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Introduction: Participation in proficiency testing (PT) is used to evaluate the competence of testing and calibration laboratories. Objective: To evaluate the viability of the freeze-drying technique to produce six lots of PT items containing two Escherichia coli, two containing Bacillus cereus and Staphylococcus aureus concomitantly, and two containing Salmonella Enteritidis in baked shredded chicken matrix. Method: Homogeneity according to harmonized protocol and long and short-term stability testing according to ISO GUIDE 35 were carried out. Results: All lots produced were sufficiently homogeneous. In the long-term stability study, all lots were sufficiently stable at temperatures of -80 ± 10°C and -20 ± 4°C, except for the lot containing B. cereus and S. aureus. The other lots presented stability for at least 126 days at -80 ± 10°C and 84 days at -20 ± 4°C. The short-term stability was carried out only with the lots sufficiently stable in the long-term stability study. The lots were sufficiently stable at temperatures of 5 ± 3°C and at 35 ± 2°C, except for the lot containing Salmonella Enteritidis at 35 ± 2°C due to the significant decrease in cell concentration. Conclusions: The freeze-drying technique was satisfactory for the production of test items containing E. coli e Salmonella Enteritidis in the chicken matrix viable to use in a PT, but the lot containing Salmonella Enteritidis must be transported to the laboratories at the temperature ≤ 8°C for up to four days. Lots containing S. aureus e B. cereus simultaneously presented insufficient stability, indicating that the production of individual lots containing each bacteria individually is necessary. Introdução: A participação em ensaios de proficiência (EP) é utilizada para avaliar a competência de laboratórios de ensaio e calibração. Objetivo: Avaliar a viabilidade da técnica de liofilização na produção de seis lotes de itens de EP, dois contendo Escherichia coli, dois contendo Bacillus cereus e Staphylococcus aureus concomitantemente, e dois contendo Salmonella Enteritidis em matriz frango desfiado cozido. Método: Foram realizados testes de homogeneidade segundo o protocolo harmonizado e de estabilidade em longo prazo pelo modelo clássico e curto prazo pelo modelo isócrono segundo a ISO Guide 35. Resultados: Todos os lotes produzidos foram considerados suficientemente homogêneos. No estudo de estabilidade em longo prazo, todos os lotes se apresentaram suficientemente estáveis nas temperaturas de -80 ± 10ºC e -20 ± 4ºC, exceto o lote contendo B. cereus e S. aureus. Os outros lotes apresentaram estabilidade por pelo menos 126 dias a -80 ± 10ºC e 84 dias a -20 ± 4ºC. Na avaliação da estabilidade em curto prazo, foram analisados apenas os lotes suficientemente estáveis no estudo em longo prazo. Os lotes foram suficientemente estáveis nas temperaturas de 5 ± 3ºC e 35 ± 2ºC, com exceção do lote contendo Salmonella Enteritidis a 35 ± 2ºC, devido ao decréscimo significativo da concentração celular. Conclusões: A técnica de liofilização foi satisfatória para produção de itens de ensaio contendo E. coli e Salmonella Enteritidis em matriz frango viáveis para utilização em um EP, sendo que o lote contendo Salmonella Enteritidis deve ser transportado aos laboratórios participantes em temperatura ≤ 8ºC por até quatro dias. Lotes contendo S. aureus e B. cereus, simultaneamente, apresentaram estabilidade insuficiente, indicando que a produção de lotes individuais contendo cada bactéria individualmente é necessária.

