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No estudo, avaliamos a susceptibilidade antimicrobiana, a presença de fatores de virulência codificadores de genes e do sistema CRISPR, bem como a capacidade de produzir enzimas líticas entre isolados clínicos (n=44) de E. faecalis e E. faecium. Todos os isolados de enterococos apresentaram fenótipo de multirresistência. Metade dos isolados de E. faecalis exibiram alto nível de resistência a gentamicina pelo teste fenotípico, vários deles abrigando o gene aac(6')Ie-aph(2″)Ia. O gene vanA foi o mais frequente entre os isolados de E. faecium resistentes à vancomicina. Foram observadas altas prevalências dos genes de virulência esp e efaA; o gene hyl foi mais associado com E. faecium, enquanto os genes ace and efaA foram mais frequentemente detectados em E. faecalis. A atividade de caseinase foi frequentemente detectada entre os isolados. Gelatinase e DNAse foram predominantes entre E. faecalis, enquanto a capacidade hemolítica foi frequente entre os isolados de E. faecium. Vinte e nove isolados apresentaram pelo menos um sistema CRISPR. Vários isolados de E. faecalis abrigavam o gene aac(6’)-Ie-aph(2’’)-Ia e um lócus CRISPR. Os lócus CRISPR foram positivamente correlacionados com a presença dos genes efaA e gelE, e as atividades de gelatinase e DNAse, enquanto a ausência de CRISPR foi relacionada com a presença do gene hyl. Esses resultados mostram que cepas de E. faecalis e E. faecium isolados de hospital contendo genes de fatores de virulência apresentam concomitantemente lócus CRISPR e determinantes de resistência a antimicrobianos. In this study, we evaluated the antimicrobial susceptibility, the presence of gene-encoding virulence factors and CRISPR systems, as well as the ability to produce lytic enzymes among clinical E. faecalis and E. faecium isolates (n=44). All enterococci isolates showed phenotypes of multi-drug resistance. Half of the E. faecalis isolates exhibited high-level gentamicin resistance phenotype, several of them harboring the aac(6')Ie-aph(2″)Ia gene. The gene vanA was the most frequent among vancomycin-resistant E. faecium. High prevalence of the virulence genes esp and efaA were observed; hyl gene was more associated with E. faecium, while ace and efaA genes were more frequently detected in E. faecalis. Caseinase activity was frequently detected among the isolates. Gelatinase and DNAse activities predominated among E. faecalis, while hemolytic capability was frequent among E. faecium isolates. Twenty-nine isolates showed at least one CRISPR system investigated. Several E. faecalis isolates harbored the aac(6’)-Ie-aph(2’’)-Ia gene and a CRISPR loci. CRISPR loci were positively correlated to efaA and gelE genes, and gelatinase and DNAse activities, while CRISPR loci absence was related to hyl gene presence. These results show that hospital- adapted strains of E. faecalis and E. faecium harboring virulence genes show the concomitant presence of CRISPR loci and antibiotic resistance determinants. Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Justification: There is a solid worldwide call to control the use of antimicrobials associated with new therapeutic approaches against multidrug-resistant infections, such as those caused by the species E. faecalis and E. faecium, commensal opportunistic pathogens usually present in healthcare-related infections (HAI). The high adaptability of these pathogens to the nosocomial environment and the acquisition of resistance and virulence genes are among the main factors contributing to the worsening of these infections. CRISPR-Cas acts as a bacterial defense system, evolutionarily selected due to the association of bacteria with viruses, present in some strains of E. faecalis and E. faecium. It is speculated that CRISPR-Cas could be used in different vectors, including conjugative plasmids, for editing and inactivating resistance genes. Goals: To investigate the use of CRISPR-Cas in conjugative plasmids to control the spread of multidrug-resistant enterococcal strains. Methodology: This is a scope-based review, applying selection criteria and inclusion of studies in the time interval between 2016 and 2021. Conclusion: Molecular editing tools, such as CRISPR-Cas, may be promising alternatives in controlling multidrug-resistant infections and contribute to the control of hospital spread. Strains that do not have this system are more susceptible to acquiring mobile genetic elements, acquiring resistance and virulence genes. The applicability of CRISPR-Cas in conjugative plasmids is an innovative and feasible method, capable of interfering in the mobile genetic elements acquisition, and consequently, reducing resistance and virulence expression, both in the Enterococcus genus and in others. Justificación: Existe un sólido llamado a nivel mundial para controlar el uso de antimicrobianos asociado con nuevos enfoques terapéuticos contra infecciones multirresistentes, como las causadas por las especies E. faecalis y E. faecium, patógenos comensales oportunistas generalmente presentes en infecciones relacionadas con la atención de la salud. (HAI). La alta adaptabilidad de estos patógenos al ambiente nosocomial y la adquisición de genes de resistencia y virulencia se encuentran entre los principales factores que contribuyen al empeoramiento de estas infecciones. CRISPR-Cas actúa como un sistema de defensa bacteriano, seleccionado evolutivamente debido a la asociación de bacterias con virus, presente en algunas cepas de E. faecalis y E. faecium. Se especula que CRISPR-Cas podría usarse en diferentes vectores, incluidos plásmidos conjugativos, para editar e inactivar genes de resistencia. Objetivos: investigar el uso de CRISPR-Cas en plásmidos conjugativos para controlar la propagación de cepas de enterococos multirresistentes. Metodología: Esta es una revisión basada en el alcance, aplicando criterios de selección e inclusión de estudios en el intervalo de tiempo entre 2016 y 2021. Conclusión: Las herramientas de edición molecular, como CRISPR-Cas, pueden ser alternativas prometedoras en el control de infecciones multirresistentes y contribuir al control de la propagación hospitalaria. Las cepas que no cuentan con este sistema son más susceptibles de adquirir elementos genéticos móviles, adquiriendo genes de resistencia y virulencia. La aplicabilidad de CRISPR-Cas en plásmidos conjugativos es un método innovador y factible, capaz de interferir en la adquisición de elementos genéticos móviles, y en consecuencia, reducir la expresión de resistencia y virulencia, tanto en el género Enterococcus como en otros. Justificativa: Há um forte apelo mundial para controle do uso de antimicrobianos associado a novas abordagens terapêuticas contra infecções multirresistentes, como as ocasionados pelas espécies E. faecalis e E. faecium, patógenos oportunistas comensais normalmente presentes em infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS). A elevada capacidade de adaptação desses patógenos ao ambiente nosocomial e a aquisição de genes de resistência e virulência estão entre os principais fatores que contribuem para o agravo dessas infecções. CRISPR-Cas atua como um sistema de defesa bacteriano, selecionado evolutivamente devido à associação de bactérias com vírus, presente em algumas linhagens de E. faecalis e E. faecium. Especula-se que CRISPR-Cas poderiam ser empregados em diferentes vetores, inclusive plasmídeos conjugativos, para edição e inativação de genes de resistência. Objetivos: Investigar o uso de CRISPR-Cas em plasmídeos conjugativos como controle de disseminação de linhagens enterocócicas multirresistentes. Metodologia: Trata-se de revisão baseada em escopo, aplicando critérios de seleção e inclusão de estudos, no intervalo temporal entre 2016 a 2021. Resultados e Considerações finais: Ferramentas de edição molecular, como CRISPR-Cas, podem ser promissoras alternativas no controle de infecções multirresistentes e contribuir no controle de disseminação hospitalar. As linhagens que não apresentam este sistema são mais susceptíveis a aquisição de elementos genéticos móveis, adquirindo genes de resistência e virulência. A aplicabilidade de CRISPR-Cas em plasmídeos conjugativos é um método inovador e factível, capaz de interferir na aquisição de elementos genéticos móveis, e consequentemente, a redução de genes de resistência e virulência, tanto no gênero Enterococcus quanto em outros gêneros.

RESUMO A proximidade dos primatas não humanos (PNH) com o ser humano pode ser considerada um fator de risco para transmissão de bactérias entre essas duas populações. Neste estudo, foi investigada a microbiota anfibiôntica aeróbica oral e retal de calitriquídeos em um fragmento de Mata Atlântica localizado no Rio de Janeiro, Brasil, e foram realizados testes fenotípicos para detecção de bactérias multirresistentes nos isolados encontrados. Foram capturados 14 calitriquídeos e coletadas 21 amostras (14 de cavidade oral e sete de cavidade retal) em dois pontos da mata próximos às habitações humanas. As espécies mais frequentes, na cavidade oral, foram Klebsiella oxytoca (50,0%), K. pneumoniae (28,6%), Kluyvera ascorbata (21,4%) e Stenotrophomonas maltophilia (21,4%) e, na cavidade retal, K. pneumoniae (85,7%), Escherichia coli (28,6%) e Enterobacter spp. (42,9%). Todos os 48 isolados da família Enterobacteriaceae foram negativos para ESBL (betalactamase de espectro ampliado), mostrando-se não produtores da enzima nos dois métodos utilizados: disco-aproximação e método de detecção automatizado. Na pesquisa de ERC (enterobactérias resistentes a carbapenêmicos), esses mesmos isolados não apresentaram resistência aos antibióticos imipenem, meropenem e ertapenem. Todas as bactérias isoladas apresentam um potencial zoonótico, o que representa um risco à saúde pública e à conservação das espécies. ABSTRACT Proximity of nonhuman primates (NHP) to humans can be considered a risk factor for transmission of pathogens between these two populations. This study investigated the oral and rectal aerobic bacterial microbiota of marmosets in an anthropized area of the Atlantic Forest located in Rio de Janeiro, Brazil, and performed phenotypic tests for detection of multidrug-resistant bacteria. Twenty-one samples (14 from the oral cavity and seven from the rectum) were collected from 14 Callithrix sp. captured in two sites of the forest near human dwellings. The most frequent species identified from the oral cavity swabs were Klebsiella oxytoca (50.0%), K. pneumoniae (28.6%), Kluyvera ascorbata (21.4%) and Stenotrophomonas maltophilia (21.4%), whereas the species most commonly identified from the rectum swabs were K. pneumoniae (85.7%), Enterobacter spp. (42.9%) and Escherichia coli (28.6%). All isolates of family Enterobacteriaceae showed no extended spectrum β-lactamase production by disk-diffusion and automated detection tests. In the search for carbapenem-resistant enterobacteriaceae these isolates presented no resistance to the imipenem, meropenem and ertapenem antibiotics. The isolate of Staphylococcus aureus was susceptible to oxacillin and the isolate of Enterococcus was susceptible to vancomycin. All isolated bacteria showed zoonotic potential, thus posing a risk to species conservation and public health.

