.Foram utilizados 40 animais divididos em quatro grupos de 10 animais para avaliação de carga parasitária através da quantificação dos helmintos recuperados dos intestinos dos animais e também da quantificação de ovos por gramas de fezes se S. venezuelensis. Para a reatividade cruzada foram utilizados ELISA e immunoblotting. Além disso, 30 animais foram utilizados para comparação de métodos de diagnóstico de S. muris pelos métodos de HPJ, Willis e Graham. Foi demonstrado que a eliminação de ovos bem como a quantidade de fêmeas partenogenéticas de S. venezuelensis diminui significativamente pela coinfecção por S. muris. O método de Graham foi o mais eficaz na detecção da infecção por S. muris em ratos Wistar. No ELISA foi observada elevada reatividade cruzada das amostras de soro de todos os ratos infectados com S. muris frente ao extrato salino total de S. venezuelensis e de todos os animais infectados apenas com S. venezuelensis frente ao extrato salino de S. muris. Por immunoblotting foi demonstrado reatividade cruzada em anticorpos IgG presentes em amostra de soro de animais infectados apenas com S. muris e o reconhecimento de oito bandas no extrato salino de S. venezuelensis. Destas, apenas as bandas de 68 e 102 kDa foram consideradas imunodominantes em amostras de soro específico proveniente de animais infectados apenas com S. muris. Nas amostras de soro de animais infectados com S. venezuelensis houve o reconhecimento cruzado de sete bandas antigênicas, sendo que as de 36, 91 e 149 kDa demonstraram maiores picos de reação. A resposta imune gerada a S. muris pode ter influenciado na infecção por S. venezuelensis nos animais coinfectados, diminuindo a carga parasitária dos animais. Esse fato pode ser justificado pela semelhança antigênica entre os parasitos e proteção parcial cruzada pelos anticorpos IgG gerados inicialmente aos antígenos S. muris. Diante disso, os animais mantidos em biotério devem ser periodicamente avaliados uma vez que infecções com S. muris podem comprometer e interferir nos resultados experimentais com S. venezuelensis. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Resumo: O intuito deste trabalho foi verificar se o vírus da Artrite Encefalite Caprina interfere nos parâmetros clínicos, fisiológicos e hematológicos de reprodutores caprinos com infecção recente ou crônica e também analisar a técnica sorológica de Western Blotting em amostras de plasma seminal na detecção de anticorpos anti-CAEV em comparação às amostras de soro sanguíneos. Foram utilizados 12 reprodutores caprinos de diferentes raças, em bom estado de saúde de acordo com exame clínico geral realizado, os quais foram mantidos durante todo o período experimental (270 dias) em regime intensivo de produção. Os machos tinham de três a quatro anos de idade, e foram selecionados com base no quadro sorológico para o CAEV, sendo seis soropositivos (com infecção natural crônica há mais de 12 meses) e seis soronegativos, obtidos após três testes consecutivos de Western Blottting (WB) e de Nested-PCR (nPCR) no sangue, com intervalo de 30 dias. Os animais foram divididos inicialmente em dois grupos: o grupo de machos com infecção crônica e o grupo de macho pré-infecção. Após 90 dias do início do experimento, os seis machos pré-infecção foram inoculados com a cepa viral CAEV-Cork, título 105,6 TCID50/mL, por via intravenosa. A partir da inoculação viral o grupo pré-infecção passou a ser denominado de grupo de reprodutores com infecção recente e foram acompanhados semanalmente por testes de WB no soro sanguíneo e plasma seminal. Todos os animais inoculados com o CAEV-Cork, soroconverteram após a terceira semana. Os reprodutores de ambos os grupos apresentaram parâmetros fisiológicos e hematológicos dentro dos padrões de normalidade para espécie. Quanto aos parâmetros de comportamento sexual, foi observado que os animais não apresentaram receio à presença do homem em sala de coleta e que a maioria realizou o comportamento de cortejo da fêmea. O tempo de reação não diferiu (p>0,05) entre os grupos e está dentro dos parâmetros normais para a espécie. Entre os animais dos grupos de reprodutores pré-infecção e com infecção crônica para o CAEV que tiveram seu sêmen submetido à avaliação in vitro, através de espermograma, não houve diferença estatística (p>0,05) para os parâmetros de concentração, motilidade e vigor, com exceção apenas do volume do grupo pré-infecção, situação que permaneceu após a realização da infecção. Além disso, estes parâmetros estiveram dentro dos padrões recomendados pelo CBRA (2013). Assim, pode-se concluir que o CAEV não interferiu nos parâmetros fisiológicos e hematológicos de reprodutores caprinos, independente do tempo de infecção do CAEV, mantendo os parâmetros avaliados dentro dos padrões de referência para a espécie. Em adição, a CAE não altera o padrão de comportamento sexual, porém quando os animais apresentam artrite há um quadro de dor e desconforto, afetando o comportamento sexual e comprometendo o bem-estar do reprodutor. Observamos que animais com infecção recente apresentam maior porcentagem de resultados positivos no Western Blotting, tanto no plasma seminal como no soro sanguíneo, do que os animais com infecção crônica, consolidando a importância do diagnóstico precoce do CAEV. Já o diagnóstico de WB em amostras de soro sanguíneo é mais eficiente do que de plasma seminal, independente do tempo de infecção. No entanto, é uma alternativa válida de diagnóstico do CAEV. The aim of this work was to verify if the Caprine Arthritis Encephalitis virus interferes with the clinical, physiological and hematological parameters for breeding with recent or chronic infection and also examine, the technique of Western Blotting in samples of seminal plasma in the detection of anti-CAEV in compared to samples of blood serum. 