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Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2014 Introdução: A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) aumenta a sensibilidade do diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana (LTA), especialmente na forma mucosa (LM). Teve-se por objetivo avaliar a acurácia dos resultados de PCR em amostras da mucosa nasal, oral e de saliva no diagnóstico da LM e da leishmaniose cutânea (LC). Métodos: Pacientes atendidos no Hospital Universitário de Brasília foram inclusos de forma consecutiva em amostra de conveniência. Intradermorreação de Montenegro (IDRM), imunofluorescência indireta (IFI), imprint em lâmina, cultura, exame histopatológico e PCR em papel filtro da lesão foram utilizados em paralelo para alocação dos casos nos grupos de LM, LC e controles. As amostras mucosas avaliadas por PCR foram coletadas por swab nasal (SN), microtubo de 1,5mls (saliva) e esfregaço oral na forma de imprint em papel de filtro (PFO). Para a PCR, utilizou-se par de iniciadores que amplificam sequência de 120pb do DNA mitocondrial de Leishmania spp. Para a identificação do subgênero, empregou-se digestão pelas enzimas de restrição HaeIII e Bsr1. Realizou-se ainda revisão sistemática da literatura com o objetivo de agregação com os dados encontrados na pesquisa clínica. Resultados: Foram incluídos 69 pacientes, sendo 17 (25%) com LM, 19 (28%) com LC e 33 (48%) controles. Para o diagnóstico da LM, em comparação aos controles, a melhor acurácia foi alcançada pela PCR do SN 86% (IC-95%=73,81-93,05), seguido da saliva 74% (IC-95%=60,45-84,13) e PFO 68% (IC-95%=54,19-79,24). As especificidades do SN e PFO foram completas, negativas em todos os controles sem LTA. Dois casos de LC tiveram SN e PFO simultaneamente positivos. A revisão sistemática da literatura resultou na inclusão de 14 referências. Análise dos dados por meta-análise, possível apenas para amostras de PCR de fragmento da lesão em 2 dos artigos selecionados, demonstrou uma sensibilidade de 70% (IC-95%=0,57-0,81), especificidade de 97% (IC-95%=0,89-1), e razão de chances de 40,34 (IC-95%=11,06-147,08) no diagnóstico da LM. Identificou-se Leishmania do subgênero Viannia em 12 casos de LM e 11 casos da LC. Em apenas um caso de LC foi identificado o subgênero Leishmania. Conclusões: O SN demonstrou a melhor acurácia entre os exames de PCR na mucosa. Os resultados da PCR nas três formas de coleta nasal, oral e de saliva apresentaram maior especificidade que a IDRM e IFI. Estes mostraram ainda sensibilidade comparável aos exames de cultura e imprint em lâmina, com a vantagem da coleta menos invasiva. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT Introduction: The technique of polymerase chain reaction (PCR) increases the sensitivity ofthe etiological diagnosis of american cutaneous leishmaniasis (ACL), especially in themucocutaneous form (MCL). The aim of the study was to evaluate the accuracy of PCR in thenasal cavity, oral mucosa and saliva in the diagnosis of MCL and cutaneous leishmaniasis(CL). Methods: Patients attending the University Hospital of Brasilia were consecutivelyincluded in a convenience sample. Montenegro skin test (MST), indirect immunofluorescence(IIF), smear, culture, histopathology and PCR from filter paper imprints of lesion biopsy(FPIL) were used in parallel for allocation in groups of MCL, CL and controls. Mucosalsamples evaluated by PCR were collected by nasal swab (NS), 1.5mls microtubes (saliva) andoral filter paper imprints (OFPI). The primers used resulted on a 120-bp sequence present inthe mitocondrial DNA of Leishmania spp. Digestion with the restriction enzymes HaeIII andBSR1 were used for subgenus identification. A systematic review of the literature wasconducted with the goal of aggregation with data found in the present clinical research.Results: 69 patients were included, 17 (25%) with MCL, 19 (28%) with CL and 33 (48%)controls . For the diagnosis of MCL, compared to controls, the best accuracy was achieved byNS 86% (95%CI=73.81-93.05), followed by saliva 74% (95%CI=60.45-84.13) and OFPI68% (95%CI=54.19-79.24). The specificity of the NS and OFPI were complete, negative inall controls without ACL. Two cases of isolated CL showed positivity for both NS and OFPI.The systematic review of the literature resulted in the inclusion of 14 previous references.Analysis of aggregated data by meta-analysis, possible only for tissue samples in 2 of thepreviously selected articles showed a sensitivity of 70% (IC-95%=0.57-0.81), a specificity of97% (IC-95%=0.89-1) and an odds-ratio of 40.34 (IC-95%=11.06-147.08) in the diagnosis ofMCL. We identified the Leishmania subgenus Viannia in 12 cases of MCL and in 11 cases ofCL. In only one case of CL the subgenus Leishmania was identified. Conclusions: NSshowed the best accuracy among the PCR tests in the mucosa. PCR results in all three formsof nasal, oral and saliva samples showed higher specificity than the MST and IIF. Themethods also show a sensitivity comparable to culture and smears, with the advantage of aless invasive collection.