Dioxinas e furanos são contaminantes classificados como poluentes orgânicos persistentes e altamente lipofílicos. A presença em alimentos é tópico de saúde pública em função dos efeitos tóxicos, incluindo propriedades carcinogênicas mesmo em concentrações muito baixas. Incidentes recentes envolvendo a carne de frango brasileira incluíram a gordura de aves dentre as matrizes prioritárias para monitoramento. Contudo, o controle desses compostos depende da confiabilidade de métodos analíticos, sendo os ensaios de proficiência (EP) ferramentas importantes para a qualidade analítica, ainda que raros. Os objetivos do presente estudo foram a produção de um material de referência a partir de gordura de aves naturalmente contaminada, avaliação de sua homogeneidade e estabilidade e a organização de um EP para determinação de dioxinas e furanos. As condições de preparo dos materiais foram otimizadas em um delineamento do tipo fatorial, envolvendo as variáveis potência e tempo de fusão no micro-ondas, temperatura do banho termostático e velocidade de agitação, visando a obtenção de um material de menor viscosidade. A velocidade de agitação foi um fator não significativo (p > 0,05) enquanto os demais fatores foram significativos (p < 0,05). As amostras foram, então, fundidas em micro-ondas, envazadas sob aquecimento e homogeneização em frascos de 80 g, e armazenadas sob refrigeração. Na avaliação da homogeneidade, dez frascos foram analisados, em duplicata, por cromatografia gasosa (CG) acoplada à espectrometria de massas de alta resolução (EMAR). O lote foi considerado homogêneo para os dez analitos quantificados pelo método adotado, segundo critérios estabelecidos pela norma ISO 13528 e IUPAC. Na avaliação da estabilidade em curto prazo, simulando condições de estresse no transporte dos materiais, por meio da exposição dos mesmos a temperaturas de 45 °C ± 3 °C, por 3, 6 e 9 dias, foram tomados três frascos por tratamento, os quais foram analisados em duplicata. Não foram notadas diferenças significativas entre os diferentes tratamentos (p > 0,05) para todos os analitos, indicando estabilidade do material. A estabilidade em longo prazo foi monitorada por meio da análise de três itens, em duplicata, em cinco diferentes tempos, durante 120 dias. Tal característica foi demonstrada por análise de regressão (p > 0,05) para nove analitos. Os critérios recomendados no documento da IUPAC mostraram mais restritivos que os da norma ISO 13528, em relação à estabilidade. Foram convidados 14 laboratórios, dos quais 12 aceitaram e 10, de quatro diferentes países, efetivamente participaram do EP. A CG-EMAR foi a técnica mais empregada, seguida de CG com espectrometria de massas em modo tandem (CG-EM/EM) e dos bioensaios, que somente reportaram resultados para o somatório TEQ. Valores designados foram estimados pela média dos resultados dos participantes, após tratamento de outliers. A estatística de desempenho foi o z-escore, sendo que o desvio padrão alvo foi estimado pelo modelo de Horwitz e pelo desvio máximo permitido pela Legislação Europeia. Para cinco dos oito analitos avaliados, todos os laboratórios apresentaram desempenho satisfatório em ambos os critérios de desvio alvo. Para os congêneres 1,2,3,7,8-PeCDF, 1,2,3,6,7,8HxCDD, 1,2,3,6,7,8-HxCDF foram encontrados um, dois e dois laboratórios com resultados insatisfatórios, respectivamente. Para o somatório TEQ, dois dos quatro resultados insatisfatórios corresponderam aos laboratórios que empregaram bioensaio. Desta forma, desempenho adequado dos participantes foi demonstrado para determinação dos congêneres de dioxinas e furanos de maior relevância toxicológica. Dioxins and furans are highly lipophilic contaminants classified as persistent organic pollutants. Their presence in food is a public health topic due to toxic effects, including carcinogenic properties even at very low concentrations. Recent incidents involving Brazilian chicken meat included chicken fat among the priority matrices for monitoring. However, the control of these compounds depends on the reliability of analytical methods. Proficiency test (PT) are important tools for analytical quality, although rare. The objectives of the present study were the production of a reference material from naturally contaminated chicken fat, the evaluation of homogeneity and stability of the produced material and the organization of a PT for the determination of dioxins and furans. The conditions for the production of the material were optimized in a factorial design, involving potency and time of melting in the microwave, temperature of the thermostatic bath and speed of agitation, aiming to obtain a material of lower viscosity. The agitation speed was a non-significant factor (p> 0.05), while the other factors were significant (p 0.05) were observed for all the analytes, indicating stability of the material. The longterm stability was monitored by analyzing three samples, in duplicate, at five different times, for 120 days. This characteristic was demonstrated by regression analysis (p > 0.05) for nine analytes. The criteria recommended in the IUPAC document were more restrictive than those of ISO 13528 in relation to stability. Fourteen laboratories were invited, 12 reported interest in participating and 10 from four different countries effectively participated in the PT. CG-HRMS was the most used technique, followed by CG tandem mass spectrometry (GC-MS/MS) and bioassays, which only reported results for the sum TEQ. Designated values were estimated by the mean of the participants' results, after outliers treatment. The performance statistic was the z-score, and the target standard deviation was estimated by the Horwitz model and by the maximum deviation allowed by the European Legislation. For five of the eight analytes evaluated, all laboratories presented satisfactory performance in both target standard deviation criteria. For the congeners 1,2,3,7,8-PeCDF, 1,2,3,6,7,8-HxCDD, 1,2,3,6,7,8-HxCDF were found one, two and two laboratories with unsatisfactory results, respectively. For the TEQ summation, two of the four unsatisfactory results corresponded to laboratories that used bioassay. In this way, adequate performance of the participants was demonstrated for the determination of dioxins and furans congeners of greater toxicological relevance.