Objective: Describe the main virulence factors associated with this pathogen, with an emphasis on E. faecium and E. faecalis, demonstrating the main resistance genes involved in the mentioned species, as well as reporting the form of dissemination of these in hospital settings. Methodology: This article was prepared through Literature Review, based on materials indexed in the databases: PubMed, SciELO and Google Scholar, published between the years 2010 to 2020. For selection, the criteria were applied in the following order: (a) exploratory reading; (b) selective reading, (c) selection of material in accordance with the research objectives. Results: 789 files were found, of which 38 were selected for this article. Conclusion: The adoption of practices by the Hospital Infection Control team is very important, contributing to improvements in the quality of health care, thus increasing the safety of the entire team of professionals and patients. Objetivo: Describir los principales factores de virulencia asociados con este patógeno, con énfasis en las especies E. faecium y E. faecalis, demostrando los principales genes de resistencia involucrados en las especies mencionadas, e informando la forma de diseminación. de estos en entornos hospitalarios. Metodología: Este artículo fue preparado a través de la Revisión de Literatura, basada en materiales indexados en las bases de datos: PubMed, SciELO y Google Scholar, publicados entre los años 2010 a 2020. Para la selección, los criterios se aplicaron en el siguiente orden: (a) lectura exploratoria; (b) lectura selectiva, (c) selección de material de acuerdo con los objetivos de la investigación. Resultados: Se encontraron 789 archivos, de los cuales 38 fueron seleccionados para este artículo. Conclusión: La adopción de prácticas por parte del equipo de Control de Infecciones Hospitalarias es muy importante, ya que contribuye a mejorar la calidad de la atención médica, aumentando así la seguridad de todo el equipo de profesionales y pacientes. Objetivo: Descrever os principais fatores de virulência associado a esse patógeno, com ênfase nas espécies E. faecium e. faecalis, demostrando os principais genes de resistência envolvidos nas espécies citadas, bem como, relatar a forma de disseminação destas em ambientes hospitalares. Metodologia: O presente artigo, foi elaborado mediante Revisão da Literatura, baseando-se em materiais indexados nas bases de dados: PubMed, SciELO e Google Acadêmico, publicados entre os anos 2010 a 2020. Para seleção, os critérios foram aplicados na seguinte ordem: (a) leitura exploratória; (b) leitura seletiva, (c) seleção do material em adequação aos objetivos da pesquisa. Resultados: Foram encontrados 789 arquivos, destes, 38 foram selecionados para este artigo. Conclusão: A adoção de práticas pela equipe de Controle de Infecção Hospitalar, se faz muito importante, contribuindo para melhorias na qualidade do atendimento em saúde, aumentando assim, a segurança de toda a equipe de profissionais e pacientes.

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Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. O correto é após a ficha catalográfica a e antes dos Agradecimentos. - Falta o titulo Resumo e o título Abstract nas páginas 7 e 8. Maiores informações: http://ib.rc.unesp.br/Home/Biblioteca37/repositorio_fluxograma_unesp_rioclaro.jpg Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. Atenciosamente, Biblioteca Campus Rio Claro Repositório Institucional UNESP https://repositorio.unesp.br on 2020-03-31T18:25:19Z (GMT) Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T13:03:20Z No. of bitstreams: 1 Montoramento_de _Bioindicadores_fecais.pdf: 3075683 bytes, checksum: c523d1d0c60fb38c01f0628281cac76d (MD5) Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T13:03:20Z No. of bitstreams: 1 Montoramento_de _Bioindicadores_fecais.pdf: 3075683 bytes, checksum: c523d1d0c60fb38c01f0628281cac76d (MD5) Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T19:54:14Z No. of bitstreams: 1 Monitoramento_bioindicadores_fecais.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T19:54:14Z No. of bitstreams: 1 Monitoramento_bioindicadores_fecais.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Rejected by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br), reason: Prezada Mirella, O documento enviado para a coleção Campus Unesp Rio Claro foi recusado pelo(s) seguinte(s) motivo(s): - Capa: logo da Unesp no cabeçalho saiu cortado na parte debaixo. Necessário alterar. O ano 2020 deve vir na linha debaixo e não na mesma linha da cidade Rio Claro - SP. - Página de rosto: há um quadrado com a cidade e ano dentro. Necessário excluir o quadrado e deixar apenas o texto. Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. O correto é após a ficha catalográfica a e antes dos Agradecimentos. - Falta o titulo Resumo e o título Abstract nas páginas 7 e 8. Maiores informações: http://ib.rc.unesp.br/Home/Biblioteca37/repositorio_fluxograma_unesp_rioclaro.jpg Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. 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Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br), reason: Prezada Mirella, O documento enviado para a coleção Campus Unesp Rio Claro foi recusado pelo(s) seguinte(s) motivo(s): - Capa: logo da Unesp no cabeçalho saiu cortado na parte debaixo. Necessário alterar. O ano 2020 deve vir na linha debaixo e não na mesma linha da cidade Rio Claro - SP. - Página de rosto: há um quadrado com a cidade e ano dentro. Necessário excluir o quadrado e deixar apenas o texto. Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. O correto é após a ficha catalográfica a e antes dos Agradecimentos. - Falta o titulo Resumo e o título Abstract nas páginas 7 e 8. Maiores informações: http://ib.rc.unesp.br/Home/Biblioteca37/repositorio_fluxograma_unesp_rioclaro.jpg Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. 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No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Previous issue date: 2020-02-17 Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T19:54:14Z No. of bitstreams: 1 Monitoramento_bioindicadores_fecais.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Rejected by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br), reason: Prezada Mirella, O documento enviado para a coleção Campus Unesp Rio Claro foi recusado pelo(s) seguinte(s) motivo(s): - Capa: logo da Unesp no cabeçalho saiu cortado na parte debaixo. Necessário alterar. O ano 2020 deve vir na linha debaixo e não na mesma linha da cidade Rio Claro - SP. - Página de rosto: há um quadrado com a cidade e ano dentro. Necessário excluir o quadrado e deixar apenas o texto. Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. 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Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br), reason: Prezada Mirella, O documento enviado para a coleção Campus Unesp Rio Claro foi recusado pelo(s) seguinte(s) motivo(s): - Capa: logo da Unesp no cabeçalho saiu cortado na parte debaixo. Necessário alterar. O ano 2020 deve vir na linha debaixo e não na mesma linha da cidade Rio Claro - SP. - Página de rosto: há um quadrado com a cidade e ano dentro. Necessário excluir o quadrado e deixar apenas o texto. Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. O correto é após a ficha catalográfica a e antes dos Agradecimentos. - Falta o titulo Resumo e o título Abstract nas páginas 7 e 8. Maiores informações: http://ib.rc.unesp.br/Home/Biblioteca37/repositorio_fluxograma_unesp_rioclaro.jpg Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. 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O ano 2020 deve vir na linha debaixo e não na mesma linha da cidade Rio Claro - SP. - Página de rosto: há um quadrado com a cidade e ano dentro. Necessário excluir o quadrado e deixar apenas o texto. Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. O correto é após a ficha catalográfica a e antes dos Agradecimentos. - Falta o titulo Resumo e o título Abstract nas páginas 7 e 8. Maiores informações: http://ib.rc.unesp.br/Home/Biblioteca37/repositorio_fluxograma_unesp_rioclaro.jpg Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. Atenciosamente, Biblioteca Campus Rio Claro Repositório Institucional UNESP https://repositorio.unesp.br on 2020-03-31T18:25:19Z (GMT) Made available in DSpace on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT). 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No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Previous issue date: 2020-02-17 Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T19:54:14Z No. of bitstreams: 1 Monitoramento_bioindicadores_fecais.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Approved for entry into archive by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Rejected by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br), reason: Prezada Mirella, O documento enviado para a coleção Campus Unesp Rio Claro foi recusado pelo(s) seguinte(s) motivo(s): - Capa: logo da Unesp no cabeçalho saiu cortado na parte debaixo. Necessário alterar. O ano 2020 deve vir na linha debaixo e não na mesma linha da cidade Rio Claro - SP. - Página de rosto: há um quadrado com a cidade e ano dentro. Necessário excluir o quadrado e deixar apenas o texto. Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. O correto é após a ficha catalográfica a e antes dos Agradecimentos. - Falta o titulo Resumo e o título Abstract nas páginas 7 e 8. Maiores informações: http://ib.rc.unesp.br/Home/Biblioteca37/repositorio_fluxograma_unesp_rioclaro.jpg Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. Atenciosamente, Biblioteca Campus Rio Claro Repositório Institucional UNESP https://repositorio.unesp.br on 2020-03-31T18:25:19Z (GMT) Approved for entry into archive by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T19:54:14Z No. of bitstreams: 1 Monitoramento_bioindicadores_fecais.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Approved for entry into archive by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Approved for entry into archive by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Rejected by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br), reason: Prezada Mirella, O documento enviado para a coleção Campus Unesp Rio Claro foi recusado pelo(s) seguinte(s) motivo(s): - Capa: logo da Unesp no cabeçalho saiu cortado na parte debaixo. Necessário alterar. O ano 2020 deve vir na linha debaixo e não na mesma linha da cidade Rio Claro - SP. - Página de rosto: há um quadrado com a cidade e ano dentro. Necessário excluir o quadrado e deixar apenas o texto. Caso for uma caixa de texto apenas configurar sem linha. - Folha de aprovação está em ordem errada. O correto é após a ficha catalográfica a e antes dos Agradecimentos. - Falta o titulo Resumo e o título Abstract nas páginas 7 e 8. Maiores informações: http://ib.rc.unesp.br/Home/Biblioteca37/repositorio_fluxograma_unesp_rioclaro.jpg Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. Atenciosamente, Biblioteca Campus Rio Claro Repositório Institucional UNESP https://repositorio.unesp.br on 2020-03-31T18:25:19Z (GMT) Made available in DSpace on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Previous issue date: 2020-02-17 Made available in DSpace on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Previous issue date: 2020-02-17 Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T13:03:20Z No. of bitstreams: 1 Montoramento_de _Bioindicadores_fecais.pdf: 3075683 bytes, checksum: c523d1d0c60fb38c01f0628281cac76d (MD5) Approved for entry into archive by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Previous issue date: 2020-02-17 Submitted by Mirella Massonetto Basilio (mirella.massonetto@gmail.com) on 2020-03-31T13:03:20Z No. of bitstreams: 1 Montoramento_de _Bioindicadores_fecais.pdf: 3075683 bytes, checksum: c523d1d0c60fb38c01f0628281cac76d (MD5) Approved for entry into archive by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Previous issue date: 2020-02-17 Approved for entry into archive by Adriana Ap. Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-02T14:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 massonetto_m_me_rcla.pdf: 2965051 bytes, checksum: 04106d0c944b66cbd519e19d8e623976 (MD5) Previous issue date: 2020-02-17 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O despejo de esgoto sem tratamento nas áreas costeiras do Brasil são uma realidade persistente, sendo responsável pela maioria dos impactos ambientais no litoral. Devido a isso, o Estado de São Paulo, efetua monitoramentos semanais para acompanhar a qualidade das águas recreacionais nas praias. Nesse contexto, Santos apresenta 6 canais de drenagem ao longo de toda baía que são fontes poluidoras, por apresentarem ligações clandestinas de efluente doméstico. Esse estudo objetivou avaliar a densidade de bioindicadores fecais(Escherichia coli e Enterococcus sp) e sua resistência a antimicrobianos. As cepas foram isoladas de amostras de água e sedimento de 3 pontos por canal ( n=18). As coletas bimestrais foram realizadas em maré baixa, para avaliar apenas o conteúdo dos canais. Foi efetuada a Técnica de Membrana Filtrante usando meios específicos. As cepas positivas foram submetidas a Suscetibilidade por disco-difusão segundo os padrões do BrCAST para os seguintes antibióticos: amoxicilina, amoxicilina + clavulanato, ampicilina, levofloxacino, gentamicina, tetraciclina, amicacina e ciprofloxacino. Todas as cepas(n=144) foram resistentes a todos os antibióticos. De acordo com os resultados, as amostras de água demostraram densidades médias dez vezes maiores(20000 UFC/100mL) do que permitido pela legislação. O sedimento não está incluso na avaliação realizada pelos órgãos de fiscalização, evidenciando negligência das autoridades. Isso é preocupante, pois as águas desembocam na praia interferindo na qualidade do ambiente e sendo um sério risco para os banhistas. Outro ponto é que a alta resistência pode funcionar como resistomas no ambiente. Assim, para que haja mudança efetiva na qualidade sanitária dessas praias, deve-se investigar e eliminar fontes poluidoras e também investir em tratamento de esgoto The discharge of untreated sewage in the coastal areas of Brazil is a persistent reality, being responsible for most of the environmental impacts on the coast. Because of this, the State of São Paulo conducts weekly monitoring to monitor the quality of recreational waters on the beaches. In this context, Santos has 6 drainage channels throughout the bay that are polluting sources, as they have clandestine connections of domestic effluent. This study aimed to evaluate the density of fecal bioindicators (Escherichia coli and Enterococcus sp) and their resistance to antimicrobials. The strains were isolated from water and sediment samples of 3 points per channel (n = 18). The bimonthly collections were carried out at low tide, to evaluate only the content of the channels. The Filter Membrane Technique was performed using specific means. Positive strains were subjected to Susceptibility by disk-diffusion according to BrCAST standards for the following antibiotics: amoxicillin, amoxicillin + clavulanate, ampicillin, levofloxacin, gentamicin, tetracycline, amikacin and ciprofloxacin. All strains (n = 144) were resistant to all antibiotics. According to the results, the water samples showed average densities ten times higher (20000 UFC / 100mL) than allowed by the legislation. The sediment is not included in the assessment carried out by the inspection bodies, showing negligence by the authorities. This is worrying, as the water flows into the beach, interfering with the quality of the environment and being a serious risk for bathers. Another point is that high resistance can function as resistomas in the environment. Thus, for there to be an effective change in the sanitary quality of these beaches, it is necessary to investigate and eliminate polluting sources and also to invest in sewage treatment. CAPES: 001.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2020-08-26T00:22:40Z No. of bitstreams: 1 Maria Goretti Varejao da Silva.pdf: 495694 bytes, checksum: 9a5efcfbf9364185e66122d299b8e39c (MD5) Made available in DSpace on 2020-08-26T00:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Goretti Varejao da Silva.pdf: 495694 bytes, checksum: 9a5efcfbf9364185e66122d299b8e39c (MD5) Previous issue date: 2020-02-04 The objective was to search for Enterococcus spp. resistant to antimicrobials and biofilm-forming in rennet cheese, packaged in the industry, sold in hypermarkets in the city of Recife, Pernambuco. The microbiological research technique employed was in accordance with the NP 2079 standards with minor changes. The growth of colonies characteristic of Enterococcus spp. on Slantz and Bartley agar in all acquired samples. From 36 isolates of Enterococcus spp. three bacterial species were identified, 44.4% of Enterococcus faecalis, 44.4% of Enterococcus faecium and 11.2% of Enterococcus durans. In the disk-diffusion method to check susceptibility to antimicrobials, a higher percentage of resistance was observed, including also the intermediate, in erythromycin (63.9%), followed by nitrofurantoin (36.2%), tetracycline (22.3% ), vancomycin (2.7%) and ciprofloxacin (2.7%). Regarding the biofilm-forming capacity of Enterococcus spp. Isolates, there was no strong biofilm-forming agent, but weak biofilm-forming agents were obtained in 77.8% and moderate biofilm-forming agents in 22.2%, in the total of the three species. found, and no isolate studied was negative in terms of the ability to form biofilm. The high contamination of this type of cheese analyzed suggests a possible failure in good practices, from milking to commercialization, where a product is ready for consumption, without disregarding the presence of Enterococcus spp. as an existing element in the manufacture of the same, being also relevant the biofilm-forming potential by this microorganism due to its formation causing phenotypic changes in planktonic cells, that can be described as microorganism survival strategies. Further microbiological studies on rennet cheese should be carried out due to its importance for the economy and public health. Objetivou-se pesquisar Enterococcus spp. resistentes a antimicrobianos e formadores de biofilme em queijo de coalho, embalado na indústria, comercializado em hipermercados da cidade de Recife, Pernambuco. A técnica de pesquisa microbiológica empregada foi em conformidade com as normas NP 2079 com pequenas alterações. Verificou-se o crescimento de colônias características de Enterococcus spp. em meio ágar Slantz and Bartley em todas as amostras adquiridas. De 36 isolados de Enterococcus spp. foram identificadas três espécies bacterianas, sendo 44,4% de Enterococcus faecalis, 44,4% de Enterococcus faecium e 11,2% de Enterococcus durans. No método de disco-difusão para verificação da susceptibilidade aos antimicrobianos observou-se maior percentual de resistência, incluindo também a intermediária, na eritromicina (63,9%), seguido de nitrofurantoína (36,2%), tetraciclina (22,3%), vancomicina (2,7%) e ciprofloxacina (2,7%). Quanto à capacidade formadora de biofilme dos isolados de Enterococcus spp., não houve nenhum forte formador de biofilme, mas obteve-se fracos formadores de biofilme em 77,8% e moderados formadores de biofilme em 22,2%, no total das três espécies encontradas, e nenhum isolado estudado foi negativo quanto a capacidade de formar biofilme. A alta contaminação desse tipo de queijo analisado sugere possível falha nas boas práticas, desde a ordenha até a comercialização, onde se tem um produto pronto para consumo, sem desconsiderar a presença de Enterococcus spp. como elemento existente na fabricação do mesmo, sendo também relevante o potencial formador de biofilme por esse microrganismo devido à formação do mesmo provocar alterações fenotípicas de células planctônicas, que podem ser descritas como estratégias de sobrevivência dos microrganismos. Mais estudos microbiológicos em queijo de coalho deverão ser realizados devido a sua importância para economia e saúde pública.

