Search

Introdução: Macrófagos inflamatórios expressam grande quantidade de receptores para IL-17 (IL-17R) favorecendo a ligação da IL-17. O papel da IL-17 na ativação desses macrófagos e o desenvolvimento de uma resposta microbicida ou reguladora não está completamente esclarecido, contudo, estudos anteriores demonstraram que a IL-17 pode estimular macrófagos peritoneais a aumentar a atividade de arginase ou óxido nítrico sintase induzida. Nós investigamos a atuação da IL-17 e sua possível interação com IFN-γ, IL-4 e LPS na indução dos perfis M1 ou M2 de macrófagos de camundongos BALB/c selvagens (WT) e IL-4 knockout (KO). Objetivo: Avaliar a capacidade da IL-17, sozinha ou em associação com outras citocinas, ativar diferentes perfis de macrófagos. Métodos: Macrófagos peritoneais eliciados com tioglicolato foram caracterizados por citometria e estimulados in vitro por 48h com diferentes associações IL-17A, IL-17F, LPS, IL-4 e IFN-γ. No sobrenadante avaliamos a produção de NO e as células lisadas foram utilizadas para avaliação da atividade da arginase. Resultados: Células totais colhidas em diferentes dias após inóculo com tioglicolato apresentaram pouca variação para os marcadores M1/70, F4/80 e IL-17R. As células aderentes obtidas no dia 5 representaram uma população celular com maior quantidade de células marcadas para M1/70 e F4/80, além de expressar maior quantidade de IL-17R na superfície celular. A IL-17 sozinha não induziu a atividade da arginase nem a produção de NO em camundongos WT e IL-4 KO. A associação de IL-4 com IL-17 também não induziu a atividade da arginase, porém IL-17 associada com o IFN-γ aumentou a produção de NO nas duas linhagens testadas. Os macrófagos IL-4 KO apresentaram maior atividade da arginase mesmo sem estímulo com citocinas e IL-4 proporcionou um aumento ainda maior na atividade destes macrófagos. Introduction: Inflammatory macrophages express high amount of IL-17 receptor (IL17R) favoring IL-17 binding. The role of IL-17 activating macrophages to increase microbicidal activity or regulatory response is not completely clear, but previous studies demonstrated that IL-17 activates peritoneal macrophages to increase arginase and induced nitric oxide synthase. Here, we investigated the role of IL-17 and its interaction with IFN-γ, IL-4 and LPS to induce M1 or M2 profiles in wild type (WT) and IL-4 knockout (KO) BALB/c mice. Objective: Evaluate the ability of IL-17, alone or in association with other cytokines, to activate different macrophage profiles. Methods: Thioglycolate-elicited peritoneal macrophages were characterized by cytometry and stimulated in vitro for 48h with different association of IL-17A, IL-17F, LPS, IL-4 and IFN-γ. The supernatant was used to evaluate NO production and lysed cells were used to evaluate arginase activity. Results: Cells harvested from different days after thioglycolate inoculation showed no variation for M1/70, F4/80 and IL-17R. Adherent cells obtained on day 5 presented the largest number of M1/70, F4/80, IL-17R positive cells. IL-17 alone did not induce arginase activity or NO production in WT and IL-4 KO mouse macrophages. Association of IL-4 with IL-17 did not induce arginase activity, but IL-17 plus IFN-γ increased NO production in both strains tested. IL-4 KO macrophages presenting high arginase activity even without stimulation with cytokines and IL-4 increased in these macrophages. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by MARCOS AURELIO RIBEIRO DA SILVA (marcosars@ufba.br) on 2016-01-15T17:25:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Denisar.pdf: 3263987 bytes, checksum: 526d1efae345d51d6e41a539652a0a6f (MD5) Approved for entry into archive by MARCOS AURELIO RIBEIRO DA SILVA (marcosars@ufba.br) on 2016-01-15T17:29:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Denisar.pdf: 3263987 bytes, checksum: 526d1efae345d51d6e41a539652a0a6f (MD5) Made available in DSpace on 2016-01-15T17:29:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Denisar.pdf: 3263987 bytes, checksum: 526d1efae345d51d6e41a539652a0a6f (MD5) CAPES PALMITO, Denisar dos Santos. Camundongos C57Bl/6 e A/j apresentam resposta inflamatória diferenciada após a imunização com Staphylococcus aureus e desafio em modelo de bolsão de ar. Dissertação (Mestrado) – Instituto Multidisciplinar de Saúde, Universidade Federal da Bahia, Vitória da Conquista, 2015. Introdução/Objetivo: Staphylococcus aureus é o principal agente etiológico de infecções bacterianas em humanos, sendo relatado como o agente