The aim of this study was to develop lyophilized test items (TI) containing Salmonella spp., in chocolate matrix to be used in proficiency testing programs (PTP). Microbial analysis was conducted on samples of granulated chocolate to verify that the sample was free of the target microorganisms. Homogeneity and stability studies in long and short term were carried out to monitor TI quality; the presence of vacuum in the samples was also verified, to ensure the efficiency of the lyophilization process. The results of the microbial testing indicated no contamination by Salmonella spp.; thus, the sample was appropriate to be used as matrix. The lyophilization technique, using trehalose as cryoprotectant, has proven to be effective for desiccation of TI produced. The Salmonella batch proved to be sufficiently homogeneous, because the microorganism was present in all analyzed flasks. The batch was held stable at -20°C (five weeks) and -70°C (26 weeks). As for the transportation stability, the batch was considered stable at 4°C (in four days). The TI produced batch in this study showed a quality level that makes it suitable to be used in PTP, to contribute to the increasing reliability of the test results from laboratories and to provide subsidies for identification of problems and troubleshooting. O objetivo desse estudo foi desenvolver itens de ensaio (IE) liofilizados contendo Salmonella spp., em matriz chocolate, para utilização em ensaio de proficiência (EP). Foi realizada a análise microbiológica de uma amostra de chocolate granulado para verificar se estava livre do micro-organismo alvo. Para monitoramento da qualidade dos IE, realizou-se estudos de homogeneidade e estabilidade em longo e curto prazo, bem como verificou-se a presença de vácuo nas amostras garantindo a eficiência do processo de liofilização. A análise microbiológica do chocolate indicou ausência de contaminação por Salmonella spp., estando apto para ser utilizado como matriz. A técnica de liofilização, com uso de trealose como crioprotetor, se mostrou eficaz para dessecação dos IE produzidos. O lote produzido se apresentou suficientemente homogêneo, pois o micro-organismo estava presente em todos os frascos analisados. O lote se apresentou estável à temperatura de -20ºC (em cinco semanas) e -70ºC (em 26 semanas); na estabilidade de transporte, foi considerado estável a 4ºC (em quatro dias). O lote de IE produzido nesse estudo apresentou qualidade que o torna apto para uso em EP, o que visou contribuir para o aumento da confiabilidade dos resultados das análises dos laboratórios e propiciar subsídios para a identificação e solução de problemas.

The participation of analytical laboratories in proficiency testing allows the verification of the reliability of results in analysis of quality control. The aim of this study was to produce a batch of test items (TI) to be used in a proficiency assay for Salmonella spp. research in a cheese matrix. Ultrafiltered Minas cheese was used as the matrix and spiked with a strain of Salmonella Enteritidis. Trehalose was used as cryoprotectant, and freeze-drying was used as the preservation technique. The batch was evaluated for vacuum verification, homogeneity study, and long-term stability testing at temperatures of -70ºC (reference temperature) and -20ºC (storage temperature). The batch was also evaluated for short-term stability at temperatures of 4ºC, 25ºC, and 35ºC (transport temperatures). The results showed vacuum in 95.6% of the bottles, and the batch was considered sufficiently homogeneous. TI remained stable at -70ºC for more than 360 days and at -20ºC for more than 160 days. TI was shown to be stable for up 6 days at 4ºC and 25ºC but not at 35ºC. It is concluded that the methodology used was satisfactory for this TI production for Salmonella spp. research in a cheese matrix. A participação de laboratórios analíticos em ensaio de proficiência permite a verificação da confiabilidade dos resultados gerados nas análises de controle da qualidade. O objetivo deste estudo foi produzir um lote de itens de ensaio (IE) a ser utilizado em ensaio de proficiência (EP) para pesquisa de Salmonella spp. em matriz queijo. Queijo Minas Frescal (QMF) Ultrafiltrado foi utilizado como matriz e fortificado com uma cepa de Salmonella Enteritidis. A trealose foi utilizada como crioprotetor e a liofilização como técnica de preservação. O lote foi avaliado quanto a verificação do vácuo, teste da homogeneidade, estudo da estabilidade em longo prazo nas temperaturas de -70oC (referência) e -20oC (armazenamento) e em curto prazo nas temperaturas de 4, 25 e 35ºC (transporte). O lote apresentou presença de vácuo em 95,6% dos frascos e foi considerado suficientemente homogêneo. Os IE apresentaram estabilidade a -70ºC superior a 360 dias e a -20ºC superior a 160 dias. Os IE demonstraram ser estáveis por até seis dias nas temperaturas de 4 e 25ºC, mas não a 35ºC. Conclui-se que a metodologia utilizada foi satisfatória para produção de IE para o ensaio de pesquisa de Salmonella spp. em matriz queijo.