Os enterococos são encontrados na microbiota intestinal de seres humanos e de outros animais, no solo, água, plantas, vegetais e alimentos. Todavia, nas últimas décadas esses microrganismos têm se destacado como agentes de infecções hospitalares devido a sua resistência intrínseca e adquirida aos diversos antimicrobianos. O uso inadequado de antimicrobianos na agropecuária contribui para o surgimento de isolados multirresistentes no meio ambiente os quais podem ser transmitidos aos seres humanos. O objetivo do presente estudo foi investigar a presença de espécies de enterococos em diferentes amostras não-clínicas (alimentos, animais, água e esgoto) e caracterizá-las quanto ao perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e fatores de virulência. Foi investigado também se isolados de Enterococcus faecalis penicilina-resistente/ampicilinasensível (EFPRAS), que foram previamente obtidos de seres humanos, encontram-se disseminados no meio ambiente e se eles seriam geneticamente semelhantes. Amostras de diversas fontes não clínicas (alimentos, água, fezes de animais, esgoto) foram cultivadas para isolamento de enterococos. Os isolados foram identificados fenotipicamente em espécies e submetidos aos testes de sensibilidade a antimicrobianos (diluição em caldo e disco difusão) de acordo com o CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Foi feita a pesquisa da produção de gelatinase e hemolisinas. Isolados da espécie E. faecalis foram ainda comparados geneticamente pela técnica de PFGE (eletroforese em campo pulsado) com isolados clínicos obtidos previamente de pacientes do hospital de clínicas da UFTM. Foi feita a detecção do gene aac(6’)-Ie/aph(2”)-Ia, que confere alto nível de resistência à gentamicina (HLRG). As espécies mais prevalentes em amostras não clínicas de origem vegetal foram E. casseliflavus (28,6%) e E. faecalis (19,0%), mas, dentre as de origem animal foram E. faecalis (26,2%) e E. faecium (23,8%). Foi observada alta prevalência de resistência a eritromicina, tetraciclina, norfloxacina e ciprofloxacina. Dentre os isolados não clínicos de E. faecalis, 3 (2,9%) eram EFPRAS; todos foram obtidos do esgoto hospitalar e apresentaram HLGR. A prevalência de E. faecalis produtor de gelatinase de origem não clínica (50,5%) e clínica (55,8%) foi semelhante, porém, a produção de hemolisinas foi maior entre os de origem não clínica (63,5%) do que entre os de origem clínica (2,8%). Os E. faecalis submetidos ao PFGE (n=31) foram classificados em 19 pulsotipos (A-S). Os isolados de EFPRAS testados obtidos do esgoto (n=3) e de pacientes (n=4) foram classificados no mesmo pulsotipo. Um isolado de EFPRAS obtido do esgoto do hospital, o qual foi submetido ao MLST (tipagem por sequenciamento de multilocus), foi englobado no CC9 (complexo clonal), que é comumente encontrado em isolados hospitalares. Apesar da diversidade de espécies do gênero Enterococcus, as espécies mais prevalentes em amostras clínicas, ou seja, E. faecalis e E. faecium, também foram as espécies predominantes em amostras não clínicas. Muitos isolados de E. faecalis de origem não clínica apresentaram resistência a diferentes antimicrobianos, no entanto, isolados apresentando o fenótipo incomum de resistência à penicilina parecem ser restritos ao ambiente hospitalar. Os resultados do presente estudo ressaltam a necessidade de tratamento do esgoto hospitalar a fim de evitar que microrganismos multirresistentes oriundos do ambiente hospitalar sejam disseminados para o meio ambiente. Enterococci are found in the intestinal microbiota of humans and other animals, in soil, water, plants, vegetables and food. However, in recent decades these microorganisms have been highlighted as agents of nosocomial infections due to their intrinsic and acquired resistance to various antimicrobials. Inadequate use of antimicrobials in agriculture contributes to the emergence of multiresistant isolates in the environment that can be transmitted to humans. The aim of the present study was to investigate the presence of enterococci species in different nonclinical samples (food, animals, water and sewage) and to characterize them for antimicrobial susceptibility profile and virulence factors. It was also investigated whether isolates of penicillin-resistant /ampicillin-sensitive Enterococcus faecalis (PRASEF), which were previously obtained from humans, are widespread in the environment and whether they would be genetically similar. Samples from a variety of nonclinical sources (food, water, animal feces, sewage) were grown for enterococcal isolation. Isolates were phenotypically identified in species and subjected to antimicrobial susceptibility testing (broth dilution and disc diffusion) according to the CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Research was made into the production of gelatinase and hemolysins. Isolates of the E. faecalis species were further compared genetically by the PFGE technique (pulsed field electrophoresis) with clinical isolates previously obtained from patients of the UFTM clinic hospital. The aac(6’)-Ie/aph(2”)- Ia gene that confers high-level resistance to gentamicin (HLRG) was detected by PCR. The most prevalent species in non-clinical samples of plant origin were E. casseliflavus (28.6%) and E. faecalis (19.0%), but among those of animal origin were E. faecalis (26.2%) and E. faecium (23.8%). It was observed high prevalence of resistance to erythromycin, tetracycline, ciprofloxacin and norfloxacin. Among the non-clinical isolates of E. faecalis, 3 (2.9%) were PRASEF; all of them were recovered from the hospital sewage and presented HLGR. The prevalence of non-clinical (50.5%) and clinical (55.8%) gelatinase-producing E. faecalis was similar, but hemolysin production was higher among non-clinical (63.5%). than among those of clinical origin (2.8%). E. faecalis submitted to PFGE (n = 31) were classified into 19 pulsotypes (A-S). The tested PRASEF isolates obtained from sewage (n = 3) and from patients (n = 4) were classified in the same pulsotype. One PRASEF isolate recovered from the hospital sewage was submitted to MLST (multilocus sequencing typing) and was encompassed into the CC9 (clonal complex), which is common among in isolates from hospitals. Despite the diversity of species of the genus Enterococcus, the most prevalent species in clinical samples, E. faecalis and E. faecium, were also the predominant species in non-clinical samples. Many E. faecalis isolates of nonclinical origin showed resistance to different antimicrobials; however, isolates presenting the unusual phenotype of penicillin resistance appear to be restricted to the hospital environment. The results of the present study highlight the need for treatment of hospital sewage in order to prevent multidrug resistant microorganisms of hospital origin from spreading to the environment. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Introdução: As infeções são um problema cada vez mais frequente e a presença de microrganismos resistentes cria impacto clínico e económico. Este estudo tem por objetivo determinar o perfil epidemiológico dos microrganismos ‘problema’ isolados num hospital do norte de Portugal.Material e Métodos: Foram analisados todos os isolamentos microbiológicos, entre janeiro de 2014 a junho de 2015. Os dados foram tratados em software estatístico.Resultados: Analisaram-se 8146 isolamentos microbiológicos, nos quais se obtiveram 23% de isolamentos de microrganismos ‘problema’ (por ordem decrescente de frequência: Enterococcus, Pseudomonas, Staphylococcus aureus e Streptococcus pneumonia), sendo 57,55% em doentes do sexo masculino. O mecanismo de resistência mais frequente foi a produção de betalactamase de espectro estendido no global dos isolamentos e a resistência à oxacilina nos microrganismos ‘problema’.Discussão: Nesta amostra, observou-se uma incidência bastante superior de microrganismos problema àquela publicada noutros países, o que remete para a necessidade da melhoria de mecanismos de vigilância e tratamento destes casos. Os microrganismos que apresentaram mais resistências foram o Staphylococcus aureus (resistente à oxacilina) e o Enterococcus (resistente à vancomicina), tendo-se verificado que a média de idades nestes casos era superior à dos não resistentes. A maioria destes microrganismos foi isolada no internamento e unidades de cuidados diferenciados, o que os relaciona a infeções associadas aos cuidados de saúde.Conclusão: A prevalência de infeção por microrganismos ‘problema’ no período estudado foi de 23%. É importante a deteção e o controle da disseminação destes microrganismos pelo seu impacto nos custos em saúde, morbilidade e sobrevida dos doentes.

