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Foram analisadas a incidência e a multi-resistência a drogas antimicrobianas em bactérias patogênicas isoladas de 750 amostras de leite de vacas com mastite sub-clínica, na região-centro oeste do Estado de São Paulo. Os microorganismos do gênero Staphytococcus (75,8%), principalmente representados pelo S. aureuse S. epidermes, e a Escherichia coli (7,1%) foram as bactérias mais freqüentemente isoladas. A maioria dos agentes etiológicos apresentou-se em cultura pura, embora associações de microorganismos tenham sido encontradas em algumas amostras. A resistência múltipla a drogas antimicrobianas (penicilina, ampicilina, dicloxacilina, estreptomicina, tetraciclina e oxacilina) foi observada somente entre bactérias Gram negativas e em algumas linhagens de S. aureus (39,9%). Os demais agentes bacterianos Gram positivos demonstraram sensibilidade às drogas testadas. Os problemas conseqüentes da resistência múltipla a drogas constituem um obstáculo à terapêutica e de difícil solução, principalmente através de programas de controle a curto prazo.