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva, 2022. Introdução: A hanseníase é uma doença crônica infecciosa e transmissível. A atual estratégia de controle está fundamentada, principalmente, na poliquimioterapia (PQT), que tem como um dos objetivos prevenir a resistência antimicrobiana (RAM). Em 2018, o Brasil implementou a vigilância da RAM na hanseníase. No entanto, poucos são os estudos sobre a temática, principalmente de abrangência nacional. Objetivo: Esta tese teve como objetivo analisar a acurácia dos testes diagnósticos para a resistência antimicrobiana e a frequência de resistência antimicrobiana nos pacientes de hanseníase no Brasil. Método: Foram desenvolvidos dois estudos: o primeiro foi uma revisão sistemática com metanálise dos estudos de acurácia diagnóstica e dos estudos de rastreio para a RAM. Foram feitas buscas em bases de dados científicas em saúde e na literatura cinzenta, sem limite de data ou idioma. Os estudos foram eleitos por dois pesquisadores independentes, que retiraram os dados e avaliaram a qualidade. O segundo foi um estudo transversal que procurou determinar a frequência da RAM nos pacientes de hanseníase no Brasil por grupo de investigação no período de 01 de outubro de 2018 a setembro de 2020. Além de investigar fatores associados à RAM por meio de regressão logística. Resultados: Na revisão sistemática, foram incluídos 129 estudos. Desses, 27 para análise da precisão diagnóstica. Os testes moleculares para resistência à dapsona tiveram sensibilidade de 78,8% (IC95% = 65,6-87,9) e especificidade de 97,0% (IC95% = 94,0-98,6). Testes moleculares para resistência à rifampicina tiveram sensibilidade e especificidade de 88,7% (IC95% = 80,0-93,9) e 97,3% (IC95% = 94,3-98,8), respectivamente. Os testes moleculares para resistência a ofloxacino tiveram sensibilidade e especificidade de 80,9% (IC95% = 60,1-92,3) e 96,1% (IC95% = 90,2-98,5), respectivamente. No estudo transversal, 1.183 casos de hanseníase investigados para RAM no Brasil foram incluídos. No total, apenas 16 (1,4%) pacientes apresentaram mutações associadas à RAM. Desses, 8 (50%) foram em casos de recidiva de hanseníase, 7 (43,8%) em casos classificados como suspeita de falha terapêutica com tratamento padrão, e 1 (6,2%) era caso novo de apresentação de hanseníase. Mutações associadas à RAM foram encontradas para todos os três genes examinados (folP1, rpoB e gyrA). Dois pacientes apresentaram resistência simultânea à dapsona e à rifampicina, indicando resistência multidroga. Não foi identificada relação significativa entre variáveis clínicas e presença de resistência antimicrobiana. Conclusão: Apesar das diferenças entre os estudos incluídos na revisão sistemática, é possível afirmar que a sensibilidade e a especificidade dos testes moleculares são boas para detectar resistência aos principais antimicrobianos usados no tratamento da hanseníase e que a proporção de casos resistentes não aumentou significativamente após a introdução da PQT. No Brasil, evidenciaram-se baixa frequência de RAM na hanseníase, especificamente à rifampicina, a principal droga bactericida para hanseníase e a importância da PQT. No entanto, a maior frequência de RAM entre pacientes com recidiva no Brasil sustenta a necessidade constante do monitoramento. Introduction: Leprosy is a chronic infectious and transmissible disease. The current control strategy is based mainly on multidrug therapy (MDT), that intends to prevent the antimicrobial resistance (AMR). In 2018, Brazil implemented the AMR surveillance in leprosy. However, the studies about this specific theme are scarce, mainly nationally. Objective: This thesis had as objective to analyze the accuracy of the diagnosis testing related to antimicrobial resistance and the frequency that the antimicrobial resistance happens on Leprosy Patients in Brazil. Method: Two studies were developed: the first one was a systematic review with a meta-analysis of the diagnostics accuracy studies and of the tracking studies for the AMR. There were searches on scientific data base conducted in health and gray literature, with no date or language limits. The studies were chosen by two independent researchers, that drew the data and evaluated their quality. The second study was a transversal one that intended to determinate the frequency of the AMR on leprosy patients in Brazil by investigation group from 01 October 2018 to September 2020. Besides that, to investigate factors associated to AMR by logistic regression. Results: In the systematic review, there were included 129 studies. From those ones, 27 were selected to diagnostic precision analysis. The molecular tests to resistance to dapsone had the sensibility of 78,8% (CI95%=65,6-87,9), and the specificity of 97,0% (CI95%=94,0-98,6). The molecular tests to resistance to rifampicin had the sensibility and specificity of 88,7% (CI95%= 80,0-93,9%) and 97,3% (CI95%=94,3-98,8), respectively. The molecular tests to resistance to ofloxacin had the sensibility and specificity of 80,9% (CI95% =60,1-92,3) and 96,1% (CI95% =90,2-98,5), respectively. In the transversal study, 1.183 leprosis investigated cases to AMR in Brazil were included. In total, only 16 (1,4%) patients showed mutations associated to AMR. From those ones, 8 (50%) were in relapsed cases of leprosis, 7 (43,8%) in cases were classified as suspects of therapeutic failure with the standard treatment, and 1 (6,2%) was a new case of leprosis. Mutations associated to AMR were found to all of the three examinate genes (folP1, rpoB and gyrA). Two patients presented simultaneous resistance to dapsone and rifampicin, indicating multidrug resistance. It was not identified any significative relation between clinical variables and the antimicrobial resistance presence. Conclusion: Although the differences between the included studies on the systematic review, it’s possible to affirm that the sensibility and the specificity of the molecular tests are good to detect resistance to the mainly antimicrobials used on the leprosis treatment and that the proportion of resistant cases didn’t increase significantly after the introduction of the MDT. In Brazil, it showed the low frequency of AMR in leprosis specifically to rifampicin, the mainly bactericidal drug to leprosis and the importance of MDT. However, the higher frequency of AMR between relapsed patients in Brazil sustains the constant necessity for monitorization.

Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2022. Acredita-se que a hanseníase é a doença infectocontagiosa mais antiga da humanidade e até os dias de hoje, é um problema público de saúde mundial. Segundo a OMS, 161 países relataram dados sobre a doença em 2019 e o total de novos casos atingiu 202.256. O Brasil, país englobado no grupo prioritário de controle à doença, no mesmo ano, notificou 27.864 incidentes, sendo destes 2.351 classificados com Grau de Incapacidade Física - GIF 2 e 1.545 casos infantis. Uma vez que o diagnóstico da enfermidade é exclusivamente clínico e que os exames laboratoriais hoje existentes servem apenas como instrumento de auxílio, é importante desenvolver uma ferramenta diagnóstica que seja menos invasiva, pouco onerosa para os cofres públicos e que possibilite a confirmação do quadro clínico relatado pelo médico. Este estudo propõe a detecção do Mycobacterium leprae nos diferentes componentes do sangue total periférico, por meio da Reação em Cadeia de Polimerase em tempo real e a quantificação da bactéria. A população de estudo consistiu nos pacientes com suspeita de hanseníase, atendidos no Hospital Universitário de Brasília, compreendidos no período de um ano entre junho de 2020 e junho de 2021, totalizando 111 pacientes, sendo 55 diagnosticados positivamente para hanseníase, conforme orientações do Ministério da Saúde, e 56 suspeitos, mas não diagnosticados, como sendo controles. Após a obtenção do soro, plasma, concentrado de hemácias e células mononucleares do sangue periférico, os mesmos foram submetidos à extração de DNA por meio de kit comercial Purelink Genomic da Thermofisher Scientific. Para a padronização dos controles positivos e reação da curva padrão de quantificação, foi confeccionado o alvo genético RLEP do genoma da micobactéria. A qPCR foi feita de forma qualitativa e quantitativa utilizando os primers RLEPBR F -5’ – CTTGCACCATTTCTGCCGCT – 3’ e RLEPBR R – 5’ – TGCGCTAGAAGGTTGCCGTA – 3’. Dos participantes diagnosticados clinicamente com hanseníase, 52,73% eram do sexo feminino, a idade média foi de 44,33 anos e nenhum era contactante. Dos participantes do grupo controle, 50% eram do sexo masculino, a idade média foi de 45,11 e 48 eram contactantes. Pela classificação do quadro clínico, 1 participante era indeterminado, 5 tuberculóide-tuberculóide, 8 dimorfo-tuberculóide, 18 dimorfo-dimorfo, 11 dimorfovirchowiana, e 12 virchowiana-virchowiana. Quanto ao GIF, 17 pacientes eram GIF 1, 15 GIF 2 e 23 GIF 0. Quanto aos resultados biomoleculares, a sensibilidade foi baixa correspondendo a 11,54% no soro, 7,31% no plasma, 9,26% nas células mononucleares do sangue periférico, 9,80% no concentrado de hemácias e na baciloscopia de 38,18%. Entre os pacientes paucibacilares, a maior sensibilidade foi para o soro e para o concentrado de hemácias e entre os multibacilares a maior sensibilidade foi encontrada no soro. A baixa sensibilidade encontrada nos resultados indica que o sangue periférico não é um material consistente para diagnosticar a hanseníase. It is believed that leprosy is the oldest infectious and contagious disease of the humanity and until today it is a public health problem worldwide. According to WHO, 161 countries reported data on the disease in 2019 and the total of new cases reached 202.256. Brazil, a country included in the priority group for the disease control, in the same year reported 27.864 incidents, of which 2.351 were classified as Disability Degree 2 and 1.545 were child cases. Since the diagnosis of the disease is exclusively clinical and the laboratory tests that exist today are used only as an aid tool, it is important to develop a less invasive tool, a less costely for the public coffers and that allows the confirmation of the clinical condition reported by the doctor. This study proposes the detection and quantification of Mycobacterium leprae in the different components of peripheral whole blood through realtime Polymerase Chain Reaction (qPCR). The study population consisted of leprosy suspected patients, treated at the University Hospital of Brasília, during the one-year period between June 2000 and June 2021, totaling 111 patients, of which 55 were positively diagnosed and 56 were controls. After obtaining the serum, plasma, red blood cells and peripheral blood mononuclear cells, they were subjected to DNA extraction using a commercial Purelink Genomic kit from Thermofisher. For the standarization of the positive controls and the reaction of the quantification standard curve, the RLEP genetic target of the mycobacterial genome was made. The qPCR was performed qualitatively and quantitatively using the primers RLEPBR F -5’ – CTTGCACCATTTCTGCCGCT – 3’ e RLEPBR R – 5’ – TGCGCTAGAAGGTTGCCGTA – 3’. Of the participants clinically diagnosed with leprosy, 52,73% were female, the average age was 44.33 years and none were household contacts. Of the control participants, 50% were male, the average age was 45.11 and 48 were household contacts. By the classification of the clinical condition, 1 participant was indeterminate, 5 were tuberculoid, 8 borderline-tuberculoid, 18 borderline, 11 borderline-lepromatous and 12 lepromatous. As for the disability degree, 17 were classified as degree 1, 15 patients as degree 2 and 23 with none degree. As for the biomolecular results, the sensitivity was low corresponding to 11.54% in serum, 7.31% in plasma, 9.26% in peripheral blood mononuclear cells, 9.80% in red blood cells and 38.18% in smear microscopy. Among paucibacillary patients, the highest sensitivity was found in both serum and red blood cells and among multibacillary patients the highest sensitivity was found in serum. The low sensitivity found in the results suggests that peripheral blood is not a consistent material for diagnosing leprosy.