A busca por bactérias com propriedades benéficas à saúde, qualidade nutricional, bem como preservação dos alimentos tem sido o foco de intensas pesquisas na área de alimentos. O isolamento e caracterização de nossas espécies são vantajosos para obtenção de isolados com características tecnológicas e funcionais diferenciadas. Nesta perspectiva, este estudo avaliou o perfil tecnológico de seis isolados de Enterococcus faecium (EFM 55, EFM 67, EFM 9A, EFM 16A, EFM19A e EFM 44) isolados de amostras de queijos. Foram avaliadas as atividades enzimáticas de proteólise e lipólise em diversos tempos de incubação. Teste da enzima betagalactosidase, capacidade de acidificação, atividade antagônica contra patógenos alimentares, sensibilidade a antimicrobianos e medicamentos de uso continuo também foram avaliados. Todos os isolados apresentaram atividade proteolítica a partir de 48 horas na temperatura de 20ºC. Já atividade lipolítica e beta-galactosidase não foram detectadas. O isolado EFM 44 apresentou resistência intermediária à ciprofloxacina e eritromicina enquanto EFM 55 somente à eritromicina, os demais isolados foram sensíveis a todos os antimicrobianos testados. O isolado EFM 44 apresentou aumento significativo no pH e teores de acidez titulável a 20ºC ao longo de 48 horas. As cepas EFM 9A e 19A não apresentaram resistência a dipirona, enquanto os demais foram resistentes a todos os medicamentos avaliados. O isolado EFM 9A apresentou inibição contra todos os patógenos avaliados, e os demais foram eficazes no controle de E.coli. Concluímos que os isolados de Enterococcus faecium estudados apresentaram perfil tecnológico para aplicação em produtos lácteos fermentados. The search for bacteria with beneficial properties to health, nutritional quality, as well as food preservation has been the focus of intense research in the area of food. The isolation and characterization of our species are useful for obtaining isolates with different technological and functional characteristics. From this perspective, this study evaluated the technological profile of six Enterococcus faecium (EFM 55, EFM 67, EFM 9A, EFM 16A, EFM19A and EFM 44) isolated from cheese. The enzymatic activities of proteolysis and lipolysis at different incubation times were evaluated. The enzymatic activities of proteolysis and lipolysis at different incubation times were evaluated. Beta-galactosidase enzyme testing, acidification capacity, antagonistic activity against food pathogens, antimicrobial susceptibility and continuous use medications were also performed. All isolates showed proteolytic activity from 48 hours at 20ºC. Lipolytic activity and beta-galactosidase were not detected. Isolate EFM 44 showed intermediate resistance to ciprofloxacin and erythromycin, while EFM 55 were resistant just to erythromycin, the remaining isolates were sensitive to all antimicrobials tested. The EFM 44 showed increase in pH and titratable acidity at 20ºC over 48 hours. The EFM 9A and 19A showed no resistance to dipyrone, while the others were resistant to all evaluated drugs. The EFM 9A isolate showed inhibition against all tested pathogens, and the others were effective in controlling E. coli. We conclude that the Enterococcus faecium isolates studied presented technological profile for application in fermented dairy products.

O leite de búfala constitui-se de uma matriz alimentar pouco explorada funcionalmente, entretanto, alguns autores demonstraram resultados promissores através da sua utilização em derivados lácteos. O objetivo do presente estudo foi avaliar o potencial probiótico de bactérias ácido lácticas (BAL) isoladas de leite de búfala cru resfriado, assim como a manutenção de sua viabilidade em uma matriz alimentar. As BAL foram identificadas através de sequenciamento do gene 16S rRNA como pertencentes ao gênero Enterococcus, sendo que dois isolados foram classificados como E. faecalis e três como E. faecium. Todas as BAL tiveram atividade hemolítica classificada como gama hemólise (ausência de hemólise) e apresentaram resultados negativos para a hidrólise de gelatina. Após a avaliação da susceptibilidade aos antimicrobianos, E. faecium M7AN7-1 e E. faecium M7AN10 mostraram-se susceptíveis a todos os antimicrobianos testados, sendo selecionadas para a realização de ensaios que avaliaram a manutenção da viabilidade celular em diferentes condições, assim como o potencial probiótico de ambas. E. faecium M7AN10 apresentou as maiores concentrações de células viáveis em relação a E. faecium M7AN7-1, após 180 min em contato com o fluído gástrico simulado (FGS), obtendo 7,19 ± 0,59 Log10 UFC mL-1 . Por esta razão, essa BAL foi selecionada para ser microencapsulada em alginato de sódio. As microcápsulas contendo E. faecium M7AN10 foram aplicadas em bebida láctea UHT, observando-se a manutenção da viabilidade celular e sua liberação neste meio durante 30 dias. No 30º dia em contato com este derivado lácteo, 7,37 ± 0,45 Log10 UFC mL-1 haviam sido liberados nesta matriz alimentar. Os resultados obtidos na avaliação in vitro demonstraram que E. faecium M7AN10 apresentou a inocuidade e viabilidade necessárias para ser sugerida como uma cultura potencialmente probiótica, obtendo contagens de células viáveis iguais ou super Buffalo milk is a poorly functionally exploited food, however, some authors have shown promising results through their use in dairy products. The aim of the present study was to evaluate the probiotic potential of lactic acid bacteria (LAB), isolated from cooled raw buffalo milk, as well as the evaluation of the maintenance of its viability in a food matrix. The LAB were identified by sequencing the 16S rRNA gene as belonging to the genus Enterococcus, where two isolates were classified as E. faecalis and three as E. faecium. All LAB had hemolytic activity classified as hemolysis Ɣ (non-hemolytic) and presented negative results for the hydrolysis of gelatin. After the antimicrobial susceptibility assessment, E. faecium M7AN7-1 and E. faecium M7AN10 were susceptible to all the antimicrobials tested, being selected to carry out tests that evaluated the maintenance of cell viability in different conditions, as well as potential probiotic of both LAB. E. faecium M7AN10 presented the highest concentrations of viable cells in relation to E. faecium M7AN7-1, after 180 min in contact with simulated gastric fluid (SGF), obtaining 7.19 ± 0.59 Log10 CFU mL-1 . For this reason, this LAB was selected to be microencapsulated in sodium alginate. The microcapsules containing E. faecium M7AN10 were applied in UHT milk beverage, observing the maintenance of cell viability and its release in this medium for 30 days. On the 30th day in contact with this dairy derivative, 7.37 ± 0.45 Log10 CFU mL-1 had been released in this food. The results obtained in the in vitro evaluation demonstrated that E. faecium M7AN10 presented the innocuity and viability necessary to be suggested as a potential probiotic culture, obtaining viable cell counts equal to or greater than 6 Log10 CFU mL-1 .

