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A doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa mais comum entre os idosos. É caracterizada pela perda progressiva de neurônios dopaminérgicos na substância negra pars compacta (SNc) e diminuição de dopamina em áreas de projeção, como o estriado (CPu). Estudos recentes têm demonstrado a presença de alterações mitocondriais, tanto em modelos animais quanto em pacientes com DP. As alterações envolvem redução da atividade e da quantidade dos complexos respiratórios e a diminuição dos níveis de fatores transcricionais, como PGC-1α, NRF-1 e TFAM, responsáveis pela biogênese mitocondrial. Por outro lado, o exercício físico tem se mostrado uma ferramenta importante tanto por atuar na melhora dos sintomas parkinsonianos como por reduzir o risco do desencadeamento da doença. Além disso, diversos estudos em outros modelos apontam seu efeito benéfico ao estimular a biogênese e função mitocondrial. Porém, a relação entre exercício físico e alterações mitocondriais na DP não estão bem estabelecidas, e não se sabe qual a duração necessária de treinamento físico para o surgimento dos efeitos benéficos. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito do exercício em esteira, em diferentes durações, sobre a expressão de proteínas mitocondriais envolvidas na biogênese (PGC-1α, NRF-1, TFAM) e na função mitocondrial através da avaliação do sistema de fosforilação oxidativa (OXPHOS). Para tal, ratos Wistar machos foram submetidos à cirurgia estereotáxica com microinfusão de 6-OHDA e ao protocolo de exercício em esteira (40 minutos, 10 m/min, 3x/semana, em dias alternados) por uma ou quatro semanas. Após o término do protocolo de exercício, foram realizados os testes comportamentais (teste de rotação por apomorfina e de marcha). Os níveis de proteínas na SNc e CPu foram mensurados por imuno-histoquímica e immunoblotting. A função da atividade dos complexos mitocondriais foi avaliada pelo ensaio da atividade enzimática da cadeia transportadora de elétrons. Os resultados indicaram uma alteração comportamental motora dos ratos injetados com 6-OHDA, que foi revertida após quatro semanas de treinamento, assim como uma melhora do sistema dopaminérgico. Com relação a mitocôndria, foram encontrados diferenças apenas na SNc. Os benefícios do exercício parecem ocorrer de maneira progressiva ao proteger contra a redução de PGC-1α e NRF-1 após uma semana de treinamento, e impedir o comprometimento da expressão de PGC-1α, NRF-1, TFAM e do complexo I, além de sua atividade, após quatro semanas de exercício em esteira. Assim, esse estudo demonstra o provável envolvimento da biogênese e função mitocondrial entre os mecanismos pelo qual o exercício físico intermitente em esteira é capaz de promover uma neuroproteção na DP, mesmo em fases iniciais do treinamento físico. Parkinson\'s disease (PD) is the second most common neurodegenerative disorder among elderly. It is characterized by a progressive loss of dopaminergic neurons in substantia nigra pars compacta (SNc) and a decreased of dopamine on its projection areas such as striatum (CPu). Recent studies have shown the presence of mitochondrial alterations, both in animal models and in patients with PD. Alterations involves reduced activity and quantity of respiratory complexes and decreased levels of the transcription factors responsible for mitochondrial biogenesis, such as PGC-1α, NRF-1 and TFAM. On the other hand, physical exercise has proved to be an important tool as it can improve parkinsonian symptoms and reduce the risk of getting the disease. In addition, several studies point to its beneficial effect of stimulating biogenesis and mitochondrial function. However, the relationship between exercise and mitochondrial alterations in PD is not well established, neither which is the duration of physical exercise capable of promote beneficial effects. In this sense, the objective of this work was to evaluate the effect of different durations of treadmill exercise in the expression of mitochondrial proteins involved in mitochondrial biogenesis (PGC-1α, NRF-1, TFAM) and function trough the oxidative phosphorylation system (OXPHOS). Male Wistar rats underwent stereotactic surgery with 6-OHDA microinfusion and treadmill exercise protocol (40 minutes, 10 m/min, 3 x/week, one day and another) for one or four weeks. After the end of the protocol, behavioral tests (apomorphine rotation and gait test) were performed. Protein levels in SNc and CPu were measured by immunohistochemistry and immunoblotting. Mitochondrial respiratory function was assessed by the enzymatic activity assay of the electron transport chain. Results indicate a motor behavioral change in rats injected with 6-OHDA that was reversed after four weeks of training, as well as an improvement in the dopaminergic system. Regarding mitochondria, alterations were found only in SNc. Beneficial exercise effects appears to act progressively by protecting against the reduction of PGC-1α and NRF-1, after one week of training, and preventing an impaired expression of PGC-1α, NRF-1, TFAM and complex I, and also its activity, after four weeks of treadmill exercise. Thus, this study demonstrates the possible involvement of mitochondrial biogenesis and function among the mechanisms by which an intermittent physical exercise is capable of promote neuroprotection in PD, even in early phases of physical exercise.