12 breeding goats of different breeds were used, in good health according to general clinical examination, which were maintained throughout the experimental period (270 days) in intensive system of production. Males of three to four years of age, and were selected based on serological framework for CAEV, six seropositive (chronic natural infection for more than 12 months) and six seronegative obtained after three consecutive tests Western Blotting (WB) and Nested-PCR (nPCR) in the blood, with an interval of 30 days. The animals were divided initially into two groups: the group of males with chronic infection and the group of pre-infection male. 90 days after the beginning of the experiment, six male pre-infection were inoculated with the viral strain CAEV-Cork title TCID50/mL 105.6 intravenously. From the viral inoculation pre-infection group came to be named the group of breeding animals with recent infection and were monitored weekly for WB testing in blood serum and seminal plasma. All animals inoculated with CAEV-Cork, seroconverted after the third week. Breeders of both groups showed physiological and hematological parameters within normal limits for the species. Regarding the parameters of sexual behavior, it was observed that the animals showed no fear to the man in the collection room and realized that the majority held the courtship behavior of the female. The reaction time did not differ (p> 0.05) between groups and is within normal parameters for the species. Among the animals in groups of breeding pre-infection and chronic infection for CAEV which had their semen submitted to in vitro evaluation through semen analysis showed no statistical difference (p>0.05) for the parameters of concentration, motility and force, with the exception only of the volume of pre-infection group, a situation that remained after the completion of the infection. Furthermore, these parameters were within recommended by CBRA (2013) standards. Thus, we can conclude that the CAEV did not interfere with physiological and hematological parameters of breeding, regardless of time of CAEV infection by keeping the parameters evaluated in the reference standards for the species. In addition, the CAE does not alter the pattern of sexual behavior, but when they show arthritis there is a picture of pain and discomfort, affecting sexual behavior and compromising the welfare of the breeder. We observed that animals with recent infection have a higher percentage of positive results in Western Blotting, both in seminal plasma and blood serum than animals with chronic infection, strengthening the importance of early diagnosis of CAEV. Since the diagnosis of WB in blood serum samples is more efficient than seminal plasma, regardless of the time of infection. However, it is a valid alternative for the diagnosis of CAEV. Dissertação (Mestrado em Zootecnia. Área de Concentração: Reprodução Animal) - Centro de Ciências Agrárias e Biológicas, Universidade Estadual Vale do Acaraú, Sobral. Orientadora: Alice Andrioli Pinheiro; Co-orientador: Raymundo Rizaldo Pinheiro.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-14Bitstream added on 2014-08-13T18:00:47Z : No. of bitstreams: 1 000753373.pdf: 543622 bytes, checksum: 568807a679f23679d4c54335db59a4d0 (MD5) O reaparecimento de manifestações clínicas após tratamento eficaz, neste texto identificado como recaída, tem sido pouco avaliado. Assim, foram estudados os casos de recaída observados em 400 pacientes, 93 com a forma aguda/subaguda (FA) e 307 com a crônica (FC), que já tinham apresentado cura aparente, isto é, com cura clínica, normalização da velocidade de hemossedimentação e cura sorológica – caracterizada pela presença de teste negativo à imunodifusão dupla em gel de agar por dois anos. Vinte e um (5,2%) desses pacientes apresentaram recaídas da doença. Três (14,3%) eram do sexo feminino e 18 (85,7%) do masculino, com razão de masculinidade de 6:1. Dos 21 pacientes com recaída, 15 (4,8%) apresentavam a FC e 6 (6,4%) a FA (p>0,05). As reativações ocorreram de 46 a 296 meses após introdução do tratamento (Md=96) e de 4 a 267 meses (Md= 60) após sua suspensão. As formas clínicas não diferiram quanto aos tempos decorridos até a reativação. O diagnóstico sorológico de recaída pela IDD foi feito em apenas 45% dos casos, o que levou à avaliação de outros testes para esse fim. Assim, foi realizado o enzimaimunoensaio (ELISA) e o immunoblotting (IB). A sensibilidade da IDD e do ELISA / 0,710 foi 76,1% em amostras de soro obtidos no pré-tratamento (p=0,25). No diagnóstico de recaída, a sensibilidade da IDD foi menor que no pré-tratamento (80% vs 45%; p=0,017), enquanto o ELISA / 0,710 foi igual (80% vs 65%;p=0,125). A sensibilidade do IB para diagnóstico de recaída foi de 12,5% na identificação da gp70 e 43,8% na da gp43 (p0.05). The relapse occurred 46-296 months after introduction of the treatment (Md=8 yrs) and from 4 to 267 months (Md=5 yrs) after withdrawal. Clinical forms did not differ regarding to the time elapsed until relapse. DID was positive in only 45% of the relapsed cases, which led to the evaluation of other tests to diagnose this condition. Thus, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was standardized and the cut off was determined using the curve receiver operator characteristic – ROC and confidence intervals of 95% and 99%, showing optical densities of 0.710 and 0.850, respectively. Then, serological evaluation was performed using ELISA/0.710 and ELISA/0.850, and immunoblotting identifying gp43 (IBgp43) and gp70 (IBgp70). ELISA 0.710 and DID showed the same sensitivity, 76.1%, in serum samples obtained before treatment (p=0.25). DID sensitivity was lower at relapse than before the initial treatment (45% vs 80%; p=0.017), whereas ELISA/0,710 was the same (65% vs 80%; p=0.125). IBgp70 showed a 12.5% and IBgp43 a 43.8% sensitivity for diagnosing relapse (p