O arroio Dilúvio, localizado em uma área central de Porto Alegre, recebe diariamente lixo e esgoto doméstico de vários bairros da cidade, que sem o tratamento adequado poderão ser fonte de diferentes microrganismos, entre eles destacam-se os enterococos resistência antimicrobianos que já foram isolados do arroio. A ausência de dados sobre a atividade de desinfetantes e antissépticos de uso doméstico frente aos microrganismos isolados de águas residuais justifica o presente estudo. Foram testados 15 produtos desinfetantes e seis produtos antissépticos frente a 28 enterococos isolados do arroio Dilúvio. A atividade dos produtos selecionados foi verificada através do método de difusão em disco. Os produtos com atividade frente aos enterococos foram submetidos ao método de concentração inibitória mínima, obtida pela diluição dos produtos em 50% até 1,563%, por 24 e 48 h de exposição. Dos 21 produtos testados, 13 desinfetantes e a cinco antissépticos apresentaram atividade contra os enterococos isolados do arrio Dilúvio. Apesar da maioria dos produtos mostraram-se eficiente quanto aplicado puro (100%), muitos tiveram a eficiência de sua atividade antimicrobiana reduzida já na primeira diluição do produto, de 50%, e no tempo de exposição de 24 horas. O período de exposição mostrou-se um fator importante frente ao crescimento bacteriano, já que o tempo de permanência de um composto pode influenciar essa capacidade de crescimento das bactérias. Como conclusão, o presente estudo demonstrou que os desinfetantes e antissépticos domésticos testados, em sua grande maioria, mostraram-se eficientes no controle cepas de enterococos susceptível e resistente a antimicrobianos isolados do arroio Dilúvio. (Action of household antiseptics and disinfectants against Enterococcus sp. isolated from Dilúvio stream, Rio Grande do Sul state, southern Brazil). Located in downtown Porto Alegre, Rio Grande do Sul state, southern Brazil, the Dilúvio stream receives waste and domestic sewage inflow daily from several districts of the city. If not properly treated, such wastewater can be the source of different microorganisms like enterococci. In the present study, the activity of household disinfectants and antiseptics was tested against microorganisms isolated from such wastewater. Fifteen disinfectants and six antiseptic products were tested against 28 enterococci isolated from Dilúvio stream by the disk diffusion method. Products showing anti-enterococci activity were subjected to the minimum inhibitory concentration method, which was obtained by diluting products in 50% to 1.563% for 24 and 48 h of exposure. Of the 21 tested products, 13 disinfectants and five antiseptics showed activity against enterococci isolated from the Dilúvio stream. Although most products proved to be efficient when pure (100%), many had their antimicrobial activity efficiency reduced already in the first dilution (50%) and in the 24-h exposure time. Exposure period revealed to be an important factor for bacterial growth, since the time of permanence of compounds may influence the capacity of bacteria to grow. Our study demonstrated that most tested household disinfectants and antiseptics proved to be efficient in controlling antimicrobial-susceptible and -resistant enterococci strains isolated from the Dilúvio stream.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil dos enterococos em amostras de fezes de morcegos urbanos Tadarida brasiliensis coletadas no Rio Grande do Sul. Fezes de morcegos foram coletadas e submetidas à identificação das espécies de enterococos e teste de suscetibilidade aos antimicrobianos rifampicina, eritromicina, norfloxacino, ciprofloxacino, tetraciclina ampicilina, cloranfenicol, estreptomicina, gentamicina, linezolida, nitrofurantoína e vancomicina. A presença dos genes de resistência (ermA, ermB, ermC, msrC, vanA, vanB, vanC1, vanC2/3, tetM, tetM e tetS) e virulência (ace, agg, cylA, esp e gelE) foi determinada por PCR. Além disso, o DNA fecal foi extraído e submetido a qPCR e PCR para detectar as espécies E. casseliflavus, E.faecalis, E. faecium, E. gallinarum, E. hirae e E. mundtii e os genes de resistência, respectivamente. Foram isolados 73 enterococos, sendo E. faecalis, E. casseliflavus, E. gallinarum e E. mundtii identificados. Fenótipos de resistência foram observados para rifampicina (n=53), eritromicina (n=32), norfloxacino (n=7), ciprofloxacino (n=6) e tetraciclina (n=1). Dos genes de resistência testados nos isolados resistentes, somente os genes ermC e tetM estavam presentes. Seis E. faecalis suscetíveis à vancomicina foram positivos para vanC1 e vanC2/3. Os genes gelE, ace, agg, cylA e esp foram detectados nos isolados. Nas amostras de DNA fecal, todas as espécies analisadas e os genes ermC, tetM, vanA, vanB e vanC2/3 foram observados. Como conclusão, diferentes espécies de enterococos estão presentes nas fezes de morcegos urbanos de T. brasiliensis. A presença de enterococos resistentes nestes animais pode estar relacionada com ação antropogênica e/ou ligada ao resistoma. We aimed to evaluate the profile of enterococci from fecal samples of urban bats Tadarida brasiliensis collected at Rio Grande do Sul state, southern Brazil. Bat feces were collected and subjected to enterococci species identification and antimicrobial susceptibility tests for rifampicin, erythromycin, norfloxacin, ciprofloxacin, tetracycline, ampicillin, chloramphenicol, streptomycin, gentamicin, linezolid, nitrofurantoin, and vancomycin. The presence of resistance (ermA, ermC, ermB, msrC, vanA, vanB, vanC1, vanC2/3, tetM, tetM, and tetS) and virulence (ace, agg, cylA, esp, and gelE) genes was determined by PCR. In addition, fecal DNA was extracted and subjected to qPCR and PCR to detect the species E. casseliflavus, E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum, E. hirae and E. mundtii, and resistance genes, respectively. A total 73 enterococci were isolated, of which E. faecalis, E. casseliflavus, E. gallinarum, and E. mundtii were identified. Resistance phenotypes were observed for rifampicin (n= 53), erythromycin (n= 32), norfloxacin (n= 7), ciprofloxacin (n= 6) and tetracycline (n=1). Of the resistance genes tested in resistant isolates, only ermC and tetM were present. Six vancomycin-susceptible E. faecalis were positive for vanC1 and vanC2/3. Genes gelE, ace, agg, cylA and esp were detected in the isolates. In fecal DNA samples, all analyzed species and the genes ermC, tetM, vanA, vanB and vanC2/3 were observed. We conclude that different species of enterococci are present in feces of T. brasiliensis urban bats. The presence of antibiotic-resistant enterococci in those animals may be related to anthropogenic action and/or linked to the resistome.

O bioma caatinga é um bioma brasileiro predominante e único no Nordeste do Brasil. Esse bioma abriga uma impressionante biodiversidade florística com espécies ricas em moléculas bioativas. O objetivo deste trabalho foi investigar a atividade antioxidante e antimicrobiana de duas espécies vegetais arbóreas ocorrentes na caatinga. Nos ensaios de atividade antioxidante dos extratos etanólicos da casca do caule das espécies Leucaena leucocephala e Cnidoscolus quercifolius foram avaliados o teor de fenólicos totais e atividade antioxidante pelos métodos de captura dos radicais livres DPPH (radical 1,1-diphenil-2-picrilhydrazil) e ABTS (radical 2,2’azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)). A atividade antimicrobiana desses extratos foi avaliada frente às espécies bacterianas Enterococcus faecales (ATCC 29212), Streptococcus pneumoniae (ATCC 49619) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923), através do ensaio de difusão em poço e determinação de Concentração Inibitória Mínima (CIM). Os teores de fenólicos totais encontrados na espécie L. leucocephala exibiram quantidades relevantes de polifenóis, resultado não observado na espécie C. quercifolius. Foi observado existir uma correlação direta entre a quantidade de fenólicos totais e a atividade antioxidante das espécies testadas. Nenhuma das espécies apresentou atividade antimicrobiana significativa.

O gênero Enterococcus está amplamente distribuído no meio ambiente e é geralmente encontrado nas fezes de animais de sangue quente. Todavia, a microbiota do trato gastrintestinal destes animais vem sofrendo alterações quanto à composição de espécies, devido ao uso de antimicrobianos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a diversidade de espécies e genética de Enterococcus spp. isolados de amostras de fezes de suínos. Foram encontradas quatro espécies E. faecalis (n=21), E. faecium (n=18), E. mundtii (n=7) e E. hirae (n=9), sendo que as duas primeiras foram as mais freqüentes. A região espaçadora intergênica 16S-23S rDNA, apresentou uma grande diversidade inter e intra-específica. E. faecalis apresentou a maior diversidade genética e E. hirae, a menor diversidade. The genus Enterococcus is widely distributed in the environment, and is generally found in feces of warm-blooded animals. However, the microbiota of the gastrointestinal tract of these animals has undergone alterations in its species composition, due to the use of antimicrobials. The objective of the present study was to evaluate the species diversity and genetics of Enterococcus spp. isolated from swine fecal samples. Four species were found: E. faecalis (n=21), E. faecium (n=18), E. mundtii (n=7) and E. hirae (n=9), the first two being the most frequent. The 16S-23S rDNA intergenic spacer region showed high inter- and intraspecific diversity. E. faecalis showed the highest genetic diversity, and E. hirae the lowest.

Entre os agentes etiologicos de mastite bovina, destacam-se as bacterias do genero Streptococcus e generos relacionados, como os Enterococcus . Esses microrganismos podem causar tanto mastite contagiosa, como e o caso de Streptococcus agalactiae , quanto mastite ambiental, causada pelas demais especies de Streptococcus e Enterococcus . Mudancas na taxonomia e nomenclatura deste grupo de microrganismos tem ocorrido nas ultimas duas decadas, resultado da aplicacao de tecnicas moleculares que auxiliam no processo de diferenciacao de generos e especies bacterianas. Alteracoes tambem tem ocorrido no padrao de infeccao intramamaria nos rebanhos leiteiros em que foram controladas as mastites causadas por agentes contagiosos. Nesses rebanhos, as infeccoes causadas por patogenos do ambiente sao atualmente o alvo dos programas de controle da mastite. O presente artigo apresenta uma revisao dos principais generos e especies bacterianas do grupo dos cocos gram-positivos catalasenegativos que ja foram relacionadas com infeccoes da glândula mamaria de bovinos. Esses incluem, alem dos generos mencionados acima, os generos Aerococcus , Lactococcus e Gemella ; e dentro do genero Streptococcus , as especies S. agalactiae , S. uberis , S. bovis , S. dysgalactiae , S. parauberis , S. equi , S. porcinus , S. canis , S. pluranimalium , S. parasanguinis e S. iniae.