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2021. Efeitos protetores da vacinação com Bacillus Calmette-Guérin (BCG) e tratamento com clofazimina e dapsona contra infecção pelo novo coronavírus (SARS-CoV-2) foram relatados. Pacientes em risco de hanseníase representam um modelo interessante para avaliar os efeitos de tais terapias sobre a ocorrência e gravidade da doença causada pelo coronavírus SARS-CoV-2 (COVID-19). Objetivos: O objetivo do presente estudo foi avaliar, de forma prospectiva, a influência de variáveis relacionadas à hanseníase na ocorrência e na gravidade da COVID-19. Metodologia: Realizou-se um estudo de coorte prospectivo por 14 meses, no qual o principal fator de risco foram duas vacinações anteriores com BCG e o principal desfecho foi a ocorrência de COVID-19, detectada por reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa (RT-PCR). O modelo de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para análise principal. Resultados: Entre 406 pacientes incluídos, 113 foram diagnosticados com hanseníase. Durante o acompanhamento, 69 (16,99%) pacientes contraíram COVID-19. A análise de sobrevivência mostrou que a hanseníase estava associada com COVID-19 (p

Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2021. Introdução: A resistência antimicrobiana na hanseníase é um problema crescente, e o impacto de pacientes com baixos índices baciloscópicos (IBs) na sensibilidade dos testes moleculares é desconhecido. Objetivamos avaliar a sensibilidade do sequenciamento genético para a detecção de mutações relacionadas à resistência antimicrobiana do Mycobacterium leprae em pacientes com baixos IBs por meio de um modelo analítico. Métodos: Pacientes com hanseníase foram incluídos e divididos em dois grupos dependendo do Bis ((≥2+ e < 2+). As sensibilidades dos dois métodos de extração de DNA foram comparadas após amplificação e sequenciamento do elemento repetitivo (RLEP), folP1, rpoB e gyrA do M. leprae. Resultados: Incluímos 56 pacientes com hanseníase: 35 tinham IBs menor que 2+ (22 tinham baciloscopia negativa) e 21 pacientes com IBs maior ou igual a 2+. A sensibilidade da amplificação do alvo RLEP e do sequenciamento gênico de folP1, rpoB e gyrA foi de 50 a 70% menor em pacientes com IB menor que 2+ e foi significativamente reduzida em pacientes com IBs mais baixos para todos os alvos (p

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2020. Introdução: A hanseníase permanece predominante em países em desenvolvimento, onde a incidência de doenças imunomediadas é crescente. O objetivo do estudo foi avaliar o risco de adquirir hanseníase em pacientes em uso de imunossupressores para o tratamento de doenças dermatológicas e reumatológicas, incluindo aqueles que receberam profilaxia para tuberculose latente (TBL). Métodos: Realizamos um estudo de coorte prospectivo de 2014 a 2019. O principal fator de risco foi a imunossupressão induzida por medicamentos, e o desfecho principal foi o diagnóstico de hanseníase. Foram realizados reação em cadeia da polimerase (PCR) de amostras de sangue para detectar o Mycobacterium leprae e ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) para o anticorpo anti- glicolípido antifenólico-I (anti- PGL-1). A razão de riscos (HRs) e curvas de sobrevivência foram avaliados. Resultados: Quatrocentos e cinco pacientes foram incluídos (268 imunossuprimidos e 137 imunocompetentes). Dez casos de hanseníase foram diagnosticados (9 em pacientes imunossuprimidos). Corticosteróides, abatacept ou inibidores do TNF estavam envolvidos em todos os casos de imunossupressão. A PCR previu hanseníase em 7 pacientes menos de 2 anos antes das manifestações clínicas. O uso de secuquinumabe e rituximabe em 2 pacientes foi eficaz no controle das reações hansênicas. Embora nenhum paciente que usou isoniazida tenha desenvolvido hanseníase, a profilaxia para TBL não teve influência no risco de hanseníase. Na análise multivariada, o modelo de riscos proporcionais de Cox mostrou que o contato domiciliar (HR = 29,6, 95% IC = 5,7-154), contato social (HR = 5,70, IC 95% = 1,6- 21) e uma imunossupressão de alto grau (HR = 7,9; IC 95% = 1,5-41) foram fatores de risco significativos para o desenvolvimento da hanseníase. Discussão e Conclusão: Podemos concluir que pacientes em uso de imunossupressores de alto grau, principalmente corticosteroides e anti-TNF, apresentam maior risco de desenvolver hanseníase do que pacientes imunocompetentes. Uma história de contato familiar e social com hanseníase deve ser investigada cuidadosamente. Novas estratégias, como o tratamento profilático para pacientes PCR-positivos e o uso de imunossupressores modernos, devem ser estudadas, além de avaliações clínicas rigorosas e periódicas. Introduction: Leprosy remains prevalent in developing countries, where the incidence of immune-mediated diseases is rising. The aim of the study was to assess the risk of acquiring leprosy in patients using immunosuppressants for the treatment of dermatological and rheumatological diseases, including those who received prophylaxis for latent tuberculosis (LTB). Methods: We conducted a prospective cohort study from 2014 to 2019. The main risk factor was drug-induced immunosuppression, and the main outcome was the diagnosis of leprosy. There were performed polymerase chain reaction (PCR) of blood samples to detect Mycobacterium leprae and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the anti-phenol- I-glycolipid antibody (anti-PGL-1). The hazard ratios (HR) and survival curves were assessed. Results: Four hundred and five patients were included (268 immunosuppressed and 137 immunocompetent). Ten leprosy cases were diagnosed (9 in immunosuppressed patients). Corticosteroids, abatacept or TNF inhibitors were involved in all cases of immunosuppression. PCR predicted leprosy in 7 patients less than 2 years before clinical manifestations. The use of secukinumab and rituximab in 2 patients was effective in controlling leprosy reactions. Although no patient who used isoniazid developed leprosy, prophylaxis for TBL had no influence on the risk of leprosy. In the multivariate analysis, Cox's proportional hazards model showed that home contact (HR = 29.6, 95% CI = 5.7- 154), social contact (HR = 5.70, 95% CI = 1.6 -21) and high-grade immunosuppression (HR = 7.9; 95% CI = 1.5-41) were significant risk factors for the development of leprosy. Discussion and Conclusion: We can conclude that patients using strong immunosuppressants, mainly corticosteroids and anti-TNF, are at a higher risk of developing leprosy than immunocompetent patients. A history of family and social contact with leprosy should be carefully investigated. New strategies, such as prophylactic treatment for PCR-positive patients and the use of modern immunosuppressants, must be studied, in addition to rigorous and periodic clinical evaluations.