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:56:38Z No. of bitstreams: 1 S0102-09352012000400021.pdf: 565183 bytes, checksum: 8b19265d3d9a11ce0fc44b10af4a7995 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0102-09352012000400021.pdf: 565183 bytes, checksum: 8b19265d3d9a11ce0fc44b10af4a7995 (MD5) Previous issue date: 2012-08-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T19:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0102-09352012000400021.pdf: 565183 bytes, checksum: 8b19265d3d9a11ce0fc44b10af4a7995 (MD5) S0102-09352012000400021.pdf.txt: 27704 bytes, checksum: 955dff7a0523fb320a5406dd58e3cc62 (MD5) Previous issue date: 2012-08-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T15:13:11Z No. of bitstreams: 2 S0102-09352012000400021.pdf: 565183 bytes, checksum: 8b19265d3d9a11ce0fc44b10af4a7995 (MD5) S0102-09352012000400021.pdf.txt: 27704 bytes, checksum: 955dff7a0523fb320a5406dd58e3cc62 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T15:13:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0102-09352012000400021.pdf: 565183 bytes, checksum: 8b19265d3d9a11ce0fc44b10af4a7995 (MD5) S0102-09352012000400021.pdf.txt: 27704 bytes, checksum: 955dff7a0523fb320a5406dd58e3cc62 (MD5) Previous issue date: 2012-08-01 Este estudo teve como objetivo produzir um antígeno (Ag) a partir de cultura de células de membrana sinovial caprina (MSC) infectadas com o vírus de artrite encefalite caprina (CAEV), pela técnica de microfiltração seriada, substituindo a ultracentrifugação em colchão de sacarose (UCCS) para utilização em ELISA indireto (ELISA-i). Amostras de 188 soros caprinos, que previamente foram testados pelo Western blot (WB) com Ag UCCS, foram submetidas à análise pelo ELISA-i com o novo antígeno produzido, que mostrou concordância de 92% em relação ao antígeno UCCS. A sensibilidade e a especificidade do ELISA em relação ao WB foram de 95,6% e 88,5%, respectivamente. A nova técnica, criada a partir de microfiltrações, mostrou-se efetiva e de baixo custo para o diagnóstico sorológico de anticorpos para CAEV em comparação ao antígeno ultracentrifugado, e constitui uma alternativa viável para produção de antígeno purificado de lentivírus de pequenos ruminantes. This study aimed to produce an antigen (Ag) from the culture of goat synovial membrane cells (MSC) infected by CAEV through serial microfiltering technique replacing ultra ultracentrifugation in sacarosis Mattress (UCCS) for the indirect diagnosis ELISA tests (i ELISA). Samples of 188 sera from goats previously examined by Western Blot (WB) with Ag UCCS were submitted to analysis by i ELISA with new antigen produced, demonstrating an accordance of 92% in relation to UCCS antigen. The specificity and sensitivity relating to WB were of 95,65% and 88, 5% respectively. The new technique created from the microfiltering is effective and with low cost for the serological antibodies diagnosis of CAEV comparing to the ultracentrifuged one, presenting, therefore, as a viable alternative for purified antigen of lentivirus in small ruminants. Universidade Estadual do Ceará Faculdade de Veterinária Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Caprinos e Ovinos Universidade Estadual Paulista Faculdade de Agricultura e Ciências Veterinárias Universidade Estadual Paulista Faculdade de Agricultura e Ciências Veterinárias

A alergia ao dióspiro é rara, não estando identificados os alergénios envolvidos. Descreve -se o caso de uma doente de 24 anos, com história pessoal de rinite alérgica, sensibilizada a ácaros e a pólen de gramíneas, que refere a ocorrência de dois episódios de início súbito de prurido e edema labial, seguidos de tonturas, dor abdominal e vómitos persistentes, minutos após a ingestão de dióspiro, fruto que anteriormente tolerava. O teste cutâneo por picada com este fruto em natureza foi positivo, bem como o doseamento de IgE específica. No immunoblotting com extracto de dióspiro identificou-se uma banda de 40 kDa. A alergia ao dióspiro pode ser grave. Os resultados obtidos apoiam o diagnóstico de anafilaxia a dióspiro mediada por IgE. A proteína de 40 kDa pode constituir um alergénio major do dióspiro, dado que bandas com pesos moleculares similares foram identificadas em cinco do total dos oito casos documentados na literatura Persimmon allergy is rare. The involved allergens have not been identified, yet. We describe a case of a 24-year-old woman, with allergic rhinitis, sensitized to house dust mites and grass pollen. The patient reports two episodes of lip pruritus and oedema, followed by dizziness, abdominal pain and persistent vomiting, immediately after eating raw persimmon, a fruit she used to tolerate. The prick-prick test with raw persimmon was positive as well as the specific IgE to this fruit’s extract. The immunoblotting with persimmon extract showed a band of 40 kDa. Persimmon allergy may be severe. Our results support the diagnosis of IgE -mediated anaphylaxis to persimmon. The 40 kDa protein may be a major persimmon allergen, since IgE -binding bands with similar molecular weights had also been identified by immunoblotting in five out of a total of eight documented persimmon allergy published case reports

A alergia ao dióspiro é rara, não estando identificados os alergénios envolvidos. Descreve -se o caso de uma doente de 24 anos, com história pessoal de rinite alérgica, sensibilizada a ácaros e a pólen de gramíneas, que refere a ocorrência de dois episódios de início súbito de prurido e edema labial, seguidos de tonturas, dor abdominal e vómitos persistentes, minutos após a ingestão de dióspiro, fruto que anteriormente tolerava. O teste cutâneo por picada com este fruto em natureza foi positivo, bem como o doseamento de IgE específica. No immunoblotting com extracto de dióspiro identificou- -se uma banda de 40 kDa. A alergia ao dióspiro pode ser grave. Os resultados obtidos apoiam o diagnóstico de anafilaxia a dióspiro mediada por IgE. A proteína de 40 kDa pode constituir um alergénio major do dióspiro, dado que bandas com pesos moleculares similares foram identificadas em cinco do total dos oito casos documentados na literatura. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Paracoccidioidomycosis (PCM) caused by a dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, is the main systemic mycosis of Latin America. Experimental models are important in the PCM study. The objective of this study was evaluate the specific humoral response (IgG, IgG1 and IgG2a) of Calomys callosus infected experimentally with P. brasiliensis and to identify patterns of antigenic recognition comparatively to susceptible (B10.A) and resistant (A/Sn) mice. The animals were infected with 0.6 x 105 yeasts de P. brasiliensis (Pb18 isolate). Lung, liver, spleen and serum samples were collected at 7, 15, 30, 60, 90 and 120 days after infection. We noticed that in the histological findings the infection evolved gradually in the studied groups, with more prominent inflammation in C. callosus, especially in the lung. In ELISA assay, the levels of IgG and IgG1 were similar for the three groups, but when we consider the IgG2a levels, C. callosus presented the lowest levels. In immunoblotting assays, the immunodominant bands (antigens) that were common to the three animals groups recognized by IgG1 were 117, 110, 95-100, 70, 43, 36 and 24kDa and by IgG2a were 95-100, 43 and 29kDa. Considering the IgG2a response, the frequency of antigenic recognition by the C. callosus serum and the band intensity were lesser than B10.A and A/Sn mice. In conclusion, C. callosus, inoculated with 0.6 x 105 P. brasiliensis yeasts, presented greater susceptibility to the infection, with a higher degree of tissue injuries, lower response of IgG2a and a lesser recognition of antigenic fractions with a lower intensity, when as compared to murine experimental model. A paracoccidioidomicose (PCM) causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é a principal micose sistêmica da América Latina. Modelos experimentais são importantes no estudo da PCM. O objetivo desse trabalho foi avaliar a resposta humoral específica (IgG, IgG1 e IgG2a) de Calomys callosus experimentalmente infectados com P. brasiliensis e identificar padrões de reconhecimento antigênico comparativamente aos dos camundongos considerados susceptíveis (B10.A) e resistentes (A/Sn) à infecção. Os animais foram infectados com 0,6 x 105 leveduras de P. brasiliensis (isolado Pb18). Pulmão, fígado, baço e amostras de soro foram coletados aos 7, 15, 30, 60, 90 e 120 dias após a infecção. Nos achados histológicos a infecção evoluiu gradativamente nos grupos estudados, com uma inflamação mais proeminente nos C. callosus, sobretudo nos pulmões. No ensaio ELISA, os níveis de IgG e IgG1 foram similares para os três grupos, mas quando o anticorpo IgG2a foi considerado, C. callosus apresentou os níveis mais baixos. Nos ensaios de immunoblotting as bandas (antígenos) imunodominantes comuns aos três grupos de animais reconhecidas por IgG1 foram as de 117, 110, 95-100, 70, 43, 36 e 24kDa, e por pela IgG2a foram as de 95- 100, 43 e 29kDa. Considerando a resposta de IgG2a, a freqüência de reconhecimento antigênico pelos soros dos C. callosus e também intensidade das bandas foram menores do que nos camundongos B10.A e A/Sn. Em conclusão, C. callosus inoculado com 0,6 x 105 leveduras de P. brasiliensis, apresentou uma maior susceptibilidade à infecção, com um alto grau de lesões teciduais, uma menor resposta do anticorpo IgG2a e um menor reconhecimento das frações antigênicas com uma intensidade menor, quando comparado aos modelos experimentais murinos. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T19:24:33Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_ks_dr_jabo.pdf: 9693100 bytes, checksum: cbce02641faf86a0db97373d5c457eff (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O aumento da glândula prostática canina com o envelhecimento pode ser decorrente de uma proliferação excessiva do estroma e epitélio acinar, uma diminuição na taxa de apoptose, entre outros. Esses processos celulares são mediados por hormônios, fatores de crescimento e proteínas, dentre elas podemos citar as proteínas CYR61 e p-ERK1/2 e os fatores de crescimento EGF, TGF- e EGFr. Próstatas originadas de 29 cães, com pesos variando entre 6 a 40 kg, foram retiradas, lavadas e pesadas e o volume medido, os valores variaram em 3,8 a 130 g e 2,4 a 90 cm3 respectivamente. Dos fragmentos avaliados 55,17% apresentaram diagnóstico de HPB-ep e 5,75% apresentaram diagnóstico normal. Exames de IHQ foram realizados e para a proteína CYR61 houve uma forte imunorreatividade nas FML, MLA e núcleo das células epiteliais dos fragmentos avaliados. Houve diferenças estatísticas entre grupos de HPB quanto a fração da área de marcação, no exame de W.B. a proteína teve como peso molecular médio 37,72 kDa. Quanto ao EGF houve uma predominância de marcação na FML e núcleo das células epiteliais, os pesos moleculares médio deste fator de crescimento foi de 47,03 e 41,65 kDa nos fragmentos prostáticos avaliados. O TGF- teve imunorreatividade nas FML e citoplasma das células epiteliais, e no exame de W.B. houve 2 bandas de pesos moleculares médios de 52,23 e 38,88 kDa. O receptor de membrana EGFr apresentou imunorreatividade nas FML e núcleo das células epiteliais, no W.B. houve apenas uma banda visível de peso molecular médio de 48,49 kDa. A proteína p-ERK1/2 esteve predominante nas FML e núcleo das células e no W.B. apresentou 3 bandas de pesos moleculares médios de 42,61; 39,56 e 37,26 kDa. Houve correlação positiva entre as proteínas e os fatores de crescimento. The canine prostate gland enlargement also aging could be resulting of excessive stroma and acinar epithelium proliferation, reduced apoptosis, among other. These cellular mechanisms are mediated by hormones, growth factors and proteins, like the proteins CYR61 and p-ERK1/2 and the growth factors EGF, TGF- e EGFr. Prostate from 29 dogs, weighing 6 to 40 kg, were collected, washed, wheighed and volume was measured, with average from 3,8 to 130 g and 2,4 to 90 cm3 respectively. Approximately 55,17% of samples were diagnosed with HPB-ep and 5,75% were normal. IHQ exams were accomplished and high CYR61 immunoreactivity in SMF, ASM and epithelial cells nucleus was observed. There were statistical differences between BHP groups related to immunoreactivity area, by means of W. B. and the mean molecular weight was 37,72 kDa. By analyzing EGF, immunoreactivity in SMF epithelial cells nucleus was prevalent, the mean molecular weights was 47,03 41,65 kDa. TGF- presented immunoreactivity in SMF and epithelial cells cytoplasm and W.B. showed two bands with mean weight 52,23 and 38,88 kDa. The EGFr membrane receptor presented immunoreactivity in SMF and epithelial cells nucleus, W.B. showed only one visible band with mean molecular weight 48,49 kDa. The p-ERK1/2 protein was prevalent in SMF and cell nucleus, W.B. showed three bands with mean molecular weights 42, 61; 39,56 and 37,26 kDa. There was positive correlation between proteins and growth factors.