Os representantes do gênero Enterococcus são membros da microbiota intestinal indígena de seres humanos e outros animais, mas têm emergido como patógenos nosocomiais de crescente importância, devido a diversas propriedades como persistência no ambiente, fácil disseminação e resistência a antimicrobianos. São intrinsecamente resistentes a diversas classes de drogas antimicrobianas e possuem capacidade notável para adquirir marcadores adicionais de resistência. Nos últimos anos, a frequência de infecções da corrente sanguínea (ICS) vem aumentando, sendo as maiores taxas de mortalidade associadas à participação de espécies de Enterococcus. Além disso, o grupo é frequentemente associado a infecções do trato urinário (ITU) comunitárias. Assim, o estudo da patogenicidade e do perfil de suscetibilidade a drogas antimicrobianas pode contribuir para o controle do microrganismo. Neste trabalho, identificamos no nível de espécie, avaliamos fenotípica e genotipicamente traços de virulência e suscetibilidade a drogas antimicrobianas de 103 amostras de Enterococcus isoladas de indivíduos saudáveis (n=33), com ITU comunitária (n=35) e de pacientes hospitalizados com ICS (n=35). Observamos, nas amostras indígenas (indivíduos saudáveis) a predominância da espécie E. faecium, enquanto nos grupos ITU e ICS, E. faecalis foi predominante. Por meio da tipagem por (GTG)5-PCR, as amostras foram agrupadas em cinco diferentes clusters (similaridade de 90%), com relativa eficiência em agrupar as amostras de acordo com a origem. Cerca de 40% das amostras clínicas (ITU e ICS) foram capazes de produzir a enzima gelatinase e cerca de 30% (ITU) e 40% (ICS) de produzir citolisina - apenas oito das 103 amostras do estudo expressaram ambas as enzimas. A produção de biofilme foi avaliada e a maioria das amostras foi classificada como não produtora, mas, observou-se que as amostras do grupo ITU apresentaram as maiores taxas de produção (cerca de 50%). A suscetibilidade a diferentes antimicrobianos foi avaliada e considerando-se todas as amostras do estudo, cerca de 70% dos testes de antibiograma identificaram amostras sensíveis; o grupo ICS, no entanto, apresentou resistência em quase 50% de seus testes. As maiores taxas de sensibilidade (> 90%) foram observadas para ampicilina (AMP), linezolina (LZD) e penicilina G (PEN). Já as maiores taxas de resistência foram detectadas para ciprofloxacino (CIP, 62%), eritromicina (ERI, 77%) e tetraciclina (TET, 45%). Das 103 amostras, cinco foram classificadas como sensíveis, 24 amostras como VRE e 46 como multidroga-resistentes. Não observamos a presença de integrons de classe 1 ou 2 nas amostras. Dessa forma, concluímos que há uma diferença clara na prevalência das espécies, perfil de patogenicidade e resistência entre os grupos de amostras de Enterococcus analisados. Além disso, detectamos a predominância de sensibilidade à AMP, LZD e PEN, bem como de resistência CIP, ERI e TET em todos os grupos Enterococci are members of the indigenous intestinal microbiota of human beings and other animals but have been emerged as nosocomial pathogens of growing relevance due to several properties such as persistence in hospital environment, easy dissemination, and resistance to several antimicrobial agents. They are intrinsically resistant to several antimicrobial drugs and demonstrate prowess to acquire additional resistance markers. In the last years, increasing frequency of bloodstream infections (BSI) has been observed and those associated with Enterococcus spp. seem to display higher mortality rates. They are also associated to community urinary tract infection (UTI). Thus, data generated from the analysis of pathogenicity and antimicrobial susceptibility profile may support the control of the microorganism spread. In this investigation, we addressed the identification and evaluated phenotypically and genotypically pathogenicity traits and the susceptibility profile to antimicrobial drugs of 103 enterococci strains isolated from 3 groups: healthy individuals (HI; n=33), UTI (n=35), and BSI (n=35). We observed the predominance of E. faecium in HI, although in UTI and BSI groups, E. faecalis was the predominant species. Typing the isolates by (GTG)5-PCR and using 90% similarity generated five different clusters, with relative efficiency in grouping the isolates according to their origin. Almost 40% of the clinical isolates (UTI and BSI) were able to produce gelatinase and almost 30% (UTI) e 40% (BSI) produced citolysin - only eight of the 103 samples expressed both enzymes. Biofilm production was assessed, and the majority of the strains were classified as non-producers, but the UTI group showed approximately 50% of producer isolates. Susceptibility test to different antimicrobial drugs were performed and considering all the studied isolates, almost 70% of the tests were classified as susceptible; it should be highlighted that in the BSI group, almost 50% of the tests showed resistance. The higher susceptibility rates (>90%) were observed to ampicillin (AMP), linezolid (LZD), and penicillin G (PEN) and the higher resistance rates were observed to ciprofloxacin (CIP, 62%), erythromycin (ERI, 77%), and tetracycline (TET, 45%). We also observed that, five among the 103 studied isolates were classified as susceptible, 24 as VRE, and 46 as multidrug-resistant. We did not observe the presence of class 1 or 2 integrons in the studied strains. Therefore, the result showed a notable difference in the prevalence of enterococci species, pathogenicity and resistance profile among the three studied groups. Furthermore, we detected a predominance of susceptibility to AMP, LZD, and PEN, as well as resistance to CIP, ERI, and TET in all groups

Enterococcus são associados à microbiota intestinal de mamíferos e aves. Além dos primatas apresentarem estreita relação evolutiva com seres humanos, é pouco conhecido o impacto da resistência antimicrobiana associada às bactérias comensais, como os enterococos. O trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar enterococos isolados de amostras fecais de macacos-prego (Sapajus nigritus) em relação a determinantes de resistência e virulência. As amostras foram coletadas de animais vivendo em cativeiro no Zoológico de Sapucaia do Sul (ZOO) e selvagens, nas cidades de São Sebastião do Caí (SSC) e Santa Cruz do Sul (SCS). As espécies isoladas foram identificadas utilizando a técnica de MALDI-TOF. Estas foram testadas frente a 12 antimicrobianos através do método disco difusão. Genes que conferem resistência à tetraciclina (tetM, tetL e tetS), fluoroquinolonas (gyrA), eritromicina (msrC e ermB) e virulência (agg, esp, cylA, ace e gelE) foram detectados por PCR. Foram identificados 296 isolados de Enterococcus sp. oriundos de 24 amostras fecais de macacos-prego. Destes, 137 eram oriundos de amostras de SSC, 86 de SCS e 73 do ZOO. A espécie mais encontrada foi E. faecalis (42,6 %), seguida de E. hirae (29,4 %) e E. faecium (15,5 %). Cento e noventa e nove amostras (67,2 %) apresentaram suscetibilidade reduzida a antimicrobianos. As amostras apresentaram menos suscetíveis para rifampicina (46,3 %), tetraciclina (26,0 %) e eritromicina (22,3 %). Entre os isolados, E. faecalis (69,0 %) apresentou as maiores frequências de suscetibilidade reduzida. Em relação ao local de coleta, 69,3 % dos isolados das amostras SSC apresentaram suscetibilidade reduzida a antimicrobianos, 69,7 % dos isolados das amostras SCS e 60,2 % dos isolados das amostras do ZOO, sendo atribuído perfil de múltipla resistência a 29 isolados de SSC, 6 isolados SCS e 8 de ZOO. As amostras ZOO apresentaram maiores índices para os genes de resistência msrC (81,8 %), gyrA (60,7 %) e tetL (44,4 %). Para o gene tetM os isolados de SCS apresentaram maior frequência (100 %). As amostras SSC e SCS apresentaram as maiores porcentagens para o gene gelE (100 %). Para esp (3,5 %), ace (93,0 %) e agg (10,5 %), as amostras SCS apresentaram as maiores porcentagens. As presenças de determinantes de resistência e virulência nas amostras foram atribuídas tanto à ação antropogênica encontrada no habitat dos macacos como através do próprio resistoma ambiental. Ainda, a proximidade dos animais com o ser humano demonstrou ser uma das principais fontes de disseminação de resistência bacteriana. Enterococcus is associated with the intestinal microbiota of mammals and birds. In addition to primates having a close evolutionary relationship with humans, the impact of antimicrobial resistance associated with commensal bacteria, such as enterococci, is little known. The objective of this work was to identify and characterize isolates of enterococci from faecal samples of black capuchin monkey (Sapajus nigritus) in relation to determinants of resistance and virulence. The samples were collected from animals living in the Sapucaia do Sul Zoo (ZOO) and wild, in the cities São Sebastião do Caí (SSC) and Santa Cruz do Sul (SCS). The isolated species were identified using the MALDI-TOF technique. These were tested against 12 antimicrobials using the disc diffusion method. Genes that confer resistance to tetracycline (tetM, tetL and tetS), fluoroquinolones (gyrA), erythromycin (mrsC and ermB) and virulence (agg, esp, cylA, ace and gelE) were detected by PCR. It were identified 296 isolates of Enterococcus sp. from 24 faecal samples of S. nigritus. Of these, 137 were from SSC samples, 86 from SCS and 73 from ZOO. The most common species was E. faecalis (42.6 %), followed by E. hirae (29.4 %) and E. faecium (15.5 %). One hundred and ninety-nine samples (67.2%) presented reduced antimicrobial susceptibility. The samples were less susceptible to rifampicin (46.3%), tetracycline (26.0%) and erythromycin (22.0%). Among the isolates, E. faecalis (69.0%) had the highest frequencies of reduced susceptibility. Regarding the collection site, 69.3% of the SSC isolates presented reduced susceptibility to antimicrobials, 69.7% of the isolates from the SCS samples and 60.2% from the isolates from the ZOO samples, with a multiple resistance profile 29 SSC isolates, 6 SCS isolates and 8 ZOO isolates. The ZOO samples presented higher indices for the resistance genes msrC (81.8%), gyrA (60.7%) and tetL (44.4%). For the tetM gene the SCS isolates showed a higher frequency (100%). The SSC and SCS samples showed the highest percentages for the gelE gene (100%). For esp (3.5%), ace (93.0%) and agg (10.5%), the SCS samples presented the highest percentages. The presences of resistance and virulence determinants in the samples were attributed both to the anthropogenic action found in the monkey habitat and through the environmental resistance itself. Furthermore, the proximity of animals to humans has been shown to be one of the main sources of dissemination of bacterial resistance.