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T18:31:33Z No. of bitstreams: 1 Patricia Ferreira Leite Dissertacao completa.pdf: 1459807 bytes, checksum: ac1791fda7d5c17172261c429bd4f483 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T18:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patricia Ferreira Leite Dissertacao completa.pdf: 1459807 bytes, checksum: ac1791fda7d5c17172261c429bd4f483 (MD5) Previous issue date: 2015-04-29 The external quality control in clinical laboratories in Brazil is a compulsory reality, as accepted by the Ministry of Health. The analytical process requires a management able to preventive and correctively treat its data, contributing to the reliability of the laboratory report. The retrospective study objectifies show the importance of Accreditation in the analytical quality of exams; proposing a new statistical approach to compare provider s data with criteria published by CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) and other references. A total of 54 clinical laboratories accredited by the program of the Brazilian Society of Clinical Analyses (SNA / DICQ) was selected. The results of 03 years of participation in proficiency testing were provided by the Programa Nacional de Controle de Qualidade (PNCQ), for hemoglobin A1c (HbA1c) and glucose exams. These tests are representative of laboratorial routine and clinical significance in treatment and monitoring of patients. The study refers to not contribute for Accreditation of the clinical laboratory in analytical quality, considering the relative average deviation (RAD) of laboratory results. The study demonstrates that Accreditation of quality management system is relevant for the management of analytical quality, and participants in proficiency testing tend to get better reviews over time as accredited clinical laboratories. O controle externo da qualidade nos laboratórios clínicos no Brasil é uma realidade compulsória, conforme Ministério da Saúde. O processo analítico requer uma gestão capaz de preventiva e corretivamente tratar seus dados, contribuindo para a confiabilidade do laudo laboratorial. O estudo retrospectivo objetiva apresentar a relevância da acreditação na qualidade analítica dos exames; propondo uma nova abordagem estatística ao comparar dados do provedor com critérios publicados pelo CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) e referências de outras entidades. Foram selecionados 54 laboratórios clínicos acreditados pelo programa da Sociedade Brasileira de Análises Clínicas (SNA/DICQ). Os resultados de três anos da participação em ensaio de proficiência foram fornecidos pelo Programa Nacional de Controle Externo da Qualidade (PNCQ), para os exames: glicose e hemoglobina glicada (HbA1c). Estes exames são representativos da rotina laboratorial e de significância clínica no tratamento e acompanhamento de pacientes. O estudo refere-se a não contribuição da acreditação do laboratório clínico na qualidade analítica, considerando o desvio relativo à média (DRM) dos resultados laboratoriais. O estudo demonstra que a acreditação do sistema de gestão da qualidade é relevante para a gestão da qualidade analítica, e que os participantes em ensaios de proficiência tendem a obter melhores avaliações ao longo do tempo como laboratórios de análises clínicas acreditados.

The participation in proficiency testing (PT) is essential for testing laboratories to prove their technical competence. The aim of this study was to produce a quantitative reference material (RM) for PT containing Bacillus cereus in milk powder. A sterile solution of 10% skim milk containing 100 mM sucrose was contaminated with a B. cereus strain in a specific concentration. The homogenized matrix was distributed into vials and freeze-drying. The batch produced was considered sufficiently homogeneous assigning a target standard deviation of 0.25. The RM was stable at ≤ -70 ºC and (-20 ± 4) ºC for 1,058 and 60 days, respectively. In the evaluation of temperatures for the transport of material, the RM was stable at 4, 25 and 35 ºC during four days. It is concluded that the batch produced had all the necessary requirements to be used as items of PT. A participação em ensaios de proficiência é essencial para que um laboratório de ensaio possa ter seu desempenho avaliado por meio de uma comparação interlaboratorial. O objetivo deste trabalho foi produzir um material de referência (MR) quantitativo para EP contendo Bacillus cereus em leite em pó. Uma solução estéril de leite desnatado a 10% contendo 100 mM de sacarose foi contaminada com uma cepa de B. cereus em uma concentração previamente determinada. A matriz foi homogeneizada, distribuída em frascos e liofilizada. O lote produzido foi considerado suficientemente homogêneo atribuindo-se um desvio-padrão alvo de 0,25 log10 UFC/mL. O MR apresentou-se estável a ≤ -70 ºC e (-20 ± 4) ºC durante 1.058 e 60 dias, respectivamente. Na avaliação da influência de diferentes temperaturas para o transporte deste material, o MR se apresentou estável a 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante o período de quatro dias de estudo. Conclui-se que o lote produzido apresentou todos os requisitos necessários para ser utilizado como itens de EP.