Application of Taenia saginata metacestodes as alternative antigen is an important alternative for neurocysticercosis (NC) serodiagnosis. The cross reaction with Echinococcus granulosus infection occurred in homologous and heterologous antigens, and could be avoid with different purified methods. This study analyzed antigen fractions obtained from crude saline extract of T. saginata metacestodes purified by affinity chromatography with the lectin jacalin (unbound and bound fraction), concanavalin A (unbound and bound fraction), concanavalin A using jacalina unbound fraction (unbound and bound fraction) and N-acetil (unbound and bound fraction). The fraction were tested for the detection of IgG antibodies by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and immunoblot for the laboratory diagnosis of human NC. The application of T. saginata metacestodes as an alternative antigen for use in ELISA and WB tests compared with the metacestodes antigen of Taenia solium in CFS samples was also analyzed. Serum samples were obtained from 142 individuals: 40 were diagnosed with NC, 62 presented Taenia sp. and other parasitic diseases and 40 were apparently healthy individuals. The CSF samples were obtained from 35 patients with definitive neurocysticercosis; and 35 patients with other neurological disorder. Among the fractions, unbound concanavalin A demonstrated statically higher sensitivity and specificity by ELISA (90% and 93.1 %, respectively). By Immunoblot, the concanavalin unbound showed 100% of sensitivity and specificity, where only serum samples from patients with NC recognized the protein of 64-68 kDa, so this antigen fraction may be used as specific antigen for diagnosis of NC. The sensitivity and specificity of ELISA using antigen obtained from T. solium applied to CSF samples results of 100%. When the tests were conducted using T. saginata metacestodes, results were 100% and 94.3%, respectively. The 47-52, 64-68 and 70 kDa antigens were recognized by only CSF samples from patients with NC. The results indicated that T. saginata metacestodes can be used as alternative antigen for NC diagnosis using LCR samples. A utilização de metacestódeos de Taenia saginata como antígeno alternativo constitui uma importante ferramenta no sorodiagnóstico da neurocisticercose humana (NC). A reatividade cruzada com indivíduos infectados por Echinococcus granulosus é comum em antígenos homólogos e heterólogos, podendo ser evitada com diferentes métodos de purificação. O presente estudo analisou as diferentes frações antigênicas obtidas, a partir do extrato salino total de metacestódeos de T. saginata, por cromatografia de afinidade em coluna de Jacalina (fração ligante e não ligante), de Concanavalina A (fração ligante e não ligante), de Concanavalina A utilizando a fração não ligante de Jacalina (fração ligante e não ligante) e Coluna de N-acetil (fração ligante e não ligante). As frações foram avaliadas quanto a detecção de anticorpos IgG anti-metacestódeos de Taenia solium nos testes ELISA e Immunoblotting. Foi avaliada a utilização do extrato salino total de metacestódeos de T. saginata como antígeno alternativo nos testes ELISA e Immunoblotting para detecção de anticorpos IgG no LCR. Foram obtidas 142 amostras de soro, sendo 40 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC, 62 de indivíduos infectados por Taenia sp e por outros parasitos e 40 de indivíduos saudáveis. Foram coletadas 70 amostras de LCR, sendo 35 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC e 35 de indivíduos com outras manifestações neurológicas. Entre todas as frações analisadas, a fração não ligante de Concanavalina A demonstrou maior sensibilidade e especificidade pelo teste ELISA em amostras de soro (90% e 93,1%, respectivamente). Pelo Immunoblotting esta mesma fração demonstrou 100% de sensibilidade e especificidade, sendo que apenas pacientes com NC reconheceram a banda especifica de 64-68 kDa, indicando que esta fração antigênica pode se usada como antígeno especifico no sorodiagnóstico da NC humana. A sensibilidade e especificidade do teste ELISA utilizando o antígeno homólogo no LCR humano foi de 100%. Quando este teste foi conduzido com o antígeno heterólogo obteve-se 100% de sensibilidade e 94,3% de especificidade. Na reação de Immunoblotting as bandas antigênicas de 47-52, 64-68 e 70 kDa foram reconhecidas exclusivamente no LCR de pacientes com NC. Os resultados conferem ao extrato salino de T. saginata sensibilidade e especificidade para ser utilizado como antígeno alternativo para o diagnostico da NC no LCR. Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Neurocysticercosis (NC) caused by the Taenia solium metacestodes usually affects the central nervous system and can be confused with other brain pathologies, which present similar clinical and image findings. This parasitose is endemic in Brazil and the serological diagnosis of NC is of great importance in routine clinical management of patients. The search for alternative antigens for NC immunodiagnosis is importance because of the difficulty of obtaining parasites from naturally infected pigs for the preparation of metacestodes T. solium homologous antigen. Once that purified antigen is more sensitive and specific than crude saline extracts, the objective of this study was to evaluate the performance of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and Immunoblotting (IB) for the serological diagnosis of human NC, using the crude saline extract (Crude) obtained from T. saginata metacestodes and two fractions of this extract, hydrophobic or detergent fraction (D) and hydrophilic or aqueous fraction (A), purified by extraction with Triton X-114 as alternative purified antigens for the diagnosis of human NC. Serum samples were obtained from 115 individuals: 40 patients with a definitive diagnosis of NC, 45 patients with Taenia sp. and with other parasitic diseases and 30 apparently healthy individuals. The serum samples were diluted 1:200 for ELISA but only the samples positives were diluted 1:100 and evaluated in IB. ELISA sensitivity and specificity were 95% and 73.3% when using Crude, 95% and 82.6% for D phase and 65% and 61.3% for A phase, respectively. The diagnostic efficiency and Youden index were: 83.9% and 0.74 (Crude), 88.5% and 0.80 (D phase) and 72.8 % and 0.46 (A phase), respectively. IB of the antigens confirmed the results obtained by ELISA, and the D phase antigen proved to be more specific than other extracts, showing only one immunodominant protein of 70-64 kDa that was the most frequent (92.5%) among patients with NC. Our results suggest that the D phase obtained with Triton X-114 can