Bactérias do gênero Enterococcus sp. são Gram positivas com morfologia celular em formato de cocos, em pares ou em cadeias curtas. Estas bactérias estão presentes na microbiota de mamíferos, como a do ser humano, e na microbiota de aves. São também isolados de várias fontes, como alimentos, solo e água. Uma das características deste gênero é a capacidade de adquirir diferentes determinantes genéticos que conferem resistência a antimicrobianos distintos. O presente estudo teve como objetivo determinar e caracterizar o perfil de resistência a antimicrobianos de Enterococcus sp. de alimentos de três diferentes mercados de Porto Alegre-RS; e avaliar a evolução da resistência antimicrobiana comparados com dados de 2006. Os alimentos aipim, batata-doce, batata inglesa, beterraba, carne de frango crua, cenoura, couve, salsa, queijo colonial e ricota foram processados e colonias com morfologia típica de Enterococcus isoladas dos alimentos foram selecionadas e submetidas à identificação em nível de gênero por testes fenotípicos. Aqueles identificados como Enterococcus foram submetidos a técnicas moleculares, através de PCR gênero-específica para a presença do gene tuf, perfil de susceptibilidade e presença de genes de resistência. Foram testados os seguintes antibióticos: Ampicilina (AMP), Ciprofloxacina (CIP), Cloranfenicol (CLO), Eritromicina (ERI), Estreptomicina (EST), Gentamicina (GEN), Linezolida (LNZ), Nitrofurantoína (NIT), Norfloxacina (NOR), Tetraciclina (TET), Rifampicina (RIF) e Vancomicina (VAN). Trezentos e dez cepas de Enterococcus foram isoladas dos alimentos e identificados como Enterococcus faecalis (177), Enterococcus casseliflavus (103), Enterococcus hirae (17), Enterococcus faecium (6), Enterococcus durans (3) e Enterococcus spp. (4). Em relação à distribuição das espécies nos alimentos, E. faecalis foi a espécie mais prevalente nas amostras de carne e queijo no presente estudo, assim como em 2006. No entanto, nas amostras de vegetais as espécies mais predominantes foram E. faecium em 2006 e E.casseliflavus em 2016. Entre os isolados, 33 (10,64%) foram susceptíveis a todos os antimicrobianos testados, enquanto 277 (89,35%) apresentaram resistência a pelo menos um. dos fármacos estudados. Os maiores números de resistência foram observados para os antibióticos: RIF (54,8%, n=170), ERI (47,74%, n=148), TET (31,29%, n=97) e CIP (20%, n=62). Em 2006, 34% das cepas eram resistentes à CIP (n= 19), 25% à CLO (n=14), 16% à GEN (n=9), 5,35% à AMP (n=3) e 1,78% à VAN (n=3), assim, em comparação ao presente estudo houve diminuição na porcentagem de cepas resistentes à AMP, CIP, CLO, GEN e VAN, presente nas amostras de alimentos. Os isolados de E. faecalis apresentam todos os genes de resistência testados e o gene que apresentou a maior prevalência entre as amostras foi tetM (24,51%), seguido de ermB (20,32%), tetL (2,42%), aac (6')/aph (2') e gyrA (3,22%) e mrsC (2,25%). Os dados aqui descritos demonstram fenótipos de resistência a uma gama de antibióticos de grande relevância clínica, que serve de alerta para a importância da cadeia alimentar na disseminação e transferência de genes de resistência antimicrobiana. Bacteria of the genus Enterococcus sp. are Gram positive with cellular morphology in the shape of coccus in pairs or in short chains. These bacteria are present in the mammal’s microbiota, such as of the human being, and in the bird’s microbiota. Currently they have been found in several sources, mainly in food. In addition, Enterococcus has acquired different genetic determinants that confer resistance to distinct antimicrobials. The present study aimed determine and characterize the profile of resistance to antimicrobials of Enterococcus sp. isolated of foods from three different markets of Porto Alegre-RS; and evaluate the evolution of the resistance to antimicrobials compered to data of 2006. The foods (cassava, sweet potato, potato, beetroot, raw chicken, carrot, cabbage, parsley, colonial cheese and ricotta) were processed and the colony with typical Enterococcus morphology isolated from food were selected and submitted to identification at the genus level by phenotypic tests. Those identified as Enterococcus were submitted to molecular techniques, through PCR genus-specific for the presence of the tuf gene, susceptibility profile and presence of resistance genes. The following antibiotics were tested: Ampicillin (AMP), Ciprofloxacin (CIP), Chloranphenicol (CLO), Erythromycin (ERI), Streptomycin (EST), Gentamicin (GEN), Linezolid (LNZ), Nitrofurantoin (NIT), Norfloxacin (NOR), Rifampin (RIF), Tetracycline (TET) and Vancomycin (VAN). Three hundred and ten strains of Enterococcus were isolated from the food and identified as Enterococcus faecalis (177), Enterococcus casseliflavus (103), Enterococcus hirae (17), Enterococcus faecium (6), Enterococcus durans (3) e Enterococcus spp. (4). In relation to the distribution of the species in food, E. faecalis was the most prevalent species among meat and cheese samples, as well as in the present study. However in the vegetable samples the most predominant species was E. faecium in 2006 and E.casseliflavus in 2016. Among the isolates, 33 (10.64%) were susceptible to all antimicrobials tested, while 277 (89.35%) presented resistance to at least one of the drugs studied. The highest numbers of resistance strains were observed for the antibiotics: RIF (54.8%, n=170), ERI (47.74%, n=148), TET (31.29%, n=97) and CIP (20%, n=62). In 2006, 34% of the strains were resistant to CIP (n=19), 25% to chlorofenicol (n=14), 16% to GEN (n=9), 5,35% AMP (n=3), 1,78% to VAN (n=3), thus, in comparison to the present study, there was a decrease in the percentage of strains resistant to AMP, CIP, COL, GEN and VAN isolated from food samples.The E. faecalis isolates present all genes of resistance tested and the gene that presented the highest prevalence among the samples was tetM (24.51%), followed by ermB (20.32%), tetL (2.42%), aac(6 ')/aph(2') and gyrA (3.22%) and mrsC (2.25%). The data described here demonstrate phenotypes of resistance to a range of antibiotics of great clinical relevance, which serves as an alert to the importance of the food chain in the dissemination and transfer of antimicrobial resistance genes.

Apesar da importância ambiental dos morcegos em ambientes urbanos, poucos estudos relatam a presença de enterococos nestes animais. Este estudo teve como objetivos: a) isolar, identificar as espécies e detectar a presença de genes de resistência e fatores de virulência em enterococos isolados de fezes de morcegos Tadarida brasiliensis; e b) avaliar a distribuição das espécies de enterococos por qPCR e dos genes de resistência por PCR nas amostras de fezes de morcegos T. brasiliensis. Quatro pools de fezes de morcegos foram coletados em três municípios do Estado do Rio Grande do Sul e foram analisados por metodologias utilizando técnicas de microbiologia e moleculares. A partir das análises dos enterococos isolados das fezes, foram identificadas 4 espécies, sendo Enterococcus faecalis a mais frequente (83,6%), seguida de E. casseliflavus (13,7%), E. gallinarum (1,35%) e E. mundtii (1,35%). As cepas apresentaram perfil de resistência para rifampicina, eritromicina, norfloxacina, ciprofloxacina e tetraciclina. Dentre as 32 cepas resistentes à eritromicina, 28 apresentaram o gene ermC. Das 13 cepas resistentes à ciprofloxacina e norfloxacina nenhuma foi positiva para o gene gyrA. A única cepa resistente à tetraciclina apresentou o gene tetM. Os genes vanC1 e vanC2-3 foram observados em cepas de E. faecalis Quanto à presença dos genes de virulência, maior incidência foi observada para os genes gelE (97,3%) e ace (91,8%), seguido por agg (49,3%), cylA (5,5%) e esp (2,7%). A análise por qPCR permitiu identificar as espécies E. casseliflavus, E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum e E. hirae nas fezes dos morcegos. Os genes de resistência ermC, gyrA, vanA, vanB, vanC1 e vanC2-3 foram detectados por PCR. Em conclusão, diferentes espécies de enterococos fazem parte da microbiota do trato gastrointestinal de morcegos T.brasiliensis e a presença de elementos de resistência e virulência podem estar relacionadas a fatores antropogênicos ou ter origem no resistoma ambiental. Despite the environmental importance of bats in urban environments, few studies have reported the presence of enterococci in these animals. This study aimed: a) isolate, to identify the species and to detect the presence of resistance genes and virulence factors in enterococci isolated from feces of Tadarida brasiliensis bats; b) to evaluate the distribution of the enterococci species by qPCR and the resistance genes by PCR in the faecal samples of T. brasiliensis bats. Four pools of bats feces were collected in three places of the Rio Grande do Sul State and analyzed using microbiology and molecular methodologies. From the analysis of enterococci isolated from feces, 4 species were identified, being Enterococcus faecalis the most frequent (83.6%), followed by E. casseliflavus (13.7%), E. gallinarum (1.35%) and E. mundtii (1.35%). The strains showed a resistance profile to rifampicin, erythromycin, norfloxacin, ciprofloxacin and tetracycline. Of the 32 strains resistant to erythromycin, 28 presented the ermC gene. Of the 13 strains resistant to ciprofloxacin and norfloxacin, none were positive for the gyrA gene. The single tetracycline resistant strain showed the tetM gene. The vanC1 and vanC2-3 genes were observed in E. faecalis strains. As regards the presence of virulence genes, higher incidence was observed for to gelE (97.3%) and ace (91.8%) genes, followed by agg (49.3%), cylA (5.5%) and esp (2.7%). The qPCR analysis allowed to identify the E. casseliflavus, E. faecalis, E. faecium, E. gallinarum and E. hirae species in the bats feces. The ermC, gyrA, vanA, vanB, vanC1 and vanC2-3 resistance genes were detected by PCR. In conclusion, different species of enterococci are part of the gastrointestinal tract microbiota of T. brasiliensis bats and the presence of resistance and virulence elements may be related to anthropogenic factors or originate from the environmental resistome.