O câncer de tiroide é uma neoplasia endócrina cuja incidência tem aumentado ao longo dos últimos anos. Mais de 80% dos casos consiste em carcinomas papilíferos (PTC), que são geralmente bem diferenciados e apresentam bom prognóstico. No entanto, uma fração dos pacientes é diagnosticada com doença agressiva e mau prognóstico. Estes casos são frequentemente resistentes à terapia convencional e apresentam baixo grau de diferenciação celular, sendo considerados pouco diferenciados ou anaplásicos (ATC). A perda de diferenciação se caracteriza pela ausência da expressão de marcadores de diferenciação tiroidiana como tiroglobulina (Tg), tiroperoxidase (TPO), simportador sódio/iodo (NIS), entre outros. A aquisição de características de células-tronco por células tumorais tem sido reportada em diversos cânceres, sendo a reativação de vias de sinalização embrionárias um dos possíveis mecanismos envolvidos nesse processo. A via de sinalização Nodal é crucial para a indução do mesoderma e formação do eixo ântero-posterior durante a embriogênese. Nodal é um ligante pertencente à superfamília TGF-&#223, a qual possui membros que apresentam expressão desregulada em tumores da tiroide, tais como TGF-&#223 1 e activinas A e B. A reativação da sinalização Nodal tem sido reportada no câncer e associada a fenótipos mais agressivos. Mostramos através de coloração por imunohistoquímica que NODAL está presente nas células foliculares de PTC, mas não de ATC. A superexpressão de NODAL em linhagem de PTC diminui a proliferação celular, mas não afeta a capacidade de formação de esferas nem a expressão de genes de pluripotência e diferenciação tiroidiana, enquanto o silenciamento parcial de NODAL aumenta a expressão de SOX2 e NIS. Tanto a superexpressão quanto silenciamento de NODAL não influenciam a ativação da via Smad. Identificamos, ainda, microRNAs com expressão reduzida em amostras de PTC e potencialmente envolvidos na regulação da via Nodal, além de discutirmos os desafios de mensuração de Nodal a níveis proteico e de mRNA. Nossos resultados mostram que NODAL está expresso em carcinomas bem diferenciados da tiroide, mas não em ATC, ao contrário do que se observa em outros tipos de câncer. Além disso, a superexpressão de NODAL não promove fenótipo de célula-tronco em linhagem de câncer diferenciado de tiroide. Em conjunto, nossos dados sugerem que a perda da expressão de NODAL pode estar associada a fenótipos menos diferenciados de câncer de tiroide, como evidenciado pelos resultados de imunohistoquímica. Dessa forma, experimentos adicionais como superexpressão de NODAL devem ser conduzidos em linhagens de ATC. Além disso, o uso de modelos mais avançados como animal ou cultura 3D pode ser empregado para estudar o envolvimento do microambiente tumoral, uma vez que o modelo de linhagens celulares apresenta limitações e não recapitula a heterogeneidade tumoral observada no câncer in vivo. Thyroid cancer is an endocrine neoplasia with increasing incidence over the last years. More than 80% of cases consist of papillary carcinomas (PTC), which are usually well differentiated and present good prognosis. However, a fraction of patients is diagnosed with aggressive disease and bad prognosis. These cases are frequently resistant to conventional therapy and present low-grade cell differentiation, being considered poorly differentiated or anaplastic (ATC). The loss of differentiation is characterized by the loss of expression of thyroid differentiation markers such as thyroglobulin (Tg), thyroperoxidase (TPO), sodium/iodine symporter (NIS), among others. The acquisition of stem cell features by cancer cells has been reported in several cancers, and reactivation of embryonic signaling pathways is one of the possible mechanisms involved in this process. The Nodal signaling pathway is crucial for mesoderm induction and anterior-posterior axis formation during embryogenesis. Nodal is a ligand belonging to TGF-&#223 superfamily, which has members with deregulated expression in thyroid tumors, such as TGF-&#223 1 and activins A and B. Reactivation of Nodal signaling has been reported in cancer and associated with more aggressive phenotypes. We show through immunohistochemistry staining that NODAL is present in follicular cells of PTC, but not ATC. NODAL overexpression in PTC cell line decreases cell proliferation but does not affect sphere formation capacity or the expression of pluripotency and thyroid differentiation genes, while NODAL knock down increases expression of SOX2 and NIS. Both NODAL overexpression and knock down do not influence the activation of Smad signaling. We also identified microRNAs with reduced expression in PTC samples and potentially involved in the regulation of Nodal pathway, besides discussing the challenges of measuring Nodal protein and mRNA expression. Our results show that, contrary to what is observed in other types of cancer, NODAL is expressed in well differentiated thyroid carcinomas rather than in ATC. Moreover, NODAL overexpression does not promote stem cell-like phenotype in differentiated thyroid cancer cell line. Together, our data suggest that NODAL loss might be associated with less differentiated phenotypes in thyroid cancer, as evidenced by our immunohistochemistry results. Thus, further experiments such as NODAL overexpression should be conducted with ATC cell lines. Furthermore, the use of more advanced models such as animal and 3D culture could be employed to study the involvement of tumor microenvironment, once cell line model is limited and do not recapitulate the tumor heterogeneity found in câncer in vivo.