be used as heterologous purified antigen for the serological diagnosis of human NC in the IB. A Neurocisticercose (NC), resultado do acometimento do sistema nervoso central pelas formas metacestódeas de Taenia solium, é uma doença polimórfica podendo ser confundida com outras síndromes neurológicas que apresentam achados clínicos e de imagem similares. Uma vez que esta parasitose é endêmica no Brasil o diagnóstico sorológico é de grande importância, pois auxilia na rotina laboratorial de pacientes com suspeita clínica. A busca por antígenos alternativos se faz necessária diante da dificuldade de obtenção de suínos naturalmente infectados com metacestódeos de T. solium, para a produção do antígeno homólogo. Uma vez que antígenos purificados apresentam sensibilidade e especificidade superiores aos extratos totais, o objetivo deste estudo foi avaliar os testes enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) e Immunoblotting (IB) no diagnóstico sorológico da NC humana utilizando o extrato salino total (S) de metacestódeos de Taenia saginata e suas frações purificadas com Triton X-114 (TX-114). Uma alíquota do extrato S foi fracionada com TX-114, para obtenção das frações antigênicas: hidrofóbica ou detergente (D) e hidrofílica ou aquosa (A). Os extratos antigênicos foram analisados em SDS-PAGE 12% e utilizados no ELISA na concentração de 10μg/mL. Foram analisadas 115 amostras de soro: 40 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC, 45 de pacientes com Taenia sp. e por outros parasitos e 30 de indivíduos saudáveis. As amostras foram diluídas a 1:200 para o ELISA, sendo apenas as positivas submetidas ao IB, na diluição de 1:100. A sensibilidade e especificidade do ELISA foram: 95% e 73,3% (S), 95% e 82,6% (D) e 65% e 61,3% (A), respectivamente. O cálculo de eficiência do diagnóstico e Youden Index foram: 83,9% e 0,74 (S); 88,5% e 0,80 (D) e 72,8 % e 0,46 (A), respectivamente. No IB a fração D apresentou com exclusividade a banda imunodominante de 70-64 kDa, sendo detectada em 92,5% dos pacientes com NC. A fração D foi significativamente mais eficiente que a fração A, tanto no ELISA quanto no IB, sendo assim, recomendada como antígeno heterólogo purificado no diagnóstico sorológico da NC humana no IB. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Background: Lolium multiflorum (Lm) grass pollen, Poaceae family, is the major cause of pollinosis in South Brazil. There are no studies evaluating the cross-reactivity between allergenic fractions from L. multiflorum and other pollen grass species. Objective: To evaluate the sensitization to Lm pollen allergens in patients with pollinosis through the detection of specific IgE by skin prick test (SPT) and immunoassays (ELISA). To characterize immunodominant fractions from L. multiflorum pollen allergens, and crossreactivity with other allergens from commercial grass pollen extracts. Methods: Thirty eight serum samples from patients with seasonal allergic rhinitis (SAR group), 35 serum samples from patients with perennial allergic rhinitis (PAR group) and 30 serum samples from non atopic patients (NA group) were tested for IgE reactivity. The sensitization was evaluated using SPT and IgE specific levels against L. multiflorum pollen extract were determined by ELISA. Inhibition ELISA and Immunoblotting were used to evaluate the cross-reactivity between allergens from L. multiflorum and commercial grass pollen extracts. Results: Serum specific IgE antibodies against Lm were detected in 100% of patients from SAR group and in 8.6% of patients from PAR group. Inhibitions observed in specific IgE ELISA demonstrated Lm cross-reactivity between homologous (Lm) and heterologous (L. perenne [Lp] or Gramíneas II [GII]) grass pollen extracts, but not for Gramíneas I (GI). Fourteen IgE binding fractions were observed and the fractions of 26, 28 and 32 kDa were the most frequent (> 90%). For IgE Immunoblotting inhibition Lm, Lp and GII inhibited significantly IgE binding to the most Immunodominant fractions of Lm, particularly the 55kDa fraction. The 26 kDa fraction were not inhibited by the Lp extract, but it was inhibited by Lm and, GII in lower proportion. Conclusion: Lm pollen extract is more appropriate instead of other phylogenetic related grass pollens for determining quantitative sensitization in diagnostic and therapeutic purposes to pollinosis due to L. multiflorum pollen. RESUMO Introdução: Lolium multiflorum (Lm), gramínea da família Poaceae, é a principal causadora de polinose na região Sul do Brasil. Não há ainda estudos de reatividade cruzada entre frações alergênicas de pólen de L. multiflorum com de outras espécies de gramíneas. Objetivos: Avaliar a sensibilização a alérgenos de pólen de Lm em pacientes com polinose por teste cutâneo de puntura (TCP) e da detecção de IgE específica por ensaio imunoenzimático (ELISA). Determinar a reatividade cruzada entre frações alergênicas do extrato de pólen de L. multiflorum (Lm) e extratos comerciais de pólens de gramíneas. Material e métodos: Amostras de soro de 38 pacientes com rinite alérgica sazonal (grupo RAS), 35 pacientes com rinite alérgica perene (grupo RAP) e 30 indivíduos não atópicos (grupo NA) foram testadas para a reatividade de IgE. A sensibilização foi analisada através de teste cutâneo de puntura e os níveis de IgE específica a pólens de L. multiflorum foram determinados por ELISA. Ensaios ELISA e Immunoblotting de inibição foram empregados na determinação da reatividade cruzada ente alérgenos de pólen de L. multiflorum e de extratos comerciais de gramíneas. Resultados: A positividade ao TCP com extratos de pólen de gramíneas foi utilizada como critério de inclusão de pacientes no grupo RAS. Anticorpos IgE específicos a Lm foram detectados no soro de 100% dos pacientes com rinite sazonal (RAS) e em 8,6% dos pacientes com rinite perene (RAP). Inibições observadas no ELISA para detecção de IgE a Lm, demonstraram reatividade cruzada entre Lm, L. perenne (Lp) e Gramíneas II (GII), mas não entre Gramíneas I (GI). Foram observadas 14 frações ligantes de IgE, sendo as de 26, 28 e 32 kDa as mais freqüentes (> 90%). Em Immunoblotting de inibição, Lm, Lp e GII inibiram significativamente a ligação de IgE à maioria das frações imunodominantes de Lm, sendo a de 55 kDa a mais inibida. A fração de 26 kDa não foi inibida pelo extrato Lp, mas sim pelos extratos Lm e, GII em menor proporção. Conclusões: A utilização de extrato de pólen Lm deve ser preferida a aqueles que apresentam proximidade filogenética com essa gramínea, quando da necessidade de determinações de sensibilização mais precisas no diagnóstico, como também o seu emprego na imunoterapia da polinose causada por alérgenos de pólen de L. multiflorum. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-15T18:12:01Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Marcos Borges Ribeiro.pdf: 1012544 bytes, checksum: cd3041816b8e33f18036ad6952db5f5d (MD5) Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-12-19T14:20:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Marcos Borges Ribeiro.pdf: 1012544 bytes, checksum: cd3041816b8e33f18036ad6952db5f5d (MD5) Made available in DSpace on 2016-12-19T14:20:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Marcos Borges Ribeiro.pdf: 1012544 bytes, checksum: cd3041816b8e33f18036ad6952db5f5d (MD5) A brucelose canina é uma infecção bacteriana contagiosa, zoonótica, causada pela Brucella canis, responsável por aborto e infertilidade. A brucelose é uma doença de importância mundial pelo prejuízo ocasionado tanto para a saúde publica como para a economia nacional. O diagnóstico baseia-se principalmente na sorologia devido a inespecificidade dos sinais clínicos. Vários métodos têm sido descritos e utilizados para diagnóstico, porém a maioria comercialmente disponível produz resultados falsos positivos. Neste trabalho foi comparado o perfil de reconhecimento de Ig G sérica a dois extratos solúveis de Brucella canis, preparados de diferentes formas. Os soros foram analisados por ELISA Indireto com os dois extratos solúveis obtidos por calor e Ultra-som. Foram testadas 765 amostras de soros de cães domiciliados da cidade de Salvador e área metropolitana com sorologia desconhecida, 92 amostras de soros testadas no Centro de Controle de Zoonoses da cidade de São Paulo (CCZ-SP) pelo método IDGA com antígeno de Brucella ovis sendo 45 positivas e 47 amostras negativas. Para o cálculo do valor de corte foram utilizadas 21 amostras de soros de filhotes de cães saudáveis provenientes do biotério do Centro de Pesquisa Gonçalves Muniz (CPqGM-Fiocruz) – Salvador –Ba. O perfil eletroforetico foi analisado por SDS-PAGE em sistema desnaturante e a reatividade dos antígenos solúveis foi avaliada pelo ELISA e Western Blotting, comparando diferentes grupos de soros. A comparação entre os ELISAs com ambos antígenos foi feito com todos os 857 soros. O ELISA com extrato solúvel obtido por calor indicou uma positividade de 10% (n=79) com valor de D.O de limite de corte de 0,235, já o ELISA com extrato solúvel obtido por ultra-som indicou uma positividade de 24% (n=187) com valor de D.O de limite de corte de 0,350. A análise estatística de correlação dos resultados encontrados nos estudos dos dois antígenos obtido por calor e ultrasom foi de 0,68. Os 92 soros do CCZ-SP testados pela IDGA foram utilizados para avaliar a especificidade, sensibilidade, valores preditivos positivo e negativo e eficiência dos ELISAs, sendo 51%,94%, 89%, 67% e 73% para o ELISA com extrato obtido por calor e de 69%, 83%, 80%,74% e 76% para o ELISA com o extrato obtido por ultra-som, respectivamente. A concordância entre os ELISAs utilizando os dois extratos solúveis dada pelo índice Kappa foi de κ= 0,38. O Elisa realizado com extrato solúvel obtido por calor mostrou concordância com a IDGA de κ=0,45 e o ELISA utilizando extrato solúvel obtido por ultra-som e a IDGA com κ= 0,52. A imunoreatividade do extrato antigênico solúvel de B. canis obtido por calor (extrato aquecido), utilizando soros de animais positivos na IDGA e ELISA, apresentou com maior freqüência as bandas 65 KDa, 58 KDa, 56 KDa, 18 KDa e 12 KDa e o extrato obtido por ultra-som as bandas 68 KDa, 52 KDa, 46 KDa, 38 KDa, 28 KDa, 18 KDa. Os antígenos utilizados para os ELISAs aquecido e sonicado, mostram diferentes perfis eletroforético em análise pela técnica SDSPAGE, sugerindo diferentes composições protéicas. Os extratos analisados por ELISA, apesar de apresentarem bons valores de controle de qualidade, sendo o de ultra-som melhor que os aquecidos, necessitam ser avaliados quanto a sua reatividade com soros de animais com diagnóstico de brucelose canina confirmados por isolamento bacteriano ou por PCR.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-07-26Bitstream added on 2014-06-13T18:39:27Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_fp_me_ilha.pdf: 272949 bytes, checksum: 557ad0d6f0ab0423f56e4256406ff28d (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Toxocara vitulorum é um parasita nematódeo de alta freqüência no trato intestinal de búfalos, particularmente em bezerros búfalos de um a três meses de idade. Devido à sua alta morbidade e mortalidade, causa consideráveis prejuízos a bubalinocultura. A pesquisa objetivou a obtenção de antígenos de extrato larval solúvel bruto (Ex), do material excretor-secretor (ES) de larvas infectantes e do líquido perientérico (Pe) de adultos de T. vitulorum, bem como a separação das frações protéicas na mistura pelo SDS-PAGE, seguida da análise imunológica por Western blot (WB), utilizando-se soros imunes e colostros de búfalos naturalmente infectados com T. vitulorum além de camundongos imunes. O acompanhamento do quadro parasitário dos bezerros búfalos também foi realizado. Pôde-se verificar que os três antígenos, Pe, Ex e ES, apresentaram mobilidades eletroforéticas pelo SDS-PAGE revelando nove (11,5, 14,2, 31, 38, 58, 76, 88, 112 e 165 KDa), onze (11,2, 13,3, 16,5, 22, 25, 32, 43, 53, 68, 82 e 96 KDa) e oito (19, 48, 56, 64, 90, 110, 150 e 190 KDa) bandas protéicas, respectivamente. A maioria dessas frações separadas pela eletroforese, foi reconhecida por todos as amostras de soros e pelo colostro, quando analisada pelo WB. No entanto, somente as bandas de alto peso molecular (68 - 190 KDa) persistiram nos grupos de bezerros búfalos que se encontravam no pico, declínio ou expulsão e na ausência ou autocura, à exceção do antígeno ES, que desapareceu durante o processo de autocura. Já os soros de bezerros búfalos com um de vida, que mamaram o colostro e os daqueles que se encontravam em fase de aparecimento ou ascensão, revelaram com as mesmas frações detectadas no soro e no colostro das búfalas. Os três antígenos reagiram de forma cruzada entre si, quando foram testados com soros homólogos e heterólogos de camundongos imunizados experimentalmente com estes antígenos de T. vitulorum Toxocara vitulorum is a nematode parasite of small intestine of cattle and water buffaloes particularly buffalo calves with one to three months of age, causing high morbidity and mortality. The purpose of this research was the antigen obtaintion and characterization of crude soluble larval extract (Ex), excretory-secretory (ES) of infective larvae, and perienteric fluid (Pe) from adults of T. vitulorum, as well as the separation of protein fractions