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2020. A Sífilis é uma moléstia infecciosa reemergente no Brasil e em todo o mundo. Indivíduos com comprometimento do sistema imune podem apresentar maior susceptibilidade para quadros graves ou atípicos quando portadores da doença ou reativação da infecção após um período de latência. Ademais, em sua fase secundária, apresenta acometimento muco-cutâneo que a torna um importante diagnóstico diferencial para doenças dermatológicas autoimunes. Este trabalho tem como objetivo avaliar o risco e a presença de sífilis em pacientes com diagnóstico de psoríase e/ou artrite psoriásica, inclusive aqueles submetidos a terapia imunossupressora, por meio de teste rápido imunocromatográfico. Foi realizado um estudo transversal e analítico em que foram realizados rastreio diagnóstico através teste rápido da marca comercial Orange Life® para sífilis em soro de pacientes atendidos no ambulatório de Psoríase do Hospital Universitário de Brasília. Dos 60 Testes Rápidos realizados, 03 (5%) pacientes da amostra apresentaram resultado positivo para sífilis. Fatores como sexo, escore de PASI (Psoriasis Área and Severity Index) > 10 e alto grau de imunossupressão não foram fatores responsáveis pela maior positividade do teste na população estudada. Os resultados alertam para necessidade de triagem para esta infecção nesta população, bem como a realização de mais estudos relacionados a esta abordagem em populações maiores, visto que é uma doença curável se diagnosticada precocemente com terapêutica simples e de fácil acesso, a fim de evitar complicações futuras nestes pacientes. Syphilis is a reemerging infectious disease in Brazil and worldwide. Immunosuppressed individuals may be more susceptible to severe or atypical symptoms when they have the disease or by infection reactivation after a latency period. In addition, in its secondary phase, it presents mucocutaneous involvement which makes it an important differential diagnosis for autoimmune dermatological diseases. This study aims to assess the risk and presence of syphilis in patients diagnosed with psoriasis and psoriatic arthritis, including those undergoing immunosuppressive therapy, using a rapid immunochromatographic test. A diagnostic, cross-sectional and analytical screening study was carried out in which a rapid test OL® for syphilis was performed on the serum of patients treated at the Psoriasis outpatient clinic of Hospital Universitário de Brasília. Of the 60 Rapid Tests performed, 03 (5%) patients in the sample had a positive result for syphilis. Factors such as sex, PASI> 10 and high degree of immunosuppression were not responsible for the greater positivity of the test in the studied population. The present results warn to the need for screening this disease in this population. Further studies related to this approach in larger populations are also important, since it is a curable disease if diagnosed early with simple and easily accessible therapy.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019. Introdução: A hanseníase é caracterizada por um quadro infectocontagioso, causado pelo Mycobacterium leprae, evoluindo de forma lenta e gradativa, com a manifestação de sinais e sintomas dermatoneurológicos. Nesse sentido, aplica-se o tratamento baseado na poliquimioterapia (PQT). Essa estratégia, cada vez mais comum nos tratamentos atuais, deve ser realizada com regularidade na administração da dose, requerendo supervisão constante. Objetivos: O principal objetivo do presente estudo consiste em verificar o efeito da polimedicação como fator de risco para a suspensão do esquema PQT no tratamento da hanseníase no Hospital Universitário de Brasília. Métodos: Trata-se de um estudo de caso-controle não pareado, em que o desfecho primário foi definido como a necessidade, ou não, de suspensão do tratamento poliquimioterápico por qualquer motivo e o fator de risco principal foi definido como a presença de polimedicação (uso de 5 ou mais medicamentos não constantes do tratamento da hanseníase). Foram recrutados, de forma consecutiva, pacientes com diagnóstico de hanseníase tratados no Hospital Universitário de Brasília-DF, de janeiro de 2018 a julho de 2019. Resultados: Foram incluídos 103 pacientes na pesquisa. Desse total, 43 pacientes necessitaram suspender o tratamento PQT formando o grupo de casos e 60 não necessitaram suspender o tratamento formando o grupo dos controles. A análise multivariada confirmou que o sexo masculino foi fator protetor para a suspensão do esquema de PQT. Interações medicamentosas não tiveram qualquer efeito na suspensão do tratamento. O número de drogas utilizadas pelos pacientes estudados influenciou, de forma importante, a suspensão da PQT (razão de chances = 3,86, intervalo de confiança de 95% = 2,01 – 8,09; p

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019. INTRODUÇÃO: a hanseníase é doença infecciosa crônica, causada pelo Mycobacterium leprae, que se caracteriza pelo acometimento preferencial do tegumento e sistema nervoso periférico. A hanseníase persiste como a principal causa de neuropatia reversível no mundo, o que reforça a importância do seu diagnóstico precoce e do tratamento adequado. OBJETIVO: este estudo teve como objetivo efetuar análise comparativa entre o esquema padrão e o esquema substitutivo com ofloxacino na evolução das incapacidades físicas de pacientes com hanseníase do ambulatório de dermatologia do Hospital Universitário de Brasília. METODOLOGIA: trata-se de um estudo de coorte longitudinal prospectivo cujo desfecho primário foi a presença ou não de melhora na medida do grau de incapacidade física ao fim do tratamento em pacientes usuários de esquema substitutivo contendo ofloxacino, quando comparados com usuários do esquema padrão. O desfecho primário foi medido por avaliação física funcional ao fim do tratamento proposto. RESULTADO: foram incluídos 98 pacientes, dos quais 49 em uso de esquema substitutivo e 49 em uso do esquema padrão. Não se observou diferença entre os esquemas na evolução das incapacidades físicas nem no manejo das reações sistêmicas. CONCLUSÃO: este estudo permite inferir que o tratamento substitutivo com ofloxacino não apresenta diferenças quanto à evolução clínica da hanseníase, em particular quanto às sequelas neurológicas. BACKGROUND: leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, which is characterized by preferential involvement of the skin and peripheral nervous system. Leprosy remains the leading cause of reversible neuropathy