A Doença de Parkinson é a segunda doença neurodegenerativa mais comum que atinge os indivíduos acima dos 50 anos, acometendo de 1% a 5% da população mundial, tornando-se um problema de saúde pública devido ao avanço da expectativa de vida da população. Dentre os tratamentos utilizados temos a utilização de medicações e terapias diversas, dentre elas a Acupuntura (ACP) que é uma técnica milenar da medicina chinesa que utiliza a inserção de agulhas em pontos específicos corporais. No presente trabalho foram realizadas cinco sessões de acupuntura, uma vez por semana, em um grupo de sete pacientes escolhidos de forma aleatória. Foram mensurados escala visual analógica de dor, UPDRS parte III, mini mental, escala de sintomas não motores e questionário de qualidade de vida, tais avaliações mensuram de forma quantitativa os sintomas motores e não motores da doença de Parkinson. Foram utilizados teste T-student para dados parados, teste de Wilcoxon e ANOVA dependendo do dado encontrado. Após a análise estatística foram detectadas diferenças significantes entre antes e após a realização da quinta sessão, sugerindo assim melhora dos scores da dor, dos sintomas motores, dos sintomas não motores e da qualidade de vida desses pacientes Parkinson\'s disease is the second most common neurodegenerative disease that affects individuals over 50 years of age, affecting 1% to 5% of the world population, becoming a public health problem due to the advancement of life expectancy of the population. Among the treatments used are the use of medications and various therapies, among them Acupuncture (ACP), which is an ancient technique of Chinese medicine that uses the insertion of needles at specific bodily points. In the present study, five acupuncture sessions were performed once a week in a group of seven randomly selected patients. The visual analog pain scale, UPDRS part III, mini mental, non-motor symptom scale and quality of life questionnaire were measured. These evaluations quantitatively measure the motor and non-motor symptoms of Parkinson\'s disease. T-student test was used for stopped data, Wilcoxon test and ANOVA depending on the data found. After the statistical analysis, significant differences were detected between before and after the fifth session, suggesting an improvement in pain scores, motor symptoms, non-motor symptoms and quality of life of these patient

A hipófise é uma glândula vital que produz e secreta hormônios relacionados ao crescimento, fertilidade, lactação e resposta ao estresse. Vários fatores de transcrição controlam as fases iniciais da organogênese hipofisária: HESX1, GLI2, OTX2, LHX3, LHX4, SOX2 e SOX3, enquanto os fatores de transcrição como o PROP1 e POU1F1 (PIT-1) estão envolvidos na diferenciação celular terminal. Estes fatores participam de uma cascata de eventos responsáveis pela formação de hormônios hipofisários (LH, FSH, TSH, GH e PRL) e, quando ausentes, provocam a deficiência de um ou mais hormônios. A linhagem Ames, camundongo com mutação espontânea no fator de transcrição PROP1, é extensivamente utilizada como modelo animal para estudo do hipopituitarismo congênito. Este estudo objetiva a avaliação da dinâmica celular hipofisária envolvida na diferenciação das células produtoras de hormônios a partir de células tronco durante a puberdade, período de alta demanda hipofisária. Durante períodos que não demandam elevação dos níveis de hormônios hipofisários, há o aumento da expressão de SOX2 em camundongos Ames. O fator de transcrição PROP1 não é essencial para a diferenciação de gonadotrofos e somatotrofos, havendo o aumento da expressão dos genes codificadores dos hormônios hipofisários e normalização da secreção de GH, LH, FSH e TSH em camundongos com mutação espontânea no Prop1. Apesar do fenótipo de retardo de crescimento e infertilidade, estes animais apresentam morfologia e diferenciação celular gonadal normais, havendo a produção de espermatozoides e desenvolvimento de folículos em animais mutados The pituitary gland produces and secretes hormones related to growth, fertility, lactation and stress response. The initial phases of the anterior pituitary gland development are regulated by many transcription factors, including HESX1, GLI2, OTX2, LHX3, LHX4, SOX2 and SOX3 as well as the transcription factors PROP1 and POU1F1 (PIT-1) that are involved in terminal differentiation. These factors participate in a cascade of events responsible for the formation of pituitary hormones (LH, FSH, TSH, GH and PRL). In the absence of one or more transcription factors, it is observed the deficiency of hormones produced by the pituitary gland. The Ames strain, a mice lineage with spontaneous mutation in the Prop1 gene, is extensively used as an animal model to study congenital hypopituitarism. This study aims to evaluate the cellular dynamic involved in the differentiation of pituitary stem/progenitor cells into pituitary hormone producing cells during puberty, a pituitary high demand period. During periods that do not demand increased pituitary hormones levels, there is an increase in SOX2 expression in the Ames mice. The transcription factor PROP1 is not essential for somatotroph and gonadotroph differentiation with increased expression of pituitary hormones codifying gene and normal secretion of GH, LH, FSH, and TSH in Prop1 spontaneous mutants. Despite presenting with growth delay and infertility, these animals have normal gonadal morphology and cell differentiation, producing spermatozoa and follicular development in mutants