from the antigenic mixture by SDS-PAGE and analysis of each band by Western blot (WB), using immune sera and colostrum of buffaloes naturally infected by T. vitulorum, and mice experimentally immunized. The parasitological status of the buffalo calves was also evaluated using sequentially coprological examinations. The results showed that three antigens, Pe, Ex and ES, revealed nine (11,5, 14,2, 31, 38, 58, 76, 88, 112, and 165 KDa), eleven (11,2, 13,3, 16,5, 22, 25, 32, 43, 53, 68, 82, and 96 KDa) and eight (19, 48, 56, 64, 90, 110, 150, and 190 KDa) protein bands by SDS-PAGE, respectively. The majority of these isolated bands were recognized by sera and colostrum of all groups of infected animals (buffalo cows one day post parturition and buffalo calves in five different periods of T. vitulorum infection) analyzed by WB. However, only the fractions of high molecular weight (68 - 190 KDa) persisted in the groups of buffalo calves at maximum peak of infection, expulsion and post-expulsion of the parasite or self-cure process, excepting ES antigen, that was not detected during the self-cure process. Sera of buffalo calves at one day of age, after suckling the colostrum and at the beginning of infection reacted with the same bands detected by serum and colostrum of the buffalo cows. The three antigens showed crossed reaction among themselves, when they were tested with homologous and heterologous sera of mice experimentally immunized with them

p.24-31 Submitted by Texeira Ana (atanateixeira@gmail.com) on 2012-05-30T13:54:26Z No. of bitstreams: 1 Santana, Genoile Oliveira(2).pdf: 187725 bytes, checksum: d600f7e1c2d2edfbedb329ea6605f823 (MD5) Made available in DSpace on 2012-05-30T13:54:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santana, Genoile Oliveira(2).pdf: 187725 bytes, checksum: d600f7e1c2d2edfbedb329ea6605f823 (MD5) Previous issue date: 2001-01 Racional - A prevalência da infecção pelo vírus da hepatite C em pacientes sob programa de hemodiálise tem sido amplamente variável. Objetivos – Determinar a prevalência do anticorpo contra o vírus C da hepatite (anti-VHC) em pacientes sob hemodiálise em Salvador, BA e sua associação com transfusão de sangue, duração de hemodiálise e elevação de alaninoaminotransferase. Métodos - Durante um período de 17 meses, foram avaliados todos os pacientes em programa de hemodiálise, totalizando 395 indivíduos, que responderam a questionário e forneceram soro para análise laboratorial (alaninoaminotransferase sérica e anti-VCH pelo ELISA II com confirmação pelo Immunoblotting (RIBA III). Resultados - O anti-VHC foi positivo em 23,8% (94/395). A presença de transfusão mostrou associação com o anti-VHC e quanto maior o número de transfusões, mais freqüente o anti-VHC. Dos pacientes que nunca foram transfundidos, 12,5% (6/48) foram anti-VHC positivos. A duração do tratamento dialítico foi de 53,44 ± 36,45 meses no grupo anti-VHC positivo e de 22,10 ± 22,75 meses no grupo negativo. A elevação de alaninoaminotransferase foi mais freqüente no grupo positivo para o anti-VHC. A positividade para as frações do RIBA III foi de 79,8%, 100%, 80,9% e 52,1% para o c100- 3, c33, c22 e NS5, respectivamente. O anti-NS5 foi ainda menos freqüente no grupo com alaninoaminotransferase elevada. Conclusões - A prevalência do anti-VHC em pacientes sob hemodiálise crônica de Salvador, BA é elevada e está associada com transfusão de sangue, maior duração de tratamento dialítico e elevação de alaninoaminotransferase. São Paulo

O presente trabalho refere-se a pesquisa dos aspectos epidemiológicos da dirofilariose canina no perímetro urbano de Cuiabá, através de exame de sangue e sorologia. Examinou-se o sangue de 822 cães: em 11,81% das amostras, detectaram-se, por meio de "Immunoblot", anticorpos contra antígenos de Dirofilaria immitis adulto, enquanto em 0,41% foram encontradas, por meio do teste de Knott modificado, microfilárias de D. immitis. A prevalência da dirofilariose canina em Cuiabá, no período de junho a novembro de 1997, e com a metodologia aplicada, foi de 120,8 casos em cada 1.000 animais. O "Immunoblot" diagnosticou como positivas 11,27% das amostras que estavam consideradas negativas pelo teste de Knott modificado. Os autores analisaram estatisticamente informações sobre raça, sexo, idade e região administrativa de origem dos cães pesquisados. Foi questionada a possibilidade de que os animais pesquisados tivessem viajado a regiões endêmicas, usado microfilaricidas, ou apresentado sintomatologia compatível, bem como estudadas as características ecológicas do local de moradia. Cães com idade variando entre um e nove anos e residentes na região Centro-Oeste apresentaram maior índice de positividade. A maioria não apresentava sintomatologia compatível com a doença, não tinha história clínica do uso de microfilaricidas e/ou preventivos contra dirofilariose canina e nunca havia saído do perímetro urbano de Cuiabá, mas residiam em bairros próximos a rios ou córregos e/ou em casas contíguas a áreas de vegetação nativa. Pela primeira vez, o "Immunoblot" foi empregado no diagnóstico de dirofilariose canina no Brasil. The present research focused on studying, through blood and sorology tests, epidemiological aspects of canine dirofilariasis in the metropolitan area of the city of Cuiabá, Brazil. Blood samples from 822 dogs were tested. The research detected, through "Immunoblot" test, antibodies against adult Dirofilaria immitis antigens in 11.81% of the samples, while 0.41% of the dogs presented, through the modified Knott test, microfilariae of D. immitis. The prevalence of canine dirofilariasis in Cuiabá, in the period between June and November 1977, reached 120.8 case per 1,000 dogs. The "Immunoblot" diagnosed as positive 11.27% of the samples previously tested negative when using the modified Knott test. The research statistically analyzed information on the dogs’ breed, sex, age and region of origin. It also took into account the possibility that the dogs researched might have traveled to endemic regions, might have been given microfilaricides or might be presenting a compatible symptomatology. The environmental characteristics of the dogs’ dwelling places were also studied. Dogs from one to nine years old, living in the Center-West region of Cuiabá, were statistically found to be the most affected. The majority of them has not been treated with microfilaricide, and has never left the Cuiabá metropolitan area. They lived, however, in neighborhoods close to streams and/or in houses adjacent to native vegetation. This research was the first time that "Immunoblot" was used for the diagnosis of canine dirofilariasis in Brazil.