in the world, which underscores the importance of early diagnosis and appropriate treatment. OBJECTIVE: to analyze the impact of the use of a substitutive regimen with ofloxacin on the evolution of physical disabilities of leprosy patients at the dermatology outpatient clinic of the University Hospital of Brasilia, when compared to patients on the standard treatment. METHOD: this is a prospective cohort study in which the primary outcome was defined as the presence or absence of improvement in the severity score of physical disability at the end of treatment in patients using a substitutive regimen containing ofloxacin. Primary outcome was measured by functional physical assessment at the end of the proposed treatment. RESULTS: ninety-eight patients were included, 49 of which were on the ofloxacin regimen and 49 on the standard regimen. There was no influence of the substitutive regimen on the evolution of physical disabilities or on the management of systemic reactions. CONCLUSION: this study allows us to infer that substitutive treatment with ofloxacin does not differ from the traditional one regarding the clinical evolution of leprosy patients, particularly with respect to neurological sequelae.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019. Introdução: A hanseníase é uma doença infecciosa causada pelo Mycobacterium leprae e que resulta em importantes sequelas aos pacientes acometidos. O tratamento precoce é essencial para prevenção das incapacidades. Mecanismos moleculares e experimentais de resistência do M. leprae à ofloxacina vêm sendo descritos. O principal objetivo do presente estudo foi monitorar variáveis para instituição do tratamento substitutivo contendo ofloxacina e associar à identificação de resistência molecular como preditor de insucesso terapêutico. Métodos: Trata-se de um estudo de coorte prospectivo com variável independente principal a presença ou não de mutações genéticas de resistência à ofloxacina e variável dependente principal a presença de cura clínica. A resistência medicamentosa foi testada por meio do kit Genotype LepraeDR® (Hain Lifescience, Nehren, Alemanha). Resultados: Foram avaliados 53 pacientes. Vinte e um pacientes estavam em curso de retratamento por recidiva ou insuficiência terapêutica. Trinta e um pacientes utilizaram esquema substitutivo com ofloxacina. Não foram encontrados marcadores moleculares de resistência ao tratamento neste estudo. O tipo de medicação utilizada não influenciou a taxa de cura no curto prazo (de 6 a 8 meses) para a hanseníase, uma doença de evolução lenta. Os pacientes que estavam em retratamento tiveram menor porcentagem de cura do que os pacientes em primeiro tratamento (p=0,034). Conclusões: Conclui-se que a resistência bacteriana à ofloxacina, aparentemente, não é um fator limitante para o tratamento da hanseníase no Hospital Universitário de Brasília Introduction: Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae and results in important sequelae. Early treatment is essential for preventing deformities. Molecular and experimental mechanisms of M. leprae resistance to ofloxacin have been described. The main objective of the present study was to monitor variables for the institution of alternative treatment containing ofloxacin and to associate the identification of molecular resistance to therapeutic failure. Methods: We conducted a prospective cohort study considering the presence of genetic mutations related to treatment resistance to ofloxacin as the main independent variable and the presence of clinical cure as the main outcome. Drug resistance was tested using the commercial kit Hain LepraeDR® (Hain Lifescience, Nehren, Germany). Results: Fifty-three patients were included. Twenty-one patients were being retreated due to relapse or insufficiency of therapy. Thirty-one patients used a substitute regimen with ofloxacin. No molecular markers of resistance to treatment were found in this study. The type of medication used did not influence the cure rate in the short term (6 to 8 months). Patients who were in retreatment had a lower percentage of cure than patients on first treatment (p = 0.034). Conclusions: We can conclude that bacterial resistance to ofloxacin is probably not a limiting factor for the treatment of leprosy in the Hospital Universitário de Brasília.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). FUNDAMENTOS: A sensibilidade dos métodos de cultura em meio sólido para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana (LTA) é limitada pela capacidade visual do avaliador. OBJETIVO: Neste trabalho, foi testada a acurácia da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) baseada em ensaios com sonda de hidrólise TaqMan acoplada à cultura em meio Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) modificado para o diagnóstico de LTA. MÉTODOS: Pacientes com apresentação clínica compatível com LTA foram alocados nos grupos controle e grupo LTA. Foram comparadas a acurácia da avaliação microscópica da cultura e da qPCR de aspirados de lesões cultivados. Os ensaios quantitativos e qualitativos foram realizados utilizando uma sonda de hidrólise específica e primers que amplificam o kDNA de Leishmania braziliensis. RESULTADOS: Cinquenta e oito pacientes foram incluídos no estudo, sendo 38 no grupo LTA e 20 no grupo controle. A análise combinada da qPCR + cultura melhorou significativamente a acurácia do diagnóstico em comparação com a análise visual microscópica (p = 0,006). Ao comparar a avaliação microscópica e a qPCR + cultura, foi observado um ganho de sensibilidade de 44.7% (17 de 38 pacientes com LTA; IC 95% = 28,6 - 61.7) para 68.4% (26 de 38 pacientes com LTA; IC 95% = 51.3 - 82.5), com uma pequena redução de especificidade de 100% (20 de 20 controles; 95% IC = 83.2 - 100) para 95% (19 de 20 controles; 95% IC = 75.1 - 99.9), respectivamente. A quantidade mínima de parasitos por tubo de cultura detectada por microscopia foi de 15. Entretanto, a sensibilidade foi de apenas 30% quando menos de 1.000 parasitos foram quantificados. CONCLUSÃO: A avaliação microscópica das amostras de cultura na LTA pode ter sua sensibilidade limitada pela não visualização de parasitos escassos ou pela não diferenciação de parasitos amastigotas em formas promastigotas. BACKGROUND: The sensitivity of culture methods in solid medium for the diagnosis of American tegumentary leishmaniasis (ATL) is limited by the visual capacity of the evaluator. OBJECTIVE: It was tested the accuracy of a TaqMan-based real-time polymerase chain reaction (qPCR) coupled to culture in Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) medium modified for the diagnosis of ATL. METHOD: Patients with a clinical