causador de patologias como endocardite e sepse. O presente trabalho teve por objetivo avaliar quais os possíveis componentes do sistema imune poderiam atuar de maneira protetora contra a infecção por S. aureus em camundongos imunizados intradermicamente. Materiais e métodos: Camundongos C57Bl/6 e A/j foram imunizados intradermicamente com amostras de S. aureus inativadas por calor e, posteriormente, foram desafiados com amostras viáveis em um modelo de bolsão de ar. Nos tempos de 6, 12 e 24 horas após o desafio, a eutanásia ocorreu e o perfil celular do infiltrado inflamatório, bem como a carga bacteriana, foram avaliados no lavado do bolsão de ar. No soro e no lavado foram quantificados anticorpos da classe IgG e a pele do bolsão foi avaliada por técnicas histopatológicas. Pela técnica de ELISA foram quantificadas citocinas presentes no lavado do bolsão, baço e medula. Resultados: Animais imunizados e desafiados com amostras resistentes no modelo de bolsão apresentaram recrutamento celular inflamatório constituído predominantemente por neutrófilos. Além disso, foi observada uma associação entre uma produção de anticorpos IgG e a redução da carga bacteriana em um modelo murino de imunização intradérmica. Ademais, animais imunizados apresentaram menor inflamação no sítio de infecção e uma maior produção local de IL-17A. Em relação as outras citocinas, não foram encontradas diferenças nos tecidos analisados. Discussão: S. aureus é capaz de induzir uma resposta sistêmica, assim como, recrutar células inflamatórias para o sítio de infecção. Porém, animais imunizados tendem a controlar melhor o processo inflamatório, aparentemente por uma correlação entre a produção de anticorpos IgG e a redução da carga bacteriana em um modelo murino de imunização intradérmica. A menor carga bacteriana nos animais imunizados se correlacionou, 10 também, com uma menor inflamação no sítio de infecção e uma maior produção local de IL-17A. Conclusão: A presença de anticorpos IgG2a se correlaciona com diminuição da carga bacteriana em animais imunizados intradermicamente com S. aureus, juntamente com a elevação de IL-17A no modelo de bolsão de ar. PALMITO, Denisar dos Santos. C57Bl/6 and A/j mice presente diferente inflamatory response patterns after immunization with Staphylococcus aureus and challenge in air pouch model. Master Dissertation - Instituto Multidisciplinar de Saúde, Universidade Federal da Bahia, Vitória da Conquista, 2015. Introduction / Objective: Staphylococcus aureus is the major etiological agent of bacterial infections in humans and is reported as the causative agent of diseases such as sepsis and endocarditis. This study aimed to evaluate which components of the immune system could act protectively against S. aureus infection in mice immunized intradermally. Methods: C57Bl/6 and A/j mice were immunized intradermally with S. aureus strains inactivated by heat and then were challenged with viable strains in an air pouch model. At the times of 6, 12 and 24 hours after challenge, the euthanasia was performed and the cellular profile of the inflammatory infiltrate as well as the bacterial load were evaluated in the air pouch lavages. Serum and lavages of air pouch were quantified for IgG antibodies and the skin was evaluated by histopathological techniques. Cytokines present in air pouch, spleen and bone marrow were quantified by ELISA . Results: Animals immunized and challenged with strains resistant to the air pouch model presented an inflammatory cell recruitment constituted predominantly by neutrophils. Furthermore, it was observed an association between the production of IgG antibodies and reduced the bacterial load in our model of intradermal immunization. In addition, immunized animals showed lower inflammation at the site of infection and increased local production of IL-17A. Regarding the other cytokines, no differences were found in the tissues. Discussion: S. aureus is able to induce a systemic response as well as recruiting inflammatory cells into the infection site. Immunized animals showed a higher control the inflammatory process correlated with the production of IgG antibodies and a reduced bacterial burden in the inflammatory site. The lower bacterial load in animals immunized correlated also with lower inflammation in the site of infection and increased local production of IL-17A. Conclusion: The presence of IgG2a antibodies correlates with a decreased bacterial load in animals immunized intradermally with S. aureus along with the elevation of IL-17A