Enterococcus estão presentes no trato gastrointestinal (TGI) de animais vertebrados e invertebrados, os quais podem adquirir estas bactérias através de mecanismos de transferência horizontal e vertical de micro-organismos. Pesquisas recentes descreveram a presença de Enterococcus em lepidópteros, porém estudos com borboletas do gênero Heliconius são escassos. Este trabalho teve como objetivo, a partir de uma bacterioteca de 178 Enterococcus sp. previamente isolados de fezes de imaturos de Heliconius erato phyllis detectar a presença de genes de resistência e virulência por PCR; avaliar fenotipicamente os fatores de virulência e a produção de compostos com atividade antimicrobiana; e avaliar o perfil clonal das cepas pela técnica de PFGE. Dos 178 enterococos, 55 apresentavam resistência a eritromicina e 11 a norfloxacina e/ou ciprofloxacina, porém não foi detectado nenhum gene relacionado a estes fenótipos de resistência. Quanto aos fatores de virulência testados nos 178 enterococos, 63 isolados amplificaram para o gene esp, 12 para ace e 2 para gelE. Os genes agg e cylA não foram detectados. Na análise fenotípica dos fatores de virulência, os dois E. faecalis positivos para gelE também foram positivos para a degradação da gelatinase e 130 enterococos apresentaram capacidade de hidrolisar hemácias. Para investigar a produção de substância antagonista, foram selecionados 26 enterococos; destes, 15 apresentaram atividade contra a bactéria indicadora Listeria monocytogenes. Oitenta e seis isolados foram selecionados para avaliar a relação clonal por PFGE, e foi possível observar a partir do dendrograma que os enterococos no TGI dos imaturos têm origem alimentar e materna. Conclui-se que os enterococos provenientes de amostras fecais de imaturos de H. erato phyllis possuem poucos genes relacionados a mecanismos de virulência comuns na área clínica. É possível que os Enterococcus produtores de substância antagonista desempenhem um papel importante no equilíbrio das comunidades microbianas do TGI deste inseto, e que ocorra a transferência vertical de micro-organismos das fêmeas para a prole para a espécie H. erato phyllis. Enterococcus is present in the gastrointestinal (GI) tract of vertebrates and invertebrates, which can acquire these bacteria through mechanisms of horizontal and vertical transfer of microrganisms. Recent research has described the presence of Enterococcus in Lepidoptera, but studies with butterflies of the genus Heliconius are scarce. This study had as objective, from a bacterioteca of 178 Enterococcus sp. previously isolated from fecal samples of immature Heliconius erato phyllis detect the presence of resistance and virulence genes by PCR; phenotypically assess the virulence factors and the production of compounds with antimicrobial activity; and to evaluate the clonal profile of the strains by PFGE. Of the 178 enterococci, 55 were resistant to erythromycin and 11 resistant to norfloxacin and/or ciprofloxacin, however was not detected any gene related to these resistance phenotypes. The virulence factors were tested in 178 enterococci, and 63 isolated amplified for the esp gene, 12 for ace and 2 for gelE. The agg and cylA genes were not detected. In the phenotypic analyzes, both E. faecalis positive to gelE gene were also positive for the degradation of gelatinase, and 130 enterococci showed ability to hydrolyze red blood cells. To investigate the production of antagonistic substance, 26 enterococci were selected and of these, 15 showed activity against the indicator bacteria Listeria monocytogenes. Eighty-six isolates were selected to evaluate the clonal profile by PFGE, and it was possible to observe in the dendrogram that the origin of the enterococci in GIT of immatures was the herbivory and maternal origin. It is concluded that the enterococci from fecal samples of immature H. erato phyllis possess few mechanisms of virulence-related genes, common in the clinical area. It is possible that the antagonistic substance-producing enterococci could play an important role in the equilibrium of the microbial communities of the GIT of this insect, and there is vertical transmission of enterococci from females to their offspring to the specie H. erato phyllis.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:17:08Z No. of bitstreams: 1 Luciana Milanez de Paula Araujo Dissertacao completa.pdf: 1068906 bytes, checksum: 1b9a2ebaad3c2f36ee6bf081ba740672 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:17:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Milanez de Paula Araujo Dissertacao completa.pdf: 1068906 bytes, checksum: 1b9a2ebaad3c2f36ee6bf081ba740672 (MD5) Previous issue date: 2017-06-12 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Nosocomial blood stream infections (BSIs) are a common and potentially life-threatening problem in intensive care units and are among the most frequently documented nosocomial infections. They are classified according to specific features related to diagnostic and preventive aspects.In addition, the prolonged use of intravascular catheters and its inadequate management are important risk factors for nosocomial BSIs development. Besides, respiratory, urinary tract, wounds, and gastrointestinal infections may also contribute as a primary focus for BSIs development. In this setting, enterococci emerged as important pathogens and are currently considered the third most common cause of nosocomial bacteremia. Among the Enterococcus species, E. faecalis is the most frequent, followed by E. faecium. The aim of this study was to perform the phenotypic and molecular characterization of enterococci isolated from bloodstream of hospitalized patients attended at healthcare instituitions located in two Brazilian states (Rio de Janeiro and Rio Gende do Norte), in a 11 years period (from 2005 to 2015). This study included 203 isolates that were characterized as genus and species level by MALDI-TOF. Susceptibility testing were carried out by disk diffusion to a panel of 15 antimicrobial agents and vancomycin-resistance genotype were detected by PCR. Virulence profiles were investigated by PCR for a set of nine genes. The diversity of de the isolates belonging to E. faecalis and E. faecium species were determined by PFGE technique. The results of this study identifiedthe prevalence of E. faecalis species followed by E. faecium. However, isolates belonging E. avium, E. gallinarum, E. durans and E. raffinosus were also identified. A large amout of multidrug resistance isolates were detected. Resistance to quinolones, macrolides and tetracyclines were prevalent. A high prevalence of isolates non-susceptible to antimicrobials commonly used to the BSIs therapy such as aminoglycosides, beta-lactams and glycopeptides were also identified. E. faecalis showed virulence determinants in higher frequency than E. faecium. Vancomycin resistance was associated to esp and hyl among E. faecium isolates. PFGE results showed a greater diversity among E. faecalis than E. faecium. Clonal groups included isolated from different healthcare institutions suggesting a wide interhospitalar dispersion. The information presented in this study are intended to contribute to brazilian data as an additional support for the development of control measures of the dispersion of Enterococcus resistant strains as well as for the improvement of BSIs management. As infecções de corrente sanguínea (ICS) constituem um problema comum e potencialmente fatal em Unidades de Terapias Intensivas (UTIs) e estão entre as infecções mais frequentemente documentadas. Elas são classificadas de acordo com características específicas relacionadas aos seus aspectos diagnósticos e preventivos. Além disso, o uso prolongado de cateteres intravasculares e seu manejo inadequado são importantes fatores de risco para o desenvolvimento dessas infecções, bem como a presença de infecções respiratórias, urinárias, feridas e infecções intestinais podem contribuir como um foco primário para as ICS. Nesse cenário, os enterococos emergiram como importantes patógenos e atualmente são considerados a terceira causa mais comum de bacteremia nosocomial. Dentre o gênero dos enterococos, a espécie E. faecalis é a mais frequentemente isolada entre as infecções humanas, seguido da espécie E. faecium. O objetivo desse estudo foi caracterizar amostras de Enterococcus isoladas de hemoculturas de pacientes hospitalizados em instituições de saúde localizadas em dois estados brasileiros (Rio de Janeiro e Rio Grande do Norte) em um período de 11 anos consecutivos (2005 a 2015). Foram incluídas nesse estudo 203 amostras caracterizadas quanto ao gênero e espécie pela metodologia de MALDI-TOF. A susceptibilidade a um painel de 15 antimicrobianos foi avaliada pelo método de difusão em Agar e o genótipo de resistência a vancomicina foi detectado por metodologia de PCR. Perfis de virulência foram determinados por metodologia de PCR para um conjunto de nove genes. A diversidade das amostras pertencentes as espécies E. faecalis e E. faecium foi avaliada por PFGE. Os resultados desse estudo identificaram um maior número de isolados E. faecalis, seguido de E. faecium, além de amostras de E. avium, E. gallinarum, E. durans e E. raffinosus. Foi identificado um menor número de amostras multirresistentes (resistentes a três ou mais classes de antimicrobianos), sendo que isoladamente quinolonas, macrolídeos e tetraciclinas determinaram os maiores percentuais de amostras não susceptíveis. Percentuais elevados de amostras não susceptíveis também foram observados frente a antimicrobianos comumente utilizados no tratamento das ICS, como aminoglicosídeos, beta-lactâmicos e glicopeptídeos. As amostras pertencentes a espécie E. faecalis apresentaram uma maior frequência de determinantes de virulência quando comparadas à espécie E. faecium. Percentuais elevados de amostras E. faecium resistentes a vancomicina exibiram caracteristicamente os genes esp e hyl, importantes marcadores de clones de dispersão mundial. As amostras de E. faecalis apresentaram uma maior diversidade clonal do que E. faecium, conforme identificado por PFGE. Foram identificados grupos clonais que reuniram amostras isoladas em mais de uma instituição de saúde, sugerindo uma ampla dispersão interhospitalar. As informações apresentadas nesse estudo visam contribuir com dados brasileiros como mais um suporte para o desenvolvimento de medidas de contenção da dispersão da resistência em Enterococcus e do controle do uso de antimicrobianos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2017. A Pancreatite Aguda é uma doença inflamatória causada pela obstrução dos ductos biliar e pancreático por cálculos biliares. Essa obstrução gera uma lesão levando à necrose pancreática que é inicialmente estéril, mas pode se tornar infectada devido à translocação de bactérias intestinais para o sítio necrótico. A utilização profilática de antibióticos ainda é comum na prática clínica apesar de não ser apoiado pelas diretrizes mais recentes para o tratamento da Pancreatite Aguda. Os antibióticos mais utilizados nesses quadros são os da classe dos Carbapenêmicos, onde os mais comuns são o Imipenem e o Meropenem. Em um modelo experimental de pancreatite aguda previamente realizado em nosso laboratório, animais tratados com Meropenem tiveram uma sobrevida menor comparado aos animais não tratados, além de apresentarem bactérias da espécie Enterococcus gallinarum no sangue. Esses microrganismos são habitantes comensais da microbiota intestinal classificados como patobiontes, ou seja, microrganismos simbióticos com potencial patogênico sob certas condições. Estudos anteriores realizados mostraram que em animais com Pancreatite Aguda o E. gallinarum foi capaz de translocar do intestino e atingir a corrente sanguínea. A hipótese é que a translocação ocorra através da parede intestinal ou do ducto biliopancreático. A alternativa para testar essa hipótese foi o desenvolvimento de uma linhagem recombinante de E. gallinarum que expresse a proteína EGFP, uma proteína que emite fluorescência verde, através de recombinação homóloga. A partir do genoma da E. gallinarum foi amplificado uma sequência de 1000 pares de bases nucleotídicas da região promotora das subunidades ß e ß da RNA polimerase que é expressa constitutivamente durante a vida do microrganismo. Foi realizada a fusão da região amplificada com o gene egfp e o novo fragmento foi inserido no plasmídeo pGEM®-T Easy, que posteriormente foi internalizado pela bactéria durante o processo de eletroporação. As colônias que receberam o plasmídeo foram selecionadas através da resistência à Ampicilina porém não foi observado a expressão da proteína EGFP. Portanto não foi possível a construção da linhagem recombinante de E. gallinarum para a expressão da proteína EGFP através da amplificação da região promotora da subunidade ß e ß da RNA polimerase. Abstract : Acute Pancreatitis is an inflammatory disease caused by obstruction of biliary and pancreatic duct by gallstones. This obstruction generates a lesion that leads to pancreatic necrosis, which is initially sterile but may become infected due to the translocation of intestinal bacteria to the necrotic site. Prophylactic use of antibiotics is still a common in clinical practice despite the lack of support from the most recent guidelines for the treatment for Acute Pancreatitis. The most used antibiotics in these cases are those of Carbapenem s class, where the most common are Imipenem and Meropenem. In an experimental model of Acute Pancreatitis previously performed in our laboratory, animals treated with Meropenem had a shorter survival compared to untreated animals, and showed bacteria from Enterococcus gallinarum specie in the blood. These microorganisms are commensal inhabitants of intestinal microbiota classified as pathobionts, that is, symbiotic microorganisms with pathogenic potential under certain conditions. Previous studies shown that in animals with Acute Pancreatitis the E. gallinarum was able to translocate from intestine and reach the bloodstream. The hypothesis is that translocation occurs through the intestinal wall or the biliopancreatic duct. The alternative to test this hypothesis was the development of recombinant lineage of E. gallinarum that express the EGFP protein, a protein that emits green fluorescence. From the genome of E. gallinarum was amplified 1000 base pair sequence of the promoter region ß and ß subunit RNA polymerase which is constitutively expressed during the life of the microorganism. Fusion of the amplified region with egfp gene was performed and the new fragment was inserted into plasmid pGEM®-T Easy, which was later internalized by the bacterium during the electroporation process. The colonies that received plasmid were selected through resistance to Ampicilin however, no expression of protein EGFP was observed. Therefore, it was not possible the development of the recombinant E. gallinarum linage for EGFP protein expression by amplifying the promoter region of the ß and ß subunit of RNA polymerase.

Os Enterococcus são bactérias que fazem parte da flora intestinal dos humanos e animais, e são exemplo de microrganismos que têm vindo a adquirir resistência a alguns antibióticos, sendo a Vancomicina um exemplo. Objetivos: Comparar a prevalência de Enterococcus faecalis resistentes à vancomicina (VRE) nos 15 países que constituíram a União Europeia antes de 2000. Método: Recolheu-se informação fornecida pela EARSS (European Centre for Disease Prevention and Control) sobre número de isolados e de infecções por VRE observados entre 2013 e 2015 nos 15 países europeus. Com base na prevalência global de VRE na região europeia que engloba os 15 países, calculou-se para cada país em estudo o número de casos esperados. A partir dos valores observados e esperados de obteve-se para cada país a razão padronizada de resistência (RPR) e respectivo intervalo de confiança a 95% (IC95%) com recurso ao software WinPep. Resultados: Os países com maior prevalência de VRE foram a Grécia (3,5%), Reino Unido (2,2%) e Portugal (2,0%) e os países com prevalências mais baixas foram a Finlândia, Suécia e Holanda onde esses valores foram inferiores a 0,1%. De acordo com os valores obtidos para RPR verifica-se que a prevalência de VRE na Grécia é o quíntuplo do esperado (RPR=520%; IC95%: 388%-682%) e em Portugal é o triplo do esperado (RPR=300%; IC95%: 221%-398%) Em contrapartida, países como Suécia e Holanda apresentam valores observados que são 90% mais baixos que o esperado (RPR=5%; IC95%: 0,2%-29% e RPR=7%; IC95%:0,2%-43%, respetivamente). Conclusões: Estes resultados sugerem que apesar de as recomendações da ECDC serem implementadas a nível Europeu, nestes países não há evidência de repercussão positiva. info:eu-repo/semantics/publishedVersion