presentation compatible with ATL were allocated into ATL and control groups. The accuracy of microscopic and qPCR processing of cultured lesion aspirates were compared. Quantitative and qualitative assays were performed using a specific hydrolysis probe and primers amplifying the kDNA minicircle of Leishmania braziliensis. RESULTS: Fifty-eight patients were included in the study, with 38 in the ATL group and 20 in the control group. The combined qPCR + culture analysis significantly improved the accuracy of diagnosis compared to the microscopic analysis (p=0.006). When comparing microscopic and qPCR + culture processing, we observed a sensitivity gain from 44.7% (17 of 38 ATL patients; 95% CI = 28.6 - 61.7) to 68.4% (26 of 38 ATL patients; 95% CI = 51.3 - 82.5), with a small specificity reduction from 100% (20 of 20 controls; 95% CI = 83.2 - 100) to 95% (19 of 20 controls; 95% CI = 75.1 - 99.9), respectively. The minimum quantity of parasites per culture tubes detected by microscopic evaluation was 15, but the sensitivity was only 30% when fewer than 1,000 parasites were quantified. CONCLUSION: The microscopic evaluation of culture samples in ATL may have its sensitivity limited by the non-visualization of scarce parasites or by the non-differentiation of amastigote parasites into promastigote forms.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2019. Introdução: A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) encontra-se entre as doenças tropicais negligenciadas com ampla distribuição geográfica e crescente incidência. O diagnóstico precoce da doença é essencial, mas não existe padrão-ouro definido. Propõe-se que testes múltiplos envolvendo a Intradermorreação de Montenegro (IDRM) e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) seja uma estratégia que aumente a acurácia do diagnóstico de LTA. Objetivos: O objetivo principal do presente estudo é avaliar a sensibilidade, especificidade e acurácia da IDRM e da PCR em testes múltiplos, realizados nos quadros clínicos compatíveis em comparação a testes de referência no diagnóstico diferencial de LTA. Metodologia: A coleta de dados foi realizada entre janeiro de 2015 a dezembro de 2017 no serviço de Dermatologia do Hospital Universitário de Brasília (HUB). Participantes com quadro clínico compatível de LTA alocados nos casoscom LTA (n=79) e controles (n=20), realizaram os testes do padrão composto de referência (exame clínico, epidemiológico, imunofluorescência indireta, cultura, microscopia, histopatológico) e os testes índices (IDRM e PCR). Resultados: A PCR na população obteve sensibilidade de 74,68%, especificidade de 100% e acurácia de 79,80%. O uso combinado com a IDRM obteve sensibilidade de 97,47%, especificidade de 60% e acurácia de 89,90%. Discussão: As análises demostraram que houve aumento significante da sensibilidade. Os resultados evidenciam novas perspectivas no manejo clínico do diagnóstico diferencial para LTA através do uso racional da IDRM. Introduction: American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is among the neglected tropical diseases with increasing geographic distribution. Early diagnosis of the disease is essential, but there is no gold standard. The objective of testing the various levels of a Montenegro intradermalimmunoassay (MIDR) and a Polymerase Chain Reaction (PCR) are strategies that leads to a diagnosis of ALT. Objectives: The main objective of the present study is to evaluate the sensitivity, specificity, and accuracy of MIDR and PCR in script tests, such as the reference test in the differential diagnosis of ALT. Methodology: Data collection was performed between January 2015 and December 2017 at the Dermatology Service of the Hospital Universitário de Brasília (HUB). Participants with ATL-compatible clinical status allocated to groups (G1, n = 79) and control (G1, n = 20) performed the reference composite standard tests (clinical, epidemiological, indirect immunofluorescence, culture, microscopy, histopathological) and index tests (MIDR and PCR). Results: PCR obtained a sensitivity of 74.68%, specificity of 100% and an accuracy of 79.80%. The combined use with MIDR obtained a sensitivity of 97.47%, specificity of 60% and an accuracy of 89.90%. Discussion: The analysis showed that there was a significant increase in sensitivity. The results show new perspectives in the clinical management of the differential diagnosis for ATL through the rational use of MIDR.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2018. O cenário de desabastecimento de PPD (derivado proteico purificado) no Brasil, tem dificultado o rastreio de infecção latente por tuberculose (ILTB) nos grupos de risco de progressão para tuberculose (TB). Os imunobiológicos são medicamentos de elevada eficácia para o tratamento de doenças auto-imunes, porém uma das reações adversas possíveis é o desenvolvimento de TB. Pacientes em uso de imunobiológicos para tratamento de psoríase no território nacional não vêm tendo acesso regular ao PPD nos últimos 4 anos. Objetivo: Investigar a prevalência de realização de PPD e avaliar o risco de tuberculose em pacientes que utilizam imunossupressores no Hospital Universitário de Brasília - HUB. Método: Análise descritiva da frequência de provas tuberculínicas (PT ou PPD) realizadas em pacientes sob tratamento imunossupressivo de psoríase no HUB, também com componente transversal analítico no qual a variável independente principal foi o uso ou não de drogas imunobiológicas e a variável dependente principal consistiu no desenvolvimento ou não de TB na vigência de terapia imunossupressora. Resultados: Foram detectados que somente 49,4% dos pacientes do grupo imunobiológicos haviam registro de realização do PPD, dos quais apenas cerca de um quarto eram recentes (< 1 ano). Considerando a ocorrência de TB, não houve diferença significativa entre pacientes que utilizaram imunobiológicos e que utilizaram outros imunossupressores, mesmo na análise multivariada (p=0,399). Conclusão: A não realização de rastreio de ILTB para um grupo de reconhecido risco de TB pode acarretar exposição inadvertida, que pode levar a desenvolvimento da doença e perpetuação do ciclo de infecção. Não foi detectada diferença entre os grupos estudados quanto ao desenvolvimento de TB. The scenario of PPD (purified protein derivative) shortages in Brazil has made it difficult to screen Latent Tuberculosis Infection (ILTB) in the at-risk groups for active tuberculosis (TB). Immunobiologicals are highly effective drugs for the treatment of autoimmune diseases, but one of the possible adverse reactions is the development of TB. Patients using immunobiologicals for the treatment of psoriasis in the national territory have not been given regular access to PPD in the last 4 years. Objective: To investigate the prevalence of PPD and to evaluate the risk of tuberculosis in patients using immunosuppressants at the Hospital Universitário de Brasília - HUB. Method: Descriptive analysis of the frequency of tuberculin tests (PT or PPD) performed in patients undergoing immunosuppressive treatment of psoriasis in the HUB, also with an analytical cross-section in which the main independent variable was the use of immunobiological drugs and the main dependent variable consisted in the development or non-development of tuberculosis during immunosuppressive therapy. Results: It was detected that only 49.4% of patients in the immunobiological group had records of PPD, of which only about a quarter were recent (