Investigamos como a atividade simpática atua na expressão do Slc2a4/GLUT4 em músculo esquelético de ratos normotensos (Wistar) e espontâneamente hipertensos (SHR) diabéticos, tratados com salina, insulina, propranolol e propranolol+insulina. A insulina reduziu a glicemia, glicosúria e volume urinário, aumentou o peso e a expressão do Slc2a4 no sóleo, porém diminuiu a expressão do Slc2a4 no EDL. O propranolol reduziu a pressão caudal dos SHR, não alterou os parâmetros metabólicos, aumentou a expressão do Slc2a4 no EDL, mas reduziu no sóleo somente dos normotensos. O propranolol+insulina mostrou que em sóleo o efeito da insulina foi preponderante, entretanto, no EDL o propranolol atenuou o efeito da insulina. A expressão do Slc2a4 foi maior nos hipertensos (sóleo e EDL), sendo parcialmente acompanhada pela expressão da proteína, com algumas alterações pós-transcricionais ou por Tnfa. Portanto, o comprometimento da expressão do Slc2a4 induzido pelo diabetes é menor em SHR, provavelmente devido à hiper-atividade simpática presente no músculo esquelético. We investigated the participation of sympathetic activity in the regulation of Slc2a4/GLUT4 expression in skeletal muscle of diabetic Wistar and spontaneously hypertensive (SHR) rats, treated with saline, insulin, propranolol and propranolol+insulin. Insulin reduced glycemia, urinary volume and glucose, and increased body weight and Slc2a4 expression in soleus, but decreased it in EDL. Propranolol reduced arterial blood pressure in SHR, and did not alter the metabolic parameters, increased the mRNA expression in EDL, but reduced it in soleus of normotensive rats. Propranolol+insulin showed that in soleus the effect of insulin was preponderant, whereas in EDL propranolol attenuated the insulin effect. The Slc2a4 expression was higher in SHR (soleus, EDL), and it was similar to the protein expression, with some discrepancies, indicating post-transcription regulation, or Tnfa-related alteration. In conclusion, the impairment in Slc2a4 expression during diabetes is limited in SHR, probably because their high sympathetic activity in skeletal muscle.

A proposta deste trabalho é a padronização do método de eletroporação direta (utilizando eletrodos) em músculo sóleo de ratos wistar. Deste processo físico, pudemos variar a voltagem, o número de pulsos e duração do pulso. O objetivo principal foi à busca de um parâmetro ideal onde deveria haver a menor lesão tecidual com a maior quantidade de expressão do GFP. Métodos de análise (fluorescência e histologia) foram utilizados para a determinação da eficiência de transferência de genes, onde se considerou a razão entre as fibras musculares sadias emissoras fluorescência e o número total de fibras sadias. Como resultado, atingimos a taxa de eficiência de (50,3 ± 20%) em transferência de genes, utilizando a voltagem de 25 V, trem de 8 pulsos com duração de 20ms e freqüência de 1Hz. A possibilidade de interferir na função deste músculo abre a perspectiva de se estudar o papel de certos genes na plasticidade muscular esquelética, especialmente no crescimento muscular longitudinal. The use of electrical pulses for gene transfer has been successfully used to reach significant levels of gene expression in vitro and in vivo. Therefore electroporation can be considered an important device to get further insight on biological mechanisms and also to treatment. The aim of the present work is to achieve a high level of gene transfer throughout electroporation in the soleus muscle of Wistar rats. The muscle was surgically accessed, injected with Hyaluronidase and subsequently injected with a plasmid expressing GFP (Green Fluorescence Protein). Observation of fluorescence produced in situ and also HE (Hematoxilin-eosin) preparations revealed that the best gene transfer efficiency (50, 3 ± 20%) was achieved with 25 V and 8 pulses (1Hz) lasting 20ms. These results point to a potential use of electroporation as a tool for investigating cellular and molecular aspects of skeletal muscle plasticity, especially those that can be approached only in soleus muscle, such as longitudinal growth.