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2018. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é um grande problema de saúde pública, e no Brasil ocorreu por todo o território nacional. Na época atual, ainda representa um grande desafio para o clínico, pela complexidade das formas de manifestação da doença. Os exames parasitológicos (esfregaço e cultura) e histopatológico apresentam uma boa especificidade diagnóstica, mas uma sensibilidade insatisfatória, em relação ao exame de imunofluorescência indireta (IFI) é caracterizado pela alta sensibilidade, mas uma baixa especificidade diagnóstica. A toxicidade dos tratamentos disponíveis fundamenta a busca frequente por técnicas mais precisas e menos invasivas no reconhecimento da LTA. Nesse estudo, utilizou-se a Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR) para quantificar o cinetoplasto do DNA (kDNA) de Leishmania spp. em lesões de LTA nas diferentes camadas da pele. O estudo recrutou pacientes com suspeita clínica de LTA, no Hospital Universitário de Brasília – HUB. Exames de IFI, esfregaço, cultura do aspirado da lesão, histopatológico e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) convencional foram utilizados para alocar os pacientes em dois grupos: LTA e controle. A separação da epiderme da derme superior foi feita pela técnica de salt split skin, e as demais camadas foram separadas por bisturi estéril. A qPCR foi realizada de forma qualitativa e quantitativa utilizando os primers PPf-5’- GGC CCA CTA TAT TAC ACC AAC CCC-3’ e PPr-5’-GGG GTA GGG GCG TTC TGC GAA-3’, resultando em um amplificado de 120pb, para encontrar e quantificar o kDNA de Leishmania spp.. Foram incluídos 59 pacientes na pesquisa, sendo que 40 foram designados para o grupo LTA e 19 para o grupo controle. Dentre todos os exames utilizados para a alocação dos grupos, o histopatológico em relação à compatibilidade apresentou a maior acurácia diagnóstica (82,35% IC 95% = 69,75 - 90,43). A epiderme (159,1 x 106) e a derme superior (75,4 x 106) respectivamente, mostraram um maior número de parasitos do que na derme inferior (54,6 x 106) e hipoderme (16,8 x 106), porém, essa diferença não foi significantiva (p > 0.05). A acurácia obtida na derme superior (77,9% IC 95% = 65,9 - 86,7), foi significativamente maior que a acurácia das amostras da epiderme e hipoderme (p = 0,039 em ambas as comparações). No grupo LTA, a maior sensibilidade alcançada foi nas amostras da derme superior (67,5% IC 95% = 50,9 - 81,43), e no grupo controle, a epiderme, derme superior e hipoderme alcançaram 100% (IC 95% 82,3 - 100 / 82,5 - 100 / 81,5 - 100) de especificidade. Futuros estudos sobre a eliminação transepidérmica como mecanismo de defesa do parasito, devem levar em consideração o kDNA de Leishmania spp. encontrado na epiderme no presente estudo. Concluiu-se que técnicas de coletas mais superficiais e menos invasivas são suficientes para encontrar um grande número de parasitos de Leishmania spp.. American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is a major public health problem, and in Brazil occurred throughout the national territory. At the present time, it still represents a great challenge for the clinician, due to the complexity form of the manifestation of the disease. Parasitological (smear and culture) and histopathological exams have good diagnostic specificity, but an unsatisfactory sensitivity, in relation to indirect immunofluorescence (IFI) is characterized by high sensitivity, but low diagnostic specificity. The toxicity of the available treatments fundamental the frequent search for more accurate and less invasive techniques in the recognition of ATL. In this study, was used the real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR) to quantify the DNA kinetoplast (kDNA) of Leishmania spp. in ATL lesions on different layers of the skin. The study recruited patients with clinical suspicion of ATL at the University Hospital of Brasília - HUB. IFI exams, smear, culture of the aspirate of the lesion, histopathological and conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) were used to allocate the patients in two groups: ATL and control. The separation of the epidermis from the upper dermis was done by the salt split skin technique, and the other layers were separated by sterile scalpel. The qPCR was performed of form qualitative and quantitative using primers PPf-5'-GGC CCA CTA TAT TAC ACC AAC CCC-3 'and PPr-5'-GGG GTA GGG GCG TTC TGC GAA-3', resulting in an amplification of 120pb, to find and quantify the kDNA of Leishmania spp.. Were included 59 patients in the study, of whom 40 were assigned to the ATL group and 19 were assigned to the control group. Among all the tests used for the allocation of the groups, the histopathological aspects in relation to compatibility showed the highest diagnostic accuracy (82.35% CI 95% = 69.75 - 90.43). The epidermis (159.1 x 106) and the upper dermis (75.4 x 106), respectively, showed a higher number of parasites than in the lower dermis (54.6 x 106) and hypodermis (16.8 x 106) however, this difference was not significant (p> 0.05). Accuracy achieved in the upper dermis (77.9% CI 95% = 65.9-86.7) was significantly higher than the accuracy of the epidermis and hypodermis samples (p = 0.039 in both comparisons). In the ATL group, the highest sensitivity was found in the samples of the upper dermis (67.5% CI 95% = 50.9 - 81.43), and in the control group, the epidermis, upper dermis and hypodermis reached 100% % 82.3 - 100 / 82.5 - 100 / 81.5 - 100) of specificity. Future studies on transepidermal elimination as a defense mechanism of the parasite should take into consideration the kDNA of Leishmania spp. found in the epidermis in the present study. Was concluded that more superficial and less invasive collection techniques are sufficient to find large numbers of